JP5582635B2

JP5582635B2 - プロスタグランジン含有脂肪乳剤およびその製造方法

Info

Publication number: JP5582635B2
Application number: JP2009550552A
Authority: JP
Inventors: 喜一郎鍋田
Original assignee: Techno Guard Co Ltd
Current assignee: Techno Guard Co Ltd
Priority date: 2008-01-24
Filing date: 2009-01-22
Publication date: 2014-09-03
Anticipated expiration: 2029-01-22
Also published as: JPWO2009093650A1; WO2009093650A1

Description

本発明は、プロスタグランジンの安定性とともに乳剤の安定性に優れるプロスタグランジン含有脂肪乳剤およびその製造方法に関する。

プロスタグランジンＥ_１（ＰＧＥ_１）に代表されるプロスタグランジン（ＰＧ）にはいくつかのタイプが存在し、そのいずれもが生体内において重要な生理学的機能を担っていることはよく知られた事実である。従って、プロスタグランジンは医薬品としての利用が期待される物質であるが、プロスタグランジンは極めて不安定な物質であるため、プロスタグランジンを医薬品として用いるためには、製剤中においてその安定性をいかに確保するかが主要なテーマとなる。プロスタグランジンの脂肪乳剤化は、製剤中におけるプロスタグランジンの安定性を確保するための方法として古くから知られている。また、脂肪乳剤を調製する際に必要となる乳化剤として用いることができる卵黄リン脂質や大豆リン脂質などの天然由来のリン脂質にはホスファチジルエタノールアミンが１０〜２０重量％含まれているが、このホスファチジルエタノールアミンがプロスタグランジンの安定性に悪影響を及ぼすことに鑑み、ホスファチジルエタノールアミンの含量を少なくしたリン脂質を乳化剤として用いてプロスタグランジンを脂肪乳剤化する方法が特許文献１において提案され、例えばこの方法を採用したプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤は、既に臨床現場において慢性動脈閉塞症などの治療に利用されている。
特公平８−１８９８９号公報

しかしながら、こうしてプロスタグランジンＥ_１の安定化が図られた製剤であっても、その効果は必ずしも十分なものではなく、乳剤の安定性を確保する点からも、その保存は５℃以下の遮光条件で行うこととされており、有効期間もわずか１年と定められている。
そこで本発明は、プロスタグランジンの安定性とともに乳剤の安定性に優れるプロスタグランジン含有脂肪乳剤およびその製造方法を提供することを目的とする。

ところで、ホスファチジルエタノールアミンの含量を少なくしたリン脂質は、乳化剤としての機能がそれほど高くないことが知られている。そのため、このリン脂質を乳化剤として用いて脂肪乳剤を調製する場合、オレイン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ミリスチン酸などの脂肪酸を乳化補助剤として配合して乳剤を安定化する必要があり、このことは当業者に共通の認識となっている。しかしながら、特許文献１において提案されたプロスタグランジン含有脂肪乳剤における脂肪乳剤の構成成分のプロスタグランジンの安定性に及ぼす影響を本発明者が詳細に検討したところ、乳化補助剤として用いている脂肪酸もまた、ホスファチジルエタノールアミンと同様にプロスタグランジンの安定性に悪影響を及ぼすことが判明した。よって、本発明者は、ホスファチジルエタノールアミンの含量を少なくしたリン脂質を乳化剤として用いてプロスタグランジンを脂肪乳剤化する場合、乳化補助剤として脂肪酸を配合することなく、乳剤の安定化を図る方法を確立する必要があるとの結論に至り、鋭意検討を重ねた結果、油脂の含量、油脂に対するプロスタグランジンの重量比率、油脂に対するリン脂質の重量比率を好適な数値範囲とすることにより、プロスタグランジンの安定性とともに乳剤の安定性に優れるプロスタグランジン含有脂肪乳剤を製造できることを知見した。

以上の知見に基づいてなされた本発明は、請求項１記載の通り、プロスタグランジン、油脂、ホスファチジルエタノールアミンの含量が２重量％以下の乳化剤、水を少なくとも構成成分とするプロスタグランジン含有脂肪乳剤であって、プロスタグランジンの含量が０．００１〜１．５ｍｇ／ｍＬ、油脂の含量が０．０５〜２ｍｇ／ｍＬ、油脂に対するプロスタグランジンの重量比率（プロスタグランジン／油脂）が０．０００５〜２０（但しプロスタグランジンと油脂の合計含量は最大で３．５ｍｇ／ｍＬ）、油脂に対する乳化剤の重量比率（乳化剤／油脂）が１〜６００であり、炭素数が６〜２２の脂肪酸またはその塩が配合されておらず、濁度が０．５以下であり、プロスタグランジンがプロスタグランジンＥ _１およびプロスタグランジンＦ _２α から選択されることを特徴とする。
また、請求項２記載の脂肪乳剤は、請求項１記載の脂肪乳剤において、乳化剤がリン脂質であることを特徴とする。
また、請求項３記載の脂肪乳剤は、請求項１記載の脂肪乳剤において、脂肪粒子の平均粒子径が１０〜３００ｎｍであることを特徴とする。
また、請求項４記載の脂肪乳剤は、請求項１記載の脂肪乳剤において、プロピレングリコール、グリセリン、マクロゴール、乳酸、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、コンドロイチン硫酸またはその塩、ヒアルロン酸またはその塩から選ばれる少なくとも１つをさらに構成成分とすることを特徴とする。
また、本発明は、請求項５記載の通り、プロスタグランジン、油脂、ホスファチジルエタノールアミンの含量が２重量％以下の乳化剤、水を少なくとも構成成分とし、濁度が０．５以下であるプロスタグランジン含有脂肪乳剤の製造方法であって、プロスタグランジンをプロスタグランジンＥ _１およびプロスタグランジンＦ _２α から選択し、プロスタグランジンの含量を０．００１〜１．５ｍｇ／ｍＬ、油脂の含量を０．０５〜２ｍｇ／ｍＬ、油脂に対するプロスタグランジンの重量比率（プロスタグランジン／油脂）を０．０００５〜２０（但しプロスタグランジンと油脂の合計含量は最大で３．５ｍｇ／ｍＬ）、油脂に対する乳化剤の重量比率（乳化剤／油脂）を１〜６００とし、炭素数が６〜２２の脂肪酸またはその塩を配合しないで構成成分を乳化することを特徴とする。
また、請求項６記載の製造方法は、請求項５記載の製造方法において、乳化を３５０〜１５００バールの圧力で行うことを特徴とする。
また、請求項７記載の製造方法は、請求項５記載の製造方法において、乳化後に高圧蒸気滅菌またはろ過滅菌を行うことを特徴とする。

本発明によれば、プロスタグランジンの安定性とともに乳剤の安定性に優れるプロスタグランジン含有脂肪乳剤およびその製造方法を提供することができる。

実施例におけるプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤の滅菌安定性の評価の結果を示すグラフである。同、プロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤の保存安定性の評価の結果を示すグラフである。

本発明は、プロスタグランジン、油脂、ホスファチジルエタノールアミンの含量が２重量％以下の乳化剤、水を少なくとも構成成分とするプロスタグランジン含有脂肪乳剤であって、油脂の含量が０．０５〜２０ｍｇ／ｍＬ、油脂に対するプロスタグランジンの重量比率（プロスタグランジン／油脂）が０．０００５〜２０（但しプロスタグランジンと油脂の合計含量は最大で２５ｍｇ／ｍＬ）、油脂に対する乳化剤の重量比率（乳化剤／油脂）が１〜６００であり、炭素数が６〜２２の脂肪酸またはその塩が配合されていないことを特徴とするものである。

本発明が適用できるプロスタグランジンは、プロスタン酸骨格を有する物質であり、具体的には、プロスタグランジンＥ_１、プロスタグランジンＥ_２、プロスタグランジンＦ_２α、プロスタグランジンＩ_２の他、そのアルキルエステル（メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、ブチルエステルなど）をはじめとする各種の誘導体が挙げられる。油脂としては、大豆油、トウモロコシ油、ヤシ油、サフラワー油、エゴマ油、オリーブ油、ヒマシ油、綿実油などの植物油の他、ラノリンなどの動物油、卵黄油、魚油、流動パラフィンなどの鉱物油、中鎖脂肪酸トリグリセリド、化学合成トリグリセリド、ゲル化炭化水素などが挙げられる。ホスファチジルエタノールアミンの含量が２重量％以下の乳化剤としては、卵黄リン脂質や大豆リン脂質などの天然由来のリン脂質に対してホスファチジルエタノールアミンの除去処理がなされたものが挙げられる。天然由来のリン脂質に対するホスファチジルエタノールアミンの除去処理は、例えば特許文献１に記載の方法に従って行うことができる。ホスファチジルエタノールアミンの除去処理がなされた卵黄リン脂質については市販もされている（ＰＣ−９８Ｎ：キューピー社製、ホスファチジルコリンの含量が９８重量％以上でホスファチジルエタノールアミンの含量が１重量％以下）。乳化剤のホスファチジルエタノールアミンの含量は１重量％以下が望ましい。なお、乳化剤は、水素添加卵黄レシチン、水素添加大豆レシチン、ホスファチジルエタノールアミンを全く含まないポリソルベート、ＰＥＧ−水添ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などであってもよい。

本発明において、油脂の含量を０．０５〜２０ｍｇ／ｍＬと規定するのは、０．０５ｍｇ／ｍＬよりも少ないと油脂とプロスタグランジンの相互作用（プロスタグランジンの脂肪粒子表面への付着など）による油脂のプロスタグランジンに対する安定化効果が減じられてしまい、プロスタグランジンを単に乳化剤だけで乳化して可溶化した場合と同程度の安定性しか得られず、プロスタグランジンが分解しやすくなる一方、２０ｍｇ／ｍＬよりも多いと多量の油を含むことによる乳剤の安定性への悪影響が生じやすくなるからである。油脂の含量は０．０７〜１０ｍｇ／ｍＬが望ましく、０．１〜１．５ｍｇ／ｍＬがより望ましい。油脂に対するプロスタグランジンの重量比率（プロスタグランジン／油脂）を０．０００５〜２０（但しプロスタグランジンと油脂の合計含量は最大で２５ｍｇ／ｍＬ）と規定するのは、０．０００５よりも小さいとプロスタグランジンに対して油脂が過多となり、患者に対して無用な油脂を投与することになってしまう一方、２０よりも大きいと油脂に対してプロスタグランジンが過多となり、プロスタグランジンの安定性が損なわれ、プロスタグランジンが分解や析出しやすくなるからである。油脂に対するプロスタグランジンの重量比率は０．００５〜１０が望ましい。プロスタグランジンと油脂の合計含量を最大で２５ｍｇ／ｍＬと規定するのは、２５ｍｇ／ｍＬよりも多いと例えば１５００バール以下といった温和な圧力条件での安定な乳剤の作製が困難になるからである。プロスタグランジンと油脂の合計含量は最大で５ｍｇ／ｍＬが望ましい（プロスタグランジンの含量は０．００１〜１．５ｍｇ／ｍＬが望ましい）。油脂に対する乳化剤の重量比率（乳化剤／油脂）を１〜６００と規定するのは、１よりも小さいと乳化剤に対して油脂が過多となり、乳剤の安定性に悪影響を及ぼしたりしやすくなる他、例えば１５００バール以下といった温和な圧力条件での安定な乳剤の作製が困難である一方、６００よりも大きいと乳化剤が凝集や析出しやすくなるからである。油脂に対する乳化剤の重量比率は５〜２００が望ましい。

本発明のプロスタグランジン含有脂肪乳剤は、油脂の含量、油脂に対するプロスタグランジンの重量比率、油脂に対する乳化剤の重量比率を上記の数値範囲に設定し、自体公知の手順、例えば、プロスタグランジン、油脂、乳化剤をいったん均一に混合して溶解させて油相とし、これに水を加えた後、強力に撹拌して粗乳化液を調製し（例えば回転数が１００００〜１５０００ｒｐｍで５〜３０分間の撹拌による）、次いで粗乳化液をマントンゴーリンホモジナイザーなどの高圧乳化機を用いて乳化することにより製造することができる。脂肪粒子の粒子系分布を狭くするために、乳化は複数回行ってもよい（例えば３〜５０回）。本発明のプロスタグランジン含有脂肪乳剤の製造に際しては、オレイン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ミリスチン酸などの炭素数が６〜２２の脂肪酸やその塩（アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、有機アミン塩など）を乳化補助剤として配合しない。特筆すべきは、油脂の含量、油脂に対するプロスタグランジンの重量比率、油脂に対する乳化剤の重量比率を上記の数値範囲に設定することで、例えば１５００バール以下、望ましくは３５０〜１０００バールの乳化圧力であっても、脂肪粒子の平均粒子径を１〜３００ｎｍの範囲で調整することが可能となり、脂肪粒子の平均粒子径がこのような数値範囲のプロスタグランジンの安定性とともに乳剤の安定性に優れるプロスタグランジン含有脂肪乳剤を容易に製造できる点にある。また、油脂の含量を２ｍｇ／ｍＬ以下にすることで、例えば脂肪粒子の平均粒子径が３０〜２００ｎｍであって、濁度が０．５以下、好適には０．４以下、より好適には０．３以下の透明性を有するプロスタグランジン含有脂肪乳剤を製造できる。

なお、本発明のプロスタグランジン含有脂肪乳剤の構成成分としてプロピレングリコール、グリセリン、マクロゴール、乳酸、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、コンドロイチン硫酸またはその塩（ナトリウム塩など）、ヒアルロン酸またはその塩（ナトリウム塩など）などをさらに用いることで、プロスタグランジンの溶解性の向上、プロスタグランジンや乳剤の安定性の向上、乳剤の等張化などを図ってもよい。これらの含量は０．２〜３００ｍｇ／ｍＬが望ましく、０．２〜５０ｍｇ／ｍＬがより望ましい。０．２ｍｇ／ｍＬよりも少ないと効果が発揮されにくくなる一方、３００ｍｇ／ｍＬよりも多いと粘度の上昇によって乳化が困難になったり、乳剤が酸性化されて不安定になったりしやすくなる。

また、本発明のプロスタグランジン含有脂肪乳剤の構成成分として糖類をさらに用いることで、時として発生しうる析出浮遊物の発生を効果的に抑制することができる。好適な糖類としては、イノシトール、グルコース、ソルビトール、フルクトース、マンニトールなどの単糖類、トレハロース、ラクトース、スクロース、マルトースなどの二糖類の他、デキストリン、シクロデキストリン、デキストラン、キシリトールなどが挙げられる。糖類の含量は１０〜６００ｍｇ／ｍＬが望ましい。

また、本発明のプロスタグランジン含有脂肪乳剤の構成成分として自体公知のｐＨ調整剤や浸透圧調整剤をさらに用い、ｐＨを調整したり（例えばプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤の場合においてはｐＨは４．５〜６が望ましい）、浸透圧を調整したりしてもよい。なお、必要に応じて防腐剤や抗酸化剤などを構成成分としてもよいことは言うまでもない。

本発明のプロスタグランジン含有脂肪乳剤は、例えば平均粒子径を１００ｎｍ以下に設定することで、ろ過滅菌を容易に行うことができる他、高圧蒸気滅菌を行うこともできる。高圧蒸気滅菌は、本発明の薬物含有脂肪乳剤をガラス製アンプルや合成樹脂製容器などに充填した後、オートクレーブなどを用いて一般的な条件（例えば１２０〜１２２℃×１０〜１５分）で行えばよい。

本発明のプロスタグランジン含有脂肪乳剤は、プロスタグランジンの安定性とともに乳剤の安定性に優れるので、低温においては安定に保存できる期間が既存上市品に比較して飛躍的に延長し、短期間であれば常温保存も可能である。また、油脂の含量を２ｍｇ／ｍＬ以下にすることで透明性を持たせることができることは、変質や異物混入の有無、配合変化の目視での確認を容易にする他、投与される患者に対して安心感を与える。従って、本発明のプロスタグランジン含有脂肪乳剤は、臨床現場において既に利用されているプロスタグランジン含有脂肪乳剤にはない特性を備えた注射剤として用いることができる。さらに、本発明のプロスタグランジン含有脂肪乳剤がプロスタグランジンの安定性とともに乳剤の安定性に優れることは、プロスタグランジンの点眼剤や吸入剤や液剤などとしての適用を可能とし、とりわけ透明性を持たせた場合には点眼剤として、平均粒子径を小さくした場合には吸入剤として適したものとなる。

以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。

実施例１：プロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤（その１）
精製大豆油１５０ｍｇ、精製卵黄レシチン（ＰＣ−９８Ｎ：キューピー社製、ホスファチジルコリンの含量が９９．４重量％でホスファチジルエタノールアミンの含量が０．６重量％以下、以下同じ）２．７ｇ、グリセリン３．３１ｇをビーカーに入れ、加温下（４５℃）で汎用ミキサーを用いて均一に混合して溶解させた後、窒素気流下でプロスタグランジンＥ_１１ｍｇを加え、よく混合して油相とした。この油相にハイフレックスディスパーサー（ＳＭＴ社製、以下同じ）を用いて攪拌下、精製水３０ｍＬを少しずつ添加し、添加終了後１１０００ｒｐｍで５分間粗乳化（１回目）した。次に、精製水をさらに添加して液容量を１５０ｍＬにメスアップした後、１２０００ｒｐｍで１０分間粗乳化（２回目）した。こうして得られた粗乳化液を窒素気流下で高圧ホモジナイザー（ＬＡＢ１０００：ＳＭＴ社製、以下同じ）を用いて精密乳化した。乳化圧力は７５０バールとし、乳化回数は２０回とした（マルチパス方式）。乳化後、ｐＨ調整剤として０．１Ｎ塩酸水溶液を添加してｐＨを５．１８に調整し、乳化液をガラス製アンプルに入れ、高圧蒸気滅菌を１２１℃×１０分の条件で行い、目的とするプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤を得た。その物性値を表１に示す。

実施例２：プロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤（その２）
精製大豆油を１５ｍｇ使用したこと以外は実施例１と同様にして目的とするプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤を得た。その物性値を表１に示す。

実施例３：プロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤（その３）
精製大豆油３００ｍｇ、精製卵黄レシチン５．４ｇ、プロピレングリコール６．６３ｇをビーカーに入れ、加温下（４０℃）で汎用ミキサーを用いて均一に混合して溶解させた後、窒素気流下でプロスタグランジンＥ_１１．８ｍｇを加え、よく混合して油相とした。この油相にハイフレックスディスパーサーを用いて攪拌下、精製水１００ｍＬを少しずつ添加し、添加終了後１００００ｒｐｍで５分間粗乳化（１回目）した。次に、精製水をさらに１６０ｍＬ添加して１２０００ｒｐｍで１０分間粗乳化（２回目）した。この粗乳化液の液容量を精製水で３００ｍＬにメスアップした後、窒素気流下で高圧ホモジナイザーを用いて精密乳化した。乳化圧力は６５０バールとし、乳化回数は２０回とした（マルチパス方式）。この乳化液に攪拌下でマンニトール３０ｇを加えて均一液とし、さらにｐＨ調整剤として０．１Ｎ塩酸水溶液を添加してｐＨを５．４６に調整した後、ガラス製アンプルに入れ、高圧蒸気滅菌を１２１℃×１０分の条件で行い、目的とするプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤を得た。その物性値を表１に示す。

実施例４：プロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤（その４）
精製大豆油３００ｍｇ、精製卵黄レシチン５．４ｇ、プロピレングリコール６．６３ｇをビーカーに入れ、加温下（４０℃）で汎用ミキサーを用いて均一に混合して溶解させた後、窒素気流下でプロスタグランジンＥ_１１．８ｍｇを加え、よく混合して油相とした。この油相にハイフレックスディスパーサーを用いて攪拌下、精製水１００ｍＬを少しずつ添加し、添加終了後１００００ｒｐｍで５分間粗乳化（１回目）した。次に、精製水をさらに１６０ｍＬ添加して１２０００ｒｐｍで１０分間粗乳化（２回目）した。この粗乳化液の液容量を精製水で３００ｍＬにメスアップした後、窒素気流下で高圧ホモジナイザーを用いて精密乳化した。乳化圧力は６５０バールとし、乳化回数は２０回とした（マルチパス方式）。この乳化液に攪拌下にトレハロース３０ｇを加えて均一液とし、さらにｐＨ調整剤として０．１Ｎ塩酸水溶液を添加してｐＨを５．３９に調整した後、ガラス製アンプルに入れ、高圧蒸気滅菌を１２１℃×１０分の条件で行い、目的とするプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤を得た。その物性値を表１に示す。

実施例５：プロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤（その５）
精製大豆油１００ｍｇ、精製卵黄レシチン１８０ｍｇ、プロピレングリコール２２１ｍｇをビーカーに入れ、加温下（４０℃）で汎用ミキサーを用いて均一に混合して溶解させた後、窒素気流下でプロスタグランジンＥ_１０．６ｍｇを加え、よく混合して油相とした。この油相にハイフレックスディスパーサーを用いて攪拌下、精製水４０ｍＬを少しずつ添加し、添加終了後１００００ｒｐｍで３分間粗乳化（１回目）した。次に、精製水をさらに３０ｍＬ添加して１２０００ｒｐｍで７分間粗乳化（２回目）した。この粗乳化液の液容量を精製水で１００ｍＬにメスアップした後、窒素気流下で高圧ホモジナイザーを用いて精密乳化した。乳化圧力は６５０バールとし、乳化回数は２０回とした（マルチパス方式）。この乳化液に攪拌下にマンニトール１０ｇを加えて均一液とし、さらにｐＨ調整剤として０．１Ｎ塩酸水溶液を添加してｐＨを５．５６に調整した後、ガラス製アンプルに入れ、高圧蒸気滅菌を１２１℃×１０分の条件で行い、目的とするプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤を得た。その物性値を表１に示す。

比較例１：プロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤（既存上市品相当）
精製大豆油２５ｇ、精製卵黄レシチン４．５ｇ、オレイン酸０．６ｇをビーカーに入れ、加温下（４５℃）で汎用ミキサーを用いて均一に混合して分散させた後、窒素気流下でプロスタグランジンＥ_１１．２５ｍｇを加え、よく混合して油相とした。この油相にハイフレックスディスパーサーを用いて攪拌下、グリセリン溶液（濃グリセリン５．５２ｇを精製水２００ｍＬに溶解した水溶液）を少しずつ添加し、添加終了後１２０００ｒｐｍで１５分間粗乳化した。次に、精製水をさらに添加して液容量を２５０ｍＬにメスアップした後、窒素気流下で高圧ホモジナイザーを用いて精密乳化した。乳化圧力は７００バールとし、乳化回数は２０回とした（マルチパス方式）。乳化後、ｐＨ調整剤として０．１Ｎ塩酸水溶液を添加してｐＨを５．２２に調整し、乳化液をガラス製アンプルに入れ、高圧蒸気滅菌を１２１℃×１０分の条件で行い、目的とするプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤を得た。その物性値を表１に示す。

なお、濁度の測定は、紫外分光光度計（ＵＶ２４０：島津製作所社製）を用い、サンプルを測定セル（セル幅：１ｃｍ角）に入れて波長λ＝６２０ｎｍで行った（ブランクは水）。サンプルが透けて見え、凝集や沈殿などの変質や異物混入の有無、配合変化を目視で容易に確認できる透明〜半透明領域はＡｂｓ（吸光度）＝０．５以下である。平均粒子径の算出は、光子相関法を用いた粒子径測定装置（ゼータサイザー３０００ＨＳ：シスメックス社製）を用いて行った。

試験例１：プロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤の滅菌安定性の評価
実施例１〜５、比較例１のそれぞれのプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤について、高圧蒸気滅菌を行う前のプロスタグランジンＥ_１の含量を１００として、高圧蒸気滅菌を行った後のプロスタグランジンＥ_１の残存率を高速液体クロマトグラフィーを用いて求めた（測定条件は表２を参照）。結果を図１に示す。図１から明らかなように、比較例１のプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤は、高圧蒸気滅菌を行うことによって約４０％のプロスタグランジンＥ_１が分解されてしまったが、実施例１〜５のプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤は、高圧蒸気滅菌を行うことによるプロスタグランジンＥ_１の分解は最大でも約２０％に留まり、プロスタグランジンＥ_１の滅菌安定性に優れることがわかった。なお、実施例１〜５、比較例１のいずれのプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤も、高圧蒸気滅菌の前後において乳剤の安定性に実用上の支障となるような変化はなかった（相分離、沈殿、析出、相変化の有無などの目視観察による）。

試験例２：プロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤の保存安定性の評価
実施例１〜５、比較例１のそれぞれのプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤について、高圧蒸気滅菌を行った直後のプロスタグランジンＥ_１の含量を１００として、４０℃において４週間保存した後のプロスタグランジンＥ_１の残存率を試験例１と同様にして求めた。結果を図２に示す。図２から明らかなように、比較例１のプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤は、保存開始から４週間後には７０％以上のプロスタグランジンＥ_１が分解されてしまったが、実施例１〜５のプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤は、保存開始から３〜４週間後においてもプロスタグランジンＥ_１の分解は約３０％に留まり、プロスタグランジンＥ_１の保存安定性に優れることがわかった。なお、実施例１〜５、比較例１のいずれのプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤も、保存開始時と保存終了時において乳剤の安定性に実用上の支障となるような変化はなかった（相分離、沈殿、析出、相変化の有無などの目視観察による）。

参考例１：プロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤の安定性に対するオレイン酸の影響（その１）
オレイン酸を配合しないこと以外は比較例１と同様にしてプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤を調製したところ、高圧蒸気滅菌を行うことで乳剤が二相分離してしまった。

参考例２：プロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤の安定性に対するオレイン酸の影響（その２）
オレイン酸の配合量を１／２（０．３ｇ）とすること以外は比較例１と同様にしてプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤を調製したところ、高圧蒸気滅菌の前後において乳剤の安定性に実用上の支障となるような変化はなかったが（相分離、沈殿、析出、相変化の有無などの目視観察による）、高圧蒸気滅菌を行うことによって乳剤の平均粒子径が約２倍に増大した（１８７ｎｍ→３５０ｎｍ）。

参考例３：プロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤の安定性に対するオレイン酸の影響（その３）
オレイン酸を３６０ｍｇ配合すること以外は実施例１と同様にしてプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤を調製した。このオレイン酸を配合して調製したプロスタグランジンＥ_１含有脂肪乳剤について、高圧蒸気滅菌を行う前のプロスタグランジンＥ_１の含量を１００として、高圧蒸気滅菌を行った後のプロスタグランジンＥ_１の残存率を試験例１と同様にして求めたところ４８．２％であり、５０％以上のプロスタグランジンＥ_１が分解されてしまった。なお、高圧蒸気滅菌の前後において乳剤の安定性に実用上の支障となるような変化はなかった（相分離、沈殿、析出、相変化の有無などの目視観察による）。参考例１〜３の結果から、オレイン酸は、乳剤の安定性に寄与するものの、プロスタグランジンＥ_１の安定性に悪影響を及ぼすことが確認できた。

実施例６：プロスタグランジンＥ_２含有脂肪乳剤
精製大豆油１００ｍｇ、精製卵黄レシチン１．８ｇ、プロピレングリコール２．２１ｇをビーカーに入れ、加温下（４５℃）で汎用ミキサーを用いて均一に混合して溶解させた後、窒素気流下でプロスタグランジンＥ_２１０ｍｇを加え、よく混合して油相とした。この油相にハイフレックスディスパーサーを用いて攪拌下、精製水３０ｍＬを少しずつ添加し、添加終了後１００００ｒｐｍで３分間粗乳化（１回目）した。次に、精製水をさらに５０ｍＬとマルトースを１０ｇ添加して１２０００ｒｐｍで７分間粗乳化（２回目）した。この粗乳化液の液容量を精製水で１００ｍＬにメスアップした後、窒素気流下で高圧ホモジナイザー（ＬＡＢ２０００：ＳＭＴ社製、以下同じ）を用いて精密乳化した。乳化圧力は７５０バールから段階的に１２００バールとし、乳化回数は２０回とした（マルチパス方式）。乳化後、ｐＨ調整剤として０．１Ｎ塩酸水溶液を添加してｐＨを５．７６に調整し、乳化液をガラス製アンプルに入れ、高圧蒸気滅菌を１２１℃×１０分の条件で行い、目的とするプロスタグランジンＥ_２含有脂肪乳剤を得た。その物性値を表３に示す。このプロスタグランジンＥ_２含有脂肪乳剤は、高圧蒸気滅菌の前後および高圧蒸気滅菌後の４０℃における４週間保存の前後において乳剤の安定性に実用上の支障となるような変化はなく（相分離、沈殿、析出、相変化の有無などの目視観察による）、高圧蒸気滅菌を行った直後のプロスタグランジンＥ_２の含量を１００とした場合、４０℃における保存１週間後のプロスタグランジンＥ_２の残存率は８９％であり、３週間後の残存率は６５％であった（試験例１記載の測定方法による）。

比較例２：プロスタグランジンＥ_２含有脂肪乳剤
精製大豆油を１０ｇ使用したこと以外は実施例６と同様にして目的とするプロスタグランジンＥ_２含有脂肪乳剤を得た。その物性値を表３に示す。このプロスタグランジンＥ_２含有脂肪乳剤は、高圧蒸気滅菌を行うことで乳剤の安定性が損なわれ、相分離が起こった（従って高圧蒸気滅菌後の乳剤の濁度は測定不能）。また、高圧蒸気滅菌を行った直後のプロスタグランジンＥ_２の含量を１００とした場合、４０℃における保存１週間後のプロスタグランジンＥ_２の残存率は８５％であり、３週間後の残存率は５４％であった（試験例１記載の測定方法による）。

実施例７：プロスタグランジンＦ_２α含有脂肪乳剤
精製大豆油１００ｍｇ、精製卵黄レシチン１．８ｇ、プロピレングリコール２．２１ｇをビーカーに入れ、加温下（５５℃）で汎用ミキサーを用いて均一に混合して溶解させた後、窒素気流下でプロスタグランジンＦ_２α１０ｍｇを加え、よく混合して油相とした。この油相にハイフレックスディスパーサーを用いて攪拌下、マルトース１０ｇを精製水７０ｍＬに溶解した液を少しずつ添加し、添加終了後１００００ｒｐｍで１０分間粗乳化した。この粗乳化液の液容量を精製水で１００ｍＬにメスアップし、さらにｐＨ調整剤として０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを６．６７に調整した後、窒素気流下で高圧ホモジナイザーを用いて精密乳化した。乳化圧力は７００バールとし、乳化回数は２０回とした（マルチパス方式）。得られた乳化液をガラス製アンプルに入れ、高圧蒸気滅菌を１２１℃×１０分の条件で行い、目的とするプロスタグランジンＦ_２α含有脂肪乳剤を得た。その物性値を表４に示す。このプロスタグランジンＦ_２α含有脂肪乳剤は、高圧蒸気滅菌の前後および高圧蒸気滅菌後の４０℃における４週間保存の前後において乳剤の安定性に実用上の支障となるような変化はなかった（相分離、沈殿、析出、相変化の有無などの目視観察による）。

本発明は、プロスタグランジンの安定性とともに乳剤の安定性に優れるプロスタグランジン含有脂肪乳剤およびその製造方法を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。

Claims

プロスタグランジン、油脂、ホスファチジルエタノールアミンの含量が２重量％以下の乳化剤、水を少なくとも構成成分とするプロスタグランジン含有脂肪乳剤であって、プロスタグランジンの含量が０．００１〜１．５ｍｇ／ｍＬ、油脂の含量が０．０５〜２ｍｇ／ｍＬ、油脂に対するプロスタグランジンの重量比率（プロスタグランジン／油脂）が０．０００５〜２０（但しプロスタグランジンと油脂の合計含量は最大で３．５ｍｇ／ｍＬ）、油脂に対する乳化剤の重量比率（乳化剤／油脂）が１〜６００であり、炭素数が６〜２２の脂肪酸またはその塩が配合されておらず、濁度が０．５以下であり、プロスタグランジンがプロスタグランジンＥ _１およびプロスタグランジンＦ _２α から選択されることを特徴とする脂肪乳剤。
乳化剤がリン脂質であることを特徴とする請求項１記載の脂肪乳剤。
脂肪粒子の平均粒子径が１０〜３００ｎｍであることを特徴とする請求項１記載の脂肪乳剤。
プロピレングリコール、グリセリン、マクロゴール、乳酸、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、コンドロイチン硫酸またはその塩、ヒアルロン酸またはその塩から選ばれる少なくとも１つをさらに構成成分とすることを特徴とする請求項１記載の脂肪乳剤。
プロスタグランジン、油脂、ホスファチジルエタノールアミンの含量が２重量％以下の乳化剤、水を少なくとも構成成分とし、濁度が０．５以下であるプロスタグランジン含有脂肪乳剤の製造方法であって、プロスタグランジンをプロスタグランジンＥ _１およびプロスタグランジンＦ _２α から選択し、プロスタグランジンの含量を０．００１〜１．５ｍｇ／ｍＬ、油脂の含量を０．０５〜２ｍｇ／ｍＬ、油脂に対するプロスタグランジンの重量比率（プロスタグランジン／油脂）を０．０００５〜２０（但しプロスタグランジンと油脂の合計含量は最大で３．５ｍｇ／ｍＬ）、油脂に対する乳化剤の重量比率（乳化剤／油脂）を１〜６００とし、炭素数が６〜２２の脂肪酸またはその塩を配合しないで構成成分を乳化することを特徴とする製造方法。
乳化を３５０〜１５００バールの圧力で行うことを特徴とする請求項５記載の製造方法。
乳化後に高圧蒸気滅菌またはろ過滅菌を行うことを特徴とする請求項５記載の製造方法。