JP5112692B2 - フォンビルブランド因子(vwf)マルチマーを検出する方法およびシステム - Google Patents
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Description
本出願は、2003年7月7日に出願された、米国仮出願番号60/485,526の優先権を主張するものであり、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は一般に、分光分析法、詳細には電気泳動スペクトル解析法についての方法およびシステムに関する。
Claims (65)
- フォンビルブランド因子(vWF)マルチマーの電気泳動度分布を分析する方法であって、
複数のvWFマルチマーを含むサンプル媒体を生成することと、
前記サンプル媒体に電界を印加することによって、前記サンプル媒体中の電気泳動度により前記vWFマルチマーを電気泳動的に分離して、分離されたvWFマルチマーを生成することと、
前記サンプル媒体中の前記分離されたvWFマルチマーを光源に露出して散乱光を生成することと、
前記散乱光を検出することと、
前記分離されたvWFマルチマーの電気泳動度分布を前記検出された散乱光から決定することと
を含む方法。 - 前記分離されたvWFマルチマーの大きさおよび/または重量分布を前記検出された散乱光から算出することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記電気泳動度分布に基づいてvWF異常および/または疾患を特定することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記vWF異常および/または疾患は、I型vWF病、II型vWF病、III型vWF病、IIA特殊型vWF病、IIB特殊型vWF病、IIM特殊型vWF病、血小板減少性血栓性紫斑病(TTP)および溶血性尿毒症症候群(HUS)からなるグループから選択される、請求項3に記載の方法。
- 前記特定する工程は、前記電気泳動度分布を一連のvWF異常および/または疾患に対応するパラメータと比較することを含む、請求項3に記載の方法。
- 前記パラメータは、前記一連のvWF異常および/または疾患に対応する複数のスペクトルに基づいている、請求項5に記載の方法。
- 前記電気泳動度分布に基づいてADAMTS異常および/または疾患を特定することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記サンプル媒体の光子相関分光法(PCS)スペクトルを生成することと、
前記試料のPCSスペクトルに基づいて分子の粒度分布を決定することと
をさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記分子の粒度分布と前記電気泳動度分布とに基づいてvWF異常および/または疾患を特定することをさらに含む、請求項8に記載の方法。
- 前記決定工程は電気泳動準弾性光散乱分析によって実行される、請求項1に記載の方法。
- 前記決定工程は、
測定された自己相関関数からの散乱光に位相シフトを検出することと、
入射光と比較した散乱光のドップラーシフトを検出することと、
その後に散乱粒子の電気泳動度を算出することと
によって実行される、請求項1に記載の方法。 - 前記光源はコヒーレント光源である、請求項1に記載の方法。
- 前記サンプル媒体は容器内に供給され、前記電気泳動的に分離する工程は前記容器内の前記サンプル媒体を用いて実行される、請求項1に記載の方法。
- 前記サンプル媒体は容器内に供給され、前記露出工程と前記検出工程とは両方とも前記容器内の前記サンプル媒体を用いて実行される、請求項1記載の方法。
- 前記電気泳動的分離工程と、前記露出工程と、前記検出工程との合計時間は、5分未満で実行される請求項1に記載の方法。
- 前記電気泳動的分離工程と、前記露出工程と、前記検出工程との合計時間は、1分未満で実行される請求項1に記載の方法。
- 前記決定された電気泳動度分布は、分子量が1000万以上のvWFマルチマーを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記決定された電気泳動度分布は、分子量が2000万以上のvWFマルチマーを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記サンプル媒体を生成する工程は、
血漿サンプルを生成することと、
前記血漿サンプルからvWFを精製して前記サンプル媒体を生成することと
によって実行される、請求項1に記載の方法。 - 前記フォンビルブランド因子マルチマーはヒトフォンビルブランド因子マルチマーである、請求項1に記載の方法。
- サンプル媒体中のフォンビルブランド因子(vWF)分解酵素の存在を決定する方法であって、
vWFマルチマーの量を含むサンプル媒体を生成することと、
酵素が前記サンプル中に存在すると、前記サンプル媒体の高分子量のvWFマルチマーが分解されるようにvWF分解酵素を含むと思われる試料を前記サンプル媒体に加えることと、
前記サンプル媒体に電界を印加することによって、前記サンプル媒体中で電気泳動移動度により前記vWFマルチマーを電気泳動的に分離して、分離されたvWFマルチマーを生成することと、
前記サンプル媒体中の前記分離されたvWFマルチマーを光源に露出して散乱光を生成することと、
前記散乱光を検出することと、
前記分離されたvWFマルチマーの電気泳動度分布を前記検出された散乱光から決定することと、
前記電気泳動度分布から前記vWF分解酵素の有無を決定することと
を含む方法。 - 前記検出された散乱光から前記分離されたvWFマルチマーの大きさおよび/または重量分布を算出することをさらに含む、請求項21に記載の方法。
- 前記サンプル媒体の光子相関分光法(PCS)スペクトルを生成することと、
前記サンプルの前記PCSスペクトルに基づいて分子の粒度分布を決定することと
をさらに含む、請求項21に記載の方法。 - 前記分子の粒度分布と前記電気泳動度分布とに基づいて前記vWF分解酵素の有無を決定することをさらに含む、請求項23に記載の方法。
- 前記vWF分解酵素はADAMTS13である、請求項21に記載の方法。
- 前記光源はコヒーレント光源である、請求項21に記載の方法。
- 前記決定工程は電気泳動準弾性光散乱分析によって実行される、請求項21に記載の方法。
- 前記サンプル媒体は容器内に供給され、前記電気泳動的に分離する工程は前記容器内の前記サンプル媒体を用いて実行される、請求項21に記載の方法。
- 前記サンプル媒体は容器内に供給され、前記露出工程と前記検出工程とは両方とも前記容器内の前記サンプル媒体を用いて実行される、請求項21に記載の方法。
- 前記電気泳動的分離工程と、前記露出工程と、前記検出工程は合計時間が5分未満で実行される、請求項21に記載の方法。
- 前記電気泳動的分離工程と、前記露出工程と、前記検出工程は合計時間が1分未満で実行される、請求項21に記載の方法。
- 前記決定された電気泳動度分布は、分子量が1000万以上のvWFダイマーを含む、請求項21に記載の方法。
- 前記フォンビルブランド因子マルチマーはヒトフォンビルブランド因子マルチマーである、請求項21に記載の方法。
- サンプル媒体中のフォンビルブランド因子(vWF)マルチマーの電気泳動度分布を分析するシステムであって、
前記システムは、
前記vWFマルチマーを電気泳動的に分離し、サンプル媒体のvWFマルチマーに対してEQELSスペクトルを生成するよう構成された電気泳動準弾性光散乱(EQELS)制御器を備えたEQELS分光計と、
前記EQELS分光計と通信するEQELS分析器と
を備え、前記EQELS分析器は前記EQELSスペクトルからの前記分離されたvWFマルチマーの電気泳動度分布を決定するよう構成されているシステム。 - 前記EQELS分析器は、前記電気泳動度分布に基づいてvWF異常および/または疾患を特定するように構成されている、請求項34記載のシステム。
- 前記EQELS分析器は、さらに、前記電気泳動度分布を一連のvWF異常および/または疾患に対応するパラメータと比較するように構成されている、請求項34に記載のシステム。
- 前記パラメータは、前記一連のvWF異常および/または疾患に対応する複数のスペクトルに基づいている、請求項36に記載のシステム。
- 前記EQELS分析器は、さらに、前記電気泳動度分布に基づいてADAMTS異常および/または疾患を特定するように構成されている、請求項34に記載のシステム。
- 前記EQELS分光計は、さらに、サンプル媒体の光子相関分光法(PCS)スペクトルを生成するように構成され、
前記EQELS分析器は、さらに、前記サンプルの前記PCSスペクトルに基づいて分子の粒度分布を決定するように構成されている、請求項34に記載のシステム。 - 前記EQELS分析器は、前記分子の粒度分布と前記電気泳動度分布とに基づいてvWF異常および/または疾患を特定するように構成されている、請求項39に記載のシステム。
- サンプル媒体のvWFマルチマーの電気泳動度および/または粒度分布を検出する方法であって、
前記サンプル媒体にエネルギーを照射してエネルギー相互作用出力を生成するステップであって、前記照射エネルギーは、前記サンプル媒体上に照射する光エネルギーを含む、ステップと、
前記エネルギー相互作用出力に基づいて前記サンプル媒体のvWFマルチマーの電気泳動度分布および/または粒度分布を決定するステップと、
光子相関分光法(PCS)静的光散乱を用いて、vWFマルチマーの粒度分布を決定することと
を含む方法。 - サンプル媒体のvWFマルチマーの電気泳動度および/または粒度分布を検出する方法であって、
前記サンプル媒体にエネルギーを照射してエネルギー相互作用出力を生成するステップであって、前記照射エネルギーは、前記サンプル媒体上に照射する光エネルギーを含む、ステップと、
前記エネルギー相互作用出力に基づいて前記サンプル媒体のvWFマルチマーの電気泳動度分布および/または粒度分布を決定するステップと、
電気泳動準弾性光散乱法(EQELS)および/またはキャピラリーゾーン電気泳動(CZE)動的光散乱法を用いて、電気泳動度分布を決定するステップと
を含む方法。 - 前記vWFマルチマーの前記電気泳動度分布および/または粒度分布に基づいて前記サンプル媒体の前記vWFマルチマーの有無および/または相対量を決定することをさらに含む、請求項41又は42に記載の方法。
- 前記サンプル媒体は血漿または血漿成分を含む、請求項41又は42に記載の方法。
- 前記サンプル媒体は希釈緩衝食塩水を含む、請求項41又は42に記載の方法。
- 前記エネルギー相互作用出力は電気泳動または非電気泳動(PCS)状態で生成される、請求項41又は42に記載の方法。
- ある一定量の高分子量vWFを被験者から得られる血漿サンプルに加えることによって前記サンプル媒体を生成することをさらに含む、請求項41又は42に記載の方法。
- 前記サンプル媒体のvWFマルチマーの前記電気泳動度および/または粒度分布に基づいて、前記血漿サンプルのvWF代謝酵素の有無を決定することをさらに含む、請求項47に記載の方法。
- 前記vWF代謝酵素は、内皮からvWFを放出する際にvWFを代謝するADAMTS13および/または酵素を含む、請求項48に記載の方法。
- 分子量が176,000MrのvWF代謝生成物フラグメントの有無を決定して、前記vWF代謝酵素の前記有無を決定する、請求項49に記載の方法。
- 被験者における、ADAMTS13の欠損または不足を特定する方法であって、前記方法は、
生理学的サンプルに、ある一定量の高分子量(HMW)vWFを加えてサンプル媒体を生成することであって、前記生理学的サンプルは、正常な被験者ではADAMTS13が存在するタイプである、と、
前記サンプル媒体に静的および/または動的光散乱分光法を実施して、ADAMTS13による前記HMWvWFの分解に起因するvWFマルチマーの電気泳動度分布および/または粒度分布を決定することと、
vWFマルチマーの前記電気泳動度分布および/または粒度分布に基づいてADAMTS13の欠損または不足について被験者を特定することと
を含む方法。 - 前記静的および/または動的光散乱分光法を実施する工程は、電気泳動準弾性光散乱(EQELS)を用いて実行される、請求項51に記載の方法。
- 前記静的および/または動的光散乱分光法を実施する工程は、光子相関分光法(PCS)を用いて実行される、請求項51に記載の方法。
- 前記静的および/または動的光散乱分光法を実施する工程は、キャピラリーゾーン電気泳動(CZE)を用いて実行される、請求項51に記載の方法。
- vWFマルチマーの前記電気泳動度分布および/または粒度分布が、分子量が176,000MrのvWFフラグメントを含むかどうかを決定することをさらに含む、請求項51に記載の方法。
- クロマトグラフィー精製を用いて前記サンプル媒体を精製することをさらに含む、請求項51に記載の方法。
- 前記サンプル媒体は、前記HMWvWFおよび/またはADAMTS13によるHMWvWFの代謝に起因するvWFマルチマーに結合し、それに結合されると、前記電気泳動度および粒度分布の決定を向上させるためにHMWvWFおよび/またはvWFマルチマーの移動度特性を変化させる試薬をさらに含む、請求項51に記載の方法。
- 前記試薬はボトロセチンを含む、請求項57に記載の方法。
- 前記ADAMTS13の欠損または不足が、前記被験者の生理状態に関連し、前記生理状態が、TTP,HUS、TTP/HUS、vWFを放出する内皮の異常機能の原因となる病状、急性冠症候群、糖尿病、高血圧、月経過多および/または腎不全からなるグループから選択される病状を含む、請求項51に記載の方法。
- vWFの代謝を調整する酵素の欠損または不足に伴う病状または生理状態が現われる危険性を有するかまたはその状態にあるとして被験者を特定するシステムであって、前記システムは、
生理学的サンプルにある量の高分子量(HMW)vWFを加えて、サンプル媒体を生成する手段であって、前記生理学的サンプルは、正常な被験者ではADAMTS13が存在するタイプである、手段と、
前記サンプル媒体に静的および/または動的光散乱分光法を実施して、ADAMTS13による前記HMWvWFの分解に起因するvWFマルチマーの電気泳動度分布および/または粒度分布を決定する手段と、
vWFマルチマーの前記電気泳動度および/または粒度分布に基づいてADAMTS13の欠損または不足に伴う病状または生理状態が発生する危険性を有するかまたはその状態にあるとして被験者を特定する手段と
を備えたシステム。 - 前記特定手段は、前記酵素による前記HMWvWFの代謝に起因するvWFマルチマーの電気泳動度分布および/または粒度分布を算出決定する手段を含む、請求項60記載のシステム。
- 相関出力を生成して、vWFマルチマーの前記電気泳動度分布および/または粒度分布に基づいて、酵素の欠損または不足に伴う病状または生理状態が発生する危険性を有するかまたはその状態にあるとして被験者を特定する手段をさらに備える、請求項61に記載のシステム。
- クロマトグラフィー精製を用いてvWFを精製することをさらに含む請求項19に記載の方法。
- 免疫親水性のマイクロビーズを用いてvWFを精製することをさらに含む請求項19に記載の方法。
- vWFと特異的に結合する試薬を用いてvWFを精製することをさらに含む請求項19に記載の方法。
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