JP5614817B2 - ミトコンドリアの機能およびエネルギー生産を高めるためのヒドロキシチロソールの組合せ - Google Patents

Description

発明の詳細な説明

［技術分野］
本発明は、ヒドロキシチロソール（「ＨＴ」）の使用法、またはクレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、Ｂ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせたヒドロキシチロソールまたはヒドロキシチロソールの前駆物質を含有する組成物の使用法に関する。これらの組成物は、体自体のエネルギー発生能力および／または細胞のエネルギー発生能力を相乗的に高める。それはまた、ミトコンドリアの機能および生合成を変えることを特徴とする健康状態、例えば心臓の強さ、様々な肝疾患、筋／脂肪比の改善、および筋持久力に役立つ医薬組成物および栄養補助組成物に関する。

［背景技術］
ミトコンドリアは、好気的エネルギー生産を担っている細胞中のオルガネラである。ミトコンドリアの内膜は、電子を伝達し、また一連の酸化還元反応、すなわち酸化的リン酸化と呼ばれる過程を介してＡＴＰを産生する複合体Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶを含有する呼吸鎖で取り囲まれている。好気的エネルギー代謝は、嫌気的エネルギー生産よりも効率的である。嫌気的エネルギー生産は、グルコースの乳酸への転化（解糖）を伴い、グルコース１モル当たり８モルのＡＴＰを生成させるに過ぎない。好気的エネルギー代謝の間にグルコースは、ＣＯ_２およびＨ_２Ｏに完全に酸化（解糖、クレブス回路、およびミトコンドリア電子鎖によって）され、同時にグルコース１モル当たり３８モルのＡＴＰを生みだす。

解糖の終りには重大な代謝の分かれ道が存在する。この分かれ道でグルコースは、１個の炭素６個からなる分子から、ピルビン酸またはピルビン酸塩と呼ばれる２個の炭素３個からなる分子に転換される。このピルビン酸は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ酵素を介して往復してミトコンドリアに入るか、または乳酸デヒドロゲナーゼ酵素を介して乳酸に転化することができる。ミトコンドリアに入るとピルビン酸は、さらなる酵素による分解、酸化を受け、グルコース当たりの高ＡＴＰ収率をもたらす。ミトコンドリア内のこの過程は、進行するために最終的には酸素分子を必要とし、したがって「好気的」である。乳酸への転化は、このエネルギーを生み出す過程における一時的な終端を意味し、また乳酸の蓄積が野放しに進行する場合、細胞ｐＨの低減による収縮性疲労の可能性を意味する。

細胞にエネルギーを供給するというこれらのよく知られた機能に加えて、ミトコンドリアおよびそれらの構成要素は、幾つかの他の細胞活動に関与する。例えばミトコンドリアはまた、熱産生およびアポトーシス過程を制御し、したがって老化過程に関与する。

ミトコンドリアは、その呼吸鎖が反応性化学種、例えばスーパーオキシドアニオンを発生させるので、それが低効率で働くか、またはエネルギー脱共役の間に働く場合、高レベルのオキシダントを含有する。スーパーオキシドアニオンは、複合体ＩＩＩ中の補酵素Ｑの還元などの電子伝達鎖の幾つかの段階で副産物として発生し、高反応性遊離基が中間体（Ｑ・−）として形成される。この不安定な中間体は、電子が直接に酸素に飛び付き、スーパーオキシドアニオンを形成する場合、電子伝達鎖の通常の一連の十分に制御された反応を進むのではなく、電子の「漏れ」を引き起こす可能性がある。

抗酸化剤は、他の分子の酸化を遅くするか、または防止することができる分子である。抗酸化剤は、遊離基中間体を除去することによって酸化鎖の反応を終結させ、またそれら自身酸化することによって他の酸化反応を抑制する。チオール類またはポリフェノール類などの還元剤は、多くの場合、抗酸化性を発揮する。ビタミンＡ、Ｃ、およびＥなどのよく知られている抗酸化剤は、遊離基を捕捉し、かつＤＮＡ、タンパク質、および脂質を損傷から保護する。抗酸化剤はまた、ミトコンドリアを反応性酸素の化学種およびＡＴＰ産生の間に発生する遊離基から保護する。

抗酸化剤の投与がミトコンドリアの生合成を促進させるのに有益であるはずであるということはこれまで一般に受け入れられてきたが、これが本当であることは明らかにされていない。Ｇｏｍｅｚ−Ｃａｒｂｅｒａらの論文、２００８，Ａｍ．Ｊ Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．８７（１）：１４２〜１４９は、二重盲検無作為化臨床試験において一日当たり１ｇのビタミンＣの経口投与が、実際には骨格筋中のミトコンドリアの生合成の減少を引き起こすことを実証した。

ヒドロキシチロソールは、プラスの心臓血管効果を有するものと従来言われてきた（例えば、Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｓａｎｔｉａｇｏらの論文、２００６，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １８８：３５〜４２、またはＭｉｔｒｏらの論文、２００３，ＮＭＣＤ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｄｉｓｅａｓｅｓ １３（５）：３０６参照）が、これらはヒドロキシチロソールの抗アテローム動脈硬化作用および／またはその抗酸化剤としての地位に関するものである。

［発明の詳細な説明］
本発明によれば、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせたヒドロキシチロソール（「ＨＴ」）は、ミトコンドリア生合成を誘導することによって体自体のエネルギー代謝を高め、かつ組織中のミトコンドリア機能の増進をもたらす可能性があることが分かった。

したがって本発明の一態様は、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせた有効量のヒドロキシチロソールを哺乳動物に投与すること、およびミトコンドリア機能に及ぼす効果を観察することを含む、ミトコンドリア生合成の増加によるミトコンドリア機能および活性の維持または増進方法である。

ミトコンドリア生合成とは、ミトコンドリアの成長、増幅、および健康維持の過程を指す。ミトコンドリア生合成は、核およびミトコンドリアの両方のプレーヤーを巻き込んだ複雑な過程である。ミトコンドリアＤＮＡは、ミトコンドリアのリボソーム上で翻訳される少数のタンパク質をコードする。これらのタンパク質の大部分は、内部ミトコンドリア膜中に局在する呼吸鎖の高度疎水性サブユニットである。核にコードされたタンパク質は、細胞質リボソーム上で翻訳され、ミトコンドリア中に輸送される。これらのタンパク質には、構造タンパク質と、酵素または酵素サブユニットと、輸送、複製、転写、および翻訳機構の構成要素と、シャペロンとが挙げられる。

細胞は、好気呼吸（電子鎖）能力がもはや十分でなくなると、より効率的でない嫌気的エネルギー代謝に切り換えなければならない。ミトコンドリア生合成の増加は、当然の結果として好気的エネルギー代謝能力を向上させ、こうして効率的エネルギー生産能力を増加させる。

本明細書および特許請求の範囲全体を通して使用される「ミトコンドリア生合成」には、細胞周期の間中のミトコンドリアの分裂および分離に必要とされるものを含めてミトコンドリアの維持および成長に関与するすべての過程が含まれる。

語句「クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせたヒドロキシチロソール」の使用は、この群内の個々の化合物のそれぞれとヒドロキシチロソールの各単一の組合せを含むことを意図している。

「ミトコンドリア機能増大の効果を観察すること」および「ミトコンドリア生合成の効果を観察すること」とは、この組合せ組成物を摂取／利用した全者が下記に列挙した効果の少なくとも１つに気付くか、あるいは第三当事者の観察者がこの効果に気付くか、またはそれを測定することのいずれかを意味する。

ミトコンドリア機能および／またはミトコンドリア生合成の増大の効果は、本発明の組合せが、
持久力の増進を助けるか、
運動後の回復の促進を助けるか、
筋疲労の軽減を助けるか、
筋肉痛の軽減を助けるか、
カフェインの即効性短期効果をエネルギー発生に与える持続効果で補完するか、
脂肪由来のエネルギー発生の促進を助けるか、
運動の間の血漿乳酸を下げるのを助けるか、
酸化的ストレスの条件下での筋力の維持を助けるか、
運動に誘発される酸化的ストレスから守るのを助けるか、
体が自然かつ持続的方法で―カフェインなしに、またたった１カロリーでより多量のエネルギーを生産するのを助けるか、
体が過剰なカフェインを摂取することなく、より多量のエネルギーを見出すのを助けるか、
人の多忙な日程の間じゅう持続するように長続きするエネルギーを与えるか、
体自体のエネルギー生産を自然な持続的方法で高めるのを助けるか、
人がより一様な活力水準を一日を通じて維持するのを助けるか、
カフェインと組み合わせて即効性かつ持続的エネルギーを与えることができるか、
体が運動に順応するのを助けるか、
人の運動の目標に向けて体を準備するのを助けるか、
人の体形を改造するのを助けるか、
運動プログラムの再開を手助けするか、
人が再び活動を開始するのを助けるか、
人がよりエネルギッシュに感じるのを助けるか、
人がより活動的に感じるのを助けるか、
人が活動する力を支えるか、
人が多忙な生活スタイルに立ち向かうのを助けるか、
筋肉労働能力を増大させるか、
有酸素能力を増大させるか、
体力を増強するか、
運動能力を増強するか、
ランニング持久力を向上し、ランニング距離を改善し、かつ／またはランニング時間を改善するか、または
栄養からのエネルギー形成を促す
という観察結果を含む。

本明細書および特許請求の範囲全体を通して使用される用語「生合成を誘導する量」とは、全ミトコンドリア生合成が、ヒドロキシチロソールが最初に摂取された時に存在したレベルに少なくとも維持されることを意味する。これはｉｎ ｖｉｔｒｏで、組織試料中のミトコンドリア機能の量および状態をモニターすることによって、または実施例中でさらに述べるように求めることができる。さらにこれは、組織のＡＴＰ含有量または運動中の酸素消費量（最大ＶＯ_２）を測定することによってｉｎ ｖｉｖｏで、あるいはミトコンドリアマーカー（例えばＴｆａｍ）の上方制御のトランスクリプトーム解析によるか、または組織の生検中のミトコンドリアＤＮＡの存在の増加を検出することによってｅｘ ｖｉｖｏで求めることもできる。ヒドロキシチロソールのこの特性は、抗酸化剤としてのヒドロキシチロソールの既知の作用とはまったく異なる。

本明細書および特許請求の範囲全体を通して使用される「ミトコンドリアが刺激する」とは、ミトコンドリアに適用された化合物が、細胞中のＡＴＰ産生の増加、細胞中のエネルギー生産能力の増大、細胞中の好気的エネルギー発生または生産能力の増大、および／または脂肪燃焼能力の増大を引き起こすことを意味する。

ヒドロキシチロソール（３，４−ジヒドロキシフェニルエタノール）（「ＨＴ」）は、合成由来のものであることも、またオリーブの葉、オリーブの実、オリーブのパルプ、オリーブの絞り汁、またはオリーブ油生産の植物的機能水から単離または濃縮することもできる。したがって用語「ヒドロキシチロソール」はまた、植物の任意の材料または抽出物、あるいは植物の一部の任意の材料または抽出物、あるいは植物の実（オリーブなど）の任意の抽出物／濃縮物／絞り汁を包含し、それは具体的にはその植物性材料または抽出物の総重量を基準にして少なくとも１．５重量％の量で、好ましくは少なくとも３０重量％の量で、より好ましくは少なくとも４０重量％の量で、より好ましくは少なくとも５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０重量％の量で、最も好ましくは少なくとも４５重量％の量でヒドロキシチロソールまたは前駆物質を含有する。この抽出物の市販の形態は、そのヒドロキシチロソールを適切な製剤用医薬添加物と共に製剤化することによってより低濃度のヒドロキシチロソールに標準化されることもあり、またされないこともある。本発明の文脈において使用される用語「植物の材料」および「植物性材料」とは、植物の任意の部分、またその果実を意味する。

ヒドロキシチロソールの前駆物質には、摂取時に代謝されてヒドロキシチロソールになることができるオレウロペインなどの複合ポリフェノールが挙げられる。これにはまた、チロソールおよびチロソール前駆物質などが挙げられる。このようなポリフェノール類は、当業者によってよく知られており、また理解されている。

本発明のさらなる実施形態ではヒドロキシチロソール誘導体、例えばエステルおよび生理的／薬学的に許容できる塩を、ヒドロキシチロソールの代わりに、またはこれに加えて使用することができる。ヒドロキシチロソールとヒドロキシチロソール誘導体および前駆物質との混合物を使用することもまた可能である。これら誘導体は、例えばエステルまたはグルコシドであることができ、当業者に知られている。ヒドロキシチロソールの好ましいエステルは、例えば酢酸エステルまたはグルクロニド抱合体であり、またオレウロペインが最も好ましいものである。

したがって本発明の一態様は、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせたヒドロキシチロソールの使用法である。

好ましい実施形態ではヒドロキシチロソールは、ミトコンドリア生合成またはミトコンドリア機能を維持または増大するのに役立つ薬剤または食品（ヒトおよび／または動物用）の製造において、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ５、Ｂ６、および／またはＢ１２）、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせて使用される。

さらに別の実施形態ではヒドロキシチロソールは、カフェイン、カルニチン、およびビタミンＢからなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせて使用される。

本発明の別の態様は、ミトコンドリア生合成を誘導するまたはミトコンドリアを刺激する量のヒドロキシチロソールを、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせて投与すること、およびミトコンドリア生合成の効果を観察することを含む、それを必要とする被験者におけるミトコンドリア生合成を維持または増加させる方法である。

本発明の別の態様は、日々の環境中で見出されるストレスからミトコンドリアを守るのに役立つ薬剤または食品（ヒトおよび／または動物用）の製造において、ヒドロキシチロソールを、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせて使用することである。

日々の環境中で見出されるストレスの例には、ＵＶ（Ａ）光線、感染症、環境汚染への暴露、炎症、および慢性変性疾患が挙げられる。したがってこれらの製品は、ストレス、病気、栄養失調（別の病状に続発する栄養失調を含めた）、または創傷の結果としての細胞の生化学的変化などの日々の傷害の原因に直面して正常なミトコンドリア機能を確保するのを助ける。

本発明の別の態様は、ミトコンドリア生合成を誘導する量のヒドロキシチロソールを、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせて含み、かつミトコンドリアの健康を推進し、最善のミトコンドリア機能を後押しする栄養補助食品である。

本発明の別の態様は、ミトコンドリア生合成を誘導する量のヒドロキシチロソールを、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせて含み、かつミトコンドリアの健康を推進し、皮膚における最善のミトコンドリア機能を後押しし、こうして皮膚のエネルギー代謝を増やす化粧用組成物である。

ＰＧＣ−１αの発現を示す図である。定量値を、デンシトメトリーによるＰＧＣ−１α：αチューブリン比に関して集計した。値は、５回の実験の平均±ＳＥである。対照に対して^＊ｐ＜０．０５であり、対照に対して^＊＊ｐ＜０．０１である。 ミトコンドリアタンパク質の発現を示す図である。３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞をヒドロキシチロソールで４８時間処理した。その後、細胞をＳＤＳ試料緩衝液中に可溶化し、αチューブリンに対する抗体を用いたウェスタンブロット法によりミトコンドリア電子伝達複合体を分析した。デンシトメトリーによるバンドの定量分析を、ミトコンドリア複合体Ｉ、複合体ＩＩ、複合体ＩＩＩ、および複合体ＩＶについてそれぞれＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤに示す。図示した結果は、対照細胞と比較した４回の独立した実験からの対照に対する増加倍数（ｆｏｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ）である。対照に対して^＊ｐ＜０．０５であり、対照に対して^＊＊ｐ＜０．０１である。 ミトコンドリアＤＮＡの発現を示す図である。３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞をヒドロキシチロソールで４８時間処理した。ＰＣＲ産物を、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎを用いて蛍光により定量した。定量値を、Ｄループ：１８ｓＲＮＡ比に関して集計した。結果は、対照に対する％として表す。データは、平均±ＳＥ（ｎ＝５）である。対照に対して^＊ｐ＜０．０５であり、対照に対して^＊＊ｐ＜０．０１である。 ３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞における酸素消費量を示す図である。ら体積の細胞を分割量に分け、９６ウェルＢＤ Ｏｘｙｇｅｎ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ｐｌａｔｅの各ウェルに入れた。プレートを覆い、各ウェル中の蛍光をある期間にわたって蛍光マイクロプレート分光光度計を用いて記録した。反応速度測定値を求めることによって各条件の間の脂肪細胞の呼吸数の定量的変化を計算した。値は平均±ＳＥであり、図示した結果は、対照細胞と比較した３回の独立した実験からの対照に対する％である。対照に対して^＊ｐ＜０．０５である。 脂肪細胞中の複合体の活性に及ぼすヒドロキシチロソールによる処理の効果を示す図である。（Ａ）複合体Ｉ、（Ｂ）複合体ＩＩ、（Ｃ）複合体ＩＩＩ、および（Ｄ）複合体ＩＶ。脂肪細胞を、異なる濃度のヒドロキシチロソールで４８時間処理した。値は、複合体Ｉについては３回の別々の実験、また複合体ＩＩおよびＩＩＩについては６回の別々の実験からのデータの平均±ＳＥであり、各実験は２回繰り返して行った。対照に対して^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１である。 Ｃｐｔ１ａ ｍＲＮＡの発現に及ぼすＨＴ処理の効果を示す図である。３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞を０．１、１．０、１０、および５０μｍｏｌ／ＬのＨＴで４８時間処理し、全ＲＮＡを単離した。その様々な転写産物が検出可能であったサイクル数を、内部対照としての１８Ｓ ｒＲＮＡと比較した。結果は、対照に対する％として表す。値は、少なくとも４回の独立した実験からの結果の平均±ＳＥである。ＨＴ処理なしの対照に対して^＊ｐ＜０．０５。 ヒドロキシチロソールを５０％含有するオリーブ抽出物として１日につき体重１ｋｇ当たり５０、１５０、または３００ｍｇの用量でチューブによる栄養補給によって与えたヒドロキシチロソールが、補給１４日後のマウスにおいて最大で５０％持久力を増加させることを示す図である。 Ｃ２Ｃ１２細胞中のミトコンドリア膜電位に及ぼすカフェインまたはL-Ｌ−カルニチンと組み合わせたヒドロキシチロソールの相乗効果を示す図である。Ａでは、ＡＩＣＡＲおよび１０μＭヒドロキシチロソールが、ミトコンドリア膜電位を増加させる。Ｂでは、１μＭヒドロキシチロソールのカフェインとの、またはＬ−カルニチンとの組合せが、膜電位を相乗的に増加させる。相対的ミトコンドリア膜電位を、ＪＣ−１染料によって放射される蛍光の赤色から緑色への変化によって評価した。細胞を、表示したように溶媒（−）、５００μＭ ＡＩＣＡＲ（ＡＩＣＡＲ）、１μＭヒドロキシチロソールまたは１００μＭヒドロキシチロソール（ＨＴ）、２００μＭカフェイン（カフェイン）、および／または２００μＭ Ｌ−カルニチン（Ｌ−カルニチン）で２４時間処理した。図示したデータは、４回繰返しの平均値±標準偏差である。

ＰＧＣ１α、ペルオキシソーム増殖活性化物質受容体（ＰＰＡＲ）γコアクチベーター１α、すなわち転写コアクチベーターは、幅広い代謝および生理的過程のマスター調節因子として働き、ミトコンドリア生合成の過程における必須因子である。ＰＧＣ１α過剰発現は、３Ｔ３細胞中のミトコンドリア生合成を刺激し、それら３Ｔ３細胞を酸化性ストレッサーに対してより抵抗性にする。

本発明者らは、１．０〜１０μＭでヒドロキシチロソールが、ＰＧＣ１αタンパク質レベルを増加させ、またミトコンドリア生合成を促進させることを実証した。クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物は、ミトコンドリア活性を相乗的に増大させ、また様々な組織中でのミトコンドリア機能障害を防止するはずである。さらに、こうしてクレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせたヒドロキシチロソールは、組織／器官の機能を維持し、かつミトコンドリア機能障害によって引き起こされる組織／器官の衰弱を防止する。

本発明のさらなる態様は、ミトコンドリア生合成を誘導する量のヒドロキシチロソールと、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物とを含み、１種類または複数種類の成分（レスベラトロール、補酵素Ｑ１０、クレアチン、ビタミンＢ類、およびチョウセンニンジン抽出物の場合）と共に相乗作用を与えることによって、または脂肪燃焼（カルニチンの場合）を相乗的に促進させることによって体自体のエネルギー代謝を相乗的に高めるための組成物である。

チョウセンニンジン抽出物をヒドロキシチロソールと組み合わせて使用する場合、それは好ましくはチョウセンニンジンの根の抽出物の形態である。

本発明の好ましい組合せには下記が挙げられる。
・ミトコンドリア生合成およびミトコンドリア機能のさらなる増強用のＨＴと、レスベラトロール、クレアチン、αリポ酸、またはＥＧＣＧ。これはミトコンドリアの好気的エネルギー発生能力の相乗的増大をもたらす。
・ＨＴと、補酵素Ｑ１０および／またはビタミンＢ２。ＨＴはミトコンドリア量を増加させるが、それらの新たに合成されたミトコンドリアは補酵素Ｑ１０およびＢ２と一緒に置かれる必要がある。これは、より多量のＡＴＰ（エネルギー）の相乗的産生を引き起こす。
・より多量のＡＴＰを作り、それを体（体力、持久力、筋力）にとって利用可能にするためには、ＨＴとクレアチンか、あるいはＨＴと補酵素Ｑ１０および／またはＢ２とクレアチンのどちらかが好ましい。ＨＴはミトコンドリア量を増加させるが、それらの新たに合成されたミトコンドリアは補酵素Ｑ１０およびＢ２と一緒に置かれる必要がある。クレアチンは、ＡＴＰの形で発生したエネルギーを使用可能な形（クレアチンリン酸）で筋原繊維に輸送する。
・体組成（脂肪：筋肉比）の改善のためにはＨＴとカルニチン。カルニチンは、脂肪燃焼およびＡＴＰ産生のためにミトコンドリア中への脂肪酸の輸送を助ける。驚くべきことにＨＴはＣＰＴ−１（カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ１）を上方制御することが分かった。この輸送体は、脂肪酸輸送にカルニチンを使用する。ＣＰＴ−１は、アシルＣｏＡをアシルカルニチンに変換することによりミトコンドリア膜を横切る長鎖脂肪酸の輸送を調節するので、ミトコンドリアの脂肪酸酸化のゲートキーパーである。さらに、本発明者らは、驚くべきことにヒドロキシチロソールとカルニチンの組合せによりミトコンドリア膜電位が相乗的に上昇することを見出した。
・即効性かつ持続的エネルギーのためにはＨＴとカフェインが好ましい。好ましい一回量は１０〜２００ｍｇのＨＴと５０〜４５０ｍｇのカフェインである。さらに、本発明者らは、驚くべきことにヒドロキシチロソールとカフェインの組合せによってミトコンドリア膜電位が相乗的に上昇することを見出した。

本発明の別の態様は、栄養飲料や、チョコレート、ビスケット、またはバーを含めたスナックなどの「健康志向栄養品（ｅｎｅｒｇｙ ｐｒｏｄｕｃｔｓ）」中の有効成分としての、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせたＨＴである。

本発明の別の態様は、生活スタイルにとって十分なエネルギーを得たいが、カフェイン摂取に関しては抑制したい人々のためのカフェイン用量を減らした状態でのカフェインと組み合わせたＨＴである。

ミトコンドリア機能、したがって利用できるエネルギーは年齢と共に減少する。したがって本発明の別の好ましい実施形態はまた、活動的な生活スタイルを維持するために若々しい活力レベルを維持しようとする５０歳を越えた年齢の人々のために調合される、ＨＴを、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせて含む栄養品である。

［身体能力ならびに運動への適応］
ミトコンドリアの増加は、運動に関与する人々および動物の両方に利益になる可能性がある。ミトコンドリア生合成は、何らかの形の運動に没頭している間の酸素の利用の増加および活力の増加に結果としてなる。ミトコンドリア量が高いほど、高い解糖流出速度における酸化的代謝能力を向上させる。さらに、これは持久力の向上をもたらす。より大きなエネルギーの蓄えを利用できる筋繊維は、より速くかつより完全に収縮することができ、したがってある期間にわたる使用後に敏速さおよび強さの向上を見ることができる。

さらに、脂肪酸酸化能力の向上は、亜最大運動強度におけるグルコース利用の低下をもたらす。さらに、脂肪代謝がグルコースとは異なる経路を通って進行し、乳酸は生成されない。また、嫌気的エネルギー生産に起因する創傷、痙攣、および痛みからの回復時間が、より迅速になるはずである。

筋肉への別の応用では、より効率的にエネルギーを利用する筋肉は脂肪が蓄積する傾向が少なく、したがってヒドロキシチロソールと、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物とを使用して体形を改善することができる。

ミトコンドリア生合成を誘導する量のヒドロキシチロソールと、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される化合物の獣医用途には、レース用動物、例えば競争馬や競争犬およびレース用ラクダなどの能力を高めること、また役畜の持久力を高めることが挙げられる。

通常の身体運動はまた、運動中の突然のエネルギー要求の高まりへの適応としてミトコンドリアを誘発する。これらの要求される相乗的組合せは、いつもの運動レベルを越える運動に対して体を整え／順応させるのを助けることができる。これは、通常の運動を長く中断（例えば、数日、数週間、数カ月、数年）した後に運動を開始（再び）する、したがって運動計画を（再）開始しようと試みたとき不調、力がない、緩慢、大儀、また倦怠を感ずる人々においてもっとも興味を引く。それはまた、週末の旅またはレース／試合の準備をするための十分な運動の時間のない生活スタイルの運動選手（レクリエーション活動の人々、予備役兵）にとっても興味深い。

［エネルギッシュな感覚］
運動する人々の身体能力を向上させることに加えて、本発明の組合せは今日の生活スタイルにとって必要な活力を生み出すのを助けることができる。消費者調査は、回答者（一般大衆、年齢１６＋、アメリカ合衆国および４つのヨーロッパの国々）の３７％がしばしば疲れまたは活力不足を感じていることを示した。第二の調査によれば、回答者の６０％がより多くの活力を得るのに役立つ製品に関心があることが分かった。今日、活力の増強を必要とする人々は、コーヒーまたはカフェイン含有栄養飲料、および糖分の多い高脂肪スナックを消費する。

正しい用量で消費される場合、疲労を取り除くカフェインの即効性は非常に高く評価される。しかしながら過剰消費した場合、それは不眠症および高血圧を引き起こす恐れがある。一般的なコーヒー１杯は、約１００ｍｇのカフェインを含有する。ヒトが定期的に一日当たり３〜５杯を飲む場合、そのカフェインの消費量はかなり高くなる（一日当たり＋３００ｍｇ）可能性がある。ヒドロキシチロソールは、ミトコンドリア生合成に与えるその刺激効果のせいで、このカフェインの短期即効性に、持続的活力の長期効果をプラスすることができる。

さらにヒドロキシチロソールは、その日の任務に立ち向かうのに必要なカフェイン用量を長期にわたって減らすのに役立つ可能性がある。日常の飲食物にヒドロキシチロソールを添加して同じ非嗜眠状態の感じを達成することができるが、必要なカフェインの量は減少（一日当たり１００ｍｇ以下まで）する。

同様に消費者は、活力の増強を実現するために糖分および／または脂肪の多い食品をしばしば食べる。しかしながら、ヒドロキシチロソールと、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される化合物からの持続的エネルギーが増加すると共にその必要な量は減少する。したがって、本発明のＨＴの組合せは、糖または脂肪由来のカロリー、またはカフェインの含有量の低い「健康志向」（ＢＦＹ）エネルギー提供（飲料、バー、スナック、ガム、ショット（ｓｈｏｔｓ）、補助食品など）に有利に使用することができる。

したがって本発明は、
・体自体のエネルギー発生能力を増し、
・有酸素運動能力を増し、
・エネルギー発生のための栄養物の使用を炭水化物の燃焼から脂肪の燃焼へ変え、
・エネルギー発生に与えるカフェインの即効性短期効果を持続的効果で補い、
・「維持する」のに必要なカフェインおよび／または糖および／または脂肪の用量を減らすことを可能にする
ためのヒドロキシチロソールを含有する組合せ物の使用法を対象とする。

したがって本発明の別の態様は、ヒドロキシチロソールと、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される化合物とを含み、そのミトコンドリア生合成の維持または増加が持続的エネルギーの増強をもたらす組成物である。本発明のさらなる態様は、本発明によるヒドロキシチロソールの組合せ物を加えることを含む、活力または俊敏さの強化を実現する食品組成物の製造方法である。本発明のさらに別の態様は、ヒドロキシチロソールと、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される化合物とを含み、ヒドロキシチロソールを含有しない類似の食品と比べて含有量の低減されたカフェイン、脂肪、および／または糖を含む、活力または俊敏さの強化を実現する食品組成物の製造方法である。

［筋肉／脂肪比、体形の改善］
本発明は、
・筋代謝を増やしてエネルギーの流動化を増大させ、
・損傷した場合に同化代謝経路を刺激し、異化代謝経路を阻害し、また筋肉再生を促進させることによって骨格筋量を改善し、
・エネルギー発生のための栄養物の使用を炭水化物またはタンパク質の燃焼から脂肪の燃焼へ変え、
・脂肪の燃焼を促進させる、すなわち脂肪の燃焼の調節因子として働き、脂肪酸酸化によるエネルギー消費を増加し、脂肪代謝を増し、脂肪酸化を促進し、体脂肪を減少させ、また筋量を増加させ、
・体脂肪を低下させ、また無駄のない筋量を増加させて、良いシルエット（体形）を達成するのを助け、かつ
・熱発生を増加させる、すなわちより多量のエネルギーを燃焼するようにヒトまたは動物の代謝を増大させる
ためのヒドロキシチロソールと、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される化合物との使用法を対象とする。

［処方］
クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせたヒドロキシチロソールまたはヒドロキシチロソールを含有するオリーブ絞り汁の抽出物は、特殊栄養用途の食品（Ｆｏｏｄ ｆｏｒ Ｓｐｅｃｉａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｕｓｅｓ）として、ダイエタリー・サプリメントとして、栄養補助食品として食品または飲料などの任意の適切な形態で、あるいは動物の飼料または食糧で使用することができる。

クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせたヒドロキシチロソールまたはヒドロキシチロソールを含有するオリーブ絞り汁の抽出物は、それらの製品の通常の工程の間の任意の段階で加えることができる。適切な食品には、例えばシリアルバー、ケーキおよびクッキーなどのパン菓子品目、あるいはチョコレート、ナッツ類、グミベア、チュウインガムなどの他の種類のスナック、さらにスープまたはスープパウダーなどの液状食品が挙げられる。適切な飲料は、アルコールを含まない飲料および酒類、ならびに飲料水および液状食品に加えられる液体製剤を包含する。アルコールを含まない飲料は、好ましくはミネラルウォーター、スポーツ飲料、賢さをますためのグルクロノラクトンや解毒のためのタウリンを含有するものを含めた栄養飲料、ハイブリッド栄養飲料、ニアウォーター飲料、果汁、レモン水、スムージー、茶、および濃縮飲料、例えばショットおよびミニショットである。スポーツ飲料は、低張性、高張性、または等張性であることができる。スポーツ飲料は、液状で、濃縮物として、または粉末（例えば水などの液体中に溶解される）として入手することができる。特殊栄養用途の食品の例には、スポーツ食品、ダイエット食品、特殊調製粉乳、および臨床用食品のカテゴリーのものが挙げられる。飼料には、ペット用トリーツおよびスナックなどの品目を含めた任意の動物用食糧または飼料プレミックスが挙げられる。

本明細書中で使用される用語「ダイエタリー・サプリメント」とは、日常の飲食物を補うことを意図した化合物または化合物の混合物を含有する口で食べられる製品を意味する。これらの製品中のその化合物または化合物の混合物には、ビタミン、ミネラル、薬草または他の植物性薬品、およびアミノ酸を挙げることができる。ダイエタリー・サプリメントはまた、抽出物または濃縮物であることもでき、また錠剤、カプセル剤、ソフトゲル、ジェルキャップ、液剤、または散剤などの多くの形態で見つけることができる。ダイエタリー・サプリメントはまた、エネルギーを皮膚ミトコンドリアに昇格させるために使用し、それによって皮膚の審美的な質を高めることもできる。

本明細書中で使用される用語「栄養補助食品」とは、栄養学および薬学の両方の分野の用途で役立つことを意味する。本発明による栄養補助組成物は、ヒトの体を含めた動物の体に投与するのに適した任意の形態、とりわけ経口投与に便利な任意の形態、例えば、食品または飼料（のための添加物／サプリメント）、食品または飼料のプレミックス、錠剤、丸剤、顆粒剤、糖衣錠、カプセル剤、および発泡製剤、例えば散剤および錠剤などの固形であるか、あるいは液剤、乳剤、または懸濁剤、例えば飲料、ペースト、および油性懸濁液などの液状であることができる。本発明によるヒドロキシチロソールまたはヒドロキシチロソールを含有するオリーブ絞り汁の抽出物を組み込んだ制御放出（徐放性）製剤もまた、本発明の一部を形成する。さらに、本発明のこの栄養用補助組成物にマルチビタミンおよびミネラル栄養補助食品を加えて、一部の日常飲食物に欠けている必須栄養素の適正な量を得ることができる。マルチビタミンおよびミネラルサプリメントはまた、病気を予防し、また生活スタイルのパターンに起因する栄養損失および失調から守るのに役立つ場合もある。この栄養補助食品は、通常の添加物、例えば甘味料、香味料、糖、脂肪、乳化剤（ｅｍｕｌｇａｔｏｒ）、保存料をさらに含むことができる。この栄養分はまた、例えば国際公開第０２／４５５２４号明細書に記載されている（加水分解された）タンパク質などの他の有効成分を含むこともできる。また抗酸化剤が、栄養分、例えばフラボノイド、カロテノイド、ユビキノン、ルチン、リポ酸、カタラーゼ、グルタチオン（ＧＳＨ）、およびビタミン類、例えばＣおよびＥ、またはこれらの前駆物質中に存在してもよい。

さらなる実施形態では、クレアチン、補酵素Ｑ１０、レスベラトロール、カフェイン、カルニチン、ビタミンＢ類（Ｂ１すなわちチアミン、Ｂ２すなわちリボフラビン、Ｂ３すなわちナイアシンまたはナイアシンアミド、Ｂ５すなわちパントテン酸、Ｂ６すなわちピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン、またはピリドキシン塩酸、Ｂ７すなわちビオチン、Ｂ９すなわち葉酸、あるいはＢ１２すなわち様々なコバラミン、例えばシアノコバラミン）、ケルセチン、αリポ酸、ＥＧＣＧ、およびチョウセンニンジン抽出物からなる群から選択される少なくとも１種類の化合物と組み合わせたヒドロキシチロソールを含有する組成物が、皮膚細胞のミトコンドリア生合成を高めるために局所的に塗布される。本発明による化粧用または皮膚用製剤は、溶媒または脂肪性物質に溶かした懸濁液または分散液の形態であることができ、あるいはエマルションまたはミクロエマルション（具体的には、Ｏ／ＷまたはＷ／Ｏ型、Ｏ／Ｗ／ＯまたはＷ／Ｏ／Ｗ型のもの、ただしＯは油相、またＷは水相の略である）の形態、例えばクリーム、ペースト、ローション、増粘ローションまたは乳液、軟膏剤の形態の小胞分散液、ゲル、固体チューブスティック、またはエアゾールムースの形態であることもでき、またムース、フォームまたはスプレーフォーム、スプレー、スティックまたはエアゾール、またはワイプの形態で提供することもできる。化粧用または皮膚用製剤の例は、スキンケア製剤、具体的にはボディーオイル、ボディーローション、ボディージェル、トリートメントクリーム、皮膚保護軟膏剤、保湿ジェル、保湿スプレー、リバイタライジングボディースプレー、アフターサン製剤、または日焼け止め調剤である。

本発明の化粧用または皮膚用製剤は、通常の化粧品の個々の皮膚用アジュバントおよび／または添加剤、例えば保存料／酸化防止剤、脂肪性物質／油、水、有機溶媒、シリコーン、増粘剤、柔軟剤、乳化剤、追加の遮光剤、泡止め剤、保湿剤、芳香剤、界面活性剤、増量剤、金属イオン封鎖剤、アニオン性、カチオン性、非イオン性、または両性ポリマーまたはそれらの混合物、プロペラント、酸性化または塩基性化剤、染料、着色剤、顔料または超微細顔料、光安定剤、防虫剤、日焼け剤（skin tanning agents）、美白剤、抗菌剤、防腐有効成分、または化粧品に通常配合される任意の他の成分をさらに含むことができる。

一般には１回に約１ｍｇから約５００ｍｇの間の純粋な形態の、またはオリーブ抽出物中のヒドロキシチロソールが有効である。好ましくは１ｍｇから２５０ｍｇの間のヒドロキシチロソールが純粋な形態でまたはオリーブ抽出物中に存在し、さらに一層好ましくはオリーブ抽出物中の約１ｍｇから約１００ｍｇの間のヒドロキシチロソールが使用される。

ヒト（７０ｋｇの）に対するヒドロキシチロソールの一日の用量は、少なくとも０．１ｍｇであることができる。それは１から５００ｍｇまで、好ましくは５から１００ｍｇまで変えることができる。

ヒドロキシチロソールの好ましい用量は、哺乳動物に対して代謝体重１ｋｇ当たり０．２８から１．９ｍｇまで変わり、ここで哺乳動物の場合、
「代謝体重」（単位ｋｇ）＝（体重（単位ｋｇ））^０．７５
である。これは、例えば７０ｋｇのヒトの場合、好ましい一日の用量は６．７７と４５．９８ｍｇの間で変わることになり、２０ｋｇのイヌの場合、一日の用量は２．２３と１５．１ｍｇの間で変わることになることを意味する。

レスベラトロールの用量は、一般にヒト当たり１ｍｇ〜４５０ｍｇ／日の範囲である。レスベラトロールは、既知の方法を用いて合成により製造することも、また大虎杖（Ｇｉａｎｔ ｋｎｏｔｗｅｅｄ）を含めた植物から抽出することもできる。

補酵素Ｑ１０は、Ｋａｎｅｋａ，ＵＳＡから購入することができる。好ましい用量は、ヒト一日当たり３〜１００ｍｇであり、より好ましくは３０〜５０ｍｇである。

クレアチンの用量は、好ましくはヒト一日当たり１ｇ〜２５ｇの範囲である。これは市販されている。

カルニチンの用量は、一般にヒト一日当たり２５０ｍｇ〜１ｇの範囲である。これはＬｏｎｚａから「ＣＡＲＮＩＰＵＲＥ」として市販されている。

カフェインの用量は、一般にヒト一日当たり６ｍｇ〜４５０ｍｇである。これは市販されている。

チョウセンニンジンの用量は、好ましくはヒト一日当たり１００ｍｇ〜５ｇの根の乾燥粉末、または相当するジンセノサイド含有量を有する抽出物である。

ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｎｙｖｉｔａｍｉｎｓ．ｃｏｍ／ｒｄａ．ｈｔｍ＃Ｗａｔｅｒ％２０Ｓｏｌｕｂｌｅ％２０Ｖｉｔａｍｉｎｓ^＊から得られるその表中にあるように、様々なビタミンＢ類のＲＤＡ／ＤＲＩ（推奨栄養所要量／一日の推奨摂取量）は知られている。本発明による好ましいビタミン用量は、ＵＳまたはヨーロッパで現在推奨されているＤＲＩ（一日の推奨摂取量）／ＲＤＡ（推奨栄養所要量）の１０％から１０００％である。ＤＲＩは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ｆｎｉｃ／ＤＲＩ／／ＤＲＩ＿Ｔｈｉａｍｉｎ／５６６−５６７＿１５０．ｐｄｆで見つけることができる。

好ましいビタミンの用量は下記のとおりである。

チアミンの用量は、一般にヒト一日当たり０．１〜１０ｍｇである。これは市販されている。

リボフラビンの用量は、一般にヒト一日当たり０．１〜１０ｍｇである。これは市販されている。

ナイアシンの用量は、一般にヒト一日当たり１〜２００ｍｇである。これは市販されている。

パントテン酸の用量は、一般にヒト一日当たり１〜１００ｍｇである。これは市販されている。

ビタミンＢ６（ピリドキシン、ピリドキサール、またはピリドキサミンなど）の用量は、一般にヒト一日当たり０．１〜２０ｍｇである。これは市販されている。

ビオチンの用量は、一般にヒト一日当たり０．１〜２０ｍｇである。これは市販されている。

コバラミンの用量は、一般にヒト一日当たり０．１〜２０ｍｇである。これは市販されている。

ケルセチンの用量は、例えばリンゴ（例えば皮）、タマネギ（例えば皮）、または茶葉から得られる植物の抽出物として、一般にヒト一日当たり５０ｍｇから２０００ｍｇである。これは市販されている。

αリポ酸の用量は、一般にヒト一日当たり２００ｍｇ〜１８００ｍｇである。これは市販されている。

ＥＧＣＧ（エピガロカテキン）の用量は、一般にヒト一日当たり緑茶抽出物としてＥＧＣＧ ２５ｍｇ〜６００ｍｇである。これは市販されている。

下記の非限定的実施例は、本発明を一層良く例示するために提供する。

［実施例］
［実施例１］
抗ウサギＰＧＣ−１αおよび抗ウサギＰＰＡＲ−γはＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）から、また抗αチューブリンはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）から、またＭｉｔｏ−Ｔｒａｃｋｅｒ Ｇｒｅｅｎ ＦＭ、抗酸化性複合体Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＶはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＵＳＡ）から、またＳＹＢＥＲ（登録商標）ＧＲＥＥＮ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ ＭｉｘはＡＢＩ（Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＵＫ）から、またＢＤ Ｏｘｙｇｅｎ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ Ｓｙｓｔｅｍ ｐｌａｔｅはＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）から購入した。ＨｙｄｒｏｘｙｔｙｒｏｓａｌはＤＳＭ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓから入手した。Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ Ｄ−ｌｏｏｐおよび１８ＳＲＮＡプライマーは、Ｂｉｏａｓｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）によって合成され、細胞培養用の他の試薬は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＵＳＡ）から入手した。

［細胞培養および脂肪細胞分化］
マウス３Ｔ３−Ｌ１前駆脂肪細胞（米国基準菌株保有機構（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ））を、１０％ウシ胎児血清を補ったダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養し、放置して密集に至らせた。前駆脂肪細胞の分化を、１０％ウシ胎児血清を補ったＤＭＥＭに溶かした１μＭインスリン、０．２５μＭデキサメタゾン、および０．５ｍＭ ３−イソブチル−１−メチルキサンチンで開始させた。４８時間後に培地を、１０％ウシ胎児血清および１μＭインスリンを補ったＤＭＥＭと取り替えた。一日おきに培地を、１０％ウシ胎児血清を含有するＤＭＥＭと交換した。細胞は、９０％脂肪細胞表現型を示す場合、分化誘発後９〜１０日間使用した。

［ミトコンドリア量の決定］
脂肪細胞をトリプシン処理し、４℃において１，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ＨＥＰＥＳおよび０．１％ＢＳＡで緩衝したクレブス・リンゲル溶液中に再懸濁し、次いでＤＭＥＭに溶かした０．１μＭ ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｇｒｅｅｎ ＦＭと３７℃において３０分間インキュベートした。細胞を、４℃において１，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ＨＥＰＥＳで緩衝した４００μｌの新鮮なクレブス・リンゲル溶液中に再懸濁した。それら画分中の相対的なミトコンドリアの染色を調べるために、各画分からの２００μｌのＰＢＳ中に分散させた２０×１０^３個のＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ標識細胞を９６ウェルプレートに載せ、蛍光マイクロプレート分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｏｂｅ）を用いて相対蛍光強度を読み取った（励起４８５±２５ｎｍ、発光５３８±２５ｎｍ）。結果は、未処理対照細胞と比べた蛍光強度の増加倍数によって表す。値は、４回の独立した実験から得られる結果の平均±ＳＥである。

［ウェスタンブロット分析］
処理後、氷で冷やしたＰＢＳで細胞を２度洗浄し、試料緩衝液（６２．５ｍＭトリスＣｌ、ｐＨ６．８、２％ＳＤＳ、５ｍＭ ＤＴＴ）中に室温で溶解し、ボルテックスさせた。次いで細胞ライゼートを５分間煮沸し、遠心分離（１３，０００ｒｐｍ、４℃で１０分間）によって澄ませた。Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＤＣタンパク質アッセイを用いてタンパク質濃度を求めた。これら可溶性ライゼート（レーン当たり１０μｇ）を１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけ、次いでタンパク質をニトロセルロース膜に転移し、５％脱脂乳／ＴＢＳＴにより室温で１時間ブロックした。それら膜を、５％乳汁／ＴＢＳＴ中のＰＰＡＲ−γ（１：１０００）、ＰＧＣ−１α（１：１０００）、α−チューブリン（１：１０，０００）、複合体Ｉ（１：２０００）、複合体ＩＩ（１：２０００）、複合体ＩＩＩ（１：２０００）、および複合体Ｖ（１：２０００）に対して向けられた第一抗体と４℃において一晩インキュベートした。それら膜をＴＢＳＴで３回洗浄した後、膜を西洋ワサビペルオキシダーゼ結合第二抗体と室温で１時間インキュベートした。ＥＣＬ（Ｒｏｃｈｅ Ｍａｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いてウェスタンブロットを発生させ、走査デンシトメトリーによって定量した。

［脂肪細胞の呼吸の測定］
完全細胞による酸素消費量を、ミトコンドリア呼吸活性の徴候として測定した。ＢＤ（商標）Ｏｘｙｇｅｎ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ Ｓｙｓｔｅｍ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）は、マルチウェルプレートの底に恒久的に付着させた気体透過性かつ疎水性の基質中に埋め込まれた酸素に敏感な蛍光化合物（塩化トリス１，７−ジフェニル−１，１０フェナントロリンルテニウム（ＩＩ））である。染料近傍の酸素濃度は、その液体媒地中の酸素濃度と平衡状態にある。酸素は、予測できる濃度依存的なやり方で染料を消光する。蛍光の量はウェル中の酸素消費速度と直接の相関があり、それは言い換えると酸素消費に関連している可能性のある何らかの反応と関係がある可能性がある。このユニークな技術は、酸素レベルの均一な瞬時の検出を可能にする。処理後、１％ＢＳＡを加えたＫＲＨ緩衝液中で脂肪細胞を洗浄した。各条件から得られる細胞を分割量に分け、３個対でＢＤ Ｏｘｙｇｅｎ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ Ｓｙｓｔｅｍ ｐｌａｔｅ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に入れた。プレートを密封し、蛍光分光計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｏｂｅｓ）上で、４８５ｎｍの励起波長および６３０ｎｍの発光波長で１分間隔で６０分間「読み取った」。等体積中に含まれた細胞数は、条件間で統計的に有意ではなかった（Ｗｉｌｓｏｎ−Ｆｒｉｔｃｈらの論文、２００４ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１４：１２８１〜１２８９）。

［ミトコンドリアＤＮＡの測定］
定量ＰＣＲは、Ｍｘ３０００Ｐ Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）中で行った。反応を、１２．５μｌのＳＹＢＲ−Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＡＢＩ）、０．５μｌの各プライマー（１０μＭ）、１００ｎｇの鋳型（ＤＮＡ）、または鋳型なし（ＮＴＣ）で行い、ＲＮアーゼを含まない水を最終体積２５μｌまで加えた。サイクリング条件は、５０℃で２分間、初期変性９５℃で１０分間、続いて９５℃で３０秒間、５５℃で１分間、および７２℃で３０秒間の４０サイクルである。各定量ＰＣＲを３回繰返して行った。下記のプライマーを使用した。ミトコンドリアＤループ順方向：５’−ＡＡＴＣＴＡＣＣＡＴＣＣＴＣＣＧＴＧ−３’（配列番号１）および逆方向：５’−ＧＡＣＴＡＡＴＧＡＴＴＣＴＴＣＡＣＣＧＴ（配列番号２）、１８ＳＲＮＡ順方向：５’−ＣＡＴＴＣＧＡＡＣＧＴＣＴＧＣＣＣＴＡＴＣ−３’（配列番号３）および逆方向：５’−ＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＧＡ−３’（配列番号４）。マウス１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子は内因リファレンス遺伝子として役立つ。融解曲線は、特異的増幅を保証するために取られた。相対的定量化には標準曲線法を使用した。次いで、ミトコンドリアＤループ対１８Ｓ ｒＲＮＡの比を計算した。最終結果は、対照に対する割合として与えられる。

［ミトコンドリア複合体Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩの活性のアッセイ］
脂肪細胞を１００ｍｍプレート中で培養し、ＰＢＳ中で洗浄し、適切な等張緩衝液（０．２５Ｍスクロース、５ｍＭトリスＨＣｌ（ｐＨ７．５）、および０．１ｍＭフッ化フェニルメチルスルホニル）中に再懸濁し、ホモジナイズした。細胞ホモジネートの分画遠心分離によってミトコンドリアを単離した。ＮＡＤＨ−補酵素Ｑオキシドレダクターゼ（複合体Ｉ）、コハク酸−補酵素Ｑオキシドレダクターゼ（複合体ＩＩ）、補酵素Ｑ−シトクロムｃレダクターゼ（複合体ＩＩＩ）を、通常のアッセイ（ＰｉｃｋｌｏおよびＭｏｎｔｉｎｅの論文、２００１ Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １５３５：１４５〜１５２、ならびにＨｕｍｐｈｒｉｅｓ，Ｋ．Ｍ．およびＳｚｗｅｄａ，Ｌ．Ｉ．の論文、１９９８ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７：１５８３５〜１５８４１）に小さな変更を加えて使用して分光測定により検定した。

［Ｃｐｔ１α ｍＲＮＡの発現分析のためのアッセイ］
３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞を、０．１、１．０、１０、および５０μｍｏｌ／ＬのＨＴで４８時間処理し、全ＲＮＡを単離した。Ｃｐｔ１α発現を、ＲＴ−ＰＣＲにより、Ｓｈｅｎ Ｗ、Ｌｉｕ Ｋ、Ｔｉａｎ Ｃらの論文、Ｒ−ａｌｐｈａ−Ｌｉｐｏｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ａｃｅｔｙｌ−Ｌ：−ｃａｒｎｉｔｉｎｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｌｙ ｐｒｏｍｏｔｅ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ３Ｔ３−Ｌ１ ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ ２００８；５１：１６５〜１７４に記載されている条件を用いて分析した。

様々な転写産物を検出できるサイクル数を、内部対照としての１８Ｓ ｒＲＮＡのそれと比較した。

［統計的解析］
すべての定量データは、少なくとも３回の独立した実験を表す。データは、平均±ＳＥとして与えられる。統計的有意性は、一元配置分散分析を２グループ間のボンフェロニのポストホックテストと共に使用することによって求めた。有意性の判定基準はｐ＜０．０５に設定した。

［結果］
脂肪細胞中のＰＣＧ−１αタンパク質レベルに与えるヒドロキシチロソールの影響：
図１に示すようにヒドロキシチロソールは、０．１から１０．０μＭまで増やした場合、釣鐘型効果を示し、最大タンパク質発現は１．０μＭであった（対照に対して２０５±５２％、ｐ＜０．０５）。

［脂肪細胞中の複合体Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＶタンパク質の発現に与えるヒドロキシチロソールの影響］
ミトコンドリア複合体をウェスタンブロットによって測定した（図２Ａ〜Ｄ）。ミトコンドリア電子伝達複合体Ｉタンパク質についての増加は、０．１μＭ（対照に対して１３１±１６％、ｐ＜０．０５）、１．０μＭ（対照に対して１６３±３１％、ｐ＜０．０１）、および１０．０μＭ（対照に対して１３８±２１％、ｐ＜０．０５）でのヒドロキシチロソール処理で観察された（図Ａ）。複合体ＩＩタンパク質の発現もまた、０．１、１．０、および１０．０μＭのヒドロキシチロソールで有意に増加した（図Ｂ）。複合体ＩＩＩおよびＶタンパク質の発現は、０．１、１．０、および１０．０μＭのヒドロキシチロソールで有意に増加した（図ＣおよびＤ）。

［ミトコンドリアＤＮＡに与えるヒドロキシチロソールの影響］
Ｄループは、ｍｔＤＮＡの重鎖および軽鎖の両方で転写開始の主要部位として知られているので、本発明者らは、ヒドロキシチロソールがｍｔＤＮＡ発現を増加させることができるかどうかをｉｎ ｖｉｔｒｏで調べた。図３に示すようにｍｔ Ｄループ／１８ＳＲＮＡの比は、１．０μＭのヒドロキシチロソールで処理した脂肪細胞において有意に増加した。

［脂肪細胞における酸素消費量に与えるヒドロキシチロソールの影響］
ミトコンドリア生合成の増加が、酸素消費量の変化を伴うかどうかを調べるために、細胞を０．１、１．０、１０．０、および５０μＭのヒドロキシチロソールで処理した。図４に示すように酸素消費の基礎代謝率（ｂａｓａｌ ｒａｔｅ）は、１．０〜１０．０μＭのヒドロキシチロソールで処理した脂肪細胞において有意に増加した。

［ミトコンドリア複合体Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶの活性に与えるヒドロキシチロソールの影響］
ヒドロキシチロソールは、対照と比較して１．０μＭにおけるそれぞれ脂肪細胞中のミトコンドリア複合体Ｉの活性の有意の増加を示した（図５Ａ）。ミトコンドリア複合体ＩＩの活性は、０．１、１．０、および１０．０μＭのヒドロキシチロソールで有意に増加した（図５Ｂ）。ヒドロキシチロソールはまた、０．１μＭおよび１０．０μＭで脂肪細胞中のミトコンドリア複合体ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶの活性の有意な増加を示した（図５Ｃ、５Ｄ、および５Ｅ）。

［Ｃｐｔ１遺伝子発現に与えるヒドロキシチロソールの影響］
Ｃｐｔ１は、アシル−補酵素Ｑをアシルカルニチンに変換することによってそれがミトコンドリア膜を横切って長鎖脂肪酸の輸送を調節するのでミトコンドリアの脂肪酸酸化のゲートキーパーである。ＨＴは、Ｃｐｔ１ ｍＲＮＡ発現に関して用量依存性の増加、すなわち１．０μｍｏｌ／ＬのＨＴで有意な増加を示した。

要約するとヒドロキシチロソールは、ミトコンドリア機能および細胞防御系の強化をもたらすミトコンドリアの活性およびミトコンドリア生合成を促進させる。

［実施例２]
持久力に与えるヒドロキシチロソールの影響：
この検討の目的は、トレッドミル上での最高ランニング能力に与えるヒドロキシチロソールの効果を調べることであった。

要約すると、４０匹のマウス（Ｃ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌ、生後８週）をＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（Ｓｕｌｚｆｅｌｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入し、水および飼料に自由にアクセスする状態で個別に檻に閉じ込め、明−暗サイクルを１２時間交互させた。動物は標準的な齧歯動物用食物（Ｓｓｎｉｆｆ Ｒ／Ｍ−Ｈ，Ｅｘｔ．ｎ^ｏ Ｖ１５３６，Ｓｓｎｉｆｆ Ｌｔｄ．，Ｓｏｅｓｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を与えられた。この食物に適応させて２週間後にマウスを体重に従って無作為化して１０匹の４つの実験グループにした。この４つのグループを３週間のあいだ毎朝、水（対照グループ）か、または水で０．２ｍｌまで希釈し、５０％ヒドロキシチロソールを含有するオリーブ抽出物のいずれかで一日当たり５０、１５０、または３００ｍｇ／体重ｋｇの用量で経口処理した。実験全体にわたって飼料消費量の違いはなかった。処理の３週間後、トレッドミル上での最大ランニング距離を測定した。食餌介入グループ（ｄｉｅｔａｒｙ ｇｒｏｕｐｓ）間の平均値の差の統計的有意性を一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）により検定した。有意差が見られた場合、多重比較のためのダネット検定を用いて各グループを対照グループと比較した。０．０５未満のｐ値を有意とみなした。ヒドロキシチロソールは、マウスの疲労状態になるまでのランニング距離を有意に増加させ、従って長期の運動における持久力を向上させた。

図７は、ヒドロキシチロソールを５０％含有するオリーブ抽出物として一日当たり５０、１５０、または３００ｍｇ／体重ｋｇの用量でチューブによる栄養補給によって与えられるヒドロキシチロソールの効果を示し、補給の３週間後のマウスにおいて最大で５０％まで持久力を増進させる。

［実施例３]
栄養飲料が、１杯当たり５０ｍｇのヒドロキシチロソールおよび１００ｍｇのカフェインを含有する。

［実施例４]
スポーツサプリメントが、２０ｇのクレアチンおよび１００ｍｇのヒドロキシチロソールを含有する。

［実施例５]
体形／脂肪燃焼／体組成の改善のためのサプリメントが、一日１人当たり５００ｍｇのカルニチンおよび２５ｍｇのヒドロキシチロソールを含有する。

［実施例６]
例えば５時間のエナージーショットが、ビタミンＢ類、タウリン、グルクロノラクトン、カフェイン（またはカフェイン抜き、シチコリン、リンゴ酸、Ｎ−アセチルチロシン、Ｌ−フェニルアラニン）に加えてヒドロキシチロソールを含有する。

［実施例７]
チョコレートバーが、２５ｇのチョコレート当たり、２５ｍｇのヒドロキシチロソールおよび２５ｍｇのＥＧＣＧを含有する。

［実施例８]
インスタントスポーツ飲料が、５ｇのクレアチン、５０ｍｇの補酵素Ｑ１０、および５０ｍｇのヒドロキシチロソールを含有する。

［実施例９]
エナージーバーが、５ｍｇのレスベラトロールおよび５ｍｇのヒドロキシチロソールを含有する。

［実施例１０]
レディ・トゥ・ドリンクアイスティー（したがってＥＧＣＧを含有する）が、８液量オンス当たり１２．５ｍｇのヒドロキシチロソールおよび５ｍｇのレスベラトロールで強化される。

［実施例１１]
リンゴジュース（したがってケルセチンを含有する）が、８液量オンス当たり１２．５ｍｇのヒドロキシチロソールおよび５ｍｇのレスベラトロールで強化される。

［実施例１２]
レディ・トゥ・ドリンクスポーツ飲料が、８液量オンス当たり１５ｍｇのヒドロキシチロソール、５０ｍｇのケルセチン、および２５ｍｇのＥＧＣＧで強化される。

［実施例１３]
エナージーショットが、２液量オンス当たり２５ｍｇのヒドロキシチロソール、２００ｍｇのカフェイン、および１００％ＲＤＡのビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ５、ビオチン、およびＢ１２で強化される。

［実施例１４]
ミニエナージーショットが液体プラリネ／ポケットコーヒーとして設計され、２液量オンス当たり２５ｍｇのヒドロキシチロソール、２００ｍｇのカフェイン、および１００％ＲＤＡのビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ５、ビオチン、およびＢ１２で強化される。

［実施例１５]
［他の化合物と組み合わせたヒドロキシチロソールの相乗効果］
この実験の目的は、筋芽細胞中のミトコンドリアのエネルギー生産が単独または他の化合物と組み合わせたヒドロキシチロソールによって影響されるかどうか、またどのように影響されるかを調べることであった。エネルギー生産の場合、ミトコンドリア電子伝達鎖は、ミトコンドリア膜間の空間の両端間にプロトン勾配を発生させ、ＡＴＰシンターゼ複合体によるＡＴＰの合成の動力を供給する膜電位を生み出す。したがってミトコンドリア膜電位は、活性なミトコンドリアエネルギー生産を示す。陽イオン緑色蛍光化合物ＪＣ−１（ヨウ化５，５’，６，６’−テトラクロロ−１，１’，３，３’−テトラエチルベンゾイミダゾリル−カルボシアニン）は、内部ミトコンドリア膜電子に比例してミトコンドリアによって吸収される。臨界濃度に達するとＪＣ−１は凝集体を形成し、その蛍光特性を緑色から赤色の蛍光に変える。したがって、赤色蛍光（凝集体）対緑色蛍光（単量体）の比は染色細胞中のミトコンドリア膜電位に正比例し、ミトコンドリアの全般的な健康状態および機能の指標として役立つ。ミトコンドリア膜電位の増加は、エネルギー状態の改善と、ＡＴＰを産生し、他の細胞構成要素にエネルギーを供給する能力の向上とを指し示す。

本発明者らは、Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞中のミトコンドリア膜電位に与えるヒドロキシチロソール、カフェイン、Ｌ−カルニチン、あるいはヒドロキシチロソールとカフェインまたはＬ−カルニチンの組合せの効果を調べた。Ｃ２Ｃ１２細胞を、９６ウェル細胞培養プレート中に１ウェル当たり細胞１０００個を播種し、標準インキュベーター（加湿、３７℃、５％ＣＯ_２）中で成長培地（１０％ウシ胎児血清を補ったダルベッコ変性イーグル培地（ＤＭＥＭ））で２４時間培養した。次いで細胞を、ａ）対照溶媒（リン酸緩衝塩類液）、ｂ）１μＭヒドロキシチロソール、ｃ）２００μＭカフェイン、ｄ）２００μＭ Ｌ−カルニチン、ｅ）１μＭヒドロキシチロソール＋２００μＭカフェイン、またはｆ）１μＭヒドロキシチロソール＋２００μＭ Ｌ−カルニチンを含有する成長培地とインキュベートした。ＡＭＰキナーゼ活性化因子アミノイミダゾールカルボキサミドリボヌクレオチド（ＡＩＣＡＲ）は、ミトコンドリアのエネルギー生産に影響を及ぼすことが知られており、陽性対照（５００μＭ）として働いた。２４時間の処理後、細胞をＪＣ−１（２μｇ／ｍｌ）を含有する培地と３７℃で３０分間インキュベートし、次いで染色液を除去し、フェノールレッドなしのＤＭＥＭを加え、蛍光プレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５）を用いて緑色蛍光（励起４８５ｎｍ／発光５３８ｎｍ）および赤色蛍光（励起５４４ｎｍ／発光５９０ｎｍ）を測定した。各ウェルにおける赤色対緑色蛍光の比を求め、繰返し４回の処理の平均および標準偏差を計算した。

ＡＩＣＡＲによるＣ２Ｃ１２細胞の処理は細胞のエネルギー生産に影響を及ぼし、赤色／緑色蛍光比の増加が反映するミトコンドリア電位の増加を生じさせる（図８Ａ）。細胞の１μＭヒドロキシチロソール（ＨＴ）による処理には有意な効果がなかったが、１０μＭ ＨＴによる処理はミトコンドリア電位を増加させた（図８Ａ）。２００μＭカフェインまたは２００μＭ Ｌ−カルニチンのみによる処理は、ミトコンドリア膜電位に与える効果がなかった（図８Ｂ）。しかしこれら化合物を等量濃度で、だが１μＭ ＨＴと組み合わせて使用した場合、ミトコンドリア膜電位に与える相乗効果が観察された。ヒドロキシチロソールとカフェインの組合せによる、またはヒドロキシチロソールとＬ−カルニチンの組合せによるＣ２Ｃ１２細胞の処理は、ミトコンドリア膜電位をそれぞれ１５％および１４％増加させた。この効果は、ＡＩＣＡＲで観察される効果（＋１６％）に匹敵した（下記表１）。

これらの結果は、ヒドロキシチロソールとカフェインの組合せ、およびヒドロキシチロソールとＬ−カルニチンの組合せが、ミトコンドリアの機能およびエネルギー生産を相乗的に高めることを実証している。

Claims (4)

1. ヒドロキシチロソールを、カフェインと組み合わせて含む組成物。
2. 前記ヒドロキシチロソールがオリーブ抽出物中に存在する、請求項１に記載の組成物。
3. 前記組成物が食品である、請求項１または２に記載の組成物。
4. 前記組成物が動物用食品である、請求項１または２に記載の組成物。

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