JP5481614B2 - フェニルボロン酸基が導入されたブロックコポリマーおよびその使用 - Google Patents
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Description
本発明の別の局面によれば、複合体が提供される。当該複合体は、上記ブロックコポリマーと生体高分子との複合体である。
本発明のブロックコポリマーは、ポリアミノ酸鎖セグメントと親水性ポリマー鎖セグメントとを含む。当該ポリアミノ酸鎖セグメントは、側鎖にカチオン性基を有するアミノ酸残基(以下、「カチオン性アミノ酸残基」と称する場合がある)と、側鎖に生理的pH付近にpKaを有するようにフェニル環の少なくとも1つの水素が置換されたフェニルボロン酸基(以下、「置換PBA基」と称する場合がある)を有するアミノ酸残基(以下、「置換PBA基含有アミノ酸残基」と称する場合がある)とを含む。ここで、カチオン性アミノ酸残基と置換PBA基含有アミノ酸残基とは、異なるアミノ酸残基であってもよく、同一のアミノ酸残基であってもよい。具体的には、当該ポリアミノ酸鎖セグメントは、側鎖に置換PBA基を有さないカチオン性アミノ酸残基と側鎖にカチオン性基を有さない置換PBA基含有アミノ酸残基とを含んでもよいし、これらの一方または両方に代えて、あるいは、これらに加えて、側鎖にカチオン性基と置換PBA基との両方を有するアミノ酸残基を含んでもよい。
上記ポリアミノ酸鎖セグメントは、側鎖にカチオン性基を有するカチオン性アミノ酸残基と側鎖に置換PBA基を有する置換PBA基含有アミノ酸残基とを含む。
−NH−(CH2)p1−〔NH−(CH2)q1−〕r1NH2 (i);
−NH−(CH2)p2−N〔−(CH2)q2−NH2〕2 (ii);
−NH−(CH2)p3−N{〔−(CH2)q3−NH2〕〔−(CH2)q4−NH−〕r2H} (iii);および
−NH−(CH2)p4−N{−(CH2)q5−N〔−(CH2)q6−NH2〕2}2 (iv)
(式(i)〜(iv)において、p1〜p4、q1〜q6、およびr1〜r2は、それぞれ相互に独立して、1〜5の整数である。)
上記親水性ポリマー鎖セグメントは、任意の適切な親水性ポリマーによって構成され得る。該親水性ポリマーとしては、例えば、ポリ(エチレングリコール)、ポリサッカライド、ポリ(ビニルピロリドン)、ポリ(ビニルアルコール)、ポリ(アクリルアミド)、ポリ(アクリル酸)、ポリ(メタクリルアミド)、ポリ(メタクリル酸)、ポリ(メタクリル酸エステル)、ポリ(アクリル酸エステル)、ポリアミノ酸、ポリ(リンゴ酸)、またはこれらの誘導体が挙げられる。ポリサッカライドの具体例としては、デンプン、デキストラン、フルクタン、ガラクタン等が挙げられる。これらのなかでも、ポリ(エチレングリコール)は、末端に種々の官能基を有する末端反応性ポリエチレングリコールが市販されており、また、種々の分子量のものが市販されており、容易に入手できることから、好ましく用いられ得る。
本発明の特に好ましい実施形態におけるブロックコポリマーの具体例を式(1)〜(4)に示す。当該式(1)〜(4)のブロックコポリマーにおいては、置換PBA基は、カチオン性アミノ酸残基の側鎖に導入される。
R1の基は、水素原子あるいは未置換もしくは置換された炭素数1〜12の直鎖または分枝状のアルキル基であり、
R2の基は、水素原子、炭素数1〜12の未置換もしくは置換された直鎖または分枝状のアルキル基あるいは炭素数1〜24の未置換もしくは置換された直鎖または分枝状のアルキルカルボニル基であり、
R3の基は、ヒドロキシル基、炭素数1〜12の未置換もしくは置換された直鎖または分枝状のアルキルオキシ基、炭素数2〜12の未置換もしくは置換された直鎖または分枝状のアルケニルオキシ基、炭素数2〜12の未置換もしくは置換された直鎖または分枝状のアルキニルオキシ基あるいは炭素数1〜12の未置換もしくは置換された直鎖または分枝状のアルキル置換イミノ基であり、
R4a、R4b、R5aおよびR5bの基は、相互に独立して、メチレン基またはエチレン基であり、
R6aおよびR6bの基は、相互に独立して、上記(i)〜(iv)の基から選択される基であり、
R7aおよびR7bの基は、相互に独立して、−O−または−NH−であり、
R8aおよびR8bの基は、相互に独立して、炭素数6〜27の飽和もしくは不飽和の直鎖または分枝状の脂肪族炭化水素基、炭素数6〜27の芳香族炭化水素基あるいはステリル基であり、
Qの基は、−NH2、−NHC(=NH)NH2、または以下の式(II)で表される基であり、
L2は、−NH−、−O−、−O(CH2)p1−NH−、または−L2a−(CH2)q1−L2b−であり、ここで、p1およびq1は、相互に独立して、1〜5の整数であり、L2aはOCO、OCONH、NHCO、NHCOO、NHCONH、CONHまたはCOOであり、L2bはNHまたはOであり、
L4は、−OCO−(CH2)p2−CO−、−NHCO−(CH2)p3−CO−、または−L4a−(CH2)q2−CO−であり、ここで、p2、p3、およびq2は、相互に独立して、1〜5の整数であり、L4aは、OCONH、−CH2NHCO−、NHCOO、NHCONH、CONHまたはCOOであり、
kは、30〜20,000の整数であり、
sは、1〜6の整数であり、
mは、1〜300の整数であり、
nは、0〜mの整数であり、
xは、0〜80の整数であり
yは、0〜xの整数であり
zは、2〜300の整数であり、
ただし、z個のQの基に含有される1級アミノ基および2級アミノ基の総数または(m−n)個のR6aの基とn個のR6bの基とに含有される1級アミノ基および2級アミノ基の総数をwとしたとき、1以上w未満の当該アミノ基の水素原子が置換PBA基(例えば、上記式(I)で示されるFPBA基)を有するアシル基で置換されている。)
本発明のブロックコポリマーは、任意の適切な合成方法によって作製され得る。本発明の好ましい実施形態におけるブロックコポリマーの合成方法の一例は次の通りである。すなわち、R1を付与できる開始剤を用いてアニオンリビング重合を行うことによりポリエチレングリコール鎖を形成すること、当該ポリエチレングリコール鎖の成長末端側にアミノ基を導入すること;当該アミノ末端からNCA−Lys(TFA)等の保護されたアミノ酸誘導体を重合させてポリアミノ酸鎖セグメントを形成すること;当該ポリアミノ酸の側鎖を脱保護してアミノ基を露出させること;および、当該露出したアミノ基とフッ素化カルボキシフェニルボロン酸のカルボキシル基とを反応させて、アミド結合により所望の数のFPBA基を当該側鎖に導入すること;によって作製され得る。
本発明の複合体は、上記A項に記載のブロックコポリマーと生体高分子との複合体である。当該複合体は、複数の当該ブロックコポリマーと生体高分子とのPICであり得る。また、当該PICは、複数の当該ブロックコポリマーによって生体高分子が内包されたポリマーミセルの形態であり得る。従来型のキャリアでは、生理条件と同程度のイオン濃度の媒体中で複合体が解離してしまうという問題があるが、本発明の複合体は安定性に優れるので、当該媒体中、さらにはタンパク質を含む媒体中であっても、複合体の形態を維持し得る。
上記生体高分子としては、例えば、タンパク質、脂質、核酸等が挙げられる。本明細書において、タンパク質はペプチドも含む。生体高分子のなかでも、上記ブロックコポリマーは核酸と好適に複合体を形成し得る。また、複合体の形成に適した生体高分子としては、上記ブロックコポリマーのpKa以下のpHの範囲において負の電荷を有する、アニオン荷電性の化合物が例示できる。
以下の実験例で用いたポリリシン系のブロックコポリマーの合成スキームAを以下に示す。具体的には、(1−i)〜(1−iii)に記載の通りにしてブロックコポリマーを作製した。
(1−ii) MeO−PEG−PLys(TFA)を1NのNaOHaq./メタノール=1/10中、35℃で12時間撹拌し、透析(外液は水)および凍結乾燥を経て、MeO−PEG−PLysを得る。
(1−iii) MeO−PEG−PLysとPLysのアミノ基に対して5当量のD−Mannitolを50mMのNaHCO3水溶液中に溶解させる。得られた溶液にメタノールに溶解した3−フルオロ−4−カルボキシフェニルボロン酸を添加し、次いで、縮合剤DMT−MMを加える。得られた溶液を室温にて終夜撹拌し、透析(外液は水)および凍結乾燥を経て、MeO−PEG−[PLys(FPBA)/PLys]を得る。
以下の実験例で用いたPAsp(DET)系のブロックコポリマーの合成スキームBを以下に示す。具体的には、(2−i)〜(2−iii)に記載の通りにしてブロックコポリマーを作製した。
(2−ii) ベンゼン凍結乾燥したMeO−PEG−PBLAをN−メチル−2−ピロリドン(NMP)中に溶解する。得られた溶液をジエチレントリアミンのNMP溶液中に滴下し、5〜10℃で1時間撹拌する。氷冷下で塩酸にて中和し、透析(外液は0.01Nの塩酸)および凍結乾燥を経て、MeO−PEG−PAsp(DET)を得る。
(2−iii) MeO−PEG−PAsp(DET)およびPAsp(DET)の一級アミンに対して5当量のD−Mannitolを氷冷下(0℃)において50mMのNaHCO3水溶液中に溶解する。得られた溶液に、メタノールに溶解した3−フルオロ−4−カルボキシフェニルボロン酸を添加し、次いで、縮合剤DMT−MMを加える。得られた溶液を6時間撹拌し、5℃で透析(外液は、任意にソルビトールを含む、0.01Nの塩酸)し、凍結乾燥を経て、MeO−PEG−P[Asp(DET−FPBA/DET)]を得る。
以下の実験例で使用したsiRNAの配列は次の通りである。Cy3等の標識は、全てセンス鎖の5’末端に導入した。
(1)hVEGF-siRNA(ヒト血管内皮成長因子に対するsiRNA):
センス鎖:5’−GAUCUCAUCAGGGUACUCCdTdT−3’(配列番号1)
アンチセンス鎖:5’−GGAGUACCCUGAUGAGAUCdTdT−3’(配列番号2)
(2)scramble-siRNA(非治療用配列siRNA):
センス鎖:5’−UUCUCCGAACGUGUCACGUUU−3’(配列番号3)
アンチセンス鎖:5’−ACGUGACACGUUCGGAGAAUU−3’(配列番号4)
(3)GL3−siRNA(ホタルルシフェラーゼに対するsiRNA)
センス鎖:5’−CUUACGCUGACUACUUCGAUU−3’(配列番号5)
アンチセンス鎖:5’−UCGAAGUACUCAGCGUAAGUU−3’(配列番号6)
上記(1−i)〜(1−iii)および(2−i)〜(2−iii)の記載の通りにして、アミノ酸重合度およびFPBA基含有量が異なる種々のブロックコポリマーを作製した。なお、Methoxy−PEG−NH2としては、PEGの分子量(Mw)が12,000であるものを用いた。当該ブロックコポリマーとCy3で蛍光標識したsiRNAとをN/P比が8となるように混合した。得られた混合液を冷蔵庫内で1〜2時間静置後、血清溶液(150mM NaCl, 10mM Hepes, 10% FBS)でsiRNA濃度が50nMとなるように希釈した。得られた希釈液を1時間程度室温で静置し、共焦点レーザスキャン顕微鏡(Carl Zeiss社製、製品名「LSM510」)にてsiRNAの拡散時間を測定した(10sec×10times)。結果を表1および図1に示す。なお、ブロックコポリマーと混合しないこと以外は同様に測定した場合における拡散時間(siRNA単独の拡散時間)は、157.5μsecである。なお、siRNAとしては、GL3‐siRNAを用いた。
A549−Luc細胞を96ウェルの培養ディッシュに2,500cells/wellとなるように播種し、10%牛胎児血清含有DMEM培地を用いて、インキュベーターで24時間培養した。培地を新しい10%牛胎児血清含有DMEM培地に交換するとともに、生理食塩水に溶解した各ブロックコポリマーを、種々のアミン濃度となるように添加した。次いで、48時間培養した後、製品名「Cell Counting Kit8」(同仁化学研究所社製)によって生細胞数を測定し、細胞生存率を算出した(N=4)。結果を図2に示す。
A549−Luc細胞を96ウェルの培養ディッシュに2,500cells/wellとなるように播種し、10%牛胎児血清含有DMEM培地を用いて、インキュベーターで24時間培養した。培地を新しい10%牛胎児血清含有DMEM培地に交換するとともに、siRNAとブロックコポリマーとの複合体を、種々のsiRNA濃度となるように添加した。次いで、48時間培養した後、製品名「Cell Counting Kit8」(同仁化学研究所社製)によって生細胞数を測定し、細胞生存率を算出した(N=4)。結果を図3に示す。なお、上記複合体は、各ブロックコポリマーとGL3-siRNAとを、N/P比が4でsiRNA濃度が80nMとなるように10mM HEPES緩衝液(pH7.3)に添加および混合し、1〜2時間程度室温で静置後、種々の濃度に希釈して用いた。
ブロックコポリマー(PEG−PLL 12−23/43)とCy3で標識したGL3-siRNAとを種々のpHの緩衝液(リン酸緩衝液またはリン酸−クエン酸緩衝液)に溶解し、N/P比が4でsiRNA濃度が50nMとなるように混合した。得られた混合液を1時間程度室温で静置し、共焦点レーザスキャン顕微鏡(Carl Zeiss社製、製品名「LSM510」)にてsiRNAの拡散時間を測定した(10sec×10times)。結果を図4に示す。
ブロックコポリマー(PEG−PLL 12−23/43)とCy3で標識したGL3‐siRNAとを10mM HEPES緩衝液(pH7.3)にそれぞれ溶解し、N/P比が4となるように混合した。得られた混合液を1〜2時間程度冷蔵庫内で静置した後、種々の濃度のグルコース、dTMPまたはUMPを含む10mM HEPES緩衝液(pH7.3)でsiRNA濃度が50nMとなるように希釈した。得られた希釈液を室温で1時間程度静置した。次いで、共焦点レーザスキャン顕微鏡(Carl Zeiss社製、製品名「LSM510」)にてsiRNAの拡散時間を測定した(10sec×10times)。結果を図5に示す。
48wellディッシュに10,000cells/wellとなるようにA549−Luc細胞をまき、10%牛胎児血清含有DMEM培地を用いて、インキュベーターで24時間培養した。培地を新しい10%牛胎児血清含有DMEM培地に交換し、siRNAが100nM/wellとなるよう、Cy3で標識したsiRNAまたは該siRNAとブロックコポリマーとの複合体を培地に添加した。インキュベーターで37℃で5時間または9時間培養した後、細胞を1mLのPBS緩衝液で3回洗浄し、トリプシン−EDTA溶液で細胞をディッシュからはがした。はがした細胞を、Cy3フィルターをセットしたフローサイトメーター(BD社製、LSRII)を用いてヒストグラム解析を行い、細胞内へのsiRNAの取り込み量を評価した(N=4)。なお、siRNAとしては、GL3−siRNAを用いた。細胞内へのsiRNA取り込み量を示すグラフを図6に示す。なお、上記複合体は、各ブロックコポリマーとsiRNAとを、N/P比が8でsiRNA濃度が4μMとなるように10mM HEPES緩衝液(pH7.3)に添加および混合し、1〜2時間程度室温で静置することによって調製した。
ブロックコポリマー(PEG−PLL 12−23/43)とCy5−GL3-siRNAとを、N/P比が8でsiRNA濃度が7.5μMとなるように10mM HEPES緩衝液(pH7.3)に添加および混合し、1〜2時間程度室温で静置することによって複合体溶液を調製した。該複合体溶液またはsiRNA溶液(10mM HEPES緩衝液)をマウス(メスのBalb/C nude、6週齢、N=4)にsiRNAの投与量が20μgとなるように尾静脈投与し、siRNAの血中残存量を経時的に調べた。結果を図7に示す。
(1)FPBA基含有ブロックコポリマーの調製
スキームBと類似のスキームによって、Ace−PEG−PAsp(DET) 12−62/75のブロックコポリマーを得た。具体的には、PEG側末端にアセタール基を有するAce−PEG−PBLA(12−110)をDETでアミノリシスし、Ace−PEG−PAsp(DET)(12−90)を得た。次いで、NaCl溶液で透析して対イオンを酢酸からクロライドとした後に、縮合剤(DMT−MM)を用いて4−カルボキシ−3−フルオロフェニルボロン酸を縮合させて、Ace−PEG−PAsp(DET) 12−62/75のブロックコポリマーを得た。
次いで、アセタール基に対して5当量のcRGDペプチド(Cyclic(Arg−Gly−Asp−D−Phe−Cys)をpH7.2でDTTと1時間混合し、得られた混合液と上記ブロックコポリマーとを混合し、pHを2に調整した。1時間撹拌後、2Mの酢酸ナトリウムおよびNaOHを用いてpHを5とした。その後、ポリマー濃度が20mg/mLとなるように水を加えて一晩撹拌した。純水に対して透析し、未反応物及び不要物を除去後、凍結乾燥によってPEG鎖の末端にcRGDを導入されたブロックコポリマー cRGD−PEG−PAsp(DET) 12−62/75を得た。なお、反応、透析は4℃(冷蔵庫)にて行った。
ブロックコポリマーを10mg/mLとなるように10mM HEPES緩衝液に溶解した。12.18μLの該ポリマー溶液と、75μLのsiRNA(15μM 10mM HEPES緩衝液)と、7.81μLの10mM HEPES緩衝液とを混合し、一晩静置した。該混合液に投与数時間前に3M NaCl 10mM HEPES緩衝液を5μL添加し、NaCl濃度が150mMとなるように調整した(全量 100μL)。これにより、複合体(siRNA内包ポリマーミセル)を得た。調製した複合体におけるsiRNAとブロックコポリマーとの組み合わせおよび混合比を表2に示す。
6週齢のマウス(メスのBalb/C nude、N=4)を購入後、1週間飼育し、5.0×107cells/mLとしたHela−luc細胞を各マウスに100μLずつ皮下に注射した。その後さらに4日間飼育し、治療(すなわち、複合体の投与)を開始した。具体的には、上記(3)で調製した複合体を一日おきに6日目まで尾静脈より投与した(すなわち、投与開始日を0日目として、0、2、4、6日目の計4回投与)。1回の投与につき、15μg/100μLのsiRNAを投与した。対照群に対しては、1回の投与につき100μLのHEPES溶液を投与した。投与開始日における腫瘍体積に対する腫瘍体積の相対値と投与後の経過日数との関係を図8に示す。
Claims (8)
- ポリアミノ酸鎖セグメントと親水性ポリマー鎖セグメントとを含むブロックコポリマーと、核酸との複合体によって構成された医薬組成物であって、
該ポリアミノ酸鎖セグメントが、側鎖にカチオン性基を有するアミノ酸残基と、側鎖に8未満のpKaを有するようにフェニル環の少なくとも1つの水素が置換されたフェニルボロン酸基を有するアミノ酸残基とを含み、前記核酸が前記フェニルボロン酸基と可逆的な共有結合を形成した状態にある、医薬組成物。 - 前記置換されたフェニルボロン酸基のpKaが7.5未満である、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記置換されたフェニルボロン酸基が、下記式(I)で示されるフッ素化フェニルボロン酸基である、請求項1または2に記載の医薬組成物。
- 前記カチオン性基が、アミノ基である、請求項1から3のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記側鎖にカチオン性基を有するアミノ酸残基が、リシン残基、または、酸性アミノ酸のカルボキシル基(−C(=O)OH)の−OH部が下記式(i)〜(iv)のいずれかの基で置換されたアミノ酸残基である、請求項1から4のいずれか1項に記載の医薬組成物。
−NH−(CH2)p1−〔NH−(CH2)q1−〕r1NH2 (i);
−NH−(CH2)p2−N〔−(CH2)q2−NH2〕2 (ii);
−NH−(CH2)p3−N{〔−(CH2)q3−NH2〕〔−(CH2)q4−NH−〕r2H} (iii);および
−NH−(CH2)p4−N{−(CH2)q5−N〔−(CH2)q6−NH2〕2}2 (iv)
(式(i)〜(iv)において、p1〜p4、q1〜q6、およびr1〜r2は、それぞれ相互に独立して、1〜5の整数である。) - 前記ポリアミノ酸鎖セグメント中における前記置換されたフェニルボロン酸基を有さないカチオン性アミノ酸残基の数と前記置換されたフェニルボロン酸基の数とが、以下の関係を満足する、請求項1から5のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記ポリアミノ酸鎖セグメントが、側鎖に疎水性基を有するアミノ酸残基をさらに含む、請求項1から6のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 請求項1から5のいずれかに記載の医薬組成物を形成し得るブロックコポリマーであって、ポリアミノ酸鎖セグメントと親水性ポリマー鎖セグメントとを含み、該ポリアミノ酸鎖セグメントが、側鎖にカチオン性基を有するアミノ酸残基と、側鎖に8未満のpKaを有するようにフェニル環の少なくとも1つの水素が置換されたフェニルボロン酸基を有するアミノ酸残基とを含み、該ポリアミノ酸鎖セグメント中における、カチオン性基を有するが置換されたフェニルボロン酸基を有さないアミノ酸残基の数と該置換されたフェニルボロン酸基の数とが、以下の関係を満足する、ブロックコポリマー。
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Citations (2)
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JPH05301880A (ja) * | 1992-04-22 | 1993-11-16 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | フェニルボロン酸誘導体及び製造方法 |
JPH083172A (ja) * | 1994-06-15 | 1996-01-09 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | フェニルボロン酸誘導体および製造方法 |
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JP2002179683A (ja) * | 2000-12-13 | 2002-06-26 | Japan Science & Technology Corp | ポリアミノ酸誘導体から成る核酸関連物質反応試薬 |
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JPN6013048406; 中野渡史子、原田敦史、片岡一則: 'フェニルボロン酸を内核に結合させたPEG-p(Lys)ブロック共重合体ミセルの調整とその外部環境応答' 高分子学会予稿集 48巻第3号, 19990512, 572, 高分子学会 * |
JPN6013048408; 片岡一則: '細胞特異性材料と新しいドラッグデリバリーシステム' ポリファイル , 19930401, 27-31, 株式会社大成社 * |
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