JP2006076980A - 歯の再生材料とこれを利用した歯の再生方法 - Google Patents
歯の再生材料とこれを利用した歯の再生方法 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】 アメロジェニンを主成分とするエナメルマトリックスを含有する歯の再生材料とする。
【選択図】 なし
Description
1.アメロジェニンの作成
アメロジェニンをマウス由来のアメロジェニン遺伝子(cDNA配列)から合成した。具体的には、まず、図1に示したマウス由来のアメロジェニンcDNA配列(配列番号1)を鋳型として、5’側のプライマー(forward primer)である「5'-tacccctggacctaaaacaaacggacggag-3'」(配列番号3)と、3’側プライマー(reverse primer)である「5'-ctgttctggttcgcccttcttcacctaatt-3'」(配列番号4)をそれぞれ用いて、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR反応)を行い、アメロジェニン遺伝子のクローニングを行った。
2.アメロジェニンからなる歯の再生材料の評価
上記1.にて精製されたアメロジェニンの効果を評価した。具体的には、歯周細胞としてHAT-7細胞(ラットエナメル上皮細胞)を使用し、このHAT-7細胞を2.5×105細胞/ウエルで12ウエルプレートに播種し、細胞密度が約100%になるまで培養した。なお、培養液にはD-MEM/F-12(GIBCO社製)に10%FBSを加えたものを用いた。培養後、アメロジェニンを、0μg/ml、1μg/ml、2μg/mlまたは4μg/mlを添加し、その効果を評価した。
3.アメロジェニンの濃度変化におけるアメロジェニンのmRNA発現量
アメロジェニンの濃度変化における、アメロジェニンのmRNA発現量を評価するため、まず、上記2.と同様にHAT-7細胞を細胞密度が約100%になるまで培養した。培養後のHAT-7細胞からRNAを公知の方法(たとえば、グアニジン-塩化セシウム超遠心法やAGPC法)に従って抽出し、リアルタイムPCR(サイバーグリーン法)でアメロジェニン遺伝子(mRNA)の発現量を定量した。
4.アメロジェニンの時間経過におけるアメロジェニンのmRNA発現量
アメロジェニンの時間経過における、アメロジェニンのmRNA発現量を評価した。まず、上記2.および3.と同様に、HAT-7細胞を細胞密度約100%になるまで培養した。培養後のHAT-7細胞に、アメロジェニンを3μg加え、0-3日間培養した。そして、それぞれの培養日数が経過したHAT-7細胞からRNAを公知の方法(たとえば、グアニジン-塩化セシウム超遠心法やAGPC法)に従って抽出し、リアルタイムPCR(サイバーグリーン法)でアメロジェニン遺伝子(mRNA)の発現量を定量した。
実施例2:アメロジェニン、ハイドロキシアパタイトおよび歯周前駆細胞からなる複合型の歯の再生材料
1.アメロジェニン、ハイドロキシアパタイトおよび歯周前駆細胞からなる複合型の歯の再生材料の作成
a軸c軸がランダム配向したΦ20nmハイドロキシアパタイト焼結体に、0μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、3μg/mlまたは4μg/mlの実施例1の1.にて得られたアメロジェニンを塗布し、さらに、その上に歯周前駆細胞としてHAT-7細胞(ラットエナメル上皮細胞)を2.5×104細胞播種し、細胞密度がコンフルエントの状態から、さらに3日間培養した。なお、培養液にはD-MEM/F-12(GIBCO社製)に10%FBSを加えたものを用いた。
2.複合型の歯の再生材料の評価
つぎに、培養後のHAT-7細胞からRNAを公知の方法(たとえば、グアニジン-塩化セシウム超遠心法やAGPC法)に従って抽出し、リアルタイムPCR(サイバーグリーン法)でアメロジェニン遺伝子(mRNA)の発現量を定量することで、歯周細胞の分化誘導の評価を行った。
2 ハイドロキシアパタイト
3 HAT-7細胞
Claims (7)
- アメロジェニンを主成分とするエナメルマトリックスを含有することを特徴とする歯の再生材料。
- エナメルマトリックスが、生体吸収性物質によりゲル化されている請求項1記載の歯の再生材料。
- エナメルマトリックスに、ハイドロキシアパタイトを複合させてなる請求項1または2に記載の歯の再生材料。
- ハイドロキシアパタイトが、プレート状またはパーティクル状に形成されている請求項3記載の歯の再生材料。
- 歯周組織前駆細胞をさらに含有させてなる請求項1から4いずれかに記載の歯の再生材料。
- 請求項1、2および5いずれかに記載の歯の再生材料を、ハイドロキシアパタイトがコートされているインプラントに付着させていることを特徴とする歯の再生材料。
- 請求項1から5いずれかに記載の歯の再生材料を、歯の欠損箇所に充填して歯周組織を構成する歯周細胞の分化誘導を促進させ、歯を再生させることを特徴とする歯の再生方法。
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