JP5179815B2 - 骨形成剤および骨形成方法 - Google Patents
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粉末タイプのエムドゲイン(登録商標)(BIORA社製、スウェーデン)をプロピレングリコールに30.0mg/mLになるように調整し、それを6週齢オスのSprague-Dawleyラット背部皮下に接種し7日後に形成された円形小体を切除した。すなわち、組織をホルマリン固定後、パラフィン包埋し、厚さ7μmの切片としてスライドガラスに貼付し、40℃のパラフィン乾燥機中で乾燥させた。それを実体顕微鏡下で円形小体に相当する部分を残し、他部位を外科用メス(No.11、ケイセイ医科工業、東京)によって除去した。円形小体を掻き集め、サンプルチューブ中のLaemmliサンプルバッファーに溶解し、溶解液を12.5%SDS−ポリアクリルアミドゲルで55分、40mA電気泳動後、40%メタノールと15%エタノールでゲルを固定して渡銀染色を行い、タンパク質を具視化した。具視化したタンパク質をゲルから切り取り、50mM重炭酸アンモニウムで調整した12.5μg/Lトリプシン中で37℃、一晩、ペプチドをフラグメント化した。試料は10mg/mLの2,5ジヒドロキシ安息香酸蒸留水中で結晶化した。それを直行MALDI−Qq−TOF MS/MS QSTARPulsar i(アプライドバイオシステムズ製、フォスターシティー、カリフォルニア、米国)によって解析した。
ペプチドWYQNMIR(配列番号1)を15.0mg/mLになるように蒸留水に溶解し、その1mLを氷水中で冷却し、後の摘出に備え、注射部位が良く分かるように、歯科用アルギン酸塩印象材(ニッシン製、アルフレックスダストフリーノーマルセット、医療用具許可番号26BZ5014、京都)40mgを加えて混和した。それを19G×1 1/2(外径1.10mm、内径0.78mm)針付きの1mL用のテルモシリンジを用いて0.3mLをSprague-Dawleyラット背部皮下に注射した。注射14日後の組織を切除し、ホルマリン固定し、パラフィン切片とし、ヘマトキシリン・エオジン染色を行い、赤紫に染色された骨組織1と青紫に染色された軟骨組織2、さらには軟骨組織にカルシウムの沈着が進んだ石灰化軟骨組織3が見られる、軟骨性骨化を示す組織像を確認した(図1)。
2 軟骨組織
3 石灰化軟骨組織
Claims (3)
- 少なくとも、
a)配列番号1記載のアミノ酸配列からなるペプチド、
b)配列番号2記載のアミノ酸配列からなるペプチド、または
c)a)記載のペプチドもしくはb)記載のペプチドにアミノ酸が1〜7個付加されたペプチド、
またはその薬学的に許容し得る塩を含有する骨形成剤。 - 前記ペプチドの含有量が7.5〜30mg/mLである請求項1記載の骨形成剤。
- 請求項1記載の骨形成剤を有効成分に換算して10〜60mg/kgを局所的に投与することによる、ヒトを除く動物における骨の形成方法。
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