JP5421501B2 - 遺伝毒性化合物を同定し、特徴付けるための遺伝子発現分析 - Google Patents
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Description
(a)少なくともGLS2、IER5、TMEM194、PROCR、ITGA2B、FADS3、STMN3、PIB5PA、ROBO3、EDA2RおよびKIF1Aの遺伝子を発現することが可能な細胞系またはその試料を提供すること、ここで該系が、単細胞、細胞培養物、組織、器官および哺乳動物の群から選択されるか、またはそれらの試料である、
(b)スクリーニングされる化合物を有する前記系の少なくとも一部をインキュベートすること、ならびに
(c)遺伝子発現分析により、遺伝毒性および/または前駆型遺伝毒性の活性を検出すること、ここで前記系における該遺伝子の発現を対照の細胞系における遺伝子発現と比較する、
が含まれる。
この発明は、かかる事項が変動しても、本明細書に記載された特定の方法、具体的な物質、使用、およびアレイに限定されないことは、理解されるべきである。本明細書で使用されている専門用語は、特定の態様のみを記載するためだけであり、添付の特許請求の範囲にしか規定されていない本発明の範囲を限定する意図はないことも理解されるべきである。添付の特許請求の範囲を含む本明細書に使用する単数形の言葉、「a」、「an」、および「the」などには、文脈上明確に指示した場合を除き、それらの対応する指示対象の複数形が含まれる。よって、例えば、「物質」への言及には、単一のまたはいくつかの異なる物質が含まれ、「方法」への言及には、当業者に知られている段階および方法の均等物への言及が含まれるなどである。別段の規定がない限り、本明細書で使用するすべての技術および科学用語は、この発明が属する技術分野における当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
シクロホスファミド(CPA);アフラトキシンB1(AFB1);7,12-ジメチルベンズ[a]アントラセン(DMBA);N-ニトロソジエチルアミン(DEN);アクチノマイシンD(ACT);エトポシド(ETO);メチルメタンスルホネート(MMS);テオフィリン(THEO);メトホルミン(MET);代謝活性化系(MAS)、シトクロムP450モノオキシゲナーゼ(CYP);なし(w/o)。
アクチノマイシンD(Streptomyces種から、純度≧95%)、7,12-ジメチルベンズ[a]アントラセン(純度≧95%)、エトポシド(純度≧98%)、メチルメタンスルホネート(液状、99%)、テオフィリン(純度≧99%)、1,1-ジメチルビグアニドハイドロクロライド(メトホルミン、純度≧97%)、N-ニトロソジエチルアミン(液状)、β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド2’-ホスフェート還元四ナトリウム塩水和物(NADPH)およびペニシリン/ストレプトマイシン溶液をSigma-Aldrich(Taufkirchen、Germany)から購入した。シクロホスファミド(一水和物、純度≧97%)はCalbiochem(Darmstadt、Germany)から、アフラトキシンB1はAcros Organics(Geel、Belgium)からであった。DMEM/F12、ゲンタマイシン、およびピルビン酸ナトリウムを、Invitrogen Corp.(Karlsruhe、Germany)から入手した。ウシ胎児血清(FBS)はHycloneに発注した(発注番号CH30160、ロット番号CRJ0454、Perbio Science、Bonn、Germany)。β−ナフトフラボン/フェノバルビタールにより誘導されたラット肝S9(発注番号R1081.S9、ロット番号0710507)を、Tebu-bio(Offenbach、Germany)から購入した。リン酸ナトリウムの一塩基一水和物、リン酸ナトリウムの二塩基七水和物、塩化マグネシウム、および塩化カリウムを、Merck KGaA(Darmstadt、Germany)から入手した。
HepG2細胞(発注番号HB-8065、ロット3129867、ATCC、Manassas、USA)を、L-グルタミンを有するDMEM/F12ならびに10%(v/v)FBS、1%(v/v)ペニシリン(10kU/ml)/ストレプトマイシン(10mg/ml)溶液、0.1%(v/v)ゲンタマイシン(50mg/ml)、および1mMのピルビン酸ナトリウムで補充した15mMのHepes中、37℃かつ5%CO2で、培養フラスコにおいて、ルーチン的に維持した。実験に応じて、適切な細胞数をプレート上に播種し、細胞を37℃かつ5%CO2で、処置前24h培養した。細胞の継代を4〜20回とするすべての実験を少なくとも3回実施した。
細胞を6ウェルプレートに播種し(1.5×106細胞/ウェル)、接着させるため24h放置した後、非遺伝毒性のテオフィリンおよびメトホルミンと同様に、直接作用するかまたは前駆型の遺伝毒性の異なる化合物を用いて処置した。代謝活性化系との干渉を避けるため、前駆型遺伝毒物用にDMSOをたった0.2%(v/v)しか使用しなかったが、直接作用する遺伝毒物を用いる実験には、対照媒体としてのDMSOを0.5%(v/v)供給した。細胞毒性とP53タンパク質活性化との先の研究(Boehme et al., 2010, Toxicol. Lett. 198, 272-281)に従って、試験化合物の用量を選択した。直接作用する遺伝毒物のための連日の処置スケジュールを継続した一方で、S9画分の細胞毒性を制限するために、S9肝ホモジネート混合物を加えた前駆型変異原を使用した場合に、細胞を6hしか処置しなかった。6hの処置時間の後、培養培地による洗浄段階と18hの回復時間とが続いた。18hの回復時間の後、前記に従い処置を繰り返した。前駆型変異原のための処置培地は、ウェルあたり、300μlのS9混合物と700μlの培養培地とからなる。S9混合物には、以下の成分と濃度で含まれる:処置培地中の最終濃度として、2.4mMのMgCl2、9.8mMのKCl、3.6mMのNADPH、37.2mMのリン酸緩衝液、および750pmol/mlのCYPに対する、事前混合物中の内容物が、8mMのMgCl2、32.8mMのKCl、12mMのNADPH、124mMのリン酸緩衝液、および2500pmol/mlのCYPである。
処置時間の後、細胞をPBS(Gibco Invitroge、Karlsruhe、Germany)ですすぎ、回収して、QIAshredderスピンカラム手順とカラム上でのRNaseのないDNase消化とを含むRNeasy Mini Kit(QIAGEN、Hilden、Germany)を使用して、製造業者による説明のとおりに、全RNAを抽出した。RNAを40μlのRNaseのない水で溶出した。RNAの品質管理および定量化を、NanoDrop(登録商標)分光光度計(Kisker、Steinfurt、Germany)と2100 Agilent Bio-Analyzer(Agilent Technologies、Waldbronn、Germany)とを使用して決定した。品質比A260/A280が1.9と2.1との間であり、分解のピーク(18s/28s)の証拠がないRNAのみを使用した。
〜23,000の転写物の分析を可能にするIllumina Sentrix(登録商標)HumanRef-8 V2 BeadChipアレイ(Illumina Inc.、San Diego、CA、USA)を使用して、遺伝子発現分析を実行した。この過程(Zidek et al., 2007, Toxicol Sci 99, 289-302)を最適化するためにIlluminaから要請のあったいくつかの修飾を有するTheonyx Liquid Performer(Aviso GmbH、Greiz、Germany)とMessageAmp(商標)II aRNA増幅キット(Ambion、Darmstadt、Germany)とを使用して、自動化手順で、ビオチン標識したcRNAの合成を実施した。cDNAとcRNAとを精製するため、カラム浄化の代わりに、ビーズをベースとしたAgencourt(登録商標)RNAclean(商標)系(Beckman Coulter、Krefeld、Germany)を適用した。cRNA量を分光光度計(NanoDrop(登録商標))で測定し、品質アセスメントのために前記2100 Agilent Bio-Analyzerを使用した。
生データを濃縮するため、さらに、先の研究(Boehme et al., 2009, Toxicol. Appl. Pharmacol. 236, 85-96)において記載された異なる対照ビーズのパラメータに基づくアレイ品質を確保するために、Illumina(登録商標)BeadStudio Softwareを使用した。したがって、データの標準化と統計的分析とのために、GenedataのExpressionist(登録商標)Analyst software(Genedata AG、Basel、Switzerland)に、データをアップロードした。試料とアレイとの間の非生物学的差異(系統的変動)を相殺するために、変異原実験ではLowess(Locally Weighted Linear Regression)を使用し、前駆型変異原研究ではシグナル強度の中央値である100で、データを標準化した。標準化した後、S9あり、なしのそれぞれの対応する対照媒体系に対して、個々の化合物それぞれの処置において、調節比(fold-regulation)を算出した。異なる研究から得られたデータの比較を成し遂げるために、相対値への変換を欠かさなかった。
本発明では、周知の遺伝毒性、前駆型遺伝毒性および非遺伝毒性の化合物の遺伝子発現パターンを調査した。最初に、遺伝子発現に影響を及ぼすパラメータを、主成分分析(PCA)を用いて同定した。異なる生物学的な複製物(継代細胞)は全体的なデータ分散に対する影響を切り離せないが、PCAは、使用した試験化合物の遺伝子発現に対する時間の効果と代謝活性化系の著しい効果とを明らかにした(図4A)。S9により誘導された遺伝子発現の分析により、24hおよび/または48h処置後に1.5倍以上に調節された164種の有意な遺伝子が明らかとなった(対照のDMSOに対する両時点のANOVAが、p値/BH−q値<0.05)。これら遺伝子の150種が下方調節され、14種が上方調節されたことを見出した。下方調節された遺伝子の77パーセントは、24hおよび48h後に同様な調節を示した。S9曝露後に差次的に調節されることが見出された遺伝子は、ビタミン/CoA、葉酸、脂肪酸/脂質、およびヌクレオチド代謝、ならびにタンパク質分解、細胞接着、細胞/酸化ストレスに対する応答、および遺伝子を調節する発生/細胞増殖などの過程に関与する(図4B)。
任意の特異的な物質の効果が表に出ないことから、遺伝子発現特性に対するMASの実質的な影響が問題となっていた。したがって、データを実験から独立させ、S9によりもたらされる効果によって物質によりもたらされる効果を調整するために、同じ継代細胞におけるそれらの対照媒体/媒体−S9を参照することにより、データを相対値に変換した。図5は、このタイプの相関が物質効果を発揮し、遺伝毒性および非遺伝毒性の化合物がすぐに別々にクラスタ化することを示す。ACTおよびMMSによる処置後の遺伝子発現の著しい変化により、クラスタの分離は、完全に解決することが困難であった(図5A/I)。しかしながら、ACTおよびMMSがPCAから除外された場合(拡大)、非遺伝毒性の化合物クラスからの遺伝毒性の明確な分離が可視化された(図5B/I)。その一方で、24h処置後の前駆型遺伝毒性の化合物では、明確な分離が可視化できなかった(図5A/IIおよび5B/II)。単一化合物の統計的分析(適切な対照媒体に対する、対応のある両側(paired two-tailed)T検定)によって、24h後のこの負の応答が確認された。さらに、S9なしのCPA、S9なしの0.5μMのAFB1およびS9なしの10μMのDMBAすべてが、それぞれ、極端に弱い遺伝子発現変化しか引き起こさないか、または統計的に有意な遺伝子発現変化を引き起こさなかった。したがって、これらの試料を、METおよびTHEOとともに非遺伝毒性としてカテゴリー化した。一般的に、さらなる分析のための化合物分類は、化合物クラス、P53(Boehme et al., 2010, Toxicol. Lett. 198, 272-281)および表3にリスト化された単一化合物分析の遺伝子発現アセスメントの組み合わせに基づいた。
(前駆型)遺伝毒性試験化合物を最も予測がつくものとして見出した91種の遺伝子を用いて、DENの遺伝子発現応答を評価した。先のP53活性化実験とは対照的に、DENは、正の応答が再現可能に確立されなかった場合、遺伝子発現分析により、S9の存在下で遺伝毒性であると正確に予測された(図9A)。これによって、我々は、DENに特異的な遺伝子発現をさらに分析するよう駆り立てられた。統計的分析(非遺伝毒性の化合物であるMETおよびTHEOに対するANOVAがp値/BH−q値<0.01)は、88種の上方および57種の下方に調節された遺伝子を明らかにし、該遺伝子は、48hのDEN試料の40%以上において、少なくとも1.5倍を超える調節解除で切り捨てた。他の試験化合物について言及したように、24h処置での応答が欠如しているか弱いため、切り捨ての基準を48h試料に一致させた。同定された一般的な毒物学的経路は、細胞のDENへの曝露後の細胞ストレス状況および遺伝毒性応答を明確に反映した(図9B)。特に後者において、数ある中でも、アポトーシス、細胞周期チェックポイント/停止、およびDNA修復ならびにP53シグナリングに直接関与する遺伝子によりもたらされる多くの経路を、存在する他の試験化合物と同様のものと同定した。
Claims (13)
- 遺伝毒性および/または前駆型遺伝毒性の活性を有する化合物をスクリーニングする方法であって、該方法が以下の段階:
(a)少なくともGLS2、IER5、TMEM194、PROCR、ITGA2B、FADS3、STMN3、PIB5PA、ROBO3、EDA2RおよびKIF1Aの遺伝子を発現することが可能な細胞系またはその試料を提供すること、ここで該系が、単細胞、細胞培養物、組織、器官および哺乳動物(ヒトを除く)の群から選択されるか、またはそれらの試料である、
(b)スクリーニングされる化合物を有する前記系の少なくとも一部をインキュベートすること、ならびに
(c)遺伝子発現分析により、遺伝毒性および/または前駆型遺伝毒性の活性を検出すること、ここで前記系における前記遺伝子の発現を、対照の細胞系における遺伝子発現と比較する、
を含む、前記方法。 - 段階(a)において、系が、少なくともIER5、 TNFSF9、 MAGI3、 BCL2L13、 LGALS7、 PROCR、 MR1、 IL27RA、 KIF1A、 STMN3、 ROBO3、 EDA2R、 PLAU、 NPAS1、 EMP1、 FLNC、 CAPZA3、 RASIP1、 GLS2、 FADS3、 DNASE1L1、 POMT1、 GLS、 UBE2R2、 ITGA2B、 PIB5PA、 AXL、 GPR137B、 TMEM194、 STYXL1、 MLLT11およびANKRD10を発現することが可能である、請求項1に記載の方法。
- 段階(a)において、系が、さらに、(1)SFN、 BAX、 GADD45A、 MAPK12、 ANXA1、 EMP3、 EMP1、 ARHGDIB、 LRDD、 HIST1H2BD、 CRABP2、 HIST2H4、 HDAC4、 MEIS1、 SRY、 CTDSP2、 CTDSP1、 ZNF395、 PIR、 ZHX2、 GPX1、 MVP、 TAP1、 PROCR、 MICB、 IFIH1、 FXYD2、 HBA1、 SLC26A3、 MAP1LC3B、 ITGA2B、 TIMP1、 PLAU、 COL7A1、 MICAL1、 TUBA1、 SNTB1、 CGNL1、 SORBS2、 ST3GAL1、 AXL、 CKM、 AK1、 GPR3、 S100P、 XYLB、 HK2、 NEDD4L、 CEL、 FADS3、 RASD1、 DNAJB2、 DPYSL4、 NDP、 FJX1、 FZD4、 MGC59937、 FLJ45909、 SPATA18、 IER5、 ATHL1、 LRG1、 FLJ43339、 LOC196463、 PLTPRおよびANKS4Bからなる群から選択される少なくとも3種の追加遺伝子および/または(2)C12orf5、 CASP4、 CDKN1A、 G1P3、 PHLDA1、 TGM2、 P53INP1、 CD247、 CD68、 GAGE12I、 GAGE4、 HCP5、 IFITM2、 IL1R2、 MR1、 NMI、 PRAME、 PROCR、 ABCA4、 CLCNKA、 CLDN16、 OSTalpha、 SLC22A17、 SLC30A1、 STX19、 CCDN1、 CD44、 CRABP2、 DLL1、 EMP1、 FOXJ1、 FSD1、 G0S2、 HAPLN4、 HBA1、 HPCAL4、 IFITM1、 IGFBP3、 KRT17、 LOX、 MMP7、 NOV、PLAU、 PTGS1、 RAPGEF3、 S100A4、 SH2D2A、 VCX、 VCX2、 VCX-C、 AMRH2、 CLDN23、 CYP2J2、 FLNC、 FLRT3、 GNA15、 GPR110、 HERC6、 INPP4B、 RGS16、 SDPR、 TBC1D2、 TUBB3、 FBXO27、 FDXR、 TMOD1、 F12、 NT5E、 ABHD7、 C15orf52、 C2orf32、 CAMKV、 CAPN9、 CHGA、 CT45-4、 FAM43A、 FNDC5、 GBGT1、 GLS、 MYEOV、 PCNXL2、 PI3、 PTRF、 RBM3、 S100A16およびSPG3Aからなる群から選択される少なくとも1種の追加遺伝子を発現することが可能であり、ここで前記の追加遺伝子(単数または複数)はIER5、 TNFSF9、 MAGI3、 BCL2L13、 LGALS7、 PROCR、 MR1、 IL27RA、 KIF1A、 STMN3、 ROBO3、 EDA2R、 PLAU、 NPAS1、 EMP1、 FLNC、 CAPZA3、 RASIP1、 GLS2、 FADS3、 DNASE1L1、 POMT1、 GLS、 UBE2R2、 ITGA2B、 PIB5PA、 AXL、 GPR137B、 TMEM194、 STYXL1、 MLLT11、 ANKRD10、 ERCC8、 NTHL1、 CDKN1A、 TNFRSF14、 ISG15、 NDFIP2、 TAP1、 SLC4A8、 MFI2、 SLC2A6、 CNNM1、 CCS、 SLC41A1、 KCNQ2、 PLK2、 NETO2、 SPATA18、 NRG1、 ARHGDIB、 LAMC2、 CRABP2、 PDS5B、 HOMER3、 EMP3、 BRMS1L、 TUBA4A、 DPYSL4、 LAMP3、 TDRD3、 ADPRHL1、 RPL34、 HNF4A、 SPR、 RNF167、 RETSAT、 B3GALNT2、 SRD5A2L、 GALE、 CEL、 MAT2B、 NAT9、 ADORA2A、 DLGAP1、 ARSK、 RRAS、 BCKDK、 GPR30、 BSDC1、 SORBS2、 CCDC24、 DSCR6、 STOM、 C1orf91、 ABHD3、 FAM20A、 S100PBP、 LOC144501、 SP4およびANKRD41と異なるものである、ならびに段階(c)において、前記の追加遺伝子(単数または複数)の発現を、対照系における遺伝子発現と比較する、請求項1または2に記載の方法。
- 段階(a)において、系が、(1)IER5、 TNFSF9、 MAGI3、 BCL2L13、 LGALS7、 PROCR、 MR1、 IL27RA、 KIF1A、 STMN3、 ROBO3、 EDA2R、 PLAU、 NPAS1、 EMP1、 FLNC、 CAPZA3、 RASIP1、 GLS2、 FADS3、 DNASE1L1、 POMT1、 GLS、 UBE2R2、 ITGA2B、 PIB5PA、 AXL、 GPR137B、 TMEM194、 STYXL1、 MLLT11、 ANKRD10、 ERCC8、 NTHL1、 CDKN1A、 TNFRSF14、 ISG15、 NDFIP2、 TAP1、 SLC4A8、 MFI2、 SLC2A6、 CNNM1、 CCS、 SLC41A1、 KCNQ2、 PLK2、 NETO2、 SPATA18、 NRG1、 ARHGDIB、 LAMC2、 CRABP2、 PDS5B、 HOMER3、 EMP3、 BRMS1L、 TUBA4A、 DPYSL4、 LAMP3、 TDRD3、 ADPRHL1、 RPL34、 HNF4A、 SPR、 RNF167、 RETSAT、 B3GALNT2、 SRD5A2L、 GALE、 CEL、 MAT2B、 NAT9、 ADORA2A、 DLGAP1、 ARSK、 RRAS、 BCKDK、 GPR30、 BSDC1、 SORBS2、 CCDC24、 DSCR6、 STOM、 C1orf91、 ABHD3、 FAM20A、 S100PBP、 LOC144501、 SP4およびANKRD41、(2) SFN、 BAX、 GADD45A、 MAPK12、 ANXA1、 EMP3、 EMP1、 ARHGDIB、 LRDD、 HIST1H2BD、 CRABP2、 HIST2H4、 HDAC4、 MEIS1、 SRY、 CTDSP2、 CTDSP1、 ZNF395、 PIR、 ZHX2、 GPX1、 MVP、 TAP1、 PROCR、 MICB、 IFIH1、 FXYD2、 HBA1、 SLC26A3、 MAP1LC3B、 ITGA2B、 TIMP1、 PLAU、 COL7A1、 MICAL1、 TUBA1、 SNTB1、 CGNL1、 SORBS2、 ST3GAL1、 AXL、 CKM、 AK1、 GPR3、 S100P、 XYLB、 HK2、 NEDD4L、 CEL、 FADS3、 RASD1、 DNAJB2、 DPYSL4、 NDP、 FJX1、 FZD4、 MGC59937、 FLJ45909、 SPATA18、 IER5、 ATHL1、 LRG1、 FLJ43339、 LOC196463、 PLTPRおよびANKS4B、および/または(3)C12orf5、 CASP4、 CDKN1A、 G1P3、 PHLDA1、 TGM2、 P53INP1、 CD247、 CD68、 GAGE12I、 GAGE4、 HCP5、 IFITM2、 IL1R2、 MR1、 NMI、 PRAME、 PROCR、 ABCA4、 CLCNKA、 CLDN16、 OSTalpha、 SLC22A17、 SLC30A1、 STX19、 CCDN1、 CD44、 CRABP2、 DLL1、 EMP1、 FOXJ1、 FSD1、 G0S2、 HAPLN4、 HBA1、 HPCAL4、 IFITM1、 IGFBP3、 KRT17、 LOX、 MMP7、 NOV、PLAU、 PTGS1、 RAPGEF3、 S100A4、 SH2D2A、 VCX、 VCX2、 VCX-C、 AMRH2、 CLDN23、 CYP2J2、 FLNC、 FLRT3、 GNA15、 GPR110、 HERC6、 INPP4B、 RGS16、 SDPR、 TBC1D2、 TUBB3、 FBXO27、 FDXR、 TMOD1、 F12、 NT5E、 ABHD7、 C15orf52、 C2orf32、 CAMKV、 CAPN9、 CHGA、 CT45-4、 FAM43A、 FNDC5、 GBGT1、 GLS、 MYEOV、 PCNXL2、 PI3、 PTRF、 RBM3、 S100A16およびSPG3Aの遺伝子を発現することが可能である、請求項3に記載の方法。
- 段階(c)において、系におけるGADD45A、MAPK12およびNTHL1の遺伝子の遺伝子発現を、対照系における遺伝子発現と比較することを除く、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 段階(c)において、遺伝子発現が、シグナル量またはシグナルの変化量と相関する、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 段階(c)において、系における遺伝子の発現が、負もしくは正の対照系と比較して、上方調節または下方調節される場合、あるいは、前記系と正の対照系とにおける遺伝子の発現が、実質的に同一である場合に、存在する活性を検出する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 段階(c)において、負の対照系を用いる差次的遺伝子発現分析によって、存在する活性を検出する、請求項7に記載の方法。
- 段階(a)において、哺乳動物(ヒトを除く)を提供し、段階(b)において、スクリーニングされる化合物を前記哺乳動物に投与し、ならびに段階(c)において、前記哺乳動物から回収した生物試料における遺伝毒性および/または前駆型遺伝毒性の活性のレベルを、遺伝毒性効果を示さない哺乳動物(ヒトを除く)と比較して検出する、ここでレベルの差異は、遺伝毒性によりもたらされた病理学的な状態に対して前記化合物が治療効果を有する可能性の増大を示す、請求項7または8に記載の方法。
- 増殖、分化および/または損傷修復の調節解除によって引き起こされ、もたらされ、および/または、伝播される、生理学的および/または病理学的な状態を監視する方法であって、該方法では、少なくとも1つの遺伝毒性もしくは前駆型遺伝毒性の化合物または生理学的に許容し得るそれらの塩の有効量が投与されたかかる処置を必要とする哺乳動物から回収した生物試料において、少なくともGLS2、IER5、TMEM194、PROCR、ITGA2B、FADS3、STMN3、PIB5PA、ROBO3、EDA2RおよびKIF1Aの遺伝子の発現を決定する、前記方法。
- 状態が、がん、腫瘍、転移がんおよび血管新生の障害の群から選択される、請求項10に記載の方法。
- 遺伝毒性および/または前駆型遺伝毒性の活性を有する化合物をスクリーニングするためのマーカー遺伝子としてのGLS2、IER5、TMEM194、PROCR、ITGA2B、FADS3、STMN3、PIB5PA、ROBO3、EDA2RおよびKIF1Aの遺伝子の使用。
- ストリンジェントな条件下でGLS2、IER5、TMEM194、PROCR、ITGA2B、FADS3、STMN3、PIB5PA、ROBO3、EDA2RおよびKIF1Aの遺伝子、あるいは、前記遺伝子によりコードされた遺伝子産物もしくはそれらの各部分と特異的にハイブリダイズする核酸プローブの、遺伝毒性および/または前駆型遺伝毒性の活性を検出するための使用。
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