JP5374371B2

JP5374371B2 - 紅藻ソゾの有機溶媒抽出物およびそこから単離された化合物からなるフジツボ付着防止剤

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Publication number: JP5374371B2
Application number: JP2009531286A
Authority: JP
Inventors: 龍文沖野; 靖行野方
Original assignee: Central Research Institute of Electric Power Industry
Current assignee: Central Research Institute of Electric Power Industry
Priority date: 2007-09-07
Filing date: 2008-09-05
Publication date: 2013-12-25
Anticipated expiration: 2028-09-05
Also published as: US8258178B2; EP2198713A1; WO2009031637A1; EP2401916A3; JPWO2009031637A1; EP2198713A4; EP2401916B1; EP2198713B1; EP2401916A2; US20100204315A1

Description

本発明は、紅藻ソゾの有機溶媒抽出物およびそこから単離同定された化合物、およびそれらを含むフジツボの付着防止剤に関するものである。

フジツボ・イガイなどの海洋付着生物は、船舶に付着して航行機能を低下させたり、漁網に付着して被害を与えたり、発電所の給排水管に付着して冷却効率を低下させて、多大な経済的損失を与えている。従来、魚網、船底などへの海洋生物の付着を防止する薬剤としては、有機スズ系化合物が広く使用されてきた。しかし、有機スズ化合物は、その強い毒性及び環境ホルモンとしての作用から使用が規制されている。代替化合物も銅や亜鉛を含むものが多く、環境に対する悪影響が懸念されており、より毒性の少ない安全な薬剤の開発が待たれている。

紅藻ソゾの有機溶媒抽出物については、ミツデソゾから得られたローリンテロール、イソローリンテロールに、フジツボ付着阻害活性があることが報告されている（非特許文献１）。

また、ローレンシアリジダ（Laurencia rigida）から得られたelatolとdeschloroelatolにフジツボ付着阻害活性があることが報告されている（非特許文献２）。

また、マギレソゾの有機溶媒抽出物には、野外試験でフジツボを含む付着生物の付着を阻害したという報告がある（非特許文献３）。

しかしながら、御前崎産ソゾ（Laurencia sp.）、八丈島産ソゾ（Laurencia sp.）、ウラソゾ（Laurencia nipponica）、ローレンシアチルシフェラ（Laurencia thyrsifera）の有機溶媒抽出物には、フジツボ付着阻害活性があることは知られていない。

また、化合物ローレンシン（Laurencin）については、ウラソゾから単離されることが知られている（非特許文献４）。また、その全合成も報告されている（非特許文献５）。しかし、生物活性については知られていない。

また、化合物チルシフェロール（Thyrsiferol）については、ローレンシアチルシフェラ（Laurencia thyrsifera）から単離されたことが報告されている（非特許文献６）。また、マギレソゾ（Laurencia obtusa）からも単離されており、細胞毒性が知られている（非特許文献７）。しかし、フジツボのキプリス幼生に対する付着阻害活性は知られていない。

また、化合物マギレオールA（Magireol A）については、マギレソゾ（Laurencia obtusa）から単離されていることが報告されている（非特許文献８）が、生物活性は知られていない。

また、御前崎産ソゾ（Laurencia sp.）、八丈島産ソゾ（Laurencia sp.）は、これまで同定されていないソゾである。そして御前崎産ソゾから単離された化合物オマエザレン（Omaezallene）および八丈島産ソゾから単離された化合物ハチジョウジマレンA（Hachijojimallene A）も、これまで知られていない化合物である。

Ryu, Geonseek; Yoon, Oh Sub. Studies on marine natural antifoulant laurinterol. Han'guk Hwankyong Uisaeng Hakhoechi（2003), 29(3), 1-8. R. de Nys, T. Leya, R. Maximilien, A. Afsar, P. S. R. Nair, and P. D. Steinberg, The need for standardised broad scale bioassay testing: A case study using the red alga Laurencia rigida, Biofouling, 10（1-3）213-224（1996). Da Gama BAP, Pereira RC, Carvalho AGV, et al, The effects of seaweed secondary metabolites on biofouling. Biofouling 18（1）13-20（2002） Irie, T., Suzuki, M. 1965. Laurencin, a constituent from Laurencia species; Tetrahedron Lett. 1965:（No. 16）1091-1099. Fujiwara, Kenshu; Yoshimoto, Saori; Takizawa, Ayumi; Souma, Shin-ichiro; Mishima, Hirofumi; Murai, Akio; Kawai, Hidetoshi; Suzuki, Takanori. Synthesis of（+)-laurencin via ring expansion of a C-glycoside derivative. Tetrahedron Letters （2005), 46(40), 6819-6822. Blunt, J. W.; Hartshorn, M. P.; McLennan, T. J.; Munro, M. H. G.; Robinson, Ward T.; Yorke, S. C. Thyrsiferol: a squalene-derived metabolite of Laurencia thyrsifera. Tetrahedron Letters（1978),（1), 69-72. Suzuki, Teruaki; Suzuki, Minoru; Furusaki, Akio; Matsumoto, Takeshi; Kato, Arata; Imanaka, Yoshihiko; Kurosawa, Etsuro. Constituents of marine plants. 62. Teurilene and thyrsiferyl 23-acetate, meso and remarkably cytotoxic compounds from the marine red alga Laurencia obtusa（Hudson）Lamouroux. Tetrahedron Letters（1985), 26(10), 1329-32. Teruaki Suzuki, Satoshi Takeda, Minoru Suzuki, Etsuro Kurosawa, Arata Kato, and Yoshihiko Imanaka, Cytotoxic squalene-derived polyethers from the marine red alga Laurencia obtuse（Hudson）Lamouroux. Chemistry Letters（1987）pp. 361-364.

本発明の目的は、紅藻ソゾの有機溶媒抽出物およびそこから単離された化合物、およびそれらを含むフジツボの付着防止剤を提供することにある。

本発明者らは、鋭意研究の結果、紅藻ソゾの有機溶媒抽出物およびそこから単離された化合物がフジツボの付着防止効果を有することを見出し、本発明を完成させた。したがって、
（１）本発明は、御前崎産ソゾ（Laurencia sp.）、八丈島産ソゾ（Laurencia sp.）、ウラソゾ（Laurencia nipponica）、ローレンシアチルシフェラ（Laurencia thyrsifera）からなる群の中から選択される少なくとも一つの有機溶媒抽出物からなるフジツボの付着防止剤に関するものである。

（２）本発明は、式：

（式中、＝・＝は、＝Ｃ＝を意味する）
で示されるオマエザレン（Omaezallene）に関するものである。

（３）本発明は、式：

（式中、＝・＝は、＝Ｃ＝を意味する）
で示されるハチジョウジマレンA（Hachijojimallene A）に関するものである。

（４）本発明は、オマエザレン（Omaezallene）および／またはハチジョウジマレンA（Hachijojimallene A）を含む組成物に関するものである。

（５）本発明は、ローレンシン（Laurencin）、チルシフェロール（Thyrsiferol）、マギレオールA（Magireol A）、オマエザレン（Omaezallene）およびハチジョウジマレンA（Hachijojimallene A）からなる群の中から選択される少なくとも一つからなる、フジツボの付着防止剤に関するものである。

（６）本発明は、上記１または上記５に記載の付着防止剤を含む、組成物に関するものである。

（７）本発明は、上記１または上記５に記載の付着防止剤を、対象物に塗布すること、または対象物に含ませること、あるいは、上記６に記載の組成物で、対象物を塗装すること、または対象物を作製することを含む、対象物をフジツボの付着から防止する方法に関するものである。

本発明の紅藻ソゾの有機溶媒抽出物およびそこから単離同定された化合物は、フジツボ付着防止剤として用いることができる。

上記のように、本発明は、紅藻ソゾの有機溶媒抽出物およびそこから単離同定された化合物を含むフジツボの付着防止剤に関する。

本発明に用いるフジツボとは、蔓脚亜綱（Cirripedia）、完胸超目（Thoracica）に属する生物を意味し、有柄目（Pedunculata）または無柄目（Sessilia）に属するものであれば限定されないが、例えば、タテジマフジツボ（Amphibalanus amphitrite）、アメリカフジツボ（Amphibalanus ebruneus)、サラサフジツボ（Amphibalanus reticulates)、ドロフジツボ（Fistrulobalanus kondakovi）、アカフジツボ（Megabalanus rosa）、オオアカフジツボ（Megabalanus volcano)、シロスジフジツボ（Balanus albicostatus）などが挙げられ、好ましくは、タテジマフジツボである。

フジツボのライフサイクルは、受精卵から孵化したノープリウス幼生が５回の脱皮を繰り返し、６回目の脱皮の際に変態してキプリス幼生となり、このキプリス幼生が基材に付着し、再び脱皮の際に変態して固着生活を送るフジツボ幼体となり、その後脱皮を繰り返して成体へとなる。

本発明の抽出物および化合物は、このキプリス幼生の基材への付着を阻害する作用を有するものである。よって、本発明のフジツボの付着防止剤とは、フジツボのキプリス幼生の付着防止剤を意味する。

本発明のキプリス幼生の付着とは、キプリス幼生が固着物質を放出して基材に固着し、その後脱皮変態してフジツボ幼体となり、プランクトン生活を終了することをいう。よって、キプリス幼生の付着は、キプリス幼生がフジツボ幼体になって基材上に固着しているか否かで判断する。

本発明の紅藻ソゾとは、御前崎産ソゾ（Laurencia sp.）、八丈島産ソゾ（Laurencia sp.）、ウラソゾ（Laurencia nipponica）、ローレンシアチルシフェラ（Laurencia thyrsifera）などが挙げられる。そして、本発明でいう紅藻ソゾとは、特に、御前崎産ソゾ（Laurencia sp.）、八丈島産ソゾ（Laurencia sp.）、ウラソゾ（Laurencia nipponica）、ローレンシアチルシフェラ（Laurencia thyrsifera）をいう。その中で、好ましくはウラソゾ（Laurencia nipponica）、ローレンシアチルシフェラ（Laurencia thyrsifera）、より好ましくは、ウラソゾ（Laurencia nipponica）である。

御前崎産ソゾ（Laurencia sp.）とは、日本国静岡県御前崎で採取されるソゾ（Laurencia sp.）であり、これまで同定されていないソゾである。また、八丈島産ソゾ（Laurencia sp.）とは、日本国東京都八丈島で採取されるソゾ（Laurencia sp.）であり、これまで同定されていないソゾである。

御前崎産ソゾ（Laurencia sp.）、八丈島産ソゾ（Laurencia sp.）は、これまで形態的に同定されていないソゾであるので、それぞれオマエザレン（Omaezallene）、ハチジョウジマレンA（Hachijojimallene A）を含むソゾとして同定される。

本発明の紅藻ソゾの有機溶媒抽出物には、採集した紅藻ソゾを水切りしたもの又は採集した紅藻ソゾを乾燥したものやこれを粉末にしたものを用いることができる。この紅藻ソゾを、有機溶媒に浸漬して抽出する。抽出温度は、特に限定されないが、１５〜２５℃、好ましくは室温（約２０℃）であり、抽出時間は、特に限定されないが、１時間〜１週間、好ましくは２４時間である。抽出操作は、特に限定されないが、攪拌があっても無くても良く、また抽出回数は１回でもよいが、２回以上とするとより多くの抽出物を得ることができる。有機溶媒抽出物の濃縮は、特に限定されないが、好ましくは湯浴の温度を２０〜２５℃に設定し、減圧下で行うことができる。さらにこの有機溶媒抽出物は、減圧濃縮後、残渣を例えば、酢酸エチル／水またはジエチルエーテル／水に分配して得られる脂溶性（酢酸エチルまたはジエチルエーテル）画分であっても良い。本発明の紅藻ソゾの有機溶媒抽出物は、有機溶媒を含んだ形態であっても、有機溶媒を除去した後の残渣の形態であっても良い。

有機溶媒は、特に限定されないが、例えば、メタノール、酢酸エチル、エタノール、アセトニトリル、アセトン、クロロホルム、ジクロロメタン、クロロホルムとこれらの混合液などが挙げられる。好ましいのはメタノール、酢酸エチル、クロロホルムとこれらの混合液、より好ましいのは、メタノールである。

フジツボ付着防止剤として好ましい御前崎産ソゾ（Laurencia sp.）の有機溶媒抽出物の量は、有機溶媒抽出に用いた乾燥藻体の重量を基にして10μg/cm²以上、より好ましくは100μg/cm²以上、さらに好ましいのは1000μg/cm²以上である。

フジツボ付着防止剤として好ましい八丈島産ソゾ（Laurencia sp.）の有機溶媒抽出物の量は、有機溶媒抽出に用いた乾燥藻体の重量を基にして10μg/cm²以上、より好ましくは100μg/cm²以上、さらに好ましいのは1000μg/cm²以上である。

フジツボ付着防止剤として好ましいウラソゾ（Laurencia nipponica）の有機溶媒抽出物の量は、有機溶媒抽出に用いた乾燥藻体の重量を基にして10μg/cm²以上、より好ましくは100μg/cm²以上、さらに好ましいのは1000μg/cm²以上である。

フジツボ付着防止剤として好ましいローレンシアチルシフェラ（Laurencia thyrsifera）の有機溶媒抽出物の量は、有機溶媒抽出に用いた乾燥藻体の重量を基にして10μg/cm²以上、より好ましくは100μg/cm²以上、さらに好ましいのは1000μg/cm²以上である。

本発明は、下記式：

（式中、＝・＝は、＝Ｃ＝を意味する）
で示すオマエザレン（Omaezallene）を提供する。

オマエザレン（Omaezallene）は、実施例に記載の方法を用いてソゾ（Laurencia）属に属する紅藻、好ましくはソゾ（Laurencia sp.）から抽出することができるが、オマエザレンを含有する生物であれば抽出のための生物は特に限定されない。また、オマエザレンを、化学合成しても、市場より入手しても良い。

オマエザレン（Omaezallene）は、フジツボ付着防止剤として用いることができる。フジツボ付着防止剤として好ましいオマエザレンの量は、1μg/cm²以上、より好ましくは10μg/cm²以上、さらに好ましいのは100μg/cm²以上である。

本発明は、下記式：

（式中、＝・＝は、＝Ｃ＝を意味する）
で示すハチジョウジマレンA（Hachijojimallene A）を提供する。

ハチジョウジマレンA（Hachijojimallene A）は、実施例に記載の方法を用いてソゾ（Laurencia）属に属する紅藻、好ましくはソゾ（Laurencia sp.）から抽出することができるが、ハチジョウジマレンAを含有する生物であれば抽出のための生物は特に限定されない。また、ハチジョウジマレンAを、化学合成しても、市場より入手しても良い。

ハチジョウジマレンA（Hachijojimallene A）は、フジツボ付着防止剤として用いることができる。フジツボ付着防止剤として好ましいハチジョウジマレンAの量は、1μg/cm²以上、より好ましくは10μg/cm²以上、さらに好ましいのは100μg/cm²以上である。

本発明に用いるローレンシン（Laurencin）は、下記：

の構造式を有し、例えば、従来公知の方法（非特許文献４）を用いてソゾ属（Laurencia）に属する紅藻、好ましくはウラソゾ（Laurencia nipponica)から抽出することができるが、ローレンシンを含有する生物であれば抽出のための生物は特に限定されない。また、ローレンシンを、化学合成（非特許文献５）しても、市場より入手しても良い。

フジツボ付着防止剤として好ましいローレンシンの量は、1μg/cm²以上、より好ましくは10μg/cm²以上、さらに好ましいのは100μg/cm²以上である。

本発明に用いるチルシフェロール（Thyrsiferol）は、下記：

の構造式を有し、例えば、従来公知の方法（非特許文献６、７）を用いてソゾ（Laurencia）属に属する紅藻、好ましくは、ローレンシアチルシフェラ（Laurencia thyrsifera）、マギレソゾ（Laurencia obutusa）から抽出することができるが、チルシフェロールを含有する生物であれば抽出のための生物は特に限定されない。また、チルシフェロールを、化学合成しても、市場より入手しても良い。

フジツボ付着防止剤として好ましいチルシフェロールの量は、1μg/cm²以上、より好ましくは10μg/cm²以上、さらに好ましいのは100μg/cm²以上である。

本発明に用いる化合物マギレオールA（Magireol A）は、下記：

の構造式を有し、例えば、従来公知の方法（非特許文献８）を用いてソゾ（Laurencia）属に属する紅藻、好ましくはマギレソゾ（Laurencia obutusa）から抽出することができるが、マギレオールAを含有する生物であれば抽出のための生物は特に限定されない。また、マギレオールAを、化学合成しても、市場より入手しても良い。

フジツボ付着防止剤として好ましいマギレオールAの量は、1μg/cm²以上、より好ましくは10μg/cm²以上、さらに好ましいのは100μg/cm²以上である。

本発明に用いる、紅藻ソゾの有機溶媒抽出物、ローレンシン（Laurencin）、チルシフェロール（Thyrsiferol）、マギレオールA（Magireol A）、オマエザレン（Omaezallene）またはハチジョウジマレンA（Hachijojimallene A）は、フジツボの付着防止剤として１種類だけで用いても、２種類以上を組合せて用いても良い。

本発明のフジツボに対する付着防止剤は、抽出物及び化合物を、有機溶媒を含む形態または有機溶媒を除去した形態としてそのまま使用する、あるいは、ハイドロゲルのようなゲル、固形物、溶液（乳液、懸濁液を含む）などの形に調整して使用することができる。よって、本発明のフジツボの付着防止剤には、必要に応じ、増粘剤、可塑剤、着色剤等を配合することができる。

本発明の付着防止剤を含む組成物には、海に存在する人工物、例えば、船、特に船底、スクリュープロペラ、舵、錨、鎖などの海中にある船の部分；漁網などの網；縄；浮き；ブイ；消波ブロック；護岸；海中構造物の塗装に用いる塗料や、網や縄などに用いるための本発明の付着防止剤を含ませた繊維や、船；網；縄；浮き；ブイ；海中構造物に用いるための本発明の付着防止剤を含ませたプラスチックや、消波ブロック；護岸；海中構造物に用いるための本発明の付着防止剤を含ませたセメントコンクリートなどの形態が挙げられる

たとえば、本発明の紅藻ソゾの有機溶媒抽出物、ローレンシン（Laurencin）、チルシフェロール（Thyrsiferol）、マギレオールA（Magireol A）、オマエザレン（Omaezallene）またはハチジョウジマレンA（Hachijojimallene A）は、塗料、繊維、プラスチック、セメントコンクリートの重量に基づき０．１〜５０％、好ましくは０．１〜３０％、さらに好ましくは０．１〜１０％の割合で配合される。

本発明の付着防止剤を含む組成物による、フジツボの付着防止方法には、組成物が本発明の付着防止剤を含ませた塗料である場合、フジツボの付着を防止したい対象物、例えば船、特に船底、スクリュープロペラ、舵、錨、鎖などの海中にある船の部分；漁網などの網；縄；浮き；ブイ；消波ブロック；護岸；海中構造物などの海に存在する人工物を該塗料で塗装することで、対象物へのフジツボの付着を防止する方法が挙げられる。また、組成物が本発明の付着防止剤を含ませた繊維である場合、該繊維で網や縄などを作製することで、網や縄などへのフジツボの付着を防止する方法が挙げられる。また、組成物が本発明の付着防止剤を含ませたプラスチックである場合、船；網；縄；浮き；ブイ；海中構造物を該プラスチックで作製することで、船；網；縄；浮き；ブイ；海中構造物へのフジツボの付着を防止する方法が挙げられる。また、組成物が本発明の付着防止剤を含ませたセメントコンクリートである場合、消波ブロック、護岸、海中構造物を該セメントコンクリートで作製することで、消波ブロック、海中構造物へのフジツボの付着を防止する方法が挙げられる。

フジツボ付着・変態阻害試験
静岡県浜名湖で採取してきた繁殖期（浜名湖では５月〜１１月）にある成体のタテジマフジツボに１２時間程度干出刺激（干出刺激とは、フジツボを飼育水から取り出して干すことを意味する）を与えた後、水槽に収容することで、ノープリウス幼生を孵化させる（繁殖期にない場合には、水温20℃〜25℃で2週間程度飽食飼育を行ない、12時間程度干出刺激を与えた後、水槽に収容することでノープリウス幼生を孵化させる）。ノープリウス幼生を２Ｌビーカーに収容し、24時間の明条件下で２５℃で飼育し、毎日換水するとともに珪藻（Chaetoceros gracilis）を20万細胞/ml以上の濃度で投与する（加戸隆介・平野礼次郎：付着生物浮遊期幼生の飼育法、付着生物研究、１（１）、１１−１９（１９７９））。飼育５日目でキプリス幼生に変態するが、キプリス幼生を光等により集めて２日冷蔵（４℃）したのち、付着・変態阻害試験に用いる。

ポリスチレン製の２４ウェルマルチプレート（コーニング社）に本発明の紅藻ソゾのメタノール抽出物または本発明の化合物を溶かしたエタノール溶液を入れ乾燥させた後、ろ過海水２ｍＬを注入する。各ウェルにタテジマフジツボ（Amphibalanus amphitrite）のキプリス幼生６個体を入れて、２５℃で２〜５日間飼育し、実体顕微鏡下で、プレート表面に付着しキプリス幼生からフジツボ幼体に変態した個体数、および付着せずにキプリス幼生のまま浮遊している個体数および死亡個体数を数える。本発明の化合物の同一濃度につき、４ウェルで試験し、３回以上繰り返し試験をする。５日後において、死亡個体数が被験個体数の５０％となる濃度をLC₅₀とする。また、２日後における付着・変態した個体数の被験個体数に対する割合が、本発明の化合物を加えない場合と比べて半分となる濃度をEC₅₀とする。濃度（μg/ml）は、１ウェルあたりに添加した紅藻ソゾのメタノール抽出物の量（μg）または化合物の量（μg）を、１ウェルあたりに添加したろ過海水の量２ｍＬで割った値として示す。

オマエザレン（Omaezallene）の単離同定
静岡県御前崎で採取した御前崎産ソゾ（Laurencia sp.）の乾燥藻体(250 g)をメタノール(3 L)で抽出した。メタノール抽出物にフジツボ付着阻害活性（乾燥藻体の重量を基にして、10μg/mLで100%の付着阻害）が認められた。抽出物を減圧濃縮し、酢酸エチル(1.5 L)と水(0.5 L)で分配した。その後、酢酸エチル画分(2.3 g)をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（130 g, メルク Kieselgel 60）にかけ、ヘキサン200mL、ヘキサン/酢酸エチル(9:1）300 mL、ヘキサン/酢酸エチル(7:3）300 mL、ヘキサン/酢酸エチル(1:1）300 mL、酢酸エチル300 mL、酢酸エチル/メタノール(9:1）300 mLの順番で溶出した。それぞれの溶出画分について、上記のフジツボ付着阻害試験を行った結果、酢酸エチル画分に活性が認められた。酢酸エチル画分(504 mg)を濃縮後、再びシリカゲルカラムクロマトグラフィー(シリカゲル 30 g)にかけ、190mLのヘキサン/酢酸エチル＝１：１で溶出した。溶媒100 mLを溶出した後に溶出された30 mLに活性が認められた。この活性画分を濃縮し、112 mg得た。この画分20mgをアセトニトリルに溶解後、逆相HPLC（日本分光 PU-980, UV-970、220 nm, 0-10 分, 60-75 % アセトニトリル、流速毎分3 mL、室温２５℃、野村化学 Develosil ODS-T-5, 10×250 mm）で単一ピークになるまで分離と活性測定を繰り返しオマエザレン（Omaezallene）（10 mg)を得た。

この精製されたオマエザレン（Omaezallene）の平面構造は、１次元および２次元NMRスペクトル並びにマススペクトルの解析により決定した。ブロモアレン部分の立体化学は旋光度から、その他の相対立体化学は、NOEなどより決定した。

IR ν_max（neat）cm^-1: 3386,3050,1954,1093,1033,963,796
LRFABMS: m/z 483/485/487/489（1:3:3:1)
HRFABMS: m/z 482.8802[calcd for C₁₅H₁₈ ⁷⁹Br₃O₃, 482.8806]（M−H)⁻
[<]_D ²¹: −126.6（c 0.215, CHCl₃)
¹HNMR（CDCl₃):^TM1.14(H-15), 1.99(H-5a), 2.10(6-OH), 2.27(H-5b), 2.60(H-14), 2.87(9-OH), 4.05(H-7), 4.24(H-8), 4.48(H-9), 4.61(H-6), 4.96(H-4), 5.40(H-3), 5.79(H-10), 6.10(H-1), 6.42(H-11), 6.48(H-12)
¹³CNMR（CDCl₃): ^TM13.6(C15), 29.9(C14), 40.4(C5), 55.7(C8), 73.1(C9), 73.4(C6), 74.2(C1), 76.2(C4),83.9(C7),101.1(C3), 127.5(C11), 130.2(C12), 131.5(C10), 132.6(C13), 201.3(C2)

この精製されたオマエザレン（Omaezallene）は、タテジマフジツボのキプリス幼生の付着・変態を低濃度（EC₅₀ 0.22μg/mL) で阻害したが、毒性は低かった(LC₅₀ 3.4μg/mL)。

ハチジョウジマレンA（Hachijojimallene A）の単離同定
東京都八丈島で採取した八丈島産ソゾ（Laurencia sp.）の乾燥藻体(62 g）をメタノール(500 mL)で抽出した。メタノール抽出物にフジツボ付着阻害活性（乾燥藻体の重量を基にして、10μg/mLで100%の付着阻害）が認められた。抽出物を減圧濃縮し、酢酸エチル(300 mL)と水(100 mL)で分配した。その後、酢酸エチル画分(700 mg)をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メルク Kieselgel 60、100 g）にかけ、ヘキサン300mL、ヘキサン/酢酸エチル（9:1）300 mL、ヘキサン/酢酸エチル（7:3）150 mL、ヘキサン/酢酸エチル（1:1）300 mL、酢酸エチル300 mL、酢酸エチル/メタノール（9:1）300 mLの順番で溶出した。3つ目のヘキサン/酢酸エチル＝７：３で溶出した画分に付着阻害活性が認められた。このヘキサン/酢酸エチル＝７：３画分(220 mg)を再びシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、ヘキサン/酢酸エチル＝３：１で溶出した。２０，１０，１０，１０，１０，１０，１０，３０ｍＬずつ分取した。付着阻害活性の認められた5番目(40.2 mg)および6番目(34.7 mg)の画分をそれぞれPTLC（Preparative Thin Layer Chromatography、メルク Kieselgel 60、20×20 cm）にかけ、ヘキサン/酢酸エチル=3:1で溶出した。Rf値が0.3であったところを合一し(5番目12.4 mg＋6番目11.8 mg)、再びPTLCにかけ、ヘキサン/酢酸エチル=1:1で、1次元NMRにより純粋であることを確認できるまで分離と活性測定を繰り返し、Hachijojimallene A(7.0 mg)を得た。

この精製されたハチジョウジマレンA（Hachijojimallene A）の平面構造は、１次元および２次元NMRスペクトル並びにマススペクトルの解析により決定した。ブロモアレン部分の立体化学は旋光度から、その他の相対立体化学は、NOEなどより決定した。

IR ν_max（neat）cm^-1: 3490,3050,1957,1258,1165,1039,959,863,800,756
HRAPCIMS: m/z 466.8851 [calcd for C₁₅H₁₈ ⁷⁹Br₃O₂ ,466.8851]（M+H−H₂O)⁺, m/z 386.9590 [calcd for C₁₅H₁₇ ⁷⁹Br₂O₂ ,386.9590]（M−Br−H₂O)⁺
[<]_D ²⁴: −88.2（c 0.13, CHCl₃)
¹HNMR（CDCl₃): ^TM1.03(H-15), 1.47(H-14b), 1.81(H-5b), 1.97(H-13), 2.11(H-14a), 2.26(H-5a), 2.50(H-11b), 2.75(H-11a), 2.76(H-8), 3.79(H-12), 4.07(H-10), 4.56(H-6), 4.60(H-7), 4.73(H-4), 5.45(H-3), 6.08(H-1)
¹³CNMR（CDCl₃): ^TM11.5(C15), 24.7(C14), 39.3(C5), 44.3(C11), 44.7(C13), 50.5(C8), 51.3(C12), 53.6(C10), 73.8(C4), 74.1(C1), 79.4(C6), 81.7(C7), 99.4(C3), 102.1(C9), 201.9(C2)

この精製されたハチジョウジマレンA（Hachijojimallene A）は、タテジマフジツボのキプリス幼生の付着・変態を低濃度（EC₅₀ 0.15μg/mL）で阻害したが、毒性は低かった(LC₅₀ 9.8μg/mL)。

ローレンシン（Laurencin）の単離同定
北海道小樽市忍路湾で採集した紅藻ウラソゾ(50g, 半乾燥重量)をメタノール(1,000mL)で5日間浸漬抽出した。メタノール抽出物にフジツボ付着阻害活性（乾燥藻体の重量を基にして、10μg/mLで100%の付着阻害）が認められた。抽出液をエバポレーターを用いて減圧濃縮後、ジエチルエーテル(300 mL)と水(150 mL)で分配した。ジエチルエーテル層を無水硫酸ナトリウムで脱水、ろ過処理後に減圧濃縮した。得られた脂溶性画分(1.3 g)をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（100 g, メルク Kieselgel 60, 70〜230 mesh）に付し、ヘキサン200mL、ヘキサン/酢酸エチル（9:1）200 mL、ヘキサン/酢酸エチル（3:1）200 mL、ヘキサン/酢酸エチル（1:1）200 mL、酢酸エチル200 mLの順番で溶出した。ヘキサン/酢酸エチル(3:1)で溶出した画分の溶媒を除去して得られた結晶性物質を熱メタノールから再結晶して純粋なlaurencinを75mg得た。単離した化合物の各種スペクトルデータは非特許文献５のものと一致した。

この精製されたローレンシン（Laurencin）は、タテジマフジツボのキプリス幼生の付着・変態を低濃度（EC₅₀ 0.23μg/mL）で阻害した。また、100μg/mLにおいても幼生に対して全く毒性を示さなかった。

チルシフェロール（Thyrsiferol）の単離同定
北海道小樽市忍路湾で採集した紅藻マギレソゾ(43g, 乾燥重量)をメタノール(1,000mL)で3日間浸漬抽出した。メタノール抽出物にフジツボ付着阻害活性（乾燥藻体の重量を基にして、10μg/mLで100%の付着阻害）が認められた。抽出液をエバポレーターを用いて減圧濃縮後、ジエチルエーテル(300 mL)と水(150 mL)で分配した。ジエチルエーテル層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過処理後に減圧濃縮した。得られた脂溶性画分をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（100 g, メルク Kieselgel 60, 70〜230 mesh）に付し、ヘキサン200mL、ヘキサン/酢酸エチル（9:1）200 mL、ヘキサン/酢酸エチル（3:1）200 mL、ヘキサン/酢酸エチル（1:1）200 mL、酢酸エチル200 mLの順番で溶出した。酢酸エチルで溶出した画分を分取薄層クロマトグラフィー（メルク Kieselgel 60F_254S, 溶媒；ヘキサン/酢酸エチル(1:1)）および高速液体クロマトグラフィー（日本分光, カラム：Finepak SIL C18, UV: 215 nmで検出, 溶媒:水/メタノール(5:95)）で分離を行い、チルシフェロール（thyrsiferol）を4.0mg得た。単離した化合物の各種スペクトルデータは非特許文献７、８のものと一致した。

この精製されたチルシフェロール（Thyrsiferol）は、タテジマフジツボのキプリス幼生の付着・変態を低濃度（EC₅₀ 0.11μg/mL）で阻害した。また、幼生に対しての毒性は低かった(LC₅₀ 2.5μg/mL)。

マギレオールA（Magireol A）の単離同定
北海道小樽市忍路湾で採集した紅藻マギレソゾ(43g, 乾燥重量)をメタノール(1,000mL)で3日間浸漬抽出した。メタノール抽出物にフジツボ付着阻害活性（乾燥藻体の重量を基にして、10μg/mLで100%の付着阻害）が認められた。抽出液をエバポレーターを用いて減圧濃縮後、ジエチルエーテル(300 mL)と水(150 mL)で分配した。ジエチルエーテル層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過処理後に減圧濃縮した。得られた脂溶性画分(1.01 g)をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（100 g, メルク Kieselgel 60, 70〜230 mesh）に付し、ヘキサン200mL、ヘキサン/酢酸エチル（9:1）200 mL、ヘキサン/酢酸エチル（3:1）200 mL、ヘキサン/酢酸エチル（1:1）200 mL、酢酸エチル200 mLの順番で溶出した。ヘキサン/酢酸エチル(1:1)で溶出した画分を分取薄層クロマトグラフィー（メルク Kieselgel 60F_254S, 溶媒；ヘキサン/酢酸エチル(1:1)）および高速液体クロマトグラフィー（日本分光, カラム：Finepak SIL C18, UV: 215 nmで検出, 溶媒:水/メタノール(5:95)）で分離を行い、magireol-Aを2.5mg得た。単離した化合物の各種スペクトルデータは非特許文献９のものと一致した。

この精製されたマギレオールA（Magireol A）は、タテジマフジツボのキプリス幼生の付着・変態を低濃度（EC₅₀ 0.30μg/mL）で阻害した。また、幼生に対しての毒性は低かった(LC₅₀ 14.4μg/mL)。

本発明により、魚介類や人体に対する安全性が高い、海に存在する人工物、例えば、船、特に船底、スクリュープロペラ、舵、錨、鎖などの海中にある船の部分；漁網などの網；縄；浮き；ブイ；消波ブロック；護岸；海中構造物へのフジツボの付着を防止するための塗料、繊維、プラスチック、セメントコンクリートなどを提供できるようになる。

Claims

ローレンシアチルシフェラ（Laurencia thyrsifera）の有機溶媒抽出物であって、チルシフェロールを含有する前記有機溶媒抽出物からなるフジツボの付着防止剤。
式：

で示されるオマエザレン（Omaezallene）。
式：

で示されるハチジョウジマレンＡ（Hachijojimallene A）。
オマエザレン（Omaezallene）および／またはハチジョウジマレンＡ（Hachijojimallene A）を含む組成物。
ローレンシン、チルシフェロール、マギレオールＡ、オマエザレンおよびハチジョウジマレンＡからなる群の中から選択される少なくとも一つを、フジツボの付着防止剤として用いる方法。
請求項１に記載の付着防止剤を含む、組成物。
請求項１に記載の付着防止剤を、対象物に塗布すること、または対象物に含ませること、あるいは、請求項４または６に記載の組成物で、対象物を塗装すること、または対象物を作製することを含む、対象物をフジツボの付着から防止する方法。