JP5548200B2 - 複数の生物試料を同時に自動的に破壊するための方法及び装置 - Google Patents
複数の生物試料を同時に自動的に破壊するための方法及び装置 Download PDFInfo
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Description
例えば、器官を、実験室動物、例えばラットから取りだす。動物の組織の選択は、目的に応じてなされる。取り出された動物の器官または組織は、洗浄緩衝溶液、例えばPBS(リン酸緩衝生理食塩水:以下の成分、Na2HP4(乾燥)、NaH2PO4(乾燥)、NaCl及び蒸留水を含む)で洗浄される。洗浄処理により、取り出された部分の組織は、血液が存在しない状態にて提供されそして望まない成分もない状態になる。
1.新鮮なラット肝臓および新鮮なラット心臓からのDNAの分離
新鮮なラットの肝臓および心臓の各々の12試料(25mg)に、180μlのATL、すなわち、錯化剤および界面活性剤を含む緩衝液(キアゲンGmbH(ドイツ、ヒルデン)より市販されている。http://www1.qiagen.com/Products/Accessories/Buffers/BufferATL.aspx参照)、10μlのDX(http://www1 .qiagen.com/Products/ReagentDX.aspx参照)、および2つの、直径5mmの金属ステンレス製の球体(以下「ビーズ」と言う)を添加し、そして50Hzで1.5分間破壊した。試験は、2つのビーズの場合には、振動はより大きく、組織はより高程度にすりつぶされることを示した。従って、装置によって、アダプターを50Hzの振動数で上下に動かした。次いで、試料を取り出し、そして小さなテーブル遠心器を用いて遠心分離した。アダプターは、破壊処理の後、このテーブル遠心器中へと固定した。そして、短い時間の間、遠心器のスイッチを入れて、すべての成分を再びアダプターの底に集めた。
心臓:
心臓組織は、平均5.83μgのDNAを回収し、標準偏差は、1.07であった。分離されたDNA量は、僅かにもっと高くできていたかも知れないが、それ以外は、不満ななかった。
肝臓組織は、平均34.08μgのDNAを回収し、標準偏差は、10.97であった。肝臓組織の破壊は、破壊が非常にうまくいっていることを示した。
新鮮なウシの肝臓の各々の12試料(25mg)に、180μlのATL、6μlのDX、および2つのビーズを添加し、そして50Hzで2分間破壊した。次いで、試料を取り出し、そして遠心分離した。その後、20μlのプロテイナーゼKを添加して、ボルテックスで撹拌し、そして溶液を56℃で1.5時間インキュベートした。インキュベーション後に、4μlのRNAseA(100mg/ml)を試料に添加して、室温で5分間インキュベートした。さらなる工程は、キアゲン(ヒルデン、ドイツ)によるQIAキューブの組織および齧歯類追尾プロトコールに従って行った。組織および齧歯類追尾プロトコールは、QIAキューブと共に発送される。
肝臓:
肝臓組織は、平均44.38μgのDNAを回収し、標準偏差は、12.84であった。肝臓組織の破壊もまた、破壊が非常にうまくいっていることを示した。DNAも同様に、白い小さな塊として目に見え、ピペットを用いるという困難さのみで新たなMRV(micro reaction vessel:微量反応容器、または「eppi」と略す)へ移すことができる。
Claims (4)
- 生物試料(9)を破壊するための方法であって、以下の工程:
前記生物試料(9)を、非金属製容器(6)に入れる工程、
前記非金属製容器(6)に、少なくとも一つの移動可能な固い物体(8)を入れる工程、
前記非金属製容器(6)を密閉した後に、アダプター(2、2a)中に挿入する工程、並びに
密閉された非金属製容器(6)を内部に有する前記アダプター(2、2a)を、該アダプターを自動的な様式で往復運動させる装置に接続する工程、を含み、
前記非金属製容器(6)が挿入されたアダプター(2、2a)は、予め−20℃〜−80℃に冷却されたものであることを特徴とする、前記方法。 - 前記非金属製容器(6)、前記生物試料(9)及び前記アダプター(2、2a)は最初にそれぞれ−20℃〜−80℃に冷却され、かつそれに引き続いて、前記アダプターを往復運動させることにより前記生物試料(9)が破壊される、請求項1に記載の方法。
- 請求項1又は2に記載の方法の実施に用いるための機器であって、
該機器は、アダプター(2、2a)を含み、
前記アダプター(2、2a)は、密閉された非金属製容器(6)を、その内部に挿入した状態で、該アダプター(6)を自動的な様式で往復運動させることが出来る装置に接続し得るように構成されたものであり、
前記アダプターは、前記複数の非金属製容器(6)を収容するための、金属からなる複数の囲いを有する、機器。 - 前記アダプター(2、2a)が、前記装置に脱着可能に連結されており、
前記装置は、囲いと平行にアダプターを自動的に往復運動できる装置である、請求項3に記載の機器。
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