JP5322940B2

JP5322940B2 - （Ｒｐ）−８−置換ｃＡＭＰＳを製造する方法

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Publication number: JP5322940B2
Application number: JP2009527896A
Authority: JP
Inventors: ウンデイム、ケール; アンドレイ、ミオアラ
Original assignee: ソルヴェルエーエス
Priority date: 2006-09-15
Filing date: 2007-09-17
Publication date: 2013-10-23
Anticipated expiration: 2027-09-17
Also published as: GB0618235D0; EP2081947A2; AU2007297329A1; US8304531B2; CA2662565C; CA2662565A1; AU2007297329B2; CN101589055A; WO2008032103A3; JP2010503652A; US20100137237A1; WO2008032103A2

Description

本発明は、（Ｒｐ）−８−置換アデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸またはその誘導体の新規製造方法に関する。

天然に存在するプリン・サイクリック・一リン酸、サイクリック・アデノシン・一リン酸（ｃＡＭＰ）およびサイクリック・グアノシン・一リン酸（ｃＧＭＰ）は、ホルモンの細胞機能に対する効果を仲介するのに重要なメッセンジャー分子である。

そのようなサイクリック・ヌクレオチドの類似体は、免疫機能を向上または低減することに関連した疾患を治療するのに用いられうることが提案されている。従ってそのような類似体の１つは、アデノシン・サイクリック・モノホスホロチオエート（ｃＡＭＰＳ）またはより正確にはアデノシン３’，５’−サイクリック・モノホスホロチオエートであり、この場合、リン原子からぶら下がっている酸素の１つが硫黄で置き換えられている。その結果、リンはキラル中心になり、Ｒｐ配置（リン原子において）の場合、ｃＡＭＰＳはｃＡＭＰアンタゴニストであり、一方、Ｓｐ配置（リン原子において）の場合、ｃＡＭＰアゴニストである。

ＨＩＶ治療の一部としてのｃＡＭＰアンタゴニストとしての（Ｒｐ）−ｃＡＭＰＳの使用は、例えばＷＯ９８／４８８０９（特許文献１）の実施例において提案されており、腫瘍性成長の阻害剤としてのｃＡＭＰＳの使用は、ＵＳ−Ａ−５８４３９１６（特許文献２）において提案されている。

様々な８−ヘテロ置換（Ｒｐ）−ｃＡＭＰＳ化合物が当該分野で公知であり、ブロモ、クロロおよびヨード化合物が含まれる。また、８−置換−ＯＨ誘導体、−ＳＲ誘導体（式中、Ｒはメチル、エチル、イソプロピル、フェニルまたは置換フェニルである）、−ＮＨＲ誘導体（式中、Ｒはヘキサンまたはシクロプロパン）および８−ピペリジノｃＡＭＰＳが知られている。

８−置換ｃＡＭＰＳの製造方法は公知であり、とりわけＷＯ２００５／１２３７５５（特許文献３）の方法、この文献には８−カルビル置換基をｃＡＭＰＳへ４つの方法により導入することが説明されている。まず最初に、８−ハロゲン化３’５’−サイクリック・ホスホロアミデートを８−カルビル化し、その後リンに結合した窒素を硫黄で置き換え、その反応ではキラルなリンの配置は保持され；２番目および３番目において、アデノシンを８−カルビル化し、その後、サイクリック・リン基を導入する；そして４番目に８−ハロｃＡＭＰＳを８−カルビル化する。

国際公開第９８／４８８０９号パンフレット米国特許第５８４３９１６号明細書国際公開第２００５／１２３７５５号パンフレット

ここで驚いたことに、従来知られていた８−置換（Ｒｐ）−ｃＡＭＰＳ（特に臭素の部分的８位交換、例えば、ある反応工程の間、塩素との臭素の部分的８位交換）の製造方法に関連した欠点が、反応試薬および反応条件を選択することにより著しく減じるか、または、予防さえすることができることを我々は見出した。以後、本発明を説明するが、本発明は、変換の間に８位において望ましくない更なる置換が著しく起こることなく、ホスホロアミデート中間体をそのホスホロチオエート類似体へ変換すること、それにより、実質的に純粋な生成物を製造することができることを可能にした。この生成物はさらに所望であれば制御して８位をさらに置換してもよい。

従って、本発明の一観点から、本発明は、（Ｒｐ）−８−置換アデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸またはその誘導体を製造する方法を提供する。この方法は、８−ブロモアデノシン−３’，５’−サイクリックリン酸をＰ−アミド化し、Ｐ−アミド体（アミデート）を塩基および二硫化炭素と反応させて（Ｒｐ）−８−ブロモアデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸またはその塩もしくはエステルを得る工程を含む。Ｐ−アミド化は、任意に置換された１級アミン、例えば、アリールアミン、アルキルアミンまたはアラルキルアミン、特に好ましくはベンジルアミンとの反応により行うことが好ましい。

酸形態とエステルまたは塩誘導体の形態との間の本発明に従う方法により、または方法に関連して生じた化合物の変換は、当業者であれば、方法のいずれの段階においても可能であることが容易に理解できるであろう。それ自体、リン酸またはホスホロチオ酸を参照することは、そのエステルまたはその塩の誘導体を含むことも意図する。

本発明の方法により生じうる（Ｒｐ）−８−置換−ｃＡＭＰＳの例には、式Ｉの化合物ならびにその塩およびエステルを含む。

［式中、
ＲはＦ、Ｂｒ、ＣｌもしくはＩまたはＲ¹Ｚを意味し、ここでＲ¹は：
（１）Ｃ_1-6−アルキル（直鎖状または分岐状であってもよい）もしくはＣ_3-7−シクロアルキル、Ｃ_2-6−アルキレンもしくはＣ_5-8−シクロアルキレン、
ここでいずれの基もヘテロ原子を挿入して有していてもよく、すなわち、オキサ誘導体としてのエーテルの一部であってもよく、チア誘導体としてのスルフィドの一部であってもよく、チア誘導体は酸化されてスルホキシドもしくはスルホンであってもよく、もしくは、アザ誘導体としてアミンの一部であってもよい；
（２）Ｃ_3-10−アリールもしくはＣ_3-10−ヘテロアリール、これらは１もしくはそれ以上の炭素原子もしくはヘテロ原子において、例えば、水素もしくは重水素により、還元され、部分的に還元されたアリールもしくはヘテロアリール基を生じてもよい；または
（３）ＮＨＲ²基、ここでＲ²は、上記（１）および（２）で定義したＲ¹と同様であり、ただし、Ｃ_1-4−ＣＯ、Ｃ_5-8−アリール−ＣＯもしくはＣ_5-8−ヘテロアリール−ＣＯ（アリールもしくはヘテロアリールは、上記（２）において定義したとおりである）も意味する］。

上記式Ｉにおいて、全てのヘテロアリール系は、酸素、硫黄および窒素からなる群から独立して選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む。

上記に定義した前記Ｒ¹基は、１またはそれ以上のハロゲン、（アルキル化、アリール化、ヘテロアリール化もしくはアシル化されたヒドロキシ誘導体およびそれらの硫黄類似体を含む）水酸基ならびに／または（アミノ基それ自体、上記のように置換されたり、もしくはアミドもしくはウレタン、カルボン酸もしくはエステルもしくはそのアミドの形態でアシル化された）アミノ基および／または環内もしくは鎖内においてオキソ基で独立して置換されていてもよい。

本発明の一実施形態において、（Ｒｐ）−８−置換アデノシン−３’，５’−サイクリックリン酸の２’−水酸基は、工程の全てまたは幾つかの間、保護基で保護されている。（Ｒｐ）−８−置換アデノシン−３’，５’−サイクリックリン酸の２’−水酸基は、Ｐ−アミド化の前は保護基で保護され、二硫化炭素との反応の後、脱保護されるのが好ましい。保護基は、シリル保護基、特にｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）保護基が好ましい。

本発明の方法において用いる塩基は、好ましくは強塩基、特にN-金属化アミン（ここで、金属はリチウム、マグネシウム、亜鉛、ナトリウム、カリウムまたはセシウムである）であるのが好ましい。

特に好ましいのは、３０より大きいｐＫａ値、例えば３１より大きいｐＫａ値、好ましくは３２より大きいｐＫａ値、さらに好ましくは３３より大きいｐＫａ値、または特に好ましくは３４を超えるｐＫａ値、たとえば、３０〜３５のｐＫａ値を有する２級アミンから誘導されたリチウムアミドであり、例えばＨＮＲ¹Ｒ²から誘導されたリチウムアミド（ここで、Ｒ¹およびＲ²は、同一または異なっていてもよく、任意に置換されたＣ_1-6−アルキル、Ｃ_3-6−シクロアルキル、フェニルおよびトリ（Ｃ_1-3−アルキル）シリルからなる群から選択されるか、または、Ｒ¹およびＲ²と一緒になってＮが、任意に置換された５員ヘテロ芳香族モノサイクリック基もしくは６員ヘテロ芳香族モノサイクリック基を形成してもよい）である。強塩基として特に好ましいのは、金属水素化物（例えば、水素化リチウム、水素化ナトリウムまたは水素化カリウム、特に水素化ナトリウム）、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ピロール、ジフェニルアミン、ジ−ｓｅｃ−ブチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−シクロヘキシルアミン、ビス−トリメチルシリルアミン、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−トリメチルシリルアミン、Ｎ−ネオペンチル−Ｎ−トリメチルシリルアミンおよびＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−トリメチルシリルアミンである。

他の同様なｐＫａ値を有するアミンから誘導されたＮ−金属化アミンも用いることができる。故に、特に好ましいのは、上記２級アミンから誘導されたマグネシウムアミド塩基である。これらは、モノアミン塩（例えば、ブロモ（ジイソプロピルアミノ）マグネシウム）もしくはジアミン（例えば、マグネシウムビス（ジイソプロピルアミン））のいずれかとして、または好ましくはＣ_1-6−アルキルマグネシウムアミド（例えば、ブチル−マグネシウムジイソプロピルアミン）として用いられてもよい。

また、特に好ましいのは、Ｒ¹Ｒ²ＮＭｇＣｌ・ＬｉＣｌ（ここで、Ｒ¹およびＲ²は、上記で定義したとおりである）の型の混合リチウム／マグネシウムアミドである。特に好ましい例は、Ｒ¹およびＲ²は、ｉ−プロピルである上記式の混合アミドであるか、または、Ｎ、Ｒ¹およびＲ²は、一緒になって２，２，６，６−テトラメチルピペリジノ塩を形成する上記式の混合アミドである。

また、特に好ましいのは、上記２級アミンから誘導される亜鉛アミド塩基である。リチウム（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，２，６，６−テトラメチルピペリジノ）亜鉛酸塩は、特に好ましい例である。

また、特に好ましいのは、いわゆる「超強塩基」、有機リチウム誘導体とより重いアルカリ金属アルコキシドの複合塩基、例えば、ｎ−ブチルリチウム−カリウム−ｔｅｒｔ−ブトキシドである。

本発明に従い用いることができる他の強塩基には、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドもしくはナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、および立体的に束縛されたＣ_1-6−アルキルリチウム誘導体（例えば、ｔｅｒｔ−もしくはｓｅｃ−ブチルリチウム）が含まれ、ある場合には、ｎ−ブチルリチウムも用いることができる。また、金属として好ましいのは、マグネシウム、例えば、アルキルマグネシウムハロゲン化物の形態、好ましくはイソプロピルマグネシウムクロライドである。

前記に定義した強い非求核性塩基を用いるホスホロアミデート中間体の脱プロトン化は、前記のように、選択した塩基と適合性な通常の溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタンまたは、テトラヒドロフランのようなエーテル型溶媒）において、−１００℃と１００℃の間、例えば−８０℃と室温の間、好ましくは−７８℃と０℃との間、より好ましくは−５０℃と−１０℃との間の温度で、１分から３時間の間、好ましくは１０分から２時間の間、特に３０分から９０分の長さ、行われるのが好ましい。

上記方法により製造された（Ｒｐ）−８−ブロモアデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸またはその塩もしくはエステルは、その後、８位を置換してもよい。好ましい実施形態において、本発明の方法は従って、他の置換基で８位において臭素を置き換える工程をさらに含む。この他の置換基は、例えば、チオール、アルコールもしくはフェノールまたは１級もしくは２級アミンであってもよい。この他の置換基は、当該分野の公知の方法、例えば求核置換を用いることにより、導入することができる。

臭素のこのヘテロ求核置換は、例えば、硫黄原子を保護基の付加により保護することにより、ホスホロチオ酸官能基をマスクした後、適切に行うことができる。このＳ−保護基は、好ましくはアルキル基、特に好ましくはｐ−ニトロベンジル基であり、ｐ−ニトロベンジル基は、例えば臭化ベンジルを用いてアルキル化することにより導入することができる。このＳ−保護基は、置換が起こった後、除去されるのが好ましい。保護基がｐ−ニトロベンジル基の場合、脱保護は、希水酸化ナトリウム、より好ましくは１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、またはｐ−チオクレゾールのようなチオールの存在下でＤＢＵの同属体を用いた緩和な条件下で行うことができる。

上記方法により製造される８−置換（Ｒｐ）−ｃＡＭＰＳは、医薬組成物に製剤化されていてもよい。本発明の別の実施形態は、従って、（Ｒｐ）−８−置換アデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸、またはその塩もしくはそのエステルを製造する方法を意図する。その方法は、（Ｒｐ）−８−置換アデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸またはその塩もしくはそのエステルを、１またはそれ以上の医薬的に許容される担体または賦形剤と混合することにより、医薬組成物に製剤化する工程をさらに含む。（Ｒｐ）−８−置換アデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸の塩またはエステルは、生理学的に許容されるその塩またはエステルであるのが好ましい。

さらなる観点から、従って、本発明は、本発明の方法により製造される生理学的に許容される８−置換（Ｒｐ）−ｃＡＭＰＳまたはその誘導体と、医薬的に許容される担体または賦形剤と共に含む医薬組成物を提供する。

本発明の組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、スプレー剤、液剤、分散剤、座薬等の通常の投与形態をとってもよい。活性剤は、１またはそれ以上の医薬的に許容される担体または賦形剤、例えば、溶媒（例えば注射剤用には水）、希釈剤、安定剤、粘度調整剤、ｐＨ調整剤、芳香剤、香味料、抗酸化剤等と混合し、通常のやり方で組成物を製造してもよい。

本発明の方法により製造された、または、本発明の方法において用いられた化合物の「塩」の用語は、その化合物がアミノ官能基のような適切な塩基性基を有する場合、内部塩を意味し、または、無機もしくは有機酸もしくは塩基との塩を意味する。好ましくは、生理学的に許容される無機酸（例えば、臭化水素酸、リン酸、硝酸、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸）または有機酸（例えばリンゴ酸、コハク酸，酢酸、フマル酸、マレイン酸、マンデル酸、乳酸、酒石酸およびクエン酸）との塩である。また好ましいものは、生理学的に許容される塩基（例えば、アルカリ金属水酸化物もしくはアルカリ土類金属水酸化物、例えば、水酸化ナトリウムもしくは水酸化カリウム、または炭酸塩、アンモニア、水酸化亜鉛もしくは水酸化アンモニウムまたは、有機アミン（例えば、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、シクロヘキシルアミンおよびジシクロヘキシルアミン、とりわけ））との塩である。

以下に本発明を詳細に説明するが、本発明を限定するものではない。

出発原料の製造（スキームＡ）：

出発原料は、市販で入手したｃＡＭＰである。国際出願ＷＯ２００５／１２３７５５号パンフレットに説明したように、大量スケールでの臭素化により、８−ブロモ誘導体を得た。リボースの２’−ＯＨ基を次いで巨大なシリル基で保護して、中間体シリルオキシ誘導体を得た。他のことの中で、シリル基は、相対的な溶解性に影響を与える。それぞれ塩化シリルをシリル化のために用いた。そのシリル化は、低温で行うとハロゲン交換（塩素イオンが臭素置換基を置き換えるであろう）（その塩素イオンは、塩化シリル試薬から発生する）を防止することができ、最も効果的に行われる。反応の間、低温に保ち、反応の後処理の前に反応媒体を中和することにより、ハロゲン交換を防止する。代わりとして、それぞれ、シリルトリフレート（シリルトリフルオロメタンスルホネート）を用いることによりハロゲン交換を排除することもできる。

（Ｒｐ）−８−ブロモアデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸（スキームＢ）の製造：

基質はスキームＡからのシリル保護されたブロム体である（実施例１）。アミド化は、低温で、ジクロロメタンとＴＨＦ中、塩化オキサリルとＤＭＦを用いて、リン酸の内部活性化を経て行われる。アミンでその後処理すると、アミデート（アミド）体が得られる。（Ｓｐ）−異性体のみが単離された。アリールアミン（例えば、アニリン）またはアルキルアミン（例えば、ベンジルアミン）のいずれかを、アミン化のために用いた。アミンの選択は、８−置換基の反応性に依る。強塩基をアミド体のアミド水素を抜き出すために用いる。金属アミド体は、次いで、二硫化炭素で処理して、付加体を形成する。次いで、転位によりホスホロチオエート体を生じる。

シリル保護は、フッ素イオンにより、例えば、ＤＭＦ中フッ化アンモニウム（室温で３〜５日間）を用いて、または、フッ化セシウム（室温で数時間）を用いて、切断することができる。

ホスホロチオ酸体は、アンモニウム塩として、好ましくはトリブチルアンモニウム塩として、精製することができる。アンモニウム塩は、所望であれば、金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウムを単に添加することにより、アルカリ金属塩へ変換することができる。

アニリンをアミド化に用いたとき、収率は４０〜６０％であった；ベンジルアミンを用いたとき、収率は６０〜８０％であった。カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドをアニリデート（anilidate）のチイレート化（thiylation）のための塩基として用い、ベンジルアミデートについては、リチウムアミド塩基、市販のＬＤＡを用いた。

（Ｒｐ）−８−ブロモアデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸の８−置換（スキームＣ）：

立体化学的に純粋な８−ブロモ−または８−クロロ−ｃＡＭＰＳを、ホスホロチオエート誘導体において８位へヘテロ置換基を導入するための基質として用いた。原則的には、誘導体の幾つかの系統は、対応するアミド体（アミデート）を経て立体選択的に製造された１種類のハロゲン基質から入手可能になった。ホスホロチオ酸段階におけるプリン環の８位の臭素のヘテロ求核的置換および位置選択的置換は、ホスホロチオ酸部分における硫黄の反応性のため、困難であろう。大部分の場合、予めのＳ−保護がスキームＣに示すように、有利であるか、または必要である。この場合、シリル保護基は最終工程まで残される。全体の安定性は、そのシリル基が早い段階で除去された場合、向上し、その結果、遊離水酸基化合物がスキームＤによる最終工程に用いられる。

８−ブロモアデノシン−３’，５’−サイクリックリン酸
臭素（１５．４ｍｌ，０．３０ｍｏｌ）をｃＡＭＰ（９８．８ｇ，０．３０ｍｏｌ）と酢酸ナトリウム・三水和物（８１．６ｇ，０．６０ｍｏｌ）の水（１．５Ｌ）中溶液に攪拌しながら１時間にわたって室温で添加した。２４時間後、亜硫酸ナトリウムを暗赤色が消えるまで、ゆっくりと添加した。沈殿物をろ過して集め、得られた固体を水、２−プロパノールおよびジエチルエーテルで洗浄し、減圧下に乾燥させた。生成物を水（５００ｍｌ）中に分散させ、重炭酸ナトリウム（１当量）をゆっくり添加して溶解させた。全ての材料が溶解したとき、少量の亜硫酸ナトリウムを添加して溶液の暗赤色を除去した。生成物の析出は１．０Ｍの臭化水素酸を激しく攪拌しながら滴下して添加することにより行った。得られた沈殿物を集め、水、２−プロパノール、ジエチルエーテルで洗浄し、高真空下に乾燥させて明黄色粉末を得た。
収量：９２．０ｇ（７６％）
¹ＨＮＭＲは文献と一致していた。

２’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−８−ブロモアデノシン−３’，５’−サイクリックリン酸トリブチルアンモニウム塩
（ａ）ＴＢＤＭＳ−Ｃｌを用いる
ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ（２．７２ｇ，１８ｍｍｏｌ）を８−Ｂｒ−ｃＡＭＰトリブチルアンモニウム塩（実施例４）（７．０ｇ，１１．８ｍｍｏｌ）とイミダゾール（２．４５ｇ，３６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍｌ）中溶液に室温で添加した。その混合物を６０℃で２０時間アルゴン雰囲気下で攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を水（１５０ｍｌ）中に懸濁させ、３０分間攪拌して全てのシリル化リン酸を加水分解し、１ＭのＨＢｒ（約１２ｍｌ，ｐＨ２〜３まで）をろ液に添加した。沈殿物をろ過して、水で洗浄して減圧下に乾燥させた。この酸をＭｅＯＨ（８０ｍｌ）中に懸濁させ、Ｂｕ₃Ｎ（５ｍｌ）を添加した。透明な溶液が得られるまで（約３０分）、得られた混合物を室温で攪拌した。溶媒は留去して除き、次の反応にそのまま用いるため、残渣を真空下Ｐ₂Ｏ₅で洗浄した。
収量：６．６０ｇ（７８％）の白色固体。

ＨＲＭＳ（エレクトロスプレー）：負のイオン測定値：Ｍ５２０．０４２７．計算値５２０．０４２２。
¹H NMR (DMSO-d₆, 300 MHz): δ 0.01 (3H, s, Si-CH₃), 0.03 (3H, s, Si-CH₃), 0.83 (9H, s, Si-t-Bu), 0.87 (9H, t), 1.28 (6H, m,), 1.53 (6H, m,), 2.79 (6H, m,), 3.90 (2H, m,), 4.11 (1H, m,), 5.02 (2H, m,), 7.53 (2H, s, NH₂), 8.15 (1H, s, H-2).
¹³C NMR (DMSO-d₆, 75 MHz): δ： -5.3, -4.7, 13.6, 18.0, 19.6, 25.6, 25.7, 51.9, 65.4, 72.3, 72.4, 76.2, 94.3, 119.2, 126.5, 150.0, 153.2, 155.0.
³¹P-NMR (CDCl₃, 81MHz): δ -1.36。

（ｂ）ＴＢＤＭＳ−トリフレートを用いる
ＴＢＤＭＳ−トリフレート（４．７５ｇ，４．１３ｍｌ，１８ｍｍｏｌ）を８−Ｂｒ−ｃＡＭＰトリブチルアンモニウム塩（実施例４）（５．３ｇ，８．９ｍｍｏｌ）とイミダゾール（１．７２ｇ，２７ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（４０ｍｌ）懸濁液に室温で添加した。その混合物を２０時間アルゴン雰囲気下に攪拌した。溶媒を除去し、残渣を水（１２０ｍｌ）中に懸濁させ、３０分間攪拌して全てのシリル化リン酸を加水分解し、１ＭのＨＢｒ（約１０ｍｌ，ｐＨ２〜３まで）をろ液に添加した。沈殿物をろ過して、水で洗浄して減圧下に乾燥させた。この酸をＭｅＯＨ（６０ｍｌ）中に懸濁させ、Ｂｕ₃Ｎ（４ｍｌ）を添加した。透明な溶液が得られるまで（約３０分）、得られた混合物を室温で攪拌した。溶媒は留去して除き、次の反応にそのまま用いるため、残渣を真空下Ｐ₂Ｏ₅で洗浄した。
収量４．９３ｇ（７８％）の白色固体、上記物性データを有する。

（Ｓｐ）−８−ブロモアデノシン−２’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３’，５’−サイクリックＮ−ベンジルホスホロアミデート
無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（４０ｍｌ）中の無水ＤＭＦ（０．３８５ｍｌ，５．００ｍｍｏｌ）をアルゴン・ガス雰囲気下に置き、０℃に冷却して、塩化オキサリル（３ｍｌ，２Ｍ、ＣＨ₂Ｃｌ₂中，６．０ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。冷却浴を除去して、懸濁液を室温で３０分間攪拌し、反応混合物を−６５℃まで冷却し、無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（３ｍｌ）中のトリブチルアンモニウム８−ブロモアデノシン−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−３’，５’−サイクリック一リン酸（実施例５）（４．７５０ｇ，６．７ｍｍｏｌ）溶液をテフロン（登録商標）チューブを通じて添加した。その混合物をこの温度で１時間攪拌し、無水（ＣａＨ₂）ベンジルアミン（２．８４ｍｌ，２６．８ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。１時間後、冷却浴を除去し、その反応混合物を室温で２時間攪拌し、混濁した反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で１２０ｍＬまで希釈し、冷飽和炭酸水素ナトリウム（２×５０ｍｌ）と共に振とうした。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥し、溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨ₂Ｃｌ₂中４％メタノールを用いてシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに付した。
収量２．０ｇ（４９％）の白色固体。

TOF MS ES⁺: 611.1/613.1;.
³¹P (CDCl₃, 121 MHz): δ 8.29;
¹H NMR (CDCl₃, 200 MHz): δ 0.03 および 0.04 (6H, 2 s, 2× Si-Me), 0.84 (9H, s, Si-tBu), 3.61 − 3.68 (1H, m), 4.13 − 4.21 (3H, m,), 4.35 − 4.56 (2H, m), 5.0 (1H, d, J 5.1 Hz,), 5.62 - 5.70 (1H, m,), 5.85 (2H, bs, NH₂), 5.91 (1H, s,), 7.25 - 7.33 (5H, m,), 8.21 (1H, s, H-2).

（Ｒｐ）−８−ブロモアデノシン−２’Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸
ＴＨＦ／ヘプタン／ジエチルエーテル（２ｍｌ，３．６ｍｍｏｌ）中のＬＤＡの１．８Ｍ溶液を、無水ＴＨＦ（３０ｍｌ）中の（Ｓｐ）−８−ブロモアデノシン−２’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３’，５’−サイクリックＮ−ベンジルホスホロアミデート（実施例６）（２．０ｇ，３．２７ｍｍｏｌ）の溶液へ−７８℃で添加した。その混合物をこの温度で２０分間攪拌し、ＣＳ₂（０．６ｍｌ，９．８１ｍｍｏｌ）を添加した。冷却浴を１０分後に除去した。その反応混合物を室温で３時間攪拌し、溶媒をロータリーエバポレーターで部分的に除去した。ヘキサンを析出が完全になるまで次いで添加した。その沈殿物を水（５０ｍｌ）に溶かし、１ＭのＨＢｒ（３．３ｍｌ）を０℃で添加した。（Ｒｐ）−８−ブロモアデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸をろ過して集めて、高真空下で終夜乾燥させた。

（Ｒｐ）−８−ブロモアデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸トリブチルアンモニウム塩
ＤＭＦ（１５ｍｌ）中の無水チオ酸生成物（実施例７）（１．７０ｇ，３．１６ｍｍｏｌ）の溶液を、ＮＨ₄Ｆ（０．７５０ｇ）と一緒に室温で５日間攪拌した。その反応混合物をろ過し、ＮＢｕ₃（１．１１ｇ，６ｍｍｏｌ）を透明溶液に添加し、溶媒を減圧下に除去した。残渣をヘキサンで洗浄し、過剰なＮＢｕ₃を除去し、残渣をＣＨ₂Ｃｌ₂：ＣＨ₃ＯＨ：ＮＢｕ₃（１００：１０：１）を用いてシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに付した。いくらかＮＢｕ₃を含有するアンモニウム塩をＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解させ、ヘキサンにより析出させることによりさらに精製し、ろ過により単離した。
収量１．１０５ｇの白色固体（実施例５の基質から５０％）。

TOF MS ES^-: 421.9/423.9;
³¹P (CDCl₃, 121 MHz): δ 57.28;
¹H NMR (CDCl₃, 200 MHz): δ 0.85 - 0.97 (9H, m,), 1.23 - 1.44 (6H, m,), 1.67 - 1.76 (6H, m,), 2.97 - 3.05 (6H, m,), 4.30 - 4.42 (3H, m,), 5.05 (3H, d, J 5 Hz, 1H), 5.27 5.45 (1H, m), 5.91 (1H, bs, NH₂), 5.98 (1H, s,), 8.18 (1H, s, H-2).

（Ｒｐ）−８−ブロモアデノシン−３’，５’−シクロホスホロチオ酸ナトリウム塩
（Ｒｐ）−８−ブロモアデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオエートトリブチルアンモニウム塩（実施例８）（１．０ｇ，１．６４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１７ｍｌ）中の０．１ＭのＮａＯＨ中へ溶かした。そのナトリウム塩をジエチルエーテルの添加により沈殿させ、ろ過して集めた。
収量０．６５０ｇの白色固体物質（８９％）。

MS ES^-: 421.9/423.9;
³¹P (MeOD, 121 MHz): δ 57.96;
¹H NMR (MeOD, 200 MHz): δ4.19 - 4.35 (3H, m,), 5.02 (1H, d, J 5.4 Hz), 5.38 - 5.46 (1H, m), 5.94 (1H, s), 8.18 (1H, s, H-2).

（Ｓｐ）−８−クロロアデノシン−２’Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３’，５’−サイクリックＮ−ベンジルホスホロアミデート
無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍｌ）中の無水ＤＭＦ（０．３２ｍｌ，４．２４ｍｍｏｌ）を、アルゴンガス雰囲気下に置き、０℃に冷却して、塩化オキサリル（１４．２ｍｌ，ＣＨ₂Ｃｌ₂中２Ｍ，２８．２５ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。冷却浴を除去し、懸濁液を室温で３０分間攪拌し、反応混合物を０℃まで冷却し、無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ）中のトリブチルアンモニウム８−ブロモアデノシン−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−３’，５’−サイクリック一リン酸（４．０ｇ，５．６５ｍｍｏｌ）の溶液をテフロン（登録商標）管を通して添加した。その混合物をこの温度で１時間攪拌し、室温になるまで放置し、溶媒を室温で除去した。固形物質をＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍｌ）に溶かし、無水（ＣａＨ₂）ベンジルアミン（３．７ｍｌ，３３．９ｍｍｏｌ）を０℃でアルゴン下に添加した。１０分後に冷却浴を除去し、その反応混合物を２時間室温で攪拌した。その混濁した反応混合物をろ過し、ろ液をＣＨ₂Ｃｌ₂で８０ｍｌまで希釈し、冷飽和炭酸水素ナトリウム（２×２５ｍｌ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄で乾燥し、溶媒を減圧下に除去し、残渣をＣＨ₂Ｃｌ₂中４％メタノールを用いてシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに付した。
収量２．２ｇ（６８％）の白色固体。

TOF MS ES⁺: 567.1/669.1;
³¹P (CDCl₃, 121 MHz): δ 8.29;
¹H NMR (CDCl₃, 200 MHz): δ 0.03 および 0.04 (2s, 6H 2×Si-Me), 0.84 (s, 9H, Si-tBu), 3.61 - 3.68 (m, 1H), 4.13 - 4.21 (m, 3H), 4.35 - 4.56 (m, 2H), 5.0 (d, J 5.1 Hz, 1H), 5.62 - 5.70 (m, 1H), 5.85 (bs, 2H, NH₂), 5.91 (s, 1H), 7.25 - 7.33 (m, 5H), 8.23 (s, 1H, H-2);
¹³C NMR (CDCl₃, 75 Mz): -5.1, -4.7, 18.1, 25.5, 45,3, 68.2, 71.3, 73.0, 76.3, 93.5, 118.3, 127.1, 127.5, 128.5, 137.4, 138.7, 150.0, 153.5, 154.6.

（Ｒｐ）−８−クロロアデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸トリブチルアンモニウム塩
ＴＨＦ／ヘプタン／エチルベンゼン（０．１７ｍｌ，０．３０ｍｍｏｌ）中のＬＤＡの１．８Ｍ溶液を、無水ＴＨＦ（５ｍｌ）中の（Ｓｐ）−８−クロロアデノシン−２’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３’，５’−サイクリック−Ｎ−ベンジルホスホロアミデート（実施例１０）（０．１６０ｇ，０．２８ｍｍｏｌ）の溶液へ−７８℃で添加した。その混合物を２０分間この温度で攪拌し、ＣＳ₂（０．０５ｍｌ，０．８５ｍｍｏｌ）を添加して、１０分後に冷却浴を除去した。その反応混合物を３時間室温で攪拌し、溶媒をロータリーエバポレーターで部分的に除去した。析出が完全になるまでヘキサンを添加した。その沈殿物を水（１０ｍｌ）に溶かし、１ＭのＨＢｒ（０．３５ｍｌ，ｐＨ２〜３）を０℃で添加した。生じた（Ｒｐ）−８−クロロアデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸をろ過して集めて、終夜乾燥させた。

ＤＭＦ（３ｍｌ）中の無水チオ酸（０．１０ｇ，０．２ｍｍｏｌ）の溶液を、ＮＨ₄Ｆ（０．０５０ｇ）と一緒に室温で５日間攪拌した。その反応混合物をろ過し、ＮＢｕ₃（０．０９０ｇ，０．５ｍｍｏｌ）を透明溶液に添加し、溶媒を減圧下に除去した。残渣をヘキサンで洗浄し、過剰のＮＢｕ₃を除去し、残渣をＣＨ₂Ｃｌ₂：ＣＨ₃ＯＨ：ＮＢｕ₃（１００：１０：１）を用いてシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに付した。ＮＢｕ₃を含有するアンモニウム塩をＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解させ、ヘキサンの添加により析出させることによりさらに精製した。
収量０．０７０ｇ（チオ酸から約５０％）の白色固体。

TOF MS ES^-:378.1/380.1;
¹H NMR (CDCl₃, 200 MHz): δ 0.90 - 0.98 (m, 9H), 1.28 - 1.44 (m, 6H), 1.68 - 1.76 (m, 6H), 2.97 - 3.07 (m, 6H), 4.25 - 4.42 (m, 3H), 5.03 (d, J 5.2 Hz, 1H), 5.28 - 5.48 (m, 1H), 5.81 (bs, 2H, NH₂), 5.99 (s, 1H), 8.19 (s, 1H, H-2).
¹³C NMR (CDCl₃, 75 Mz): 13.6, 20.1, 25.2, 51.9, 67.1, 71.7, 71.8, 76.2, 91.6, 118.5, 138.5, 150.3, 152.9, 154.1.

（Ｒｐ）−８−クロロアデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸ナトリウム塩
（Ｒｐ）−８−クロロアデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸トリブチルアンモニウム塩（実施例１１）（０．０５０ｇ，０．０７３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ中の０．１ＭのＮａＯＨ（０．８ｍｌ）中に溶かした。そのナトリウム塩をジエチルエーテルの添加により沈殿させた。
収量０．０３０ｇ（８５％）の白色固体物質。

TOF MS ES^-: 378.1/380.1;
¹H NMR (MeOH-d₄, 200 MHz): δ 4.25 - 4.45 (m, 3H), 5.02 (d, J 5.2 Hz, 1H), 5.28 - 5.45 (m, 1H), 6.02 (s, 1H), 8.2 (s, 1H, H-2).
¹³C NMR (MeOH-d4, 75 Mz): 59.1, 63.6, 64.25, 68.3, 84.5, 110.2, 129.8, 142.4, 145.3, 147.3.

Claims

（Ｒｐ）−８−置換アデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸、またはその塩もしくはエステルの製造方法であり、８−ブロモアデノシン−３’，５’−サイクリックリン酸をＰ−アミド化し、前記Ｐ−アミド体を塩基および二硫化炭素と反応させて（Ｒｐ）−８−ブロモアデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸またはその塩もしくはエステルを生じる工程を含み、前記塩基が金属アミドである製造方法。
請求項１に記載の製造方法であって、前記Ｐ−アミド化が、ベンジルアミンとの反応により行われる製造方法。
請求項１または２に記載の製造方法であって、８−ブロモアデノシン−３’，５’−サイクリックリン酸の前記２’−水酸基が、前記Ｐ−アミド化の前に保護基により保護され、二硫化炭素との反応の後に脱保護される製造方法。
請求項３に記載の製造方法であって、前記保護基が、シリル保護基である製造方法。
請求項１〜４のいずれか１つに記載の製造方法であって、前記塩基が、Ｎ−金属化アミン（ここで、金属はリチウム、マグネシウム、亜鉛、ナトリウム、カリウムまたはセシウムである）である製造方法。
請求項５に記載の製造方法であって、前記塩基が、リチウムジイソプロピルアミドである製造方法。
請求項１〜６のいずれか１つに記載の製造方法であって、８位における臭素を別の置換基と置き換える工程をさらに含む製造方法。
請求項１〜７のいずれか１つに記載の製造方法であって、（Ｒｐ）−８−置換アデノシン−３’，５’−サイクリックホスホロチオ酸またはその塩もしくはエステルを、１またはそれ以上の医薬的に許容される担体または賦形剤と混合することにより医薬組成物へ製剤化する工程をさらに含む製造方法。