JP5555431B2 - 自己免疫疾患を予防し治療するための物質 - Google Patents

Description

連邦支援研究又は開発に関する説明
この発明は合衆国陸軍のナショナル・メディカル・テクノロジー・テストベッド・インクとの共同契約番号ＤＡＭＤ−１７−９７−２−７０１６の米国政府支援下でなされたものである。合衆国政府はこの発明に一定の権利を有している。

関連出願とのクロスリファレンス
本出願人は、その内容の全体を出典明示によりこの開示に取り込む２００２年８月６日出願の「糖尿病の抑制のための方法と物質」と題された米国仮特許出願６０／４０１６５２号の優先権を主張する。

背景
自己免疫疾患は顕著なヒト罹患率と死亡率を生じる。これらの疾患には、およそ８０の疾患、例えばリウマチ様関節炎、全身性ループス及び多発性硬化症が含まれ、米国の人口のおよそ５％が罹っている。一つの自己免疫疾患である１型糖尿病は子供に最も頻繁に生じる慢性疾患であり、世界的に発生率は定常的に増加している。
一般に、１型糖尿病の発症は、膵臓ベータ細胞により合成された自己抗原の抗原提示細胞(ＡＰＣｓ) による提示で始まる。この提示により、殆どはＴヘルパー１(Ｔｈ１)及び細胞毒性Ｔリンパ球により媒介される膵臓ベータ細胞が破壊され、これによってインスリン産生が失われる。

１型糖尿病に対する多くの予防的及び治療的アプローチ法では、例えば自己抗原を専ら送達させるワクチンを投与するか、又はサイトカインのような免疫系の直接のエフェクターを投与して、免疫系を誘発して病原性自己反応性リンパ球を欠失させ、不活性化させ又は抑えることによってベータ細胞の破壊の防止が試みられている。しかし、現在利用できるＤＮＡをベースとするワクチンは疾患予防には完全には効果的ではなく、これらのワクチンの幾つかの使用は疾患予防よりむしろ自己免疫の誘導又は増強に関連している。また、サイトカインの使用は顕著な罹患率を伴う。
従って、これらの不具合を伴わないワクチンを使用する自己免疫疾患を予防し、その発症を遅延させ又は治療するための新規な方法が必要である。更に、これらの不具合を伴わないワクチンを使用する１型糖尿病を予防し、その発症を遅延させ又は治療するための新規な方法が必要である。

概要
本発明の一実施態様によれば、一以上の自己免疫疾患を予防し、その発症を遅延させ又は治療するための物質が提供される。該物質は、アポトーシス誘導タンパク質ＢＡＸをコードし、自己免疫疾患の一以上の自己抗原をコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドコンストラクトを含む。
本発明の他の実施態様によれば、一以上の自己免疫疾患を予防し、その発症を遅延させ又は治療するための医薬の製造における、アポトーシス誘導タンパク質ＢＡＸをコードし、自己免疫疾患の一以上の自己抗原をコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドコンストラクトの使用が提供される。

本発明の他の実施態様によれば、一以上の自己免疫疾患を予防し、その発症を遅延させ又は治療するための医薬の製造における、アデノウイルスタンパク質Ｅ３−ＧＰ１９ｋをコードし、自己免疫疾患の一以上の自己抗原をコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドコンストラクトの使用が提供される。
本発明の他の実施態様によれば、一以上の自己免疫疾患を予防し、その発症を遅延させ又は治療するための医薬の製造における、ΔＢＣＬ−２をコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドコンストラクトの使用が提供される。

一実施態様では、医薬は約０．５ｍｇから約５ｍｇの間の投薬単位で製造される。他の実施態様では、医薬は約１ｍｇから約４ｍｇの間の投薬単位で製造される。他の実施態様では、医薬は約２．５ｍｇから約３ｍｇの間の投薬単位で製造される。他の実施態様では、医薬は筋肉内投与に適した形態で製造される。他の実施態様では、医薬が静脈内投与に適した形態で製造される。

本発明の他の実施態様によれば、患者の自己免疫疾患を予防し、その発症を遅延させ又は治療するための方法が提供される。該方法は、自己免疫疾患に罹っていることが疑われるか、自己免疫疾患に罹りつつあるか、又は自己免疫疾患である患者を選択し；アポトーシス誘導タンパク質ＢＡＸをコードし、自己免疫疾患の一以上の自己抗原をコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドコンストラクト、又はアデノウイルスタンパク質Ｅ３−ＧＰ１９ｋをコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドコンストラクト、又はΔＢＣＬ−２をコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドコンストラクト、又は上記ポリヌクレオチドコンストラクトの組み合わせの一以上の投薬用量を患者に投与することを含む。

一実施態様では、自己免疫疾患はＩ型糖尿病である。他の実施態様では、患者の選択は、患者における抗インスリン又は抗ＧＡＤ自己抗体あるいは抗インスリン及びＧＡＤ自己抗体の双方の存在を同定することを含む。他の実施態様では、患者の選択は、患者における高血糖の存在を同定することを含む。他の実施態様では、患者の選択は、患者における糖尿の存在を同定することを含む。他の実施態様では、患者の選択は、患者における自己免疫疾患に対する遺伝的素因の存在を同定することを含む。

他の実施態様では、一以上の投薬用量は複数の投薬用量である。他の実施態様では、患者への一以上の投薬用量の投与は、患者への一以上の投薬用量の筋肉内注射によりなされる。他の実施態様では、該方法は、投与後に自己免疫疾患の進行について患者をモニターすることを更に含む。
本発明のこれら等の特徴、側面及び利点は次の説明、添付の特許請求の範囲及び図面を参照してより良好に理解される。

［説明］
本発明の一実施態様によれば、一以上の自己免疫疾患を予防し、その発症を遅延させ又は治療するための物質が提供される。本発明の他の実施態様によれば、一以上の自己免疫疾患を予防し、その発症を遅延させ又は治療するための方法が提供される。一実施態様では、自己免疫疾患は１型糖尿病である。好適な実施態様では、本方法はワクチンである本発明の物質を使用することを含む。本発明の物質及び方法は自己抗原の送達のみを使用するのではなく、従来の方法におけるように免疫系の直接のエフェクターである分子を使用するのでもない。代わりに、本発明は 自己免疫疾患を抑制可能な一以上のタイプの細胞のアポトーシスを防止するためにワクチンを使用する。自己免疫疾患を抑制可能なこれら一以上のタイプの細胞はなお生理的及び免疫調節を受けるので、自己免疫を誘導し又は抑制する危険性が、幾種かの従来の方法と比較して本方法によって大きく減少する。更に、本発明は、サイトカインのような免疫系の直接エフェクターである物質を投与することを含んでいないので、本発明はそのような免疫系の直接的エフェクターに伴う副作用を生じない。更に好適には、主としてプラスミドＤＮＡを含む遺伝的ワクチンは比較的低コストで生産することができ、保存のための「コールド鎖(cold chain)」を必要としない。従って、本発明に係る物質及び方法は自己免疫疾患を予防し、その発症を遅延させ又は治療するために使用するのに経済的かつ実用的である。更に、本発明に係る遺伝子ワクチンは、生物の遺伝子材料を直接改変し、これはタンパク質をベースとするワクチンとは異なり、生物の免疫系によって天然エピトープが加工されることを意味する。本発明の物質と方法を以下に詳細に説明する。

本明細書において使用されるところでは、「自己免疫疾患」という用語は、生物自身の免疫系による正常細胞又は組織の部分的又は全体的な破壊による双方の疾患を含み、また生物に移植されて、生物自身の免疫系によって、例えば島細胞移植、又は部分的又は全体的器官移植のように、欠陥があるか欠如した細胞又は組織の代わりをする細胞又は組織の破壊を含む。
この明細書において使用される「含む(comprise)」及びその変形、例えば「含んでいる(comprising)」及び「含む(comprises)」という用語は、他の添加剤、成分、完全体、又は工程を排除することを意図しない。

一実施態様では、本発明は、一以上の自己免疫疾患を予防し、その発症を遅延させ又は治療するために個々に、連続して又は同時に使用できる３種の物質を含む。３種の物質の一つは、アポトーシス誘導タンパク質ＢＡＸをコードし、自己免疫疾患の一以上の自己抗原をコードする、配列番号：１のポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡコンストラクトである。３種の物質のもう一つは、小胞体中のＭＨＣ−Ｉ分子上の抗原提示を防止する、アデノウイルスタンパク質Ｅ３−ＧＰ１９ｋをコードする配列番号：２のポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡコンストラクトである。３種の物質のもう一つは、本明細書においてΔＢＣＬ−２と命名されたＢＣＬ−２の切断型をコードする配列番号：３のポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡコンストラクトである。

本明細書を参照して当業者が理解するように、アポトーシス誘導タンパク質ＢＡＸ、アデノウイルスタンパク質Ｅ３−ＧＰ１９ｋ及びΔＢＣＬ−２をコードするポリヌクレオチド配列のように、本明細書に開示されたポリヌクレオチド配列に対して特定の配列が付与されているが、本発明は、翻訳されたアミノ酸配列に変化を引き起こさない任意の他の配列、並びに、翻訳されたアミノ酸配列に変化を引き起こすがその変化は本明細書において考えられている用途にそれを不適にするように翻訳アミノ酸配列の機能に実質的に影響を及ぼすことはない任意の配列を含む。

しかして、図１には、本発明に係る３種の物質の概略図が示されている。これから分かるように、各物質はプラスミドＤＮＡコンストラクトを含む。物質Ａは、１型糖尿病の自己抗原である分泌型グルタミン酸デカルボキシラーゼのような、自己免疫疾患のための自己抗原をコードするポリヌクレオチドを含み、ＢＡＸをコードする配列番号：１のポリヌクレオチドが続くプラスミドコンストラクトを含む。物質Ｂは、自己免疫疾患の自己抗原をコードするポリヌクレオチドを含まず、Ｅ３−ＧＰ１９ｋをコードする配列番号：２のポリヌクレオチドを含むプラスミドコンストラクトを含む。物質Ｃは、自己免疫疾患の自己抗原をコードするポリヌクレオチドを含まず、アポトーシス誘導タンパク質ＢＣＬ−２の切断型をコードする配列番号：３のポリヌクレオチドを含むプラスミドコンストラクトを含む。図中、「ＣＭＶ」はサイトメガロウイルスプロモーターエレメントを表し、「ｐＡ」はポリアデニル化部位を表し、「ＩＲＥＳ」は配列番号：４のＥＭＣＶウイルスの内部リボソーム結合部位を表す。

本発明の効果を実証するために、１５のプラスミドを構築しワクチンとして使用した。各コンストラクトをベクターｐＮＤ２中にクローン化した。しかして、図２には、自己免疫疾患の予防、その発症の遅延又は治療のためのその効能について検査した１５種のプラスミドの模式図が示されている。これから分かるように、各プラスミドは、各形質移入細胞における双方のオープンリーディングフレームの発現を確実にするために同じプロモーター (ＣＭＶｐ)のプラスミド転写制御下に置いた。ＢＣＬ−２をコードするｃＤＮＡを含むこれらプラスミドの構築中に、ｃＤＮＡの大きなサイズのためにプラスミドの欠失が生じたことが分かった。従って、Δｂｃｌ−２ と命名したｂｃｌ−２ の切断型を用いてプラスミドを構築した。図２に示すように、上記プラスミドは、細胞質ＧＡＤをコードするｃＤＮＡ, 配列番号：５ (プラスミド１)；分泌型ＧＡＤ (ＳＧＡＤ), 配列番号：６, (プラスミド２)；コントロール分泌型ルシフェラーゼ, 配列番号：７, (プラスミド３)；切断型ヒト抗アポトーシスタンパク質ＢＣＬ−２ (ΔＢＣＬ−２), 配列番号：３, (プラスミド４)；抗アポトーシスタンパク質ＢＡＸ, 配列番号：１, (プラスミド５)；Ｅ３−ＧＰ１９ｋ, 配列番号：２, (プラスミド６)；細胞質ＧＡＤ, 配列番号：５、分泌型ＧＡＤ, 配列番号：６２、及び分泌型ルシフェラーゼ, 配列番号：７をΔＢＣＬ−２, 配列番号：３と組み合わせたもの(それぞれ、プラスミド７−９)；細胞質ＧＡＤ, 配列番号：５、分泌型ＧＡＤ, 配列番号：６、及び分泌型ルシフェラーゼ, 配列番号：７をＢＡＸ, 配列番号：１と組み合わせたもの(それぞれ、プラスミド１０−１２)；及び細胞質ＧＡＤ, 配列番号：５、分泌型ＧＡＤ, 配列番号：６、及び分泌型ルシフェラーゼ, 配列番号：７をＥ３−ＧＰ１９ｋ, 配列番号：２と組み合わせたもの(それぞれプラスミド１３−１５)を含んでいた。

全プラスミドを生成し、ＰＣＲを使用してオープンリーディングフレームを増幅させ、増幅産物をＤＮＡ配列決定後に調べ、変異がないことを見出した。ついで、各コンストラクトを用いて、細胞可溶化物の免疫ブロット分析のためにサルＣＯＳ−７細胞を一過性にトランスフェクトしたところ、正しいサイズの遺伝子産物がコードされていることが確認された(データは示さず)。

次に、非肥満糖尿病(ＮＯＤ)マウスに対する上記１５種のプラスミドの効果を次のようにして決定した。先ず、プラスミドＤＮＡを、Qiagen Endofreeキット(Qiagen Inc., Chatsworth, CA, US)を用いて単離し、１５種のプラスミドＤＮＡのそれぞれ３００ｕｇを、１５匹の４−５週齢の雌ＮＯＤマウス群に筋肉内注射した。３００ｕｇの用量は、生物体の体重を基にしたヒトの臨床状態に関連した用量として選択した。糖尿病の発症は、尿及び血糖分析を使用して３５週齢までモニターした。マウスは、血糖値が２日連続して３００ｍｇ／ｄｌを超え、高レベルの糖尿について陽性であると検査で分かった後に糖尿病であると考えた。

これらの実験結果により次のことが実証された。３５週齢の糖尿病の動物の割合は、プラスミド１−３をワクチン接種したマウスに対して７３−９３％、プラスミド４又は７−９をワクチン接種したマウスに対して６０−６７％、プラスミド５及び１０−１２をワクチン接種したマウスに対して４７−８５％、プラスミド６及び１３−１５をワクチン接種したマウスに対して５３−７３％の範囲であった。コントロール動物(ワクチン接種していないもの)は約９３％の糖尿病の発生率であった。従って、３００ｕｇのプラスミドベクターだけ又は抗原だけをコードする３００ｕｇのプラスミドベクター、つまりプラスミド１−３の投与は、糖尿病の有意な抑制を示さなかった。プラスミド６−９及び１１をワクチン接種したマウスは未処置のマウスと比較すると統計的に有意な糖尿病の抑制結果を示した(プラスミド７に対してＰ＜０．０５、プラスミド９に対してＰ＜０．０２)。また、ｐＮＤ２−Ｅ３−ＧＰ１９ｋ，プラスミド６又はｐＮＤ２−ＳＧＡＤ５５−ＢＡＸ，プラスミド１１を接種されたマウスは、プラスミドｐＮＤ２−ＧＡＤ６５，プラスミド１又はｐＮＤ２−ＧＡＤ６５−ＢＡＸ，プラスミド１０ を接種されたマウスと比較すると、３５週齢で有意に減少した糖尿病発症率を示し(Ｐ＜０．０４)、ｐＮＤ２−ＧＡＤ６５−ΔＢＣＬ２，プラスミド７又はｐＮＤ２−ＳＧＡＤ５５−ΔＢＣＬ２，プラスミド８を接種されたマウスは、ｐＮＤ２−ＧＡＤ６５，プラスミド１を接種されたマウスと比較すると、有意に減少した糖尿病を示した(Ｐ＜０．０５)。糖尿病の抑制は島炎症の減少を伴っていた(データ示さず)。これらの結果を以下に更に詳細に開示する。

Δｂｃｌ−２を含むプラスミド、つまりプラスミド４及び７−９をワクチン接種したマウスは、同時発現した抗原にかかわらず糖尿病発症の４−５週の遅延を、また同時発現した抗原にかかわらず３５週齢で糖尿病発症の減少（ワクチン未接種マウスの約９３％と比較して６０−６７％）を示した。従って、ＧＡＤ自己抗原の同時発現は作用を抑制しなかった。
ＢＡＸを含むプラスミド、つまりプラスミド５及び１０−１２をワクチン接種したマウスは、ｓｇａｄ５５−ｂａｘ，プラスミド１１以外は、糖尿病の抑制を示さなかった。プラスミド１１をワクチン接種したマウスは、ｂａｘ，プラスミド５だけを含むプラスミドをワクチン接種した他のマウスと同様な時点で糖尿病を発症しはじめたが、プラスミド１１をワクチン接種した３５週齢のマウスにおける糖尿病の発症は、未ワクチン接種コントロールマウスに対する９３％の発症と比較して僅か４７％であった(ｐ＜０．０５)。

Ｅ３−ｇｐ１９ｋを含むプラスミド、つまりプラスミド６及び１３−１５をワクチン接種したマウスは、同時発現された抗原に応じて、糖尿病発症に広範な差異を示した。自己抗原を含まないでＥ３−ｇｐ１９ｋ を含むプラスミドをワクチン接種したマウスは４−５週遅れて糖尿病を発症させ始め、３５週齢で糖尿病の減少を示した(コントロールの未ワクチン接種コントロールマウスの９３％に対して５３％) (ｐ＜０．０５)。自己抗原と共にＥ３−ｇｐ１９ｋ を含むプラスミド、つまりプラスミド１３−１５をワクチン接種したマウスは、糖尿病の発症遅延化と３５週齢での糖尿病動物の発症率の双方について作用を抑制した。
ついで、免疫応答を、ＧＡＤ特異的ＥＬＩＳｐｏｔ分析及び血清抗ＧＡＤ ＩｇＧアイソタイプの ＥＬＩＳＡを使用して特徴づけして、本発明の物質の投与による糖尿病抑制には炎症Ｔｈ１様活性の抑制及び抗炎症Ｔｈ２様応答の上方制御が伴うかどうかを調べた。

ＥＬＩＳｐｏｔアッセイは次のようにして実施した。糖尿病発症時点又は非糖尿病動物の観察期間の終わりにマウスから脾細胞を単離した。ついで、その細胞を組換えＧＡＤタンパク質で刺激し、標準的な製造者プロトコルに従ってＩＦＮ−γ(Ｔｈ１様活性について)、及びＩＬ−４ (Ｔｈ２様活性について) を分泌する細胞数をカウントした。ついで、ＧＡＤ刺激のない状態でサイトカインを分泌する細胞数を減算し、結果を分析した。ＩＦＮ−γに対しては、データは、Ｅ３−ＧＰ１９ｋのみをコードするプラスミド６、又はΔＢＣＬ−２のみ又は抗原と共にそれをコードするプラスミド４及び７−９による糖尿病の抑制にはＧＡＤ特異的活性の抑制が伴うことを明白に示している。従って、Ｅ３−１９ｋ及びΔＢＣＬ−２はベータ細胞に対する自己反応性を抑制することができる免疫応答を誘発し得た。驚いたことに、ＳＧＡＤ５５−ＢＡＸの組み合わせはＴｈ１様活性を有意には抑制しなかったようである。更に、糖尿病を抑制しなかったＳＧＡＤ５５単独で、ＧＡＤ特異的Ｔｈ１様応答を抑制した。

ＩＬ−４については、データは、Ｅ３−ＧＰ１９ｋだけをコードするプラスミド６(糖尿病抑制)、ＳＧＡＤ５５及びＥ３−１９ｋをコードするプラスミド１３(糖尿病抑制なし)、及びＳＧＡＤ５５及びΔＢＣＬ−２のプラスミド８(糖尿病抑制)を接種されたマウスに対してＧＡＤ特異的活性の増加を示している。よって、Ｔｈ２様活性の増加には、Ｔｈ１様活性減少又は疾患抑制が常に伴うとは限らなかった。
ＥＬＩＳＡは次のようにして実施した。動物の血清を、Ｔｈ１様及びＴｈ２様活性をそれぞれ示す抗ＧＡＤ ＩｇＧ２ａ，ｂ及びＩｇＧ１アイソタイプのＥＬＩＳＡに使用した。抗ＧＡＤ ＩｇＧ２ａ，ｂのＥＬＩＳＡは、ΔＢＣＬ−２をコードするプラスミドＤＮＡの３種のプラスミド４、８及び９が、未ワクチン接種コントロールマウスとではなく、ＢＡＸをコードするプラスミド５と比較した場合、Ｔｈ１様活性の有意な減少を示したことを示している。抗ＧＡＤ ＩｇＧ１のＥＬＩＳＡは、プラスミド５及び１０−１２のＢＡＸをコードする全てのプラスミドＤＮＡがＴｈ２様活性の低下を生じることを示している。

これらのデータを総合すると、第一に、アポトーシス誘導タンパク質をコードするプラスミドｃＤＮＡのｂａｘを、自己抗原の分泌型をコードするポリヌクレオチドを含むワクチンのような、自己免疫疾患を予防する遺伝子ワクチンのための分子アジュバントとして使用することができることが分かる。第二に、Ｅ３−ＧＰ１９ｋをコードするか又は切断型ＢＣＬ−２だけをコードするプラスミドｃＤＮＡは自己免疫疾患を抑制し得たが、Ｅ３−ＧＰ１９ｋをコードするか又は切断型ＢＣＬ−２を自己抗原と組み合わせてコードするプラスミドｃＤＮＡは効果が少なかった。

本発明の一実施態様では、自己免疫疾患を予防し、その発症を遅延させ又は治療する方法が提供される。その方法は、自己免疫疾患に罹っていることが疑われるか、自己免疫疾患に罹りつつあるか、又は自己免疫疾患である患者を選択することを先ず含む。その選択は、この明細書を参照して当業者が理解するところの標準的な方法を使用して行うことができる。例えば、自己免疫疾患が糖尿病である場合、選択は、患者における抗インスリン又は抗ＧＡＤ自己抗体あるいは抗インスリン及び／又はＧＡＤ自己抗体の双方の存在、増加する高血糖の存在、糖尿の存在、糖尿病に対する遺伝的素因の存在、又はこれらの一以上を同定することによって、行うことができる。

ついで、本発明に係るプラスミドコンストラクトの一以上の投薬用量を患者に投与する。つまり、ＢＡＸをコードし、自己免疫疾患の自己抗原をコードするポリヌクレオチドを含むプラスミドコンストラクト、又はＥ３−ＧＰ１９ｋをコードするポリヌクレオチドを含むが自己免疫疾患の自己抗原をコードするポリヌクレオチドを含まないプラスミドコンストラクト、又は抗アポトーシスタンパク質ＢＣＬ−２の切断型をコードするポリヌクレオチド配列を含むが自己免疫疾患の自己抗原をコードするポリヌクレオチドを含まないプラスミドコンストラクトを患者に投与する。好適な実施態様では、本発明に係る二種のプラスミドコンストラクトが生物体に投与される。特に好適な実施態様では、本発明に係る３種全てのプラスミドコンストラクトが生物体に投与される。

好適な実施態様では、プラスミドコンストラクトは複数の投薬用量で投与される。他の好適な実施態様では、用量は約０．００１ｍｇ／Ｋｇから約１０ｍｇ／Ｋｇの間である。他の好適な実施態様では、用量は約０．０１ｍｇ／Ｋｇから約１ｍｇ／Ｋｇの間である。他の好適な実施態様では、用量は約０．０５ｍｇ／Ｋｇである。好適な実施態様では、ヒト成人のための好適な用量は約０．５ｍｇから５ｍｇの間である。好適な実施態様では、ヒト成人のための好適な用量は約１ｍｇから４ｍｇの間である。好適な実施態様では、ヒト成人のための好適な用量は約２．５ｍｇから３ｍｇの間である。他の好適な実施態様では、用量は約２回から約１０回、毎週投与される。特に好適な実施態様では、用量は毎週４回投与される。他の特に好適な実施態様では、用量は１回のみ投与される。

投与は好適な経路によって行うことができる。好適な実施態様では、経路は筋肉内又は静脈内である。
また、本方法は、投与後に自己免疫疾患の進行について患者をモニターすることを含みうる。

糖尿病の予防
本発明によれば、患者における糖尿病の発症が例えば次のようにして遅延されるか予防される。先ず、患者が、循環抗インスリン及び抗ＧＡＤ自己抗体の存在に基づいて選択される。ついで、患者に、ＳＧＡＤ，配列番号：６をコードし、アポトーシス誘導タンパク質ＢＡＸをコードしている配列番号：１のポリヌクレオチド配列、又はアデノウイルスタンパク質Ｅ３−ＧＰ１９ｋをコードしている配列番号：２のポリヌクレオチド配列、又はΔＢＣＬ−２をコードする配列番号：３のポリヌクレオチド配列を含む０．０５ｍｇ／Ｋｇのプラスミドコンストラクトが筋肉内注射される。注射は、循環抗インスリン及び抗ＧＡＤ自己抗体レベルをモニターしながら３週間の間毎週繰り返される。循環抗インスリン及び抗ＧＡＤ自己抗体のレベルが正常値に戻ったときに治療が終了する。

本発明は、ある好ましい実施態様を参照しながらかなり詳細に検討したが、他の実施態様も可能である。従って、添付の特許請求の範囲はこの開示に含まれる好適な実施態様の説明に限定されるべきではない。

図１は本発明の３種の物質の概略図である。 図２は本発明の方法に従って自己免疫疾患の予防、その発症の遅延化又は治療におけるその効能を検査した１５種のプラスミドの概略図である。

Claims (16)

1. 患者の１型糖尿病を予防するか、その発症を遅延させるか又は治療するための医薬において、プロモーターと、配列番号３に記載の核酸配列を有する切断型ＢＣＬ−２ (ΔＢＣＬ−２)をコードするポリヌクレオチド配列とを含むプラスミドを含んでなることを特徴とする、医薬。
2. 患者の１型糖尿病を予防するか、その発症を遅延させるか又は治療するための医薬において、プロモーターと、配列番号３に記載の核酸配列を有する切断型ＢＣＬ−２ (ΔＢＣＬ−２)をコードし、且つ分泌型グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ｓＧＡＤ）又はｓＧＡＤの自己抗原断片をコードするポリヌクレオチド配列とを含むプラスミドを含んでなることを特徴とする、医薬。
3. 前記ポリヌクレオチドが配列番号６に記載の配列を含む、請求項２に記載の医薬。
4. 前記医薬がアデノウイルスタンパク質Ｅ３-ＧＰ１９ｋをコードするポリヌクレオチド配列を更に含む、請求項１から３の何れか一項に記載の医薬。
5. ０．５ｍｇから５ｍｇの投薬単位である、請求項１から４の何れか一項に記載の医薬。
6. 筋肉内又は静脈内投与の形態である、請求項１から５の何れか一項に記載の医薬。
7. 複数の投薬用量で使用される、請求項１から６の何れか一項に記載の医薬。
8. 前記患者は１型糖尿病を発病しやすいか、１型糖尿病を発病しているか又は１型糖尿病を有する患者である、請求項１から７の何れか一項に記載の医薬。
9. 前記患者は抗インスリン抗体か、抗ＧＡＤ自己抗体か、又は抗インスリン抗体と抗ＧＡＤ自己抗体の両方の存在が同定された患者である、請求項１から８の何れか一項に記載の医薬。
10. 前記患者は高血糖の存在が同定された患者である、請求項１から８の何れか一項に記載の医薬。
11. 前記患者は糖尿の存在が同定された患者である、請求項１から８の何れか一項に記載の医薬。
12. 前記患者は１型糖尿病の遺伝的素因の存在が同定された患者である、請求項１から８の何れか一項に記載の医薬。
13. １型糖尿病を予防するか、その発症を遅延させるか又は治療するための医薬の製造方法であって、プロモーターと、配列番号３に記載の核酸配列を有する切断型ＢＣＬ−２ (ΔＢＣＬ−２)をコードするポリヌクレオチド配列とを含むプラスミドをそこに含有せしめることを含む方法。
14. 前記医薬がアデノウイルスタンパク質Ｅ３-ＧＰ１９ｋをコードするポリヌクレオチド配列を更に含む、請求項１３に記載の方法。
15. プロモーターと、配列番号３に記載の核酸配列を有する切断型ＢＣＬ−２ (ΔＢＣＬ−２)をコードするポリヌクレオチド配列とを含むプラスミドの、１型糖尿病を予防するか、その発症を遅延させるか又は治療するための医薬の製造における使用。
16. 前記医薬がアデノウイルスタンパク質Ｅ３-ＧＰ１９ｋをコードするポリヌクレオチド配列を更に含む、請求項１５に記載の使用。

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