JP5102658B2 - 髪質改善剤の評価方法 - Google Patents
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Description
本発明において、毛髪のうち毛根部又は頭皮近傍の毛元部分を使用する。毛髪は様々な外的因子(光、熱、シャンプーなど)により毛髪脂質を失う。本発明における「頭皮近傍の毛元部分」とは、このような外的因子の影響をほとんど受けておらず、毛根部とほぼ同等の毛髪脂質組成であるような、頭皮の生え際の毛髪の一部を意味している。本発明においては、毛根部又は頭皮から1cmまでの毛元部分を使用するのが好ましく、毛根部を使用するのがより好ましい。
図1は、セラミド分子群等の脂質分子解析システムの一例のブロック図である。このシステムは、液体クロマトグラフ10、質量分析装置20及び演算装置30からなっている。
イオン化装置21でのイオン化の方法としては、感度の点からエレクトロスプレーイオン化法(ESI)が好ましいが、この他、大気圧化学イオン化法(APCI)や大気圧光イオン化法(APPI)等も用いることもできる。
質量分離検出装置22は、イオン化装置21で生成したイオンを、m/z毎に分離し、検出する。質量分離検出装置22としては、四重極(Q)型質量分析計、イオントラップ(IT)型質量分析計等の質量分析計、Q−TOF型、IT−TOF型等のハイブリッド型質量分析計、あるいはトリプル四重極型等のタンデム質量分析計(MS/MS)を用いることができる。
セラミド分子はスフィンゴ塩基と脂肪酸がアミド結合した化合物であり、スフィンゴシンと脂肪酸の構造の違いによって、NDS(ノンヒドロキシアシル−ジヒドロスフィンゴシン)類、NS(ノンヒドロキシアシル−スフィンゴシン)類、ADS(α−ヒドロキシアシル−ジヒドロスフィンゴシン)類、及びAS(α−ヒドロキシアシル−スフィンゴシン)類に分類される。毛髪には以下に示す合計73種のセラミド分子が存在することが知られている。
上記(ii)では、(i)の脂肪酸の炭素数を規定する。ここで、上記(a’)では「25:1」となっているが、これは脂肪酸の炭素数が25で、不飽和結合を1つ有することを示す。
上記(iii)では、セラミド分子のスフィンゴ塩基の種類を規定する。ここでDSはジヒドロスフィンゴシン又はその誘導体であることを示し、Sはスフィンゴシンまたはその誘導体であることを示す。
上記(iv)では、(iii)のスフィンゴ塩基の炭素数を規定する。
尚、上記(a)、(b)、(c)及び(d)のセラミド分子の化学式は以下の通りである。
1ヶ月以上カラリングやパーマ処理を実施していない16名の被験者の頭皮から1cmの毛元部分の毛髪、及び髪質改善剤(ユーカリエキスを3%配合した頭皮ローション)を頭皮に1年間毎日2回適用した後の同一被験者の頭皮から1cmの毛元部分の毛髪を採取した。それぞれの毛髪は、天秤により毛髪重量を測定した。
髪質改善剤使用前後の髪質改善効果の評価方法として、以下のように毛髪のカール半径を測定することによって行った。毛髪のカール半径の測定方法は、毛髪(毛先から15cmまでの部分)を高解像度スキャナーで読み込み、毛髪形状の二次元イメージを取得した後、1mm間隔で各点の接線角度を求め、隣り合う2点の接線角度から曲率を算出した。これら曲率の平均値の逆数をカール半径とした。その結果、髪質改善剤使用後において毛髪のカール半径(うねり)が有意に改善されたことを確認した(図2)。
上記で採取した頭皮から1cmの毛元部分の毛髪に、クロロホルム/メタノール=2/1(体積比)溶液を加え、24時間放置することによりセラミドを抽出した。同様に、クロロホルム/メタノール=1/1(体積比)溶液、クロロホルム/メタノール=1/2(体積比)溶液、クロロホルム/メタノール/水=18/9/1(体積比)溶液においても抽出を行い、これらの抽出液を混合した。このように調製したセラミドの抽出液を窒素気流下で乾固し、これにN−ヘプタデカノイル−D−エリスロール−スフィンゴシンを含むメタノールを加えて溶解し、セラミド試料を調製した。
上記のように調製したセラミド試料を用いて、液体クロマトグラフ−質量分析法で網羅的な測定を行った。液体クロマトグラフ−質量分析法による測定条件は以下の通りである。
(4−1)液体クロマトグラフ−質量分析装置
液体クロマトグラフと質量分析装置が一体になった分析システムとして、アジレント社製1100シリーズLC/MSDを使用した。
(4−2)カラム、分離条件
カラム及び分離条件は次の通りとした。
分離カラム:化学物質評価研究機構、L−column ODS 2.1mmΦ×150mm(5μm)
移動相:10mmol/L酢酸アンモニウム含有メタノール
移動相流速:0.2mL/分
カラム温度:40℃
試料溶液注入量:5μL
(4−3)質量分析装置における分析条件
質量分析装置における分析条件は、以下の通りとした。
イオン化法:ESI
極性:負イオン
フラグメンター電圧:250V
Vcap電圧:3000V
ネブライザー圧力:30psig
乾燥ガス温度:350℃
乾燥ガス流量:8.0L/分
SIMモニターイオン:表1
得られたデータを、保持時間とm/zとイオン強度の3軸を有する多段マスクロマトグラムに展開した。その結果を図3および図4に示す。その後、保持時間とm/zの情報からなるセラミド分子群のデータベースを利用して各ピークを同定した。毛髪改善剤使用前の毛髪採取物からは、図3に示すように、41本のピークを検出することができた。一方、毛髪改善剤使用後の毛髪採取物においても、図4に示すように、41本のピークが検出されたが、そのプロファイルは使用前(図3)と異なっていた。そして、各セラミドのピーク面積を求め、内部標準物質に対するピーク面積比を算出し、さらに毛髪重量で除することにより、単位毛髪重量当たりの各セラミド分子の絶対量を算出した。
表2の結果から、髪質改善剤使用後では、N14DS18、N16DS18、N18DS18、N20DS18、N24DS18、N18:1DS18、N24:1DS18、A14DS18、A16DS18、A18DS18が有意に減少し、N17DS18、N21DS18、N23DS18、N27DS18、N28DS18、N16:1DS18、N27:1DS18、N30:1DS18、N16S18、N22S18、N24S18、N26S18、N24:1S18、A16S18、A24S18が有意に増加していた。即ち、脂肪酸鎖の炭素数が偶数のNDS類やADS類は減少し、脂肪酸鎖の炭素数が奇数のNDS類、脂肪酸鎖が長鎖のNDS類、NS類、AS類は増加する傾向であった。
11 高圧グラジエントポンプ
12 オートインジェクター
13 分離カラム
20 質量分析装置
21 イオン化装置
22 質量分離検出装置
30 演算装置
a 溶離液
b 脂質試料溶液
Claims (4)
- 髪質改善剤使用前後における毛髪の毛根部又は頭皮近傍の毛元部分から調製した試料を液体クロマトグラフ−質量分析法で分離検出して毛髪脂質分子の組成情報を得る工程と、髪質改善剤使用前後での前記毛髪脂質分子の組成情報と髪質改善剤の使用による毛髪の髪質改善効果とを関連付ける工程を含む、髪質改善剤の評価方法。
- 前記毛髪脂質分子がセラミド分子群である請求項1の記載の髪質改善剤の評価方法。
- 前記セラミド分子群がノンヒドロキシアシル−ジヒドロスフィンゴシン(NDS)類、ノンヒドロキシアシル−スフィンゴシン(NS)類、α−ヒドロキシアシル−ジヒドロスフィンゴシン(ADS)類、及びα−ヒドロキシアシル−スフィンゴシン(AS)類から選ばれる1種以上であることを特徴とする、請求項2の記載の髪質改善剤の評価方法。
- 被験剤使用前後における毛髪の毛根部又は頭皮近傍の毛元部分から調製した毛髪脂質試料を液体クロマトグラフ−質量分析法で分離検出し、毛髪脂質分子の組成情報を得、被験剤使用前後での毛髪脂質組成情報から、前記髪質改善剤使用前後での毛髪脂質組成情報と髪質改善剤使用前後での毛髪の髪質改善効果との関連付けに基づいて、被験剤の目的とする髪質改善効果を評価することを特徴とする、請求項1〜3のいずれか1項に記載の髪質改善剤の評価方法。
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