JP5509504B2 - 骨塩密度を改善し、骨粗鬆症を治療するための２５−ヒドロキシ−ビタミンｄ３とビタミンｄ３の併用 - Google Patents

Description

発明の詳細な説明

［技術分野］
本発明は、ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）および２５−ヒドロキシビタミンＤ３（２５−ＯＨ Ｄ３）；カルシフェジオール）を使用して、骨粗鬆症を治療および／または予防することならびに、骨密度低下の重篤度を下げることに関する。

［背景技術］
ビタミンＤ（エルゴカルシフェロールおよびコレカルシフェロールなど）とは、それぞれの生物活性によって定義される脂溶性化合物の総称である。ビタミンＤの欠乏によって、子どもではくる病、成人では骨軟化症が起こる。しかしながら、数ヶ月間にわたって１日あたりの推奨摂取量（すなわち、ビタミンＤ５〜１５μｇまたは２００〜６００ＩＵ）の１００倍を超えて慢性的に摂取すると、毒性が生じる可能性がある。ビタミンＤの場合、「毒性の閾値は体重１ｋｇあたり１日で５００〜６００ｍｃｇである。通常、成人はＲＤＡの３倍を超えて長期間消費すべきではない」（Ｇａｒｒｉｓｏｎ ＆ Ｓｏｍｅｒ， Ｔｈｅ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄ．， ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ， ｐｇ． ８２， １９９７）。高カルシウム血症は、２５−ヒドロキシビタミンＤの血中濃度が３７５ｎｍｏｌ／Ｌを超えると生じることがある。最近になって、ビタミンＤの安全な上限レベルは少なくとも２５０μｇ／日（１０’０００ＩＵ）であることが確認された（Ｈａｔｈｃｏｃｋら Ａｍ．Ｊ Ｃｌｉｎ． Ｎｕｔｒ． ８５：６〜１８， ２００７）。このような健康補助食品を摂取すると、２５−ヒドロキシビタミンＤの血中濃度が約２００ｎｍｏｌ／Ｌになることが明らかになっている。

ビタミンＤは、２５−ヒドロキシビタミンＤ（カルシフェジオール；２５−ＯＨビタミンＤ；２５−ＯＨ Ｄ）を生成するのに肝臓でのヒドロキシル化が必要なプロホルモンの１つであり、この２５−ヒドロキシビタミンＤが腎臓や他の組織でさらにヒドロキシル化されて、ビタミンＤの活性ホルモン形態である１，２５−ジヒドロキシビタミンＤが生成される。１，２５−ジヒドロキシビタミンＤは、血液中に放出され、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）と結合し、標的組織まで運ばれる。１，２５−ジヒドロキシビタミンＤとビタミンＤ受容体とが結合することで、この複合体が細胞核で転写因子として機能するようになる。

ビタミンＤ欠乏によって、骨吸収が促進されることがある。また、それによって、心臓血管系、免疫系、筋肉系の機能が調節されることもある。疫学的研究では、ビタミンＤ摂取とそれが血圧またはグルコース代謝におよぼす影響との関連性が見いだされている。ビタミンＤの活性は、副甲状腺ホルモンによる負のフィードバック制御下にある。

ビタミンＤと２５−ＯＨ Ｄ３は、ともに今まで医薬品として投与されてきている。ビタミンＤは、言うまでもなく、広く利用可能である。米国では以前、２５−ＯＨ Ｄ３がオルガノン（Ｏｒｇａｎｏｎ） ＵＳＡから「ＣＡＬＤＥＲＯＬ」という商品名で販売されていたが、現在はＦＤＡの販売中止対象薬の一覧に含まれている。これは、コーン油と２５−ＯＨ Ｄ３を含有するゼラチンカプセルであった。

現在は、液状の２５−ＯＨ Ｄ３が、スペインにてＦＡＥＳ Ｆａｒｍａから「ＨＩＤＲＯＦＥＲＯＬ」という商品名で油性溶液として販売されている。

また、ビタミンＤと２５−ＯＨ Ｄ３との組み合わせが、動物の飼料に用いられている。飼料用の２５−ＯＨ Ｄ３は、ＤＳＭから「ＲＯＶＩＭＩＸ ＨＹ−Ｄ」という商品名で市販されている。

５％〜５０％（ｗｔ／ｗｔ）の量で油に溶解された少なくとも２５−ＯＨ Ｄ３と酸化防止剤、２５−ＯＨ Ｄ３と油の液滴をカプセル化する作用剤、栄養添加剤（ビタミンＤ３など）を含む飼料プレミックス組成物が、Ｔｒｉｔｓｃｈら（米国特許出願公開第２００３／０１７０３２４号明細書）によって開示されている。このプレミックスを、家禽類、ブタ、イヌまたはネコ用の食品に添加してもよい。この組成物は、２５−ＯＨ Ｄ３を酸化に対して安定させる。

２５−ＯＨビタミンＤ３とビタミンＤ３の組み合わせを動物用の飼料に添加することが、Ｓｉｍｏｅｓ−Ｎｕｎｅｓら（米国特許出願公開第２００５／００６４０１８号明細書）によって開示されている。特に、約１０μｇ／ｋｇ〜約１００μｇ／ｋｇの２５−ＯＨビタミンＤ３と、約２００ＩＵ／ｋｇ〜約４，０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ３を、ブタ用の飼料に添加する。この添加によって、ブタの骨強度が改善される。

２５−ＯＨビタミンＤ３とビタミンＤ３の組み合わせを家禽類用の飼料に添加して、脛骨軟骨発育不全症の影響を改善することが、Ｓｔａｒｋら（米国特許第５，６９５，７９４号明細書）によって開示されている。

Ｂｏｒｅｎｓｔｅｉｎらの米国特許第５，０４３，１７０号明細書には、産卵鶏および老齢鶏の卵殻強度および下肢強度を改善するための、ビタミンＤ３と、１−α−ヒドロキシコレカルシフェロールまたは１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールのいずれかとの組み合わせが開示されている。

Ｃｈｕｎｇらによる国際公開第２００７／０５９９６０号パンフレットには、ビタミンＤ３と２５−ヒドロキシビタミンＤ３の両方を含有する食餌を与えられた雌ブタで、全身の健康状態、体格、産仔数と健康、その他の生産パラメータが改善されることが開示されている。また、ヒト用の２５−ＯＨ Ｄ３栄養補助食品が開示されているが、体重１ｋｇあたり５〜１５マイクログラムというその投与量の範囲（一人あたり３００〜９００マイクログラムという極めて高い一日投与量に相当）は極めて高い。

ビスホスホネート化合物は、ピロリン酸の代謝的に安定した類似体であり、骨の破壊を防ぐことで、骨粗鬆症の治療に有効である（すなわち抗吸収性薬剤）として承認されていた。ビスホスホネート化合物は、骨のカルシウムとリン酸塩の結晶形態であるヒドロキシアパタイトに吸着される。このため、ビスホスホネート化合物は、カルシウムの流出を阻害することで、骨吸収を防止する。

Ｆｒａｎｃｉｓ（米国特許第４，２３０，７００号明細書および同第４，３３０，５３７号明細書）は、エチドロン酸と、約１００ＩＵ〜約５０，０００ＩＵのビタミンＤ様化合物との組み合わせによって、骨吸収を阻害することについて開示している。

Ｆｌｅｓｈｎｅｒ−Ｂａｒａｋ（国際公開第０３／００７９１６号パンフレット）は、ビスホスホネート化合物と、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３または２４，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３などの天然ビタミンＤ誘導体、あるいは２５−ＯＨビタミンＤ３の投与について開示している。

Ｄａｉｆｏｔｉｓら（国際公開第０３／０８６４１５号パンフレット）は、少なくとも１種のビスホスホネート化合物と、ビタミンＤ２および／またはビタミンＤ３の不活性型代謝物約１００ＩＵ〜約６０，０００ＩＵとの組み合わせによって、骨吸収を阻害することについて開示している。

上述した文献には、ビタミンＤ３と２５−ＯＨ Ｄ３の併用が、意外なことにヒトの骨粗鬆症の治療および／または予防に有益である旨は、教示も示唆もされていなかった。組成物の形態と投与量によって、骨代謝に対する望ましい効果が得られる。他の利点および改善点については、後述するか、あるいは本明細書の開示内容から自明であろう。

［発明の詳細な説明］
ヒトの骨の健康用の薬、栄養補給食品または食品として使用される、ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）と２５−ＯＨ Ｄ３（カルシフェジオール）との組み合わせには、ビタミンＤ３単独または２５−ヒドロキシビタミンＤ３単独の投与にまさる利点があることが見いだされている。ヒトは、子どもや若者をはじめとして、誕生から成人まで、１８歳から８０歳まで、あるいは８０歳を超えるなど、どの年齢であってもよい。

第１の態様では、ビタミンＤ３および２５−ＯＨ Ｄ３の両方と薬学的に許容されるキャリアとを投与し、これによって骨の健康を維持および／または骨粗鬆症を治療および／または予防するために、ヒトで使用するのに適した１種類以上の医薬品、栄養補給食品または食品組成物が得られる。

また、本発明は、有効成分が本質的にビタミンＤと２５−ＯＨ Ｄ３の組み合わせからなる、骨疾患を治療および／または骨の健康を維持するためのヒト用の医薬組成物にも関する。

別の態様では、ビタミンＤ３および２５−ＯＨ Ｄ３の多数回分の投与量の組成物を含むキットが得られる。これらを瓶やブリスター包装、あるいはバイアルラックなどの容器に封入しておいてもよい。任意に、ビスホスホネート化合物などの１種類以上の他の骨粗鬆症薬を容器に同梱してもよい。さらに、ある投与量として組成物をヒトに投与するための指示もキット内に含まれている。

別の態様では、骨粗鬆症を治療および／または予防するために、少なくともビタミンＤ３および２５−ヒドロキシビタミンＤ３をヒトに投与する方法が得られる。これについては、１日１回、１週間に１回または１ヶ月に１回投与すればよい。

ビタミンＤ３と２５−ＯＨ Ｄ３は、他の骨粗鬆症薬の有無を問わず、組み合わせで、あるいは別々の製剤として併用投与することが可能（必ずしも同時でなくてもよい）である。「他の骨粗鬆症薬」とは、本明細書で使用する場合、骨粗鬆症の軽減、寛解、予防、発症遅延などのために投与できる他の化合物を示す。一例として、ビスホスホネート、モノクローナル抗体、カルシウム形態、エストロゲン、フィトエストロゲンなどがあげられる。

本発明の別の態様は、２５−ＯＨ Ｄ３、好ましくはビタミンＤと２５−ＯＨ Ｄ３の組み合わせを含有する、ヒトが消費するのに適した骨の健康促進食品、機能性食品、栄養補助食品または栄養補給食品である。別の実施形態では、２５−ＯＨ Ｄ３が、単独またはビタミンＤとの組み合わせで、ヒトが消費するのに適した食品、機能性食品、栄養補助食品または栄養補給食品中の骨の健康促進有効成分である。２５−ＯＨおよび／またはＤ３の投与量は、医薬品製品に存在する場合と同じであってもよいが、好ましくは、それよりも少ない範囲になりやすい。栄養補助食品および栄養補給食品は、錠剤、カプセルまたは他の便利な剤形の形であってもよい。食品は、飲料または食品であってもよく、必要があれば、他のビタミン、ミネラルなど、栄養的に効果的な他の化合物を含有してもよい。

本明細書および特許請求の範囲全体で使用する場合、以下の定義を適用する。

「骨の健康」は、広義語を想定している。骨の健康の維持は、骨粗鬆症／骨減少症、くる病／骨軟化症の予防、正常な骨吸収／形成および再生イベントの維持、正常なＣａ＋代謝の維持、異常流出の予防、ピーク骨量の増加を包含することを想定している。

「ビタミンＤ」は、ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）および／またはビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）のいずれかを示す。ヒトは、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）を生成できないが、これをビタミンＤ源として使うことはできる。ビタミンＤ２は、さまざまな植物によって合成可能であり、ビタミンＤに相当するものとしてサプリメントでビタミンＤに使用されることが多い。

「ビタミンＤ代謝物」は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３以外のビタミンＤの代謝物を意味する。

「２５−ＯＨ Ｄ３」は、具体的には２５−ヒドロキシビタミンＤ３を示す。

「２５−ＯＨ Ｄ」は、血漿中に見られる主要な循環型であるビタミンＤ２またはビタミンＤ３のいずれかの２５−ヒドロキシル化代謝物を示す。

「予防する」には、疾患の寛解、症候の重篤度の低減、早期介入、疾患の発症期間の延長を含むことを想定しており、患者がその疾患にもはや羅患しないとか、何の症候も経験しないとかいった状況に限定されることを意図したものではない。

「ビスホスホネート」は、アレンドロン酸、クロドロン酸、エチドロン酸、イバンドロン酸、オルパドロン酸、ミノドロン酸、パミドロン酸、リセドロン酸、チルドロン酸、ゾレドロン酸を含む。

「他の骨粗鬆症薬」とは、本明細書で使用する場合、骨粗鬆症の軽減、寛解、予防、発症遅延などのために投与できる他の化合物を示す。一例として、ビスホスホネート、モノクローナル抗体、カルシウム形態、エストロゲン、フィトエストロゲンなどがあげられる。

ビタミンＤ欠乏は、骨の健康問題の筆頭要因の１つである。ビタミンＤ欠乏／不足は、特に高齢者の個体群や、年齢とは関係なく慢性的に動けない人々の間で多く見られる症状である。さらに、乳児、幼児、児童、青年、若い成人も隠れたビタミンＤ欠乏に羅患する可能性がある。これは、太陽光にあたる時間の全般的な不足、体がビタミンＤを作ったりこれを効率的に代謝したりする機能が衰えたこと、あるいは屋外にいるときには常に日焼け止めを使用するなどの他の多数の原因による場合がある。よって、本発明の一態様は、高齢者の個体群においてビタミンＤと２５−ＯＨ Ｄ３との組み合わせを使用し、骨の健康を促進することにある。本明細書全体で使用する場合、「高齢者の」という表現は、６５歳を超えた個体、好ましくは７０歳を超え、さらには８０歳を超えた個体すら包含することを想定している。

別の実施形態では、この２５−ＯＨ Ｄ３とビタミンＤの組み合わせが、ビタミンＤ欠乏または不足が特徴である症状を発症する危険性のある人々で、骨の健康を維持するのに適している。これには、特に閉経後の女性（すなわち４５歳前後以上）や４５歳前後以上の男性をはじめとするすべての成人を含み得る。これは特に、伝統的に長い衣服を着用する、日常的に屋外に出ない、太陽光にあたるときにサンスクリーン製剤を使用する、あるいは地理的に赤道から北または南に離れた太陽光がそれほど強くない地域で暮らす人々など、自然の太陽光を大量に浴びていない個体の骨の健康を維持するのに、特に適している。

別の実施形態では、２５−ＯＨ Ｄ３とビタミンＤの組み合わせが、骨成長のモデリングフェーズにある子どもや若い成人で骨の健康を改善するのに適している。これは、ピーク骨量に達する前にビタミンＤ欠乏または不足の危険性があるときに、ことさら懸案事項である。これは特に、伝統的に長い衣服を着用する、日常的に屋外に出ない、太陽光にあたるときにサンスクリーン製剤を使用する、あるいは地理的に赤道から北または南に離れた太陽光がそれほど強くない地域で暮らす人々など、自然の太陽光を大量に浴びていないピーク骨量前の個体で、骨の健康を改善するのに適している。このように、本発明の別の態様は、２５−ＯＨ Ｄ３とビタミンＤ３の組み合わせを使用して、骨成長のモデリングフェーズにある個体のピーク骨量を増加させることである。

本発明の別の態様は、ビタミンＤと２５−ＯＨ Ｄ３の組み合わせを投与することで、（小児脂肪便症、スプルー症候群または短腸症候群に羅患しているなど）吸収不良症候群のある人において、骨の健康を維持する方法である。

本発明の別の態様は、ビタミンＤを効率よく処理して２５−ヒドロキシビタミンＤに変えることのできない肝機能障害のある人において、その人にビタミンＤと２５−ヒドロキシビタミンＤ３の組み合わせを提供することで、骨の健康を維持する方法である。

ビタミンＤ３および２５−ＯＨ Ｄ３は、どのような供給源から入手したものであってもよく、その組成物も従来の技術を用いて調製してもよい。通常、ビタミンＤ３、２５−ＯＨ Ｄ３またはその両方の結晶を、加熱攪拌しながら（別々にまたは一緒に）油に溶解させる。好ましくは、油を容器に移して加熱する。その後、油の温度を維持または経時的に上昇させながら、ビタミンＤ３、２５−ＯＨ Ｄ３またはその両方を容器に入れる。組成物を攪拌して、ビタミンＤ３、２５−ＯＨ Ｄ３またはその両方の結晶を溶解させる。油に入れる前に、製粉および／または篩過によって結晶の大きさを小さくし、溶解しやすくしておいてもよい。組成物の攪拌は、かき回し、容器の回転、混合、均質化、再循環または超音波処理によって実施してもよい。好ましくは、油を容器に入れて約８０℃〜約８５℃の温度まで加熱し、大きさを揃えた結晶を容器に入れ、中身をかき回して結晶を油に溶解させる。

「油」は、ババス油、ココナッツ油、コフネヤシ油、ムルムル脂、パーム核油またはホシダネヤシ油など、食用油、脂質または脂肪のいずれであってもよい。油は、天然油、合成油、半合成油またはこれらの組み合わせであってもよい。天然油は、どのような供給源に由来するものであってもよい（動物、植物、真菌、海洋など）；合成または半合成油は、都合のよい技術で製造してもよい。好ましくは、油は、植物中鎖トリグリセリド、主にカプリル酸およびカプリン酸の混合物である。組成物は、任意に、たとえば、酸化防止剤、保存剤、溶解剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤または緩衝剤、湿潤剤、これらの組み合わせなどの１種類以上の他の好適な成分を含むものであってもよい。上記は、薬学的に許容されるキャリアの例である。

好適な酸化防止剤としては、トコフェロール、混合トコフェロール、天然または合成供給源由来のトコフェロール、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ローズマリー抽出物のような天然酸化防止剤、没食子酸プロピル、ヒト用医薬品の製造に用いられる他の任意の酸化防止剤があげられる。好ましくは、酸化防止剤がトコフェロールである。好適な保存剤としては、メチルパラベン、プロピルパラベン、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、安息香酸、これらの組み合わせがあげられる。好適な溶解剤としては、アルコール、塩素化炭化水素、これらの組み合わせなどの無機溶媒または有機溶媒があげられる。好適な界面活性剤は、パルミチン酸アスコルビル、ポリソルベート、ポリエチレングリコール、これらの組み合わせなど、アニオン系、カチオン系または非イオン系であってもよい。好適なｐＨ調整剤または緩衝剤としては、クエン酸−クエン酸ナトリウム、リン酸−リン酸ナトリウム、酢酸−酢酸ナトリウム、これらの組み合わせがあげられる。好適な湿潤剤としては、グリセロール、ソルビトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、これらの組み合わせがあげられる。

油組成物を形成したら、これを他のさまざまな有用な組成物に取り込むことができる。そのうちのいくつかを、以下にあげておく。たとえば、エマルションを形成してもよく、これを任意にカプセル化または噴霧乾燥させてもよい。上述した非水性組成物を水性組成物と組み合わせることで、多岐にわたるエマルションを調製できる。エマルションは、どのようなタイプであってもよい。好適なエマルションとしては、水中油滴型エマルション、油中水滴型エマルション、無水エマルション、固体エマルション、マイクロエマルションがあげられる。エマルションの調製には、都合のよい任意の技術を使用してもよい。エマルションは、水性組成物と非水性（油など）組成物を含有し、後者は、油組成物の総重量に対して約３重量％〜約５０重量％の量で油に溶解されたビタミンＤ３、２５−ＯＨ Ｄ３またはその両方を（別々にまたは一緒に）含む。本明細書で使用する場合、「水性組成物」および「水性相」は同義に用いられる。通常、エマルションは約２０％〜約９５％の水性組成物と、約５％〜約８０％の非水性組成物とを含み得る。しかしながら、好ましくは、エマルションが約８５％〜約９５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の水性組成物と、約５％〜約１５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の非水性組成物とを含有する。都合のよいことに、非水性組成物が液滴として水性組成物中に分散していてもよい。たとえば、液滴の平均直径が水性組成物中で約５００ｎｍ未満であってもよい。都合のよいことに、液滴の平均直径が約１００ｎｍ〜約２００ｎｍである。

特に有利な実施形態では、エマルションは、後にエマルションをさらに処理する（噴霧乾燥など）際に、油組成物のカプセル化を容易にするカプセル化剤を含有する。カプセル化剤は、油組成物をカプセル化できる食用物質であれば何でもよい。好ましくは、カプセル剤が主にコロイド状物質である。このような物質としては、デンプン、動物供給源由来のタンパク質（ゼラチンを含む）、植物供給源由来のタンパク質、カゼイン、ペクチン、アルギン酸塩、寒天、マルトデキストリン、リグニンスルホン酸塩、セルロース誘導体、糖質、糖類、ソルビトール、ゴム、これらの組み合わせがあげられる。

好適なデンプンとしては、植物デンプン（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｒｃｈ ＆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹのＣＡＰＳＵＬ（登録商標）またはＨＩ−ＣＡＰ（登録商標）など）、他の食品用化工デンプン、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、デンプンがＣＡＰＳＵＬ（登録商標）化工植物デンプンである。動物供給源由来の好適なタンパク質としては、ゼラチン（ウシゼラチン、ブルーム強度の異なるブタゼラチン（Ａ型またはＢ型）、魚ゼラチンなど）、脱脂乳タンパク質、カゼイン塩、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、動物タンパク質がゼラチンである。植物供給源由来の好適なタンパク質としては、ジャガイモタンパク質（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ Ｐｒｅｒｅｓ Ｓｏｃｉｅｔｅ Ａｎｏｎｙｍｅ， Ｌｅｓｔｒｅｍ，ＦｒａｎｃｅのＡＬＢＵＲＥＸ（登録商標）など）、マメタンパク質、ダイズタンパク質、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、植物タンパク質がＡＬＢＵＲＥＸ（登録商標）ジャガイモタンパク質である。デキストロース当量の異なる好適なマルトデキストリンとして、マルトデキストリン５、マルトデキストリン１０、マルトデキストリン１５、マルトデキストリン２０、マルトデキストリン２５、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、マルトデキストリンが、マルトデキストリン１５である。好適なセルロース誘導体として、エチルセルロース、メチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、これらの組み合わせがあげられる。好適な糖類として、ラクトース、スクロースまたはこれらの組み合わせがあげられる。好ましくは、糖類がスクロースである。好適なゴムとして、アカシア、ローカストビーン、カラギーナン、これらの組み合わせがあげられる。好ましくは、ゴムがアカシアゴムである。

エマルションがカプセル化剤を含む場合、このカプセル化剤を都合のよい技術で水に分散させ、水性相を形成してもよい。水性相は、選択した成分の特性に応じて、溶液であっても混合物であってもよい。選択した成分の分散には、均質化、混合、乳化、再循環、静的混合、超音波処理、かき混ぜ、加熱またはこれらの組み合わせをはじめとする都合のよい技術を用いればよい。その後、得られる水性相の粘度を、必要に応じて水を加えて調整してもよい。エマルションの水性組成物は、非水性組成物に関して上述したものを含むがこれに限定されるものではない、他の好適な物質を任意に含むものであってもよい。好ましくは、水性組成物は、カプセル化剤、成膜剤、可塑剤、保存剤、酸化防止剤またはこれらの組み合わせを含むものであってもよい。好適な保存剤として、メチルパラベン、プロピルパラベン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、これらの組み合わせがあげられる。好適な酸化防止剤として、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸、クエン酸、これらの組み合わせがあげられる。

好ましくは、水性相が、オクテニルスクシニルデンプン（ＣＡＰＳＵＬ（登録商標））、マルトデキストリン、アスコルビン酸ナトリウムなどの食品用化工デンプンを含有する。別の好ましい水性相は、ジャガイモタンパク質（ＡＬＢＵＲＥＸ（登録商標））、マルトデキストリン２０、アスコルビン酸ナトリウムを含有する。選択した成分を水に溶解させるには、都合のよい技術、好ましくはかき混ぜを使用してもよい。混合物を、好ましくはこれが均一で塊のないものになるまで均質化する。好ましくは、約５０℃〜約７５℃の温度で均質化を実施する。その後、得られる水性相の最終粘度を、好ましくは約２５０ｃｐ〜約４５０ｃｐ、一層好ましくは約３００ｃｐ〜約４００ｃｐ、なお一層好ましくは約３８５ｃｐの所望の粘度に調整してもよい。

エマルションを形成するには、均質化、ロータ−ステータ剪断、高圧剪断およびキャビテーション、高速「カウリング」または剪断攪拌、これらの組み合わせをはじめとする任意の手段で、非水性組成物と水性相を乳化してもよい。エマルションの容量および粘度については、好ましくは、乳化後に水を加えて調整してもよい。好ましくは、非水性組成物および水性組成物を均質化によって乳化する。好ましくは、エマルションは、鉱物、遷移金属またはペルオキシドを含有しないものとする。

上述したように、他の有用な組成物、特に噴霧乾燥粉末などのカプセル化油の製造時に、エマルションを取り込むかまたは利用してもよい。通常、カプセル化油は、油組成物と、油組成物をカプセル化するカプセル剤とを含み、この場合の油組成物は、油に溶解されたビタミンＤ３、２５−ＯＨ Ｄ３またはその両方を、油組成物の総重量に対して約３重量％〜約５０重量％の量で含有する。カプセル化油の製造には、噴霧乾燥、フリーズドライ、流動床乾燥、トレイ乾燥、吸着、これらの組み合わせをはじめとする従来の技術による上述したエマルションの乾燥など、都合のよい任意の技術を用いればよい。好ましくは、カプセル剤を含有する上記の水性相を有するエマルションを噴霧乾燥してカプセル化油を生成する。噴霧乾燥のパラメータは、最終的なカプセル化油に望ましい物理的特徴に左右される。このような物理的パラメータとしては、粒度、粉末の形状とフロー、水分含有量があげられる。好ましくは、油が、カプセル化油の総重量に対して約３０重量％未満、約２０重量％未満、約１０重量％未満または約３重量％未満の量である。カプセル化油は流動性に優れたものでなければならず、ビタミンＤ３および／または２５−ＯＨ Ｄ３が組成物全体に均一に分散しなければならない。都合のよいことに、カプセル化油が粉末である。他の好適な添加剤をカプセル化油に加えてもよい。このような添加剤の１つが、カプセル化油の流動性を高めるための二酸化ケイ素などのフロー剤であってもよい。

［投与量］
毎日．２種類の有効成分を別々に投与する場合の本発明による組成物は、ビタミンＤまたは２５−ＯＨ Ｄ３を、約１μｇ〜約５０μｇ、好ましくは約５μｇおよび２５μｇの量で含有する。あるいは、ビタミンＤと２５−ＯＨ Ｄ３の両方を含む１日の単回投与量に、各有効成分を、約１μｇ〜約５０μｇ、好ましくは約５μｇおよび２５μｇの量で含有する。

ビタミンＤ対２５−ＯＨ Ｄ３の用量比については、約５０：１〜約１：５０であってもよく、一層好ましくは約２５：１〜約１：２５、なお一層好ましくは約６：１〜約１：６であってもよい。

別個の複数の投与量を単一のキット（または容器）に梱包してもよい。たとえば、１日の投与量３０組を、両方の活性成分を別々に分けて（すなわち別々の６０の投与量）キットを構成してもよいし、混合（すなわち両方の有効成分を含有する３０の投与量）して構成してもよい。この投与量をヒトに投与するための指示をキットに入れておいてもよい。

毎週．１週間の単回投与量には、ビタミンＤまたは２５−ＯＨ Ｄ３を約７μｇ〜約３５０μｇ、好ましくは約３５〜１７５μｇの量で含有する。あるいは、１週間の単回投与量が、ビタミンＤと２５−ＯＨ Ｄ３の両方をそれぞれ約７μｇ〜約３５０μｇ、好ましくは約３５〜１７５μｇの量で含有してもよい。ビタミンＤ対２５−ＯＨ Ｄ３の用量比については、約５０：１〜約１：５０であってもよく、一層好ましくは約２５：１〜約１：２５、なお一層好ましくは約６：１〜約１：６であってもよい。

毎月．１ヶ月の単回投与量には、ビタミンＤまたは２５−ＯＨ Ｄ３を３０μｇ〜約１５００μｇ、好ましくは約７５μｇ〜約５００μｇの量で含有する。あるいは、１ヶ月の単回投与量が、ビタミンＤと２５−ＯＨ Ｄ３の両方をそれぞれ、３０μｇ〜約１５００μｇ、好ましくは約７５μｇ〜約５００μｇの量で含有してもよい。１週間または１ヶ月の投与量を１組、２組、３組、４組、５組、６組、７組、８組、９組、１０組、１１組または１２組でキットを構成してもよい。

ビタミンＤ対２５−ＯＨ Ｄ３の用量比については、５０：１〜約１：５０の範囲とし、一層好ましくは約２５：１〜約１：２５、なお一層好ましくは約６：１〜約１：６の範囲とする。

２５−ＯＨ Ｄ３の噴霧乾燥製剤、ビタミンＤ３の噴霧乾燥製剤またはその両方を経口投与して、ヒトでの薬物動態に関する研究を開始し、その生理学的相互作用を調査した。特に、その用量反応曲線（単に得られた平均濃度や最大濃度ではなく、一定時間内の経時的なビタミンＤ３および２５−ＯＨ Ｄ３の循環濃度を示す）の形状と定常状態の動態を対象とした。前者の点に関しては、ビタミンＤ３と２５−ＯＨ Ｄ３の両方に曝露した場合の用量反応曲線の形状の変化を調査することが重要である。後者の点に関しては、投与が毎日よりも少ない場合の定常状態の動態を調査することも必要である。なぜなら、（高齢者など）毎日摂取しにくい場合もあり得るグループでは、そのほうが好ましいレジメンだからである。

以下の非限定的な実施例は、本発明を一層よく例示するために示すものである。

［実施例］
［実施例１］
［治験］
［製剤］
２５−ＯＨ Ｄ３の噴霧乾燥製剤を粉末として提供した。要約すると、２５−ＯＨ Ｄ３およびＤＬ−α−トコフェロールを中鎖トリグリセリドの油に溶解させた後、化工デンプン、スクロース、アスコルビン酸ナトリウムの水溶液に乳化した。このエマルションを二酸化ケイ素の存在下にて噴霧乾燥器で微粒化した。水分含有量（ＬＤＯ）が４％未満になったら、得られた粉末を回収し、４００μｍで篩過した。これをアルミ製の袋に包装して封止した後、１５℃未満の乾燥した場所で保管し、製造から１２ヶ月以内に使用した。

３種類のロットを製造した。詳しく説明すると、アンカー型攪拌羽根を備えるＦＲＹＭＩＸプロセスユニットで、７０℃にて真空下で１２０分間混合してマトリクスを生成した。
・１７．３００ｋｇの水（ＷＢＩ）
・１３．４６０ｋｇの食品用化工デンプン（ＣＡＰＳＵＬ ＨＳ）
・３．２７０ｋｇのスクロース
・０．７３０ｋｇのアスコルビン酸ナトリウム

プロペラスターラーを備える二重壁容器で、８２℃にて３５分間混合して、油相を調製した。
・０．５５０ｋｇのＢＥＲＧＡＢＥＳＴ ＭＣＴ油６０／４０
・０．０４９ｋｇのカルシフェジオール（ＨＹ−Ｄ ＵＳＰ）
・０．１８３ｋｇのＤＬ−α−トコフェロール

油相をＦＲＹＭＩＸプロセスユニット内のマトリクスに移し、内部のコロイドミル（６０分、７０℃）で事前乳化させた。この事前乳化物を高圧ホモジナイザに循環させた（２０分）。７０℃での粘度が６０ｍＰａ・ｓ〜９０ｍＰａ・ｓのエマルションを高圧ポンプでスプレーノズルまで送った。流動化剤として、二酸化ケイ素（ＳＩＰＥＲＮＡＴ ３２０ ＤＳ）を塔に供給した。噴霧乾燥パラメータを以下にあげておく。

３ロットの２５−ＯＨ Ｄ３それぞれについて、２５−ＯＨ Ｄ３含有量約０．２５％の噴霧乾燥粉末平均８．４ｋｇを得た。製剤の他の成分は、食品用化工デンプン７３．２％、スクロース１７．６％、アスコルビン酸ナトリウム４．０％、中鎖トリグリセリド３．０％、二酸化ケイ素１．０％、ＤＬ−α−トコフェロール１．０％である。

ビタミンＤ３の噴霧乾燥製剤を粉末として提供した。要約すると、ビタミンＤ３およびＤＬ−α−トコフェロールを中鎖トリグリセリドの油に溶解させた後、化工デンプン、スクロース、アスコルビン酸ナトリウムの水溶液に乳化した。このエマルションを二酸化ケイ素の存在下にて噴霧乾燥器で微粒化した。水分含有量（ＬＯＤ）が４％未満になったら、得られた粉末を回収し、篩過して大きな塊を取り除いた。これを１５℃未満の乾燥した場所で保管し、製造から１２ヶ月以内に使用した。

［治験］
［被験者］
インフォームドコンセントを用いて健康な閉経後の女性（５０〜７０歳）を募集し、以下の基準でふるい分けた。血清２５−ヒドロキシビタミンＤ３が２０ｎｍｏｌ／Ｌ〜５０ｎｍｏｌ／Ｌ、肥満度指数１８ｋｇ／ｍ^２〜２７ｋｇ／ｍ^２、血圧１４６／９５ｍｍ Ｈｇ未満、血清カルシウム２．６ｎｍｏｌ／Ｌ未満、空腹時グルコース１００ｍｇ／ｄｌ未満、１週間に３回を超えて激しい運動をしない、高血圧症の治療歴なし、骨代謝に影響する高用量ビタミンＤまたはカルシウムサプリメントまたは薬物（ビスホスホネート、カルシトニン、エストロゲン受容体調節因子、ホルモン補充療法、副甲状腺ホルモン）の使用歴なし、研究中は「日当たりの良い」場所に足を運ばない。

被験者を７つの処理群（すなわち、毎日、毎週、一用量でのボーラス、組み合わせ用量でのボーラス）に無作為に振り分けた。各群を被験者５名ずつで構成した。彼らをスイスのチューリッヒで冬季に４ヶ月間追跡する。

［臨床研究］
ビタミンＤ３および２５−ＯＨ Ｄ３の薬物動態特性を研究した。両方の物質を等モル量で調査した。レジメンは、２５−ＯＨ Ｄ３を２０μｇ／日（またはそれに相当する量を週ベースで）とした。比較目的で、等モル量のビタミンＤ３または２５−ＯＨ Ｄ３のいずれかを投与する必要があった。ビタミンＤ３の投与に関しては、バックグラウンドのばらつきに影響されず、参加者にとっての有効用量を提供するのに十分な用量であると思われた。

毎日：１２０回投与
１． ２５−ＯＨ Ｄ３ ２０μｇ
２． ビタミンＤ３ ２０μｇ（８００ＩＵ）
毎週：１６回投与
３． ２５−ＯＨ Ｄ３ １４０μｇ
４． ビタミンＤ３ １４０μｇ（５６００ＩＵ）
ボーラス：単回投与
５． ２５−ＯＨ Ｄ３ １４０μｇ
６． ビタミンＤ３ １４０μｇ（５６００ＩＵ）
ボーラス：組み合わせ投与
７． Ｄ３および２５（ＯＨ）Ｄ３ １４０μｇ（５６００ＩＵ）＋１４０μｇ

ハードゲルカプセル（瓶入り）には、噴霧乾燥ビタミンＤ３または２５−ＯＨ Ｄ３のいずれかが１カプセルあたり２０μｇまたは１４０μｇのいずれかで含まれていた。各投与量を朝食時に経口摂取した。研究期間は、「毎日」および「毎週」群で４ヶ月であった。「ボーラス」群に登録された被験者は、２回目の研究での来訪時に単一投与量を経口摂取した。

この投与量を摂取後、さまざまな時点で被験者から試料を入手して、２５−ＯＨ Ｄ３の血漿濃度（ピークおよび定常状態など）を求めた。スクリーニング目的と基線値を確立するために、研究への参加前に血液試料を採取し、臨床検査室で、血清中のビタミンＤ３、２５−ＯＨ Ｄ３、カルシウム、クレアチニン、アルブミン、空腹時グルコースを測定した。研究１週目の月曜日に、血清ビタミンＤ３、２５−ＯＨ Ｄ３、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の薬物動態；血清マーカー（すなわち、ビタミンＤ３、２５−ＯＨ Ｄ３、カルシウム、クレアチニン、アルブミン、ＰＴＨ、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＡＬＰ、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬ、総コレステロール、ｂＡＬＰ、空腹時グルコース）；尿マーカー（すなわち、カルシウム、クレアチニン、ＤＰＤ）を２４時間かけて評価した。１週目の残りの日と２週目の月曜日の１日試料を採取して、血清ビタミンＤ３および２５−ＯＨ Ｄ３、血清マーカー（すなわち、カルシウム、クレアチニン、アルブミン）、尿マーカー（すなわち、カルシウム、クレアチニン）を評価した。３、５、７、９、１１、１３、１５週目の月曜日にも評価を継続した。１６週目の月曜日には、試料を採取して、血清ビタミンＤ３、２５−ＯＨ Ｄ３、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３；血清マーカー（すなわち、ビタミンＤ３、２５−ＯＨ Ｄ３、カルシウム、クレアチニン、アルブミン、ＰＴＨ、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＡＬＰ、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬ、総コレステロール、ｂＡＬＰ、空腹時グルコース）；尿マーカー（すなわち、カルシウム、クレアチニン、ＤＰＤ）の薬物動態を評価した。

［結果］
表１に、２５−ＯＨ Ｄ３で毎日および毎週治療後（１日あたり２０μｇ；１週間あたり１４０μｇ）とビタミンＤ３で毎日および毎週治療後（１日あたり２０μｇ；１週間あたり１４０μｇ）の骨吸収マーカーであるデオキシピリジノリン（ＤＰＤ）と骨特異的アルカリホスファターゼ（ＢＡＰ）を示す。治療期間は４ヶ月とした。値は、４ヶ月後に、２５−ＯＨ Ｄ３およびビタミンＤ３の骨吸収マーカー、年齢および肥満度指数に合わせて調整した、ＧＬＭ（一般線形モデル）の最小二乗平均である。

表２は、ビタミンＤ３で毎日および毎週治療（１日あたり２０μｇ；１週間あたり１４０μｇ）した場合との比較で、２５−ＯＨ Ｄ３で毎日および毎週治療後（１日あたり２０μｇ；１週間あたり１４０μｇ）の骨吸収マーカーであるデオキシピリジノリン（ＤＰＤ）と骨特異的アルカリホスファターゼ（ＢＡＰ）の相対変化を示す。治療期間は４ヶ月とした。値は、１３回の来訪にわたって繰り返し測定分析後に、２５−ＯＨ Ｄ３対ビタミンＤ３の基線での骨マーカー、年齢および肥満度指数に合わせて調整した、ＧＬＭ（一般線形モデル）の最小二乗平均を改善率の％単位で示したものであり、２５−ＯＨ Ｄ３対ビタミンＤ３での基線の骨吸収マーカーおよび時間に合わせて調整した、骨吸収マーカーの減少率の％で示したものである。

これらのデータから、２５−ＯＨ Ｄ３で毎日または毎週治療すると、意外なことに、同じ投与量のビタミンＤ３を摂取する場合に比して骨吸収マーカーの減少度合いがかなり大きくなることが分かる。２５−ＯＨ Ｄ３での治療後、治療前ならびにビタミンＤ３での治療時に比して、被験者に一層顕著な骨吸収マーカーの減少が認められた。２５−ＯＨ Ｄ３対ビタミンＤ３で治療した被験者でのデオキシピリジノリン（ＤＰＤ）と骨特異的アルカリホスファターゼ（ＢＡＰ）の減少は、それぞれ１７．０および２．４％であるが、これは臨床的に意義があり、なおかつあらゆる年齢層の被験者で有意な利益を表すエフェクトサイズである。

デオキシピリジノリン（ＤＰＤ）および骨特異的アルカリホスファターゼ（ＢＡＰ）などの骨吸収に対するマーカーの減少は、骨吸収と骨形成のバランスが形成にシフトしていることを示すものであり、これは最終的に骨量の増加または少なくとも骨量喪失の抑制につながる。結論として、２５−ＯＨ Ｄ３での治療が、意外なことに、ビタミンＤ３に比して骨吸収マーカーの極めて効果的な減少に至ったことから、２５−ＯＨ Ｄ３での治療後に正味の骨形成が改善されることが分かる。

表３に、投与量１４０μｇの２５−ＯＨ Ｄ３、投与量１４０μｇのビタミンＤまたは併用投与量１４０μｇの２５−ＯＨ Ｄ３＋１４０μｇビタミンＤ後の血漿２５−ＯＨ Ｄレベルの増加を示す。血液試料については、表記の時間スケジュールで採取した。

上述したように、１４０μｇの２５−ＯＨ Ｄ３＋１４０μｇのビタミンＤ３を併用投与後に、血漿２５−ＯＨ Ｄ応答の相乗的な増加があった。この効果は最初の６時間に特に顕著であった。さらに、併用投与によって、２から２０６時間まで（すなわち８．５日目まで、あるいは１週間を超えて）血漿２５−ＯＨ Ｄレベルが少なくとも３０ｎｍｏｌ／Ｌずつ持続的に増加した。１４０μｇの２５−ＯＨ Ｄ３を投与後、４〜４９時間の間のみ少なくとも３０ｎｍｏｌ／Ｌの血漿２５−ＯＨ Ｄレベルの増加が観察されたのに対し、１４０μｇのビタミンＤ３単独の投与後にはその大きさの増加は観察されなかった。

したがって、１４０μｇの２５−ＯＨ Ｄ３＋１４０μｇのビタミンＤ３の併用投与によって、２つの有意な利点が得られる。これは、２５−ＯＨ Ｄの迅速かつ相乗的な血漿応答を生じ、なおかつ予想外に顕著かつ長時間にわたる血漿２５−ＯＨ Ｄレベルの安定化につながる。これらは、ビタミンＤ欠乏の特に重要な治療目標すなわち、すべてのビタミンＤ依存性組織の十分な供給を保証するための最適以下のビタミンＤの状態と長期かつ安定した血漿濃度をすみやかに回復することである。

２５−ＯＨ Ｄ３で治療すると、同じ投与量のビタミンＤ３の場合よりも一層効果的に骨吸収マーカーが減少する。これによって骨吸収と骨形成のバランスが骨形成の側に一層顕著にシフトし、結果として骨の健康につながる。２５−ＯＨ Ｄ３とビタミンＤ３の併用投与後の血漿２５−ＯＨ Ｄレベルの相乗的な増加がゆえに、骨形成がさらに加速され、骨の健康にとっての大きな利点が得られる。

Claims (8)

1. ヒトの骨の健康を維持ならびに／または骨粗鬆症、くる病および骨減少症を予防または治療するための、および骨密度の重篤化を下げるための医薬品であって、
   ２５−ヒドロキシビタミンＤ３（２５−ＯＨ Ｄ３）とビタミンＤ３とを６：１〜１：６の用量比で含有する、医薬品。
2. 前記医薬品が１日１回投与されるためのものである、請求項１に記載の医薬品。
3. 前記医薬品が１日１回投与されるためのものであり、前記２５−ＯＨ Ｄ３および前記ビタミンＤ３の１回あたりの投与量がそれぞれ１〜５０μｇである、請求項１に記載の医薬品。
4. 前記医薬品が１週間に１回投与されるためのものである、請求項１に記載の医薬品。
5. 前記医薬品が１週間に１回投与されるためのものであり、前記２５−ＯＨ Ｄ３および前記ビタミンＤ３の１回あたりの投与量がそれぞれ７〜３５０μｇである、請求項１に記載の医薬品。
6. 前記医薬品が、１ヶ月に１回投与されるためのものである、請求項１に記載の医薬品。
7. 前記医薬品が１ヶ月に１回投与されるためのものであり、前記２５−ＯＨ Ｄ３および前記ビタミンＤ３の１回あたりの投与量がそれぞれ３０〜１５００μｇである、請求項１に記載の医薬品。
8. ヒトにおいて骨の健康を維持および／または骨粗鬆症、くる病および骨減少症を予防または治療するための、および骨密度の重篤化を下げるための医薬品の製造における、２５−ヒドロキシビタミンＤ３（２５−ＯＨ Ｄ３）およびビタミンＤ３の使用であって、
   前記医薬品における２５−ＯＨ Ｄ３とビタミンＤ３との用量比が６：１〜１：６の範囲である、使用。