JP5454873B2 - リパーゼ阻害活性を有する乳酸菌 - Google Patents
リパーゼ阻害活性を有する乳酸菌 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5454873B2 JP5454873B2 JP2009141699A JP2009141699A JP5454873B2 JP 5454873 B2 JP5454873 B2 JP 5454873B2 JP 2009141699 A JP2009141699 A JP 2009141699A JP 2009141699 A JP2009141699 A JP 2009141699A JP 5454873 B2 JP5454873 B2 JP 5454873B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lactic acid
- pancreatic lipase
- inhibitory activity
- acid bacteria
- food
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 126
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 title claims description 63
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 title claims description 63
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims description 60
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims description 44
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 title 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 title 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 title 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 title 1
- 102000019280 Pancreatic lipases Human genes 0.000 claims description 60
- 108050006759 Pancreatic lipases Proteins 0.000 claims description 60
- 229940116369 pancreatic lipase Drugs 0.000 claims description 60
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 25
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 claims description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 7
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 4
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 25
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 24
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 24
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 5
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 4
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 4
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 4
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 4
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 4
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 3
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 3
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 3
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000003579 anti-obesity Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 3
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 3
- AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N orlistat Chemical compound CCCCCCCCCCC[C@H](OC(=O)[C@H](CC(C)C)NC=O)C[C@@H]1OC(=O)[C@H]1CCCCCC AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N 0.000 description 3
- STTGYIUESPWXOW-UHFFFAOYSA-N 2,9-dimethyl-4,7-diphenyl-1,10-phenanthroline Chemical compound C=12C=CC3=C(C=4C=CC=CC=4)C=C(C)N=C3C2=NC(C)=CC=1C1=CC=CC=C1 STTGYIUESPWXOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 229960001243 orlistat Drugs 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000725101 Clea Species 0.000 description 1
- 238000012773 Laboratory assay Methods 0.000 description 1
- SIKWOTFNWURSAY-UHFFFAOYSA-N Lipstatin Natural products CCCCCCC1C(CC(CC=CCC=CCCCCC)C(=O)OC(CC(C)C)NC=O)OC1=O SIKWOTFNWURSAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N Triolein Natural products O([C@H](OCC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)C(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N 0.000 description 1
- PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N Trioleoylglycerol Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000883 anti-obesity agent Substances 0.000 description 1
- 229940125710 antiobesity agent Drugs 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000013367 dietary fats Nutrition 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 1
- OQMAKWGYQLJJIA-CUOOPAIESA-N lipstatin Chemical compound CCCCCC[C@H]1[C@H](C[C@H](C\C=C/C\C=C/CCCCC)OC(=O)[C@H](CC(C)C)NC=O)OC1=O OQMAKWGYQLJJIA-CUOOPAIESA-N 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000008268 mayonnaise Substances 0.000 description 1
- 235000010746 mayonnaise Nutrition 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N triolein Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N 0.000 description 1
- 229940117972 triolein Drugs 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Dairy Products (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は、膵リパーゼ阻害活性を有する乳酸菌に関する。更に本発明は、当該乳酸菌を含有する食品に関する。
肥満は動脈硬化や心筋梗塞の疾患を促進させる生活習慣病として知られている。肥満の主要な原因の一つとして食事由来の過剰な脂肪（主に中性脂肪）が消化・吸収され、体内に蓄積することが挙げられる。この消化・吸収においては生体内の消化酵素である膵リパーゼが関与している。具体的には、摂取された食物に含まれる脂肪は膵臓から分泌される膵リパーゼによって脂肪酸とグリセリンに分解され、分解された脂肪酸は小腸粘膜に吸収される。小腸粘膜に吸収された脂肪酸は再度、中性脂肪に合成された後、血中に放出され、体内に吸収される。そして、吸収された中性脂肪で余剰なものは脂肪組織に蓄えられることで肥満に繋がる。
そのため、膵リパーゼを阻害し、食事由来脂肪の消化・吸収を抑えることで肥満を抑制する方法が開発・検討されている。例えば、放線菌類が産生するリプスタチンやこれから発展したオルリスタットは膵リパーゼを阻害する抗肥満薬として知られている。
また、食品中の特定の成分が膵リパーゼを阻害して抗肥満に有効であることが示されている（非特許文献１〜３）。
また、食品中の特定の成分が膵リパーゼを阻害して抗肥満に有効であることが示されている（非特許文献１〜３）。
一方、本発明者らは、従来より、乳酸菌の有する機能に着目し種々の研究を行っているが、乳酸菌については膵リパーゼ阻害能を有することはいまだに報告されていない。そこで、膵リパーゼ阻害能を有する乳酸菌を検討すべく、本発明にかかる研究を開始した。
奥田拓道：食品に含まれる機能物質と肥満に関する研究．日本栄養・食糧学会誌，５４（１）：３５−４０，２０００．
奥田拓道：生活習慣病と食品の機能性．臨床栄養，９７（７）：８１２−８２３，２０００．
榮 昭博，関崎悦子：茶およびにがりが膵リパーゼ活性に及ぼす影響．桐生短期大学起要．１６：１３−１７．２００５．
本発明は、乳酸菌の有する膵リパーゼ阻害作用を有する乳酸菌を提供することを目的とした。また、これらの乳酸菌を用いた食品を提供することを目的とした。
本発明者らは、上記課題を解決すべく、糞便や各種発酵食品を分離源として、膵リパーゼ阻害作用を有する乳酸菌について検討を行った。その結果、一部の乳酸菌に強い膵リパーゼ阻害活性を有することを見出し、また、前記乳酸菌を実験動物に投与することにより、血中中性脂肪の上昇を効果的に抑制することを見出し、本発明を完成するに至ったのである。
すなわち、本発明は、
膵リパーゼ阻害活性を有する乳酸菌、である。
膵リパーゼ阻害活性を有する乳酸菌、である。
さらに本乳酸菌は、ラクトバチルス ガセリ（Lactobacillus gasseri）であることが好ましい。すなわち、本発明は、
前記乳酸菌がラクトバチルス ガセリ（Lactobacillus gasseri）である請求項１に記載の乳酸菌、も意図する。
前記乳酸菌がラクトバチルス ガセリ（Lactobacillus gasseri）である請求項１に記載の乳酸菌、も意図する。
次に、膵リパーゼ阻害活性におけるＩＣ５０（酵素の５０％阻害活性に必要な乳酸菌の濃度）が１２００μｇ／ｍＬ以下であれば、動物実験より有意に血中中性脂肪の上昇を抑制することを見出した。すなわち、本発明は、
膵リパーゼ阻害活性におけるＩＣ５０（酵素の５０％阻害活性に必要な乳酸菌の濃度）が１２００μｇ／ｍＬ以下である請求項１又は２に記載の乳酸菌、も意図する。
膵リパーゼ阻害活性におけるＩＣ５０（酵素の５０％阻害活性に必要な乳酸菌の濃度）が１２００μｇ／ｍＬ以下である請求項１又は２に記載の乳酸菌、も意図する。
次に、これらの乳酸菌を含有させた食品を用いればこれを喫食する際に、同時に生体内の膵リパーゼ活性を阻害し、脂肪酸への分解を抑制することができる。
すなわち、本発明は、
請求項１乃至３のいずれかに記載の乳酸菌を含有する食品、も意図する。
すなわち、本発明は、
請求項１乃至３のいずれかに記載の乳酸菌を含有する食品、も意図する。
次に、本食品は乳酸菌飲料であることが好ましい。
すなわち、本発明は、
前記食品が発酵乳又は乳酸菌飲料である請求項４に記載の食品、も意図する。
すなわち、本発明は、
前記食品が発酵乳又は乳酸菌飲料である請求項４に記載の食品、も意図する。
また、本食品は粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、又は錠剤等の健康食品であってもよい。
すなわち、本発明は、
前記食品が粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、又は錠剤等の健康食品である請求項４記載の食品、も意図する。
すなわち、本発明は、
前記食品が粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、又は錠剤等の健康食品である請求項４記載の食品、も意図する。
さらに、本発明の乳酸菌を用いて膵リパーゼ阻害剤を製造することも可能である。
すなわち、本発明は、
請求項１乃至３のいずれかに記載の乳酸菌を含有する膵リパーゼ阻害剤、も意図する。
すなわち、本発明は、
請求項１乃至３のいずれかに記載の乳酸菌を含有する膵リパーゼ阻害剤、も意図する。
本発明の乳酸菌を摂取することで生体の酵素膵リパーゼを阻害することできる。これによって脂肪の吸収量を減少させることができる。
以下、本発明を詳細に説明する。
乳酸菌
本発明の乳酸菌は、膵リパーゼ阻害活性を有する。特に、その属は、ラクトバチルス ガセリであることが好ましい。特にラクトバチルス ガセリに属する乳酸菌のうち、ラクトバチルス ガセリＮＬＢ３６７株及びＮＬＢ３６５株を選択することができた。尚、本発明にいうＮＬＢ及び ＮＬＢSの記号は日清食品ホールディングス株式会社で独自に各菌株に付与した番号である。
乳酸菌
本発明の乳酸菌は、膵リパーゼ阻害活性を有する。特に、その属は、ラクトバチルス ガセリであることが好ましい。特にラクトバチルス ガセリに属する乳酸菌のうち、ラクトバチルス ガセリＮＬＢ３６７株及びＮＬＢ３６５株を選択することができた。尚、本発明にいうＮＬＢ及び ＮＬＢSの記号は日清食品ホールディングス株式会社で独自に各菌株に付与した番号である。
尚、ラクトバチルス ガセリＮＬＢ３６７株及びＮＬＢ３６５株は、平成２１年５月２１日に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターにＮＬＢ３６７株がNITE AP-763として、また、ＮＬＢ３６５株がNITE AP-762として寄託されている。
また、これらのラクトバチルス ガセリＮＬＢ３６７株（NITE AP-763）及びＮＬＢ３６５株（NITE AP-762）の菌株的性質は以下の表１及び２に示す通りである。これらの菌学的性質は、Bergey’s manual of systematic bacteriology Vol.2(1986)に記載の方法に
また、これらのラクトバチルス ガセリＮＬＢ３６７株（NITE AP-763）及びＮＬＢ３６５株（NITE AP-762）の菌株的性質は以下の表１及び２に示す通りである。これらの菌学的性質は、Bergey’s manual of systematic bacteriology Vol.2(1986)に記載の方法に
２．膵リパーゼ阻害活性
本発明にいう膵リパーゼの阻害活性の測定は、アラビアガムを用いてトリオレインをエマルジョン化し、膵リパーゼと反応させ、生成されるオレイン酸量を銅試薬で定量する方法（Tujita T etal, Eur.J.Biochem.,133(1),215-221）を用いた。
本発明にいう膵リパーゼの阻害活性の測定は、アラビアガムを用いてトリオレインをエマルジョン化し、膵リパーゼと反応させ、生成されるオレイン酸量を銅試薬で定量する方法（Tujita T etal, Eur.J.Biochem.,133(1),215-221）を用いた。
具体的には以下の方法で測定する。各菌体をＭＲＳ液体培地で３２℃、１８時間培養した。次いで、培養後の菌体を凍結乾燥処理し、凍結乾燥菌体を得た。本凍結乾燥菌体に０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌを含む０．１ｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．０）を加えて１ｇ/ｍＬの一定濃度とした被験資料１００μＬに、基質液１００μＬ（８．９ｍｇ／ｍｌ トレオレイン／アラビアガム（終濃度０．５％））及びブタ膵臓リパーゼ（２００Ｕ／ｍＬ）５０μＬを添加・混合した後、３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、クロロホルム：ｎ−ヘプタン（１：１）／２％（ｖ／ｖ）メタノールを３ｍＬ添加・混合し、遠心分離した後、水層を除去した。これに銅試薬（０．１２１ｇ／mＬ Ｃｕ（ＮＯ３）２、１００ｍｏｌ トリエタノールアミン、６０ｍｍｏｌ ＮａＯＨ、０．３３ｇ／ｍＬ ＮａＣｌ）を１ｍＬ添加・混合し、遠心分離した後、上層である有機層０．５ｍＬに対して発色試薬０．５ｍＬ（０．１％バソクプロイン、０．０５％ ＢＨＡ／クロロホルム）を添加し、吸光度(４８０ｎｍ)を測定した。オレイン酸で作製した検量線から、遊離した脂肪酸濃度を求めた。本方法において、膵リパーゼ阻害活性は以下の式より求めた。
膵リパーゼ阻害活性（％）＝ （１−（（Ｔ−Ｂ）／（Ｃ−Ｂ））×１００
Ｔ：膵リパーゼ添加・被験試料添加区の遊離脂肪酸濃度
Ｃ：膵リパーゼ添加・被験試料無添加区の遊離脂肪酸濃度
Ｂ：膵リパーゼ無添加・被験試料無添加区の遊離脂肪酸濃度
Ｔ：膵リパーゼ添加・被験試料添加区の遊離脂肪酸濃度
Ｃ：膵リパーゼ添加・被験試料無添加区の遊離脂肪酸濃度
Ｂ：膵リパーゼ無添加・被験試料無添加区の遊離脂肪酸濃度
本発明の乳酸菌は、上記膵リパーゼ阻害活性が３０％以上であることが好ましい。また、４０％以上であればさらに好ましい。
次に、これらの測定方法を用いたＩＣ５０の測定は以下のように行った。上述の測定方法においてそれぞれの菌株に対して、３００、１，０００、３，０００、１０，０００ｍｇ／mＬの濃度に調製した乳酸菌液を用いて各濃度における膵リパーゼ阻害活性を求め、最小二乗法により上述の試験系における膵リパーゼの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を求めた。
尚、上記の測定条件でその求めたＩＣ５０が１２００μｇ/mＬ以下であることが好ましい。また、１１００μｇ/mＬ以下であればさらに好ましい。また、８００μｇ/mＬ以下であればさらに好ましい。
３．食品
本発明の乳酸菌は食品に含有せしめて使用することができる。本発明にいう食品とは飲料も含むものとするが、例えば、発酵乳及び乳酸菌飲料が考えられる。必要な菌数については特に限定されないが、発酵乳であれば乳中でよく増殖する乳酸菌では１０８〜９ｃｆｕ／ｍＬまで増殖するものもあり、乳中で本程度まで増殖するものであれば、１００ｍＬ程度を食後に摂取すればよい。
本発明の乳酸菌は食品に含有せしめて使用することができる。本発明にいう食品とは飲料も含むものとするが、例えば、発酵乳及び乳酸菌飲料が考えられる。必要な菌数については特に限定されないが、発酵乳であれば乳中でよく増殖する乳酸菌では１０８〜９ｃｆｕ／ｍＬまで増殖するものもあり、乳中で本程度まで増殖するものであれば、１００ｍＬ程度を食後に摂取すればよい。
また、発酵乳及び乳酸菌飲料以外にも、バター等の乳製品；マヨネーズ等の卵加工品；バターケーキ等の菓子パン類等にも利用することができる。また、上記の他、本発明の食品は、前記乳酸菌と共に、必要に応じて適当な担体及び添加剤を添加して製剤化された形態（例えば、粉末、顆粒、カプセル、錠剤等）であってもよい。
通常、脂肪含量が高い食品については、その食品の摂取によって血中中性脂肪含量が上昇する傾向がみられるが、前記乳酸菌を含むことによって、血中中性脂肪の上昇を抑制することができる。
尚、本発明の食品は、一般の食品以外に、特定保健用食品、栄養補助食品等としても有用である。
尚、本発明の食品は、一般の食品以外に、特定保健用食品、栄養補助食品等としても有用である。
４．膵リパーゼ阻害剤
前記乳酸菌は、血中中性脂肪低減のために膵リパーゼ阻害剤の有効成分として製剤化されて使用することもできる。当該膵リパーゼ阻害剤は、血中中性脂肪低減に繋がり、抗肥満のための治療剤としても有用である。本発明の膵リパーゼ阻害剤は、前記乳酸菌とともに必要に応じて製剤製造上許容される担体や添加剤を適宜配合して調製される。添加される担体や添加剤の種類及び配合割合については、製剤の形態や投与形態に応じて適宜選択される。
前記乳酸菌は、血中中性脂肪低減のために膵リパーゼ阻害剤の有効成分として製剤化されて使用することもできる。当該膵リパーゼ阻害剤は、血中中性脂肪低減に繋がり、抗肥満のための治療剤としても有用である。本発明の膵リパーゼ阻害剤は、前記乳酸菌とともに必要に応じて製剤製造上許容される担体や添加剤を適宜配合して調製される。添加される担体や添加剤の種類及び配合割合については、製剤の形態や投与形態に応じて適宜選択される。
本発明の乳酸菌は膵リパーゼを阻害する活性を有しており、これによって小腸内での脂質の消化・吸収を抑制することができ、過剰な脂質の摂取を抑制し、血中中性脂肪を抑制して抗肥満に繋げることができる。
以下、本発明の実施例を示すが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
＜実施例１＞乳酸菌株の膵リパーゼ阻害活性の測定
日清食品ホールディングス株式会社が保有する、発酵食品、ヒト糞便等の様々な分離源から分離した乳酸菌及び市販の乳酸菌を用いて膵リパーゼ阻害活性を測定し、スクリーニングを行った。測定方法は以下に示す。被験菌株をＭＲＳ液体培地で３２℃、１８時間培養した。
＜実施例１＞乳酸菌株の膵リパーゼ阻害活性の測定
日清食品ホールディングス株式会社が保有する、発酵食品、ヒト糞便等の様々な分離源から分離した乳酸菌及び市販の乳酸菌を用いて膵リパーゼ阻害活性を測定し、スクリーニングを行った。測定方法は以下に示す。被験菌株をＭＲＳ液体培地で３２℃、１８時間培養した。
次いで、培養後の菌体を滅菌純水にて洗浄後、凍結乾燥処理し、凍結乾燥菌体を得た。本凍結乾燥菌体に０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌを含む０．１ｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．０）を加えて１ｇ／ｍＬの一定濃度とした被験試料１００μＬに、基質液１００μＬ（８．９ｍｇ／ｍｌ トレオレイン／アラビアガム（終濃度０．５％））及びブタ膵臓リパーゼ（２００Ｕ／ｍＬ）５０μＬを添加・混合した後、３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、クロロホルム：ｎ−ヘプタン（１：１）／２％（ｖ／ｖ）メタノールを３ｍＬ添加・混合し、遠心分離した後、水層を除去した。これに銅試薬（０．１２１ｇ／mＬ Ｃｕ（ＮＯ３）２、１００ｍｏｌ トリエタノールアミン、６０ｍｍｏｌ ＮａＯＨ、０．３３ｇ／ｍＬ ＮａＣｌ）を１ｍＬ添加・混合し、遠心分離した後、上層である有機層０．５ｍＬに対して発色試薬０．５ｍＬ（０．１％バソクプロイン、０．０５％ ＢＨＡ／クロロホルム）を添加し、吸光度(４８０ｎｍ)を測定した。オレイン酸で作製した検量線から、遊離した脂肪酸濃度を求めた。本方法において、膵リパーゼ阻害活性は以下の式より求めた。
膵リパーゼ阻害活性（％）＝ （１−（（Ｔ−Ｂ）／（Ｃ−Ｂ））×１００
Ｔ：膵リパーゼ添加・被験試料添加区の遊離脂肪酸濃度
Ｃ：膵リパーゼ添加・被験試料無添加区の遊離脂肪酸濃度
Ｂ：膵リパーゼ無添加・被験試料無添加区の遊離脂肪酸濃度
阻害活性の高かった菌株に及び他の一般的な菌株についての抜粋を表３に示す。
Ｔ：膵リパーゼ添加・被験試料添加区の遊離脂肪酸濃度
Ｃ：膵リパーゼ添加・被験試料無添加区の遊離脂肪酸濃度
Ｂ：膵リパーゼ無添加・被験試料無添加区の遊離脂肪酸濃度
阻害活性の高かった菌株に及び他の一般的な菌株についての抜粋を表３に示す。
ほとんどの乳酸菌においては、高い膵リパーゼ阻害活性はみられなかったが、一部の乳酸菌のみに高い膵リパーゼ阻害活性が見られた。膵リパーゼ阻害活性を有する特異的な菌株を見つけることに成功した。尚、ＮＬＢ３６７、３６５、３５５はいずれも、ヒト糞より単離したものである。
さらに膵リパーゼ阻害活性の高かった各乳酸菌に対して、上述の膵リパーゼ阻害活性測定において、被験菌体として本凍結乾燥菌体に０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌを含む０．１ｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．０）を加えて３００、１，０００、３，０００、１０，０００ｍｇ／ｍＬとした乳酸菌液を調製して測定し、最小二乗法により上述の試験系におけるブタ膵臓リパーゼの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を求めた。尚、比較対象としてはシグマ社製のオリルスタットを用いた。結果を表４に示す。
＜実施例２＞膵リパーゼ阻害活性を有する乳酸菌の脂肪負荷ラットの血中中性脂肪上昇抑制効果
ＳＤ系雄ラット（使用時週令９〜、日本クレアより購入）を１週間検疫、馴化飼育した後、一晩絶食し、脂肪負荷試験を行った。脂肪懸濁液としてイントラリポス（大塚製薬工場）を用い、７ｍＬ／kg（ラット重量）となるように投与した。また、これと同時に投与した乳酸菌は、各菌株をＭＲＳ培地で培養し、集菌・洗浄後、凍結乾燥したものを用い、１ｇ／ｋｇ（ラット重量）となるように投与した。また、対照群には溶媒の水を投与し、比較対照にオルリスタット ５ｍｇ／ｋｇ投与群を用意した。投与前、投与後２．５時間に尾静脈より採血、遠心分離により血漿を調製し、中性脂肪濃度をラボアッセイ トリグリセライドキット（和光純薬）を用いて測定した。脂肪負荷２．５時間後の各乳酸菌株投与群の血中中性脂肪濃度を比較結果を図１に示す。
対照群、オルリスタット群、ＮＬＢ３６７群、ＮＬＢ３６５群、ＮＬＢ３５５群、ＮＬＢＳ０５５群、ＮＬＢ３５７群、ＮＬＢ３６４群、ＮＬＢ３４９群、ＮＬＢ３５０群、ＮＬＢＳ０１２群、ＮＬＢＳ００１群についての結果を図１に示す。
図１に示したように膵リパーゼ阻害活性を有する乳酸菌株の中でも特に強い膵リパーゼ阻害活性（ＩＣ５０が１２００μｇ／ｍＬ以下）を示したＮＬＢ３６７（ＩＣ５０＝７４５μｇ／ｍＬ）、ＮＬＢ３６５（ＩＣ５０＝７８５μｇ／ｍＬ）及びＮＬＢ３５５（ＩＣ５０＝１１０６μｇ／ｍＬ）は有効な血中中性脂肪濃度の上昇抑制を示した。一方、膵リパーゼ阻害活性を示したが、ＩＣ５０が１２００μｇ／ｍＬを超えていたＮＬＢＳ０５５（ＩＣ５０＝１２０１μｇ／ｍＬ）、ＮＬＢ３５７群（ＩＣ５０＝１２２４μｇ／ｍＬ）、ＮＬＢ３６４群（ＩＣ５０＝１２２７μｇ／ｍＬ）、ＮＬＢ３４９群（ＩＣ５０＝１３１１μｇ／ｍＬ）、ＮＬＢ３５０群（ＩＣ５０＝１３８５μｇ／ｍＬ）については対照群と比較して血中中性脂肪の低下を示さなかった。ＩＣ５０が１２００μｇ／ｍＬ以下の乳酸菌を用いた場合に血中中性脂肪濃度の低下効果がみられた。
さらに、血中中性脂肪濃度上昇に与える影響について調べた。結果を図２に示す。
さらに、血中中性脂肪濃度上昇に与える影響について調べた。結果を図２に示す。
図２に示したように、図１の場合と同様に、膵リパーゼ阻害活性を有する乳酸菌株の中でも特に強い膵リパーゼ阻害活性（ＩＣ５０が１２００μｇ／ｍＬ以下）を示したＮＬＢ３６７（ＩＣ５０＝７４５μｇ／ｍＬ）、ＮＬＢ３６５（ＩＣ５０＝７８５μｇ／ｍＬ）及びＮＬＢ３５５（ＩＣ５０＝１１０６μｇ／ｍＬ）は有効な血中中性脂肪濃度の上昇抑制を示した。一方、膵リパーゼ阻害活性を示したが、ＩＣ５０が１２００μｇ／ｍＬを超えていたＮＬＢＳ０５５（ＩＣ５０＝１２０１μｇ／ｍＬ）、ＮＬＢ３５７群（ＩＣ５０＝１２２４μｇ／ｍＬ）、ＮＬＢ３６４群（ＩＣ５０＝１２２７μｇ／ｍＬ）、ＮＬＢ３４９群（ＩＣ５０＝１３１１μｇ／ｍＬ）、ＮＬＢ３５０群（ＩＣ５０＝１３８５μｇ／ｍＬ）については対照群と比較して血中中性脂肪濃度の上昇抑制効果を示さなかった。ＩＣ５０が１２００μｇ／ｍＬ以下の乳酸菌を用いた場合に血中中性脂肪濃度の上昇抑制の効果がみられた。
＜実施例３＞ＮＬＢ３６７の血中中性脂肪上昇抑制効果
上述の菌株の中で特に活性の高かったＮＬＢ３６７株について時間ごとの血中中性脂肪濃度を測定した。結果を図３に示す。図３に示したようにＮＬＢ３６７を投与した場合、投与量依存的に血中中性脂肪の上昇が抑制された。
上述の菌株の中で特に活性の高かったＮＬＢ３６７株について時間ごとの血中中性脂肪濃度を測定した。結果を図３に示す。図３に示したようにＮＬＢ３６７を投与した場合、投与量依存的に血中中性脂肪の上昇が抑制された。
Claims (6)
- 膵リパーゼ阻害活性を有する乳酸菌であって、当該乳酸菌がラクトバチルス ガセリ（Lactobacillus gasseri）ＮＬＢ３６５株（ＮＩＴＥ Ｐ−７６２株）又はＮＬＢ３６７株（ＮＩＴＥ Ｐ−７６３株）に属する乳酸菌。
- 前記乳酸菌の膵リパーゼ阻害活性におけるＩＣ５０が１２００μｇ／ｍＬ以下である請求項１に記載の乳酸菌。
- 請求項１又は２のいずれかに記載の乳酸菌を含有する食品。
- 前記食品が発酵乳又は乳酸菌飲料である請求項３に記載の食品。
- 前記食品が粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、又は錠剤等の健康食品である請求項３記載の食
品。
- 請求項１又は２のいずれかに記載の乳酸菌を含有する膵リパーゼ阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009141699A JP5454873B2 (ja) | 2009-06-12 | 2009-06-12 | リパーゼ阻害活性を有する乳酸菌 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009141699A JP5454873B2 (ja) | 2009-06-12 | 2009-06-12 | リパーゼ阻害活性を有する乳酸菌 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2010284123A JP2010284123A (ja) | 2010-12-24 |
| JP5454873B2 true JP5454873B2 (ja) | 2014-03-26 |
Family
ID=43540343
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2009141699A Active JP5454873B2 (ja) | 2009-06-12 | 2009-06-12 | リパーゼ阻害活性を有する乳酸菌 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP5454873B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7044273B2 (ja) * | 2020-06-01 | 2022-03-30 | 株式会社東洋新薬 | 血中中性脂肪上昇抑制用組成物 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2740471B1 (fr) * | 1995-10-31 | 1997-12-19 | Gervais Danone Co | Ferments lactiques, et leur utilisation pour l'obtention de produits hypocholesterolemiants |
-
2009
- 2009-06-12 JP JP2009141699A patent/JP5454873B2/ja active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2010284123A (ja) | 2010-12-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bovee-Oudenhoven et al. | Increasing the intestinal resistance of rats to the invasive pathogen Salmonella enteritidis: additive effects of dietary lactulose and calcium. | |
| JP4834798B2 (ja) | 新規ビフィズス菌、耐糖能改善剤、および抗肥満剤 | |
| TWI572354B (zh) | 抑制發炎之組成物 | |
| JP6684966B2 (ja) | 新規なラクトバチルス・サケイ及びそれを含む組成物 | |
| JP6479768B2 (ja) | 新規ラクトバチラス・パラカゼイ株 | |
| JP5592640B2 (ja) | 乳酸菌発酵ローヤルゼリーを含有する抗ストレス剤、その製造方法、視床下部−下垂体−副腎皮質系の活動抑制剤、及び交感神経−副腎髄質系の活動抑制剤 | |
| JP5025930B2 (ja) | ラクトバチルス・プランタラムの菌体を有効成分とする体脂肪率低減剤 | |
| JP2022551245A (ja) | ラクトバチルスアシドフィルスｋｂｌ４０９菌株およびその用途 | |
| KR20160013069A (ko) | 페디오코커스 및 락토바실러스를 포함하는 박테리아 혼합물을 포함하는 조성물, 및 알코올의 영향을 감소시키는 방법 | |
| CN106661542B (zh) | 新型乳酸菌和包含所述乳酸菌的组合物 | |
| CA3198168A1 (fr) | Composition symbiotique comme additif d'alimentation pour les porcelets ou les truies et son utilisation | |
| KR100717742B1 (ko) | 콜레스테롤 저하제，2차 담즙산 생산 억제제 및 음식품 | |
| JP5454873B2 (ja) | リパーゼ阻害活性を有する乳酸菌 | |
| WO2023066973A1 (en) | Probiotic strains for reducing blood cholesterol and/or treating dyslipidemia, and methods for using and producing the same | |
| WO2021125342A1 (ja) | 肥満抑制用組成物 | |
| WO2017141879A1 (ja) | 膵リパーゼ阻害用組成物及び膵リパーゼ阻害用組成物の製造方法 | |
| JPWO2018003898A1 (ja) | 軟骨再生促進用組成物 | |
| KR100523661B1 (ko) | 결장 내에서 프로피온산 및/또는 프로피오네이트를생성하기 위한 프로피온 박테리아의 용도 | |
| JP2013227250A (ja) | Ｎｒｆ２活性化剤およびその用途 | |
| TW201132348A (en) | Lactobacillus sp. PM308 composition and its use for treating obesity, ameliorating endomorph body type, decreasing body fat ratio and reducing cholesterol | |
| JP6547122B2 (ja) | 血中中性脂肪上昇抑制用組成物 | |
| JP2022130294A (ja) | 腸内環境改善剤及び組成物 | |
| JP5851242B2 (ja) | チオレドキシン誘導活性を有する乳酸菌ならびにチオレドキシンを介する生体傷害の予防および／または改善用の飲食品および医薬品 | |
| JPWO2003101472A1 (ja) | ダイオキシン類排除促進剤 | |
| KR20150031116A (ko) | 인슐린 저항성 개선 효능을 가지는 비피도박테리움 락티스 hy8101 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20111107 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130625 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130823 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20131225 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20131225 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5454873 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |