JP5484065B2

JP5484065B2 - メラノコルチン受容体リガンドとしての新規アミノグアニジン

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Publication number: JP5484065B2
Application number: JP2009540865A
Authority: JP
Inventors: ルンドステット、トルビョルン; セイフェルト、エリザベス; レク、ペー; ボマン、アーネ
Original assignee: アナマルエービー
Priority date: 2006-12-14
Filing date: 2007-12-13
Publication date: 2014-05-07
Anticipated expiration: 2027-12-13
Also published as: US20100056641A1; CA2673065C; KR20150038754A; US8372878B2; MX2009005917A; AU2007331265A1; ES2474890T3; WO2008071980A1; IL199254A; KR101539252B1; CA2673065A1; EP2121585B1; AU2007331265B2; EP2121585A1; GB0624987D0; KR20090089904A; KR101603721B1; NZ577546A; JP2010513258A

Description

本発明は、メラノコルチン受容体または関連する系（例えば、メラニン細胞刺激ホルモン）と関連がある炎症および自己免疫異常の治療のための化合物に関する。

多数の大型線状および環状のペプチドが、メラノコルチン（ＭＣ）受容体に対して高い特異的結合を示すことが従来技術において知られている。これらのペプチドのアゴニストおよび／またはアンタゴニスト的特性も、知られている。例えば、Ｄｏｏｌｅｙ、ＧｉｒｔｅｎおよびＨｏｕｇｈｔｅｎ（ＷＯ９９／２１５７１、特許文献１）による「メラノコルチン受容体リガンドおよびそれを用いる方法」を参照。ＭＣ受容体に対して活性を示す小分子を説明する多数の特許出願が、公開されている。例えば、ＷＯ９９５５６７９（特許文献２）、ＷＯ９９６４００２（特許文献３）、ＷＯ０１０５４０１（特許文献４）、ＷＯ０１２５１９２（特許文献５）、ＷＯ０１０５５１０７（特許文献６）、ＷＯ０１０５５１０９（特許文献７）、ＷＯ０１０５５１０６（特許文献８）、ＷＯ０２１２１７８（特許文献９）、ＷＯ０２１２１６６（特許文献１０）、ＷＯ０２１８３２７（特許文献１１）およびＷＯ０３００９８４７（特許文献１２）、ＷＯ０３０６１６６０（特許文献１３）、ＷＯ０３０３１４１０（特許文献１４）参照。従来技術において知られている薬理学的に活性なグアニジンの他の例は、特許ＵＳ３９８２０２０（特許文献１５）およびＧＢ１２２３４９１（特許文献１６）に説明されている。他の適用分野は従来技術において知られており、特許ＵＳ３８９６３３２（特許文献１７）、ＤＥ１１６５０１３（特許文献１８）およびＵＳ３９４１８２５（特許文献１９）において説明されている。

国際公開第９９／２１５７１号パンフレット国際公開第９９５５６７９号パンフレット国際公開第９９６４００２号パンフレット国際公開第０１０５４０１号パンフレット国際公開第０１２５１９２号パンフレット国際公開第０１０５５１０７号パンフレット国際公開第０１０５５１０９号パンフレット国際公開第０１０５５１０６号パンフレット国際公開第０２１２１７８号パンフレット国際公開第０２１２１６６号パンフレット国際公開第０２１８３２７号パンフレット国際公開第０３００９８４７号パンフレット国際公開第０３０６１６６０号パンフレット国際公開第０３０３１４１０号パンフレット米国特許第３９８２０２０号明細書英国特許第１２２３４９１号明細書米国特許第３８９６３３２号明細書独国特許第１１６５０１３号明細書米国特許第３９４１８２５号明細書

低分子量化合物が文献においても検討されており、例えば、Sebhatら．， Ann. Rep. M
ed. Chem. 38, 31-40, 2003、Speakeら．， Expert Opin. Ther. Patents 12, 1631 - 1638, 2002、Anderssonら． Expert Opin. Ther. Patents 11, 1583-1592, 2001およびそこで引用されている文献を参照。

ここで、我々は、ＭＣ−受容体において活性を有し、炎症および自己免疫異常を治療するのに用いることができる様々な新規ベンジリデンアミノグアニジンおよびアリリデンアミノグアニジンを見出した。

本発明の一形態において、我々は一般式（Ｉ）の化合物を提供する。そのような化合物およびその異性体の形態、ならびに医薬的に許容されるその塩は、メラノコルチン受容体へのリガンドとして、および／またはメラノコルチン系における不調の治療のために作用することができる。

式中、ｎは、０、１、２または３であり、好ましくは０または１であり、飽和または不飽和であり；
Ｒ₁〜Ｒ₅の少なくともひとつは、ハロゲンから選択され：
Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅の少なくとも１つは、−Ｓ−Ｒもしくは−ＣＯＯＲから選
択されるか、または、Ｒ₁〜Ｒ₅の２以上は、−Ｓ−（ＣＨ₂）_m−Ｓ−（式中、ｍは１、２または３である）のような連結基を含み、
Ｒは、１〜５の炭素原子を有するアルキル、１〜５の炭素原子を有するアルコキシ；３〜６の炭素原子を有するシクロアルキルおよび６〜１０の炭素原子を有するアリールから選択され、Ｒ₁が−Ｓ−Ｒから選択される場合、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₅の少なくとも１つはハロゲンから選択され；
そうでない場合は、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅は、同一または異なっており、水素、
ハロゲン、１〜５の炭素原子を有するアルキル、電子供与性基（例えば、１〜５の炭素原子を有するアルコキシまたはヒドロキシ）、シアノ、ニトロ、トリフルオロアルキルもしくはアミドから選択される電子受容性基；アルキルアミノ、ベンゾイルオキシ、ニトロキシ、フェニルまたはスルホから選択される。

存在する場合、連結基は、メチレンジチオ基が好ましく、２，３−、３，４−または４，５−メチレンジチオ基が特に好ましい。

前記定義において用いられる場合、用語アルキルは、直鎖または分岐鎖の炭化水素基を含むことを意図する。「１〜５の炭素原子を有するアルキル」は、低級アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルが好ましい。

用語アルコキシは、直鎖または分岐鎖のアルコキシ基を含むことを意図する。「１〜５の炭素原子を有するアルコキシ」は、低級アルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、またはイソプロポキシであるのが好ましい。または、Ｒ₁〜Ｒ₅の２つは、酸素含有連結基、例えば、−Ｏ−（ＣＨ₂）_m−Ｏ−（式中、ｍは上記で定義したとおり）を含んで、複素環を形成してもよい。

用語ハロゲンには、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを含む。前記ハロゲンは、フルオロまたはクロロが好ましい。

トリフルオロアルキルは、トリフルオロメチル、トリフルオロエチル、トリフルオロプロピルまたはトリフルオロイソプロピルであるのが好ましい。

用語「アルキルアミノ」は、２〜６の炭素原子を有する基を指すのが好ましく、ジアルキルアミノ基が特に好ましく、ジメチルアミノまたはジエチルアミノが最も好ましい。

式（Ｉ）の化合物は、塩基性特性を有し、したがって、適切な酸、例えば、無機酸（例えば、塩化水素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸およびリン酸）または有機酸（例えば、酢酸、プロパン酸、グリコール酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、パモ酸（palmoic acid）またはパラ−トルエンスルホン酸）で処理することにより、治療的に活性な医薬的に許容される酸付加塩に変換されてもよい。

逆に、塩の形態は、アルカリでの処理により遊離塩基の形態へ変換されてもよい。

本発明は、また、ベンジリデンアミノグアニジンおよびアリリデンアミノグアニジンの治療における使用に関する。上記式（Ｉ）の化合物、および医薬的に許容されるその塩
［ただし式中、
ｎは、０、１、２または３であり、０または１であるのが好ましく、飽和または不飽和であり；
Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅の少なくとも１つは、−Ｓ−Ｒおよび−ＣＯＯＲから選択
されるか、または、Ｒ₁〜Ｒ₅の２以上は、−Ｓ−（ＣＨ₂）_m−Ｓ−（式中、ｍは１、２または３である）のような連結基を含み；
Ｒは、１〜５の炭素原子を有するアルキル、１〜５の炭素原子を有するアルコキシ；３〜６の炭素原子を有するシクロアルキルおよび６〜１０の炭素原子を有するアリールから選択され、そのような基は任意に置換され、
そうでない場合は、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅は、同一または異なっており、水素、
ハロゲン、１〜５の炭素原子を有するアルキル、電子供与性基（例えば、１〜５の炭素原子を有するアルコキシまたはヒドロキシ）、シアノ、ニトロ、トリフルオロアルキルもしくはアミドから選択される電子受容性基；アルキルアミノ、ベンゾイルオキシ、ニトロキシ、フェニルまたはスルホから選択される。］
は、本文中で化合物（ＩＡ）と指定され、
メラノコルチン系において生物学的に検査され、驚いたことに、メラノコルチン受容体への結合能力を示し、かつ、機能分析において活性を示した。そのような化合物は、驚いたことに、従来技術において公知の化合物と比較して、より取り込まれるにもかかわらず、急性毒性がより低いことを示した。

治療において用いられる式（ＩＡ）の好ましい化合物は、ここに示す好ましさも含んで、上記の式（Ｉ）の化合物のものである。

本発明の式（ＩＡ）の化合物のいくつかは、特定のＭＣ−受容体または、多くのＭＣ−
受容体、例えば、ＭＣ１、ＭＣ３、ＭＣ４または／およびＭＣ５受容体のアゴニストまたはアンタゴニストのいずれかである。

ＭＣ−受容体は、前記ＭＣ−受容体の独特なサブタイプにより媒介されると考えられている、様々な生理作用と関連している。しかしながら、多くの場合、いずれのサブタイプが効果に対して重要であるのかは、全体として明らかになっていない。

ＭＳＨ−ペプチドは、多くの様々なプロセス、例えば、刺激、学習、記憶、行動（摂食行動および性行動を含む）、炎症（免疫刺激性炎症および免疫抑制性炎症を含む）、体温、疼痛認識、血圧、心拍数、血管緊張、脳血流量、異なる臓器における栄養効果、神経成長、胎盤成長、内分泌機能および外分泌機能、アルドステロン合成および放出、チロキシン放出、精子形成、卵巣重量、プロラクチンおよびＦＳＨ分泌、他のホルモンへの影響、女性における子宮出血、皮脂およびフェロモン分泌、血糖レベル、子宮内胎児成長、ならびに、分娩付近の他の事象およびナトリウム排泄増加（Eberle, AN: The melanotropins: Chemistry, physiology and mechanisms of action. Basel: Karger, Switzerland. 1988, ISBN 3-8055-4678-5; Gruber, and Callahan, Am. J. Physiol. 1989, 257, R681-R694; De Wildt ら, J. Cardiovascular Pharmacology. 1995, 25, 898-905）ならびに誘発ナトリウム排泄増加（Lin ら., Hypertension. 1987, 10, 619-627）に影響を与えることが長いこと知られている。

α−ＭＳＨの免疫調節作用には、免疫刺激効果および免疫抑制効果の両方が含まれることもよく知られている。幾つかの研究により、α−ＭＳＨが、前炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−α）の効果を弱め、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−１０の生産を誘導することが示されている（総論としては、Catania & Lipton, 1993参照)。

式（Ｉ）、（ＩＡ）の化合物および／またはそれらの医薬的に許容される塩は、それらの有用な薬理学的性質により、酸化窒素の生産に関連する炎症、増加する量（上方調整された量）の誘導酸化窒素合成に関連する炎症、転写活性剤の活性化に関連する炎症、核因子カッパベータに関連する炎症、マクロファージ、好中球、単球、ケラチノサイト、線維芽細胞、メラノサイト、色素細胞および内皮細胞に関連する炎症、および、炎症性サイトカイン（例えば、インターロイキン類、特にインターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン６（ＩＬ−６）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）の増加した生産および／または放出に関連する炎症のような炎症の治療に有用である。

本願明細書において、「増加した生産」は、健康な個体における内因性化合物の量と比較して、患者の局所的、地域的または全身的に、その内因性化合物の形成が増加し、放出が増加し、またはその量が増加することを指す。本明細書において、「上方調整（upregulated）」は、化合物の活性または量が、健康な個体における化合物の活性または量と比
較して増加していることを指す。

非常に特定な本発明の実施形態において、本発明の式（Ｉ）または（ＩＡ）の化合物は、炎症性成分を有する皮膚疾患を含む、全ての起源の皮膚の炎症性疾患（真皮および表皮を含む）の予防または治療的処置のために投与することができる。本発明のこの実施形態の特定な例には、皮膚の接触性皮膚炎、皮膚の日焼け、あらゆる原因による火傷、ならびに、化学剤、乾癬、血管炎、壊疽性膿皮症、円板状エリテマトーデス、湿疹、掌蹠膿疱症および尋常性天疱瘡による炎症の治療を含む。

また、炎症性成分を有する腹部疾患を含む腹部における炎症性疾患の治療のための、式（Ｉ）、（ＩＡ）の化合物または医薬的に許容されるその塩の投与は、本発明に含まれる
。本発明の化合物によるそのような疾患の治療の特定な例は、由来不明の胃炎を含む胃炎、胃炎悪性熱（萎縮性胃炎）、潰瘍性大腸炎（潰瘍性大腸炎）、クローン病、全身性硬化症、十二指腸潰瘍、小児脂肪便症、食道炎および胃潰瘍である。

自己免疫性のもの、および他の炎症性および／もしくは関節炎状態または全身性疾患を含む、全身または全身および／もしくは局所性の免疫疾患の治療のための、式（Ｉ）、（ＩＡ）の化合物または医薬的に許容されるその塩の投与も本発明に含まれる。特定な例には、リウマチ様関節炎、乾癬性関節炎、全身性硬化症、リウマチ性多発性筋痛、ヴェグナー肉芽腫、サルコイドーシス、好酸球性筋膜炎（fasceitis）、反応性関節炎、ベヒテレ
フ病、全身性エリテマトーデス、側頭動脈炎、ベーチェット氏病、バーガー病、グッドバスチャー症候群、好酸性肉芽腫、線維筋痛症、筋炎および混合型結合組織病の治療が含まれる。また、由来不明の関節炎を含む関節炎も、ここに含まれる。

炎症に関連する末梢および／または中枢神経系の疾患の治療のための、式（Ｉ）、（ＩＡ）の化合物または医薬的に許容されるその塩の投与もさらに本発明に含まれる。本発明のこの形態に、脳性脈管炎、多発性硬化症、自己免疫眼炎および多発性神経炎の治療を含む。中枢神経系の炎症の治療のためのそのような化合物の投与により、アポトーシス性細胞死を予防することも本発明に含まれる。さらに、ある化合物は神経再生を誘導する特異な能力を示すので、陽性な治療効果が中枢神経系疾患（この領域における細胞損傷を含む）にしばしばみられる。本発明のこの形態には、中枢神経系への外傷性損傷、脳浮腫、多発性硬化症、アルツハイマー病、中枢神経系における細菌性およびウィルス性感染、発作、および中枢神経系における出血の治療も含まれる。

炎症に関連する目および涙腺の疾患の治療のための、式（Ｉ）、（ＩＡ）の化合物または医薬的に許容されるその塩の投与も本発明に含まれる。そのような疾患の特定な例には、前部ブドウ膜炎および後部ブドウ膜炎、網膜血管炎、視神経炎、視神経脊髄炎、ヴェグナー肉芽腫症、シェーグレン症候群、上強膜炎、強膜炎、目に影響を与えるサルコイドーシス、および目に影響を与える多発性軟骨炎を含む。

本発明は、式（Ｉ）、（ＩＡ）の化合物の製造方法および、式（Ｉ）または（ＩＡ）の化合物の１以上と、医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とを混合して含む医薬製剤にも関する。また、本発明は、メラニン細胞刺激ホルモン受容体に関連した様々な医療および獣医の診療の使用にも関連する。

本発明の化合物の幾つかは、ヒトを含む哺乳類において、キサンチンオキシダーゼに効果を有する。

［製造方法］
［実施例］
以下の実施例は、本発明を説明することを意図しており、挙げられた化合物が特定の目的に特に興味深いものであったとしても、その範囲を限定するものではない。これらの化合物は、番号コードａ：ｂにより呼ばれており、ａはその化合物の製造を説明した実施例の番号を意味し、ｂは、その実施例に従い製造された化合物の順番を意味する。従って、実施例１：２は、方法１（実施例１参照）に従い同様に製造された第２の化合物を意味する。

［実施例１］
一般式（Ｉ）または（ＩＡ）の化合物［式中、ｎは０、１、２または３であり、飽和または不飽和である］は、以下の一般的な方法により製造することができる。

式（ＩＩ）の化合物［式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅は、式（ＩＡ）について先
に定義したとおりである］を、アミノグアニジン（ＩＩＩ）と反応させ、式（Ｉ）または（ＩＡ）の化合物を得る。この反応は、有機溶媒、たとえば、低級アルカノール（例えば、メタノール）中で、高温で、望ましくは還流下に行うことができる。

ＩＲ、ＮＭＲ、ＭＳおよび元素分析により、化合物の構造を確認した。融点（ｍ．ｐ．）が示されている場合、これらは未修正である。

［化合物１：１の製造］
２−メチルチオ−３−クロロベンズアルデヒド（１．０ｇ、５ｍｍｏｌ）、アミノグアニジン重炭酸塩（０．６８ｇ、５ｍｍｏｌ）および酢酸（１ｍｌ）の１５ｍｌメタノール中の溶液を１０分間還流加熱した。反応混合物を０℃まで冷却し、残渣をろ過して除去した。ろ液を真空下に蒸発させ、得られた生成物をエタノールから結晶化した。標題化合物１：１の収量は１．１ｇ（７０％）であった。

［化合物１：２の製造］
化合物１：２〜１：１２を、方法１と同様の方法を用いて、１：１についてと本質的に同様のアプローチを用いて製造した。化合物とそのデータは、以下のとおりである。
１：１Ｎ−（２−メチルチオ−３−クロロベンジリデンアミノ）グアニジン塩酸塩ｍ．ｐ．１７９〜１８１℃
１：２Ｎ−（２−クロロ−４−メトキシ−３−メチルチオベンジリデンアミノ）グアニジン
１：３Ｎ−（２−クロロ−（３−エトキシカルボニル）−ベンジリデンアミノ）グアニジントリフルオロ酢酸塩、ｍ．ｐ．１４６°
１：４Ｎ−（２−クロロ−３−メトキシ−４−メチルチオベンジリデンアミノ）グアニジン
１：５Ｎ−（２−クロロ−３，４−ジメチルチオベンジリデンアミノ）グアニジン
１：６Ｎ−（５−クロロ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジチイン−６−イルメチレンアミノ）−グアニジン
１：７Ｎ−（２−メチルチオ−３−クロロフェニルプロピリデンアミノ）グアニジン１：８Ｎ−（２−クロロ−４−メトキシ−３−メチルチオフェニルプロピリデンアミノ）グアニジン
１：９Ｎ−（２−クロロ−（３−エトキシカルボニル）−フェニルプロピリデンアミノ）グアニジン
１：１０Ｎ−（２−クロロ−３−メトキシ−４−メチルチオフェニルプロピリデン（propyliidene）アミノ）グアニジン
１：１１Ｎ−（２−クロロ−３，４−ジメチルチオフェニルプロピリデンアミノ）グ
アニジン
１：１２Ｎ−［３−（５−クロロ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジチイン−６−イル）−アリリデンアミノ］−グアニジン
［実施例２］
この実施例は、式（Ｉ）の化合物およびそれらの治療的に活性な酸付加塩の、精神障害の治療に対する効力を示すものである。

［試験１．ＭＣ１受容体に対する親和性］
結合アッセイを、本質的にLunecら、 Melanoma Res 1992; 2; 5-12に記載されているように、Ｉ¹²⁵−ＮＤＰ−αＭＳＨをリガンドとして用いて行った。

［試験２．ＭＣ３受容体、ＭＣ４受容体およびＭＣ５受容体に対する親和性］
結合アッセイを、本質的にSzardeningsら, J Biol Chem 1997; 272; 27943-27948およ
びSchioethら, FEBS Lett 1997; 410; 223-228に記載されているように、Ｉ¹²⁵−ＮＤＰ
−αＭＳＨをリガンドとして用いて行った。

［試験３．ｃＡＭＰ］
ｃＡＭＰの刺激を、本質的にSchioethら、Br J Pharmacol 1998; 124; 75-82に記載さ
れているように行った。

［実施例３］
［滑膜線維芽細胞］
研究デザイン：抗原誘導関節炎を有するラットから、過増殖性滑膜、パンヌスを、疾患発症から４日に炎症膝から取り出した。そのパンヌス組織を、ＰＥＳＴ（１００ＩＵペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン）およびフンギソン（Ｆｕｎｇｉｚｏｎｅ）（２．５μｇ／ｍｌ）（すべてスェーデンのインビトロジェン（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）より）を含むＰＢＳ中で小片に切断し、その後、コラゲナーゼ（４００Ｕ／ｍｌ、米国、ワージントン）中で３時間３７℃、５％のＣＯ₂でインキュベーションした。細胞を
遠心分離し（８分、室温、１１００ｒｐｍ．）、１０％ＦＣＳ（スェーデンのインビトロジェン）、ＰＥＳＴおよびフンギゾンを追加したＲＰＭＩ１６４０中に懸濁させ、２５
ｃｍ²フラスコ中に３７℃、５％ＣＯ₂で接種した。次の日、細胞を培地でゆすいで、さらにインンキュベートした。融合（ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）したとき、細胞を１分間トリプシン化し（ＥＤＴＡを含む０．２５％トリプシン、スェーデンのインビトロジェン）、計数
し、９６ウェル・プレートに１００００細胞／ウェル／２００μｌで接種した。

２４時間後、培地を取替え、細胞をヒト組み換えＩＬ−１ａ、５０ｎｇ／ｍｌ（スェーデンのロッシュ（Ｒｏｃｈｅ））で誘導した。ペプチドＡＭ０００１（Schaefer, デンマーク)を濃度間隔５０〜４００μMで三重にテストした。７２時間３７℃、５％ＣＯ₂でイ
ンキュベーション後、培地を集めてＮＯを測定し（グリース（Ｇｒｉｅｓｓ）反応）、ＩＬ−６を製造会社（米国のＢＤバイオサイエンス（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ））の指示書に従いＥＬＩＳＡで分析した。

［実施例４］
［軟骨外植］
ＩＬ−１誘導軟骨におけるＮＯ放出に対する化合物の効果を以下に説明するようにして測定した。
皮膚を剥したウシ鼻（雌牛、１８〜２４ヶ月齢から）を、ヘービー（Ｈｏｅｒｂｙ）屠殺場（スェーデン、チーム・ウグラップ（ＴｅａｍＵｇｇｌａｒｐ））で集めた。軟骨をＰＥＳＴ（１００ＩＵペニシリン、１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン）および２．５μｇ／ｍｌフンギゾン（全てスェーデンのインビトロジェン）を含むＰＢＳ中に２時間室温で入れた後、鼻内部隔壁を切断して除去し、粘膜および軟骨膜を除去した。２ｍｍ片を軟骨の外に穿孔した。１０μｇ／ｍｌＢＳＡ、２５ｍｇ／ｍｌアスコルビン酸塩（両方ともスェーデンのシグマから）、ＰＥＳＴ（１００ＩＵペニシリン、１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン）および２．５μｇ／ｍｌフンギゾンを追加した１ｍｌの細胞培養培地、ＨＡＭｓＦ１２（スェーデンのインビトロジェン）を含む２４ウェル細胞培養プレート（スェーデンのファルコン（Ｆａｌｃｏｎ））中に各片を入れた。２４時間後、培地を取り替え、軟骨片をヒト組み換えＩＬ−１ａ、１０ｎｇ／ｍｌ（スェーデンのロッシュ）で誘導した。テスト化合物をの適切な濃度で三重にテストした。軟骨組織を別途６日間インキュベートし、培地を３日ごとに交換した。毎回、培地をＮＯ測定のため集めた（グリース反応）。

［実施例５］
［抗炎症効果］
［コントロール］
メスＢＡＬＢ／ｃマウス（重量２０〜２２ｇ）を０．５％の２，４−ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）３０μｌで剃毛した腹を処理することにより、感作させた。４日後、これらのマウスの足に０．３％のＤＮＦＢ１０μｌを感作させた。感作させていないマウス足をコントロールとして用いた。最後の感作から２４時間後、足重量の相違を炎症（足浮腫）の指標として測定した。

［プレドニゾロン・コントロール］
マウスはコントロールとして処理したが、ただし、感作前２時間（０日）にプレドニゾロン（２０ｍｇ／ｋｇ）を腹膜内へ注射（ｉ．ｐ．）をさらに行い、同じ量を４連続日間の間、感作後、繰返し投与した。足浮腫の阻害を前記のようにして測定した。

［新規化合物の研究］
マウスをコントロールとして処理したが、ただし、感作前２時間（０日）に様々な量（０．０５、０．１５または０．２５、０．３７５、０．５、０．７５および最後のほうの研究では、１．５、３および時々６ｍｇ／ｋｇ）の各化合物を腹膜内へ注射ｉ．ｐ．をさらに行い、同じ量を４連続日間の間、感作後、繰返し投与した。足浮腫阻害は、前記のとおり。少なくとも１０マウスを含むそれぞれの群を全ての実験に用いた。

血液分析をＱＢＣ（登録商標）自動判読（商標）Ｐｌｕｓ＆ＱＢＣ（登録商標）アキュ
チューブ・システム（ＱＢＣ（登録商標）Ａｕｔｏｒｅａｄ（商標）Ｐｌｕｓ＆ＱＢＣ（登録商標）ＡｃｃｕｔｕｂｅＳｙｓｔｅｍ（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ））を用いて行った。全てのケースにおいて、血液サンプルは最後の感作後２４時間で採取した。

［実施例６］
［抗原誘導関節炎（ＡＩＡ）］
ラットにおける抗原誘導関節炎（ＡＩＡ）は、良好に再現可能な単独関節炎モデルである。感作動物の膝関節中への抗原メチル化ウシ血清アルブミン（ｍＢＳＡ）の関節内注射により、炎症応答が誘発される。滑膜を侵害するパンヌス組織の形成は、関節の軟骨全体に広がり、骨内に成長し、組織びらんおよびリモデリングを生じる。

ＡＩＡは、ヒト関節炎の標準的な臨床治療に用いられる化合物に対して良く応答する。従って、このモデルは、関節炎症および軟骨／骨分解に関する新規化合物の効果を測定するのに適切である。テスト化合物を、局所的または全身的に投与してもよい。関節炎の特徴が生じ、膝関節膨張を測定することにより、関数的スコアリングおよび組織学的分析により、評価することができる。単独関節炎モデルであるため、炎症血清マーカーのレベルを検出するのが困難かもしれない。ＡＩＡモデルはまた、滑液マトリックス組成物における更なる洞察と、薬物スクリーニング目的のため、イン・ビトロ培養のための滑膜細胞の産生のための源としても機能する。

［実施例７］
［コラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）］
マウスのコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）は、ヒト疾患と幾つかの特徴が共通する、リュウマチ様関節炎に対する最も一般的な実験モデルである。完全フロイントアジュバントにおいて乳化された自己由来または異種のコラーゲン・タイプＩＩ（ＣＩＩ）は、滑液膜組織の浮腫、滑膜細胞増殖、炎症性細胞浸潤ならびに軟骨および骨のびらんを伴う多発性関節炎を誘発する。テスト化合物は、全身に投与されるべきである。多発性関節炎の特徴は、関節炎の症候のスコア、組織学的分析および血清バイオマーカーを測定することにより評価できる。骨無機質含量と密度は、マウス・デンシトメトリー（ＰＩＸＩＭＵＳ）により分析してもよい。

医薬製剤の投与のために適した形態には、例えば、錠剤、カプセル剤、液剤、シロップ剤または乳剤が含まれる。各場合において、医薬的に有効な化合物の含有量は、組成物全体の０．１〜５重量％の範囲であるのが望ましい。

製剤は、錠剤の形態で、粉末として、カプセル剤（例えば、硬ゼラチンカプセル）中の粉末として、液剤または懸濁剤として、経口投与されてもよい。

式（Ｉ）または（ＩＡ）の化合物は経口的に投与されるのが好ましい。適切な錠剤は、例えば、前記活性物質を公知の担体、希釈剤または賦形剤（例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたは乳糖）、崩壊剤（例えば、コーンスターチまたはアルギン酸）、結合剤（例えば、デンプンまたはゼラチン）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはタルク）および/または遅延放出剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、酢酸
フタル酸セルロースまたはポリ酢酸ビニル）と混合することにより得ることができる。錠剤は、幾つかの層を含んでいてもよい。

被覆錠剤は、錠剤と同様にして製造した核を、錠剤被覆について通常用いられる物質（例えば、コリドン（collidone）もしくはセラック、アラビアゴム、タルク、二酸化チタ
ンまたは糖）でコーティングすることにより適切に製造することができる。錠剤被覆は、
遅延放出を達成するため、おそらく錠剤について上記した賦形剤を用いることにより、多数の層からなっていてもよい。

本発明による活性物質またはその組み合わせを含むシロップ剤は、甘味剤（例えば、サッカリン、シクラミン酸塩、グリセロールまたは糖）及び香増強剤（例えば、香り、例えば、バニラまたはオレンジ抽出物）をさらに含んでもよい。これらは、懸濁補助剤もしくは増粘剤（例えば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム）、湿潤剤（例えば、脂肪アルコールとエチレンオキシドの縮合生成物）または保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸塩）も含んでもよい。

１以上の活性物質または、活性物質の組み合わせを含むカプセル剤は、例えば、活性物質を不活性担体（例えば、乳糖またはソルビトール）と混合し、それらをゼラチンカプセル中に詰めることにより製造することができる。座薬は、例えば、この目的のために供給されている担体（例えば、中性脂肪もしくはポリエチレングリコールまたはそれらの誘導体）と混合することにより製造することができる。

用いられうる賦形剤には、例えば、水、医薬的に許容される有機溶媒、例えば、パラフィン類（例えば、石油分画）、植物油（例えば、落花生油またはゴマ油）、モノ−またはポリ−官能性アルコール（例えば、エタノールまたはグリセロール）、担体、例えば、天然鉱物粉（例えば、カオリン、クレー、タルク、チョーク）、合成鉱物粉（例えば、高度分散ケイ酸およびケイ酸塩）、糖（例えば、ショ糖、乳糖およびグルコース）、乳化剤（例えば、リグニン、亜硫酸パルプ廃液、メチルセルロース、デンプンおよびポリビニルピロリドン）および潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸およびラウリル硫酸ナトリウム）を含んでもよい。

経口投与について、錠剤は、上記担体に加えて、種々の添加剤（例えば、デンプン、好ましくはじゃがいもデンプン、ゼラチン）等と共に添加剤（例えば、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウムおよびジリン酸カルシウム）を含んでもよい。さらに、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルク）を錠剤化工程と同時に用いてもよい。水性懸濁剤の場合、活性物質は、上記賦形剤に加えて種々の香増強剤または着色剤と組み合わせてもよい。

［実施例８］
以下の製剤は、本発明の薬理学的に活性な化合物全てについての代表例である。

［カプセルを含む製剤の例］

活性成分の量がより多い場合、用いる乳糖の量を減らしてもよい。

［適当な錠剤製剤の例］

注射による非経口投与のための液剤は、活性物質の水溶性の医薬的に許容される酸付加塩を、好ましくは０．１重量％から約５重量％の濃度で水溶液に調製してもよい。これらの液剤は、安定剤および／または緩衝剤も含んでもよい。

Claims

一般式（Ｉ）の化合物もしくはその異性体の形態または医薬的に許容されるその塩。

式中、ｎは、０、１、２または３、飽和または不飽和であり；
Ｒ₁〜Ｒ₅の少なくとも１つは、ハロゲンを表わし；
Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅の少なくとも１つは、−Ｓ−Ｒであるか、または、Ｒ₁〜Ｒ₅の２以上は、連結基−Ｓ−（ＣＨ₂）_m−Ｓ−（式中、ｍは１、２または３である）であり、
Ｒは、１〜５の炭素原子を有するアルキル、３〜６の炭素原子を有するシクロアルキル、および６〜１０の炭素原子を有するアリールから選択され、そのような基は任意に置換され；
Ｒ₁が−Ｓ−Ｒである場合、Ｒ₂、Ｒ₃またはＲ₅の少なくとも１つがハロゲンから選択され；
他のＲ ₁ 〜Ｒ ₅ 基は、同一または異なっており、水素、ハロゲン、１〜５の炭素原子を有するアルキル、シアノ、ニトロ、トリフルオロアルキルもしくはアミド、アルキルアミノ、ベンゾイルオキシ、ニトロキシ、フェニルもしくはスルホから選択される。
ｎが、０または１である請求項１に記載の化合物。
前記連結基が、メチレンジチオ基である請求項１または２に記載の化合物。
前記連結基が、２，３−、３，４−または４，５−メチレンジチオ基である請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
前記ハロゲンが、フルオロまたはクロロである請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
以下の式の１つを有する化合物または医薬的に許容されるその塩。
１：１Ｎ−（２−メチルチオ−３−クロロベンジリデンアミノ）グアニジン
１：２Ｎ−（２−クロロ−４−メトキシ−３−メチルチオベンジリデンアミノ）グアニジン
１：４Ｎ−（２−クロロ−３−メトキシ−４−メチルチオベンジリデンアミノ）グアニジン
１：５Ｎ−（２−クロロ−３，４−ジメチルチオベンジリデンアミノ）グアニジン
１：６Ｎ−（５−クロロ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジチイン−６−イルメチレンアミノ）−グアニジン
１：７Ｎ−（２−メチルチオ−３−クロロフェニルプロピリデンアミノ）グアニジン
１：８Ｎ−（２−クロロ−４−メトキシ−３−メチルチオフェニルプロピリデンアミノ）グアニジン
１：１０Ｎ−（２−クロロ−３−メトキシ−４−メチルチオフェニルプロピリデンアミノ）グアニジン
１：１１Ｎ−（２−クロロ−３，４−ジメチルチオフェニルプロピリデンアミノ）グアニジン
１：１２Ｎ−［３−（５−クロロ−２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジチイン−６−イル）−アリリデンアミノ］−グアニジン
１以上の医薬的に許容される補助剤、担体または賦形剤と共に、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物を含む医薬組成物。
医薬品として用いられるための請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
式（ＩＡ）の化合物、または医薬的に許容されるその塩を含む炎症の治療用の医薬組成物。

式中、
ｎが、０、１、２または３であり、飽和または不飽和であり；
Ｒ’₁、Ｒ’₂、Ｒ’₃、Ｒ’₄およびＲ’₅の少なくとも１つが、−Ｓ−Ｒ’であるか、または、Ｒ’₁〜Ｒ’₅の２以上が、連結基−Ｓ−（ＣＨ₂）_m−Ｓ−（式中、ｍは１、２または３である）であり、
Ｒ’が、１〜５の炭素原子を有するアルキル、３〜６の炭素原子を有するシクロアルキルおよび６〜１０の炭素原子を有するアリールから選択され、そのような基は任意に置換され、
他のＲ’ ₁ 〜Ｒ’ ₅ 基は、同一または異なっており、水素、ハロゲン、１〜５の炭素原子を有するアルキル、シアノ、ニトロ、トリフルオロアルキルもしくはアミド、アルキルアミノ、ベンゾイルオキシ、ニトロキシ、フェニルもしくはスルホから選択される。
請求項１に記載の化合物（Ｉ）の製造方法であり、式（ＩＩＩ）の化合物と式（ＩＩ）の化合物を反応させる工程および、所望であれば、その後、塩形成工程を含む製造方法。

前記式中、ｎ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄およびＲ₅は、請求項１において定義したとおりである。
化合物（ＩＡ）の製造方法であり、式（ＩＩＩ）の化合物と式（ＩＩＡ）の化合物を反応させる工程および、所望であれば、その後、塩形成工程を含む製造方法。

前記式中、ｎ、Ｒ’₁、Ｒ’₂、Ｒ’₃、Ｒ’₄およびＲ’₅は、請求項９において定義したとおりである。
請求項９に記載の関節炎状態の治療用の医薬組成物。
前記関節炎状態が、関節炎である請求項１２に記載の医薬組成物。
中枢神経再生を誘発するための請求項９に記載の化合物（ＩＡ）を含む医薬組成物。
疼痛の治療用の請求項９に記載の医薬組成物。
炎症もしくは関節炎状態を治療するため、または中枢神経再生を誘発するための医薬品の製造における式（ＩＡ）の化合物の使用。

前記式中、ｎ、Ｒ’₁、Ｒ’₂、Ｒ’₃、Ｒ’₄およびＲ’₅は、請求項９において定義したとおりである。