JP5299078B2 - レーザ走査顕微鏡、3次元画像取得方法、及びプログラム - Google Patents
レーザ走査顕微鏡、3次元画像取得方法、及びプログラム Download PDFInfo
- Publication number
- JP5299078B2 JP5299078B2 JP2009118295A JP2009118295A JP5299078B2 JP 5299078 B2 JP5299078 B2 JP 5299078B2 JP 2009118295 A JP2009118295 A JP 2009118295A JP 2009118295 A JP2009118295 A JP 2009118295A JP 5299078 B2 JP5299078 B2 JP 5299078B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- light
- dimensional
- scanning
- sample
- observation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 66
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 58
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 49
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 claims description 26
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 claims description 26
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 20
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 17
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000005484 gravity Effects 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 67
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 32
- 230000008569 process Effects 0.000 description 23
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 16
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 11
- 241000208140 Acer Species 0.000 description 9
- 206010036618 Premenstrual syndrome Diseases 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 4
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 3
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 239000013307 optical fiber Substances 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Microscoopes, Condenser (AREA)
Description
Claims (7)
- 光源からの光を試料上で2次元走査する走査手段と、前記走査手段と前記試料との間に配置された対物レンズと、前記対物レンズの光軸方向に沿って、前記対物レンズによる前記光の集光位置を変化させる駆動手段とを備えるレーザ走査顕微鏡であって、
前記試料に含まれ、観察対象において特定された観察部位に含まれる蛍光蛋白質の励起特性を変化させるための光を照射する励起特性変化手段と、
前記励起特性変化手段により前記観察部位に含まれる蛍光蛋白質の励起特性が変化された後、前記観察部位の3次元詳細画像を生成する3次元詳細画像生成手段と
を備え、
前記3次元詳細画像生成手段は、
前記光源からの光の波長を、前記励起特性変化手段により励起特性を変化させた蛍光蛋白質の励起波長に設定する光源設定手段と、
前記光源設定手段により光源からの光の波長が設定された状態で、前記駆動手段によって前記光の集光位置を第1の移動量毎に変化させながら、前記走査手段によって、前記光を前記観察部位を含む試料上で2次元走査させて、前記集光位置毎に第1の2次元画像を取得する第1の2次元画像取得手段と、
前記第1の2次元画像のそれぞれにおいて、輝度値に基づいて前記観察部位の位置を特定して、前記観察部位を含む走査領域を設定する走査領域設定手段と、
前記駆動手段によって前記光の集光位置を、前記第1の移動量より小さい第2の移動量毎に変化させながら、前記走査手段によって、前記光を前記設定された走査領域で2次元走査させて、前記集光位置毎に第2の2次元画像を取得する第2の2次元画像取得手段と、
前記取得された複数の前記第2の2次元画像を用いて前記観察部位の3次元画像を生成する3次元画像生成手段と
を備えることを特徴とするレーザ走査顕微鏡。 - 前記試料には、フォトコンバージョンタイプの蛍光蛋白質が予め含まれており、
前記励起特性変化手段は、UVレーザ光を照射することにより、前記蛍光蛋白質の励起特性を変化させる
ことを特徴とする請求項1に記載のレーザ走査顕微鏡。 - 前記走査領域設定手段は、前記走査領域を、前記第1の2次元画像の所定の閾値以上の輝度値を有する領域の重心を中心として決定する
ことを特徴とする請求項1又は2に記載のレーザ走査顕微鏡。 - 前記走査領域設定手段は、前記走査領域の大きさが全て同じになるように設定する
ことを特徴とする請求項1から3のいずれか一項に記載のレーザ走査顕微鏡。 - 前記走査領域設定手段は、前記走査領域の大きさが必要最小限あって、個別の大きさとなるように設定する
ことを特徴とする請求項1から3のいずれか一項に記載のレーザ走査顕微鏡。 - 試料に含まれ、観察対象において特定された観察部位に含まれる蛍光蛋白質の励起特性を変化させるための光を照射する励起特性変化ステップと、
前記励起特性変化ステップの処理によって前記観察部位に含まれる蛍光蛋白質の励起特性が変化された後、前記観察部位の3次元詳細画像を生成する3次元詳細画像生成ステップと
を含み、
前記3次元詳細画像生成ステップは、
光源からの光の波長を、前記励起特性変化ステップの処理によって励起特性を変化させた蛍光蛋白質の励起波長に設定する光源設定ステップと、
前記光源設定ステップの処理によって光源からの光の波長が設定された状態で、前記光の集光位置を第1の移動量毎に変化させながら、前記光を前記観察部位を含む試料上で2次元走査させて、前記集光位置毎に第1の2次元画像を取得する第1の2次元画像取得ステップと、
前記第1の2次元画像のそれぞれにおいて、輝度値に基づいて前記観察部位の位置を特定して、前記観察部位を含む走査領域を設定する走査領域設定ステップと、
前記光の集光位置を、前記第1の移動量より小さい第2の移動量毎に変化させながら、前記光を前記設定された走査領域で2次元走査させて、前記集光位置毎に第2の2次元画像を取得する第2の2次元画像取得ステップと、
前記取得された複数の前記第2の2次元画像を用いて前記観察部位の3次元画像を生成する3次元画像生成ステップと
を含むことを特徴とする3次元画像取得方法。 - コンピュータに、
試料に含まれ、観察対象において特定された観察部位に含まれる蛍光蛋白質の励起特性を変化させるための光を照射する励起特性変化ステップと、
前記励起特性変化ステップの処理によって前記観察部位に含まれる蛍光蛋白質の励起特性が変化された後、前記観察部位の3次元詳細画像を生成する3次元詳細画像生成ステップと
を実行させるプログラムであって、
前記3次元詳細画像生成ステップは、
光源からの光の波長を、前記励起特性変化ステップの処理によって励起特性を変化させた蛍光蛋白質の励起波長に設定する光源設定ステップと、
前記光源設定ステップの処理によって光源からの光の波長が設定された状態で、前記光の集光位置を第1の移動量毎に変化させながら、前記光を前記観察部位を含む試料上で2次元走査させて、前記集光位置毎に第1の2次元画像を取得する第1の2次元画像取得ステップと、
前記第1の2次元画像のそれぞれにおいて、輝度値に基づいて前記観察部位の位置を特定して、前記観察部位を含む走査領域を設定する走査領域設定ステップと、
前記光の集光位置を、前記第1の移動量より小さい第2の移動量毎に変化させながら、前記光を前記設定された走査領域で2次元走査させて、前記集光位置毎に第2の2次元画像を取得する第2の2次元画像取得ステップと、
前記取得された複数の前記第2の2次元画像を用いて前記観察部位の3次元画像を生成する3次元画像生成ステップと
を含むことを特徴とするプログラム。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009118295A JP5299078B2 (ja) | 2009-05-15 | 2009-05-15 | レーザ走査顕微鏡、3次元画像取得方法、及びプログラム |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009118295A JP5299078B2 (ja) | 2009-05-15 | 2009-05-15 | レーザ走査顕微鏡、3次元画像取得方法、及びプログラム |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010266709A JP2010266709A (ja) | 2010-11-25 |
JP2010266709A5 JP2010266709A5 (ja) | 2012-06-28 |
JP5299078B2 true JP5299078B2 (ja) | 2013-09-25 |
Family
ID=43363721
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009118295A Active JP5299078B2 (ja) | 2009-05-15 | 2009-05-15 | レーザ走査顕微鏡、3次元画像取得方法、及びプログラム |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5299078B2 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2798443B1 (en) * | 2011-12-28 | 2018-12-19 | Femtonics Kft. | Method for the 3-dimensional measurement of a sample with a measuring system comprising a laser scanning microscope and such measuring system |
JP6010450B2 (ja) * | 2012-12-20 | 2016-10-19 | 浜松ホトニクス株式会社 | 光観察装置及び光観察方法 |
JP2017044752A (ja) * | 2015-08-24 | 2017-03-02 | オリンパス株式会社 | 顕微鏡システム、制御方法、プログラム、貼り合わせ画像生成方法 |
JP7226316B2 (ja) * | 2016-09-02 | 2023-02-21 | フェムトニクス・カーエフテー | 三次元ラインに沿った走査方法及び複数三次元ラインの走査による関心領域の走査方法 |
US10871640B2 (en) * | 2019-02-15 | 2020-12-22 | Perkinelmer Cellular Technologies Germany Gmbh | Methods and systems for automated imaging of three-dimensional objects |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4020638B2 (ja) * | 2001-12-28 | 2007-12-12 | オリンパス株式会社 | 走査型レーザ顕微鏡システム |
JP4756819B2 (ja) * | 2003-10-21 | 2011-08-24 | オリンパス株式会社 | 走査型顕微鏡システム |
JP4700299B2 (ja) * | 2004-07-07 | 2011-06-15 | オリンパス株式会社 | 共焦点走査型顕微鏡 |
JP5112832B2 (ja) * | 2006-12-11 | 2013-01-09 | オリンパス株式会社 | 顕微鏡対物レンズ及びそれを用いた蛍光観察装置 |
-
2009
- 2009-05-15 JP JP2009118295A patent/JP5299078B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2010266709A (ja) | 2010-11-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20210173195A1 (en) | Systems and Methods for Three-Dimensional Imaging | |
JP6899963B2 (ja) | リアルタイムの自動焦点調節走査 | |
EP2997353B1 (en) | Microscopy of a tissue sample using structured illumination | |
JP5698398B2 (ja) | スライド全体蛍光スキャナ | |
JP4756819B2 (ja) | 走査型顕微鏡システム | |
JP5299078B2 (ja) | レーザ走査顕微鏡、3次元画像取得方法、及びプログラム | |
US20150153559A1 (en) | Image processing apparatus, imaging system, and image processing system | |
JP7239324B2 (ja) | 生物試料の向上された被写界深度の合成2d画像を生成するシステム | |
US20150109432A1 (en) | Scanner With Increased Dynamic Range | |
EP2807974A1 (en) | Information processing apparatus, information processing method and computer program | |
JP7064796B2 (ja) | 画像再構成方法、装置及び顕微結像装置 | |
US10753871B2 (en) | Information processing device, image acquisition system, information processing method, and image information acquisition method | |
CA2996231C (en) | Scan-based imaging with variable scan speed using predictions of region-of-interest positions | |
KR20120140672A (ko) | 촬상장치 및 촬상 방법 | |
JP2006023476A (ja) | 共焦点走査型顕微鏡 | |
JP7030986B2 (ja) | 画像生成装置、画像生成方法および画像生成プログラム | |
JP2014063041A (ja) | 撮影解析装置、その制御方法及び撮影解析装置用のプログラム | |
JP2014063019A (ja) | 撮影解析装置、その制御方法及び撮影解析装置用のプログラム | |
JP4855139B2 (ja) | 顕微鏡装置および細胞観察方法 | |
JP4350365B2 (ja) | レーザ走査型顕微鏡 | |
JP2006084960A (ja) | 3次元共焦点顕微鏡システム | |
JP4803974B2 (ja) | 共焦点観察システム、光照射方法、及び光照射プログラム | |
JP6617774B2 (ja) | 顕微鏡装置 | |
JP2007219406A (ja) | 走査型顕微鏡 | |
JP2021501913A (ja) | 試料を走査するための方法および装置 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120502 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120510 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20130218 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130221 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130418 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20130521 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20130603 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5299078 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |