JP5022794B2 - 核酸抽出方法及び核酸抽出装置 - Google Patents
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Description
Primer 2: 5’GCA AGC TTT CTA ACA ACA GTA GTT TCC GG 3’
温度条件:94℃(5min)→94℃(1min)→55℃(1min)→72℃(1min)→72℃(10min)、ただし、(94℃(1min)→55℃(1min)→72℃(1min))は、30サイクル行なった。
Primer BIP:5’GAT AAA ACG CCG CAG ACA CAT CCT TCC AAC CTC TTG TCC TCC AA 3’
Primer F3:5’GGT GGT TGA TGT TCC TGG A 3’
Primer B3:5’CAA AAT TCG CAG TCC CCA AC 3’
温度条件:95℃(5min)→On ice(3min)→Bst DNA Polymerase添加→65℃(1h)→80℃(10min)
増幅産物の確認:0.8%アガロースゲルを支持体とする電気泳動を実施し、2本鎖DNAに特異的に結合する蛍光色素で染色し、紫外線照射下において確認した。
Claims (8)
- 核酸結合性固相を有する抽出カラムを用いて、核酸含有液体試料から目的の核酸を抽出する核酸抽出方法において、
上記抽出カラム内に核酸含有液体試料を吸引し、上記抽出カラム内の液面を光センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記核酸含有液体試料が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記核酸含有液体試料を一定量残留させて上記核酸含有試料を上記抽出カラムから吐出し、核酸を上記核酸結合性固相に結合し、
上記抽出カラム内に洗浄液を吸引し、上記抽出カラム内の液面を上記光センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記洗浄液が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記洗浄液を一定量残留させて上記洗浄液及び非特異的な結合物を上記抽出カラムから吐出し、上記核酸結合性固相から非特異的な結合物を除去し、
上記抽出カラム内に溶出液を吸引し、上記抽出カラム内の液面を上記光センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記溶出液が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記溶出液を一定量残留させて上記溶出液及び目的の核酸を上記抽出カラムから吐出し、目的の核酸を上記核酸結合性固相から溶出させることを特徴とする核酸抽出方法。 - 核酸結合性固相を有する抽出カラムを用いて、核酸含有液体試料から目的の核酸を抽出する核酸抽出方法において、
上記抽出カラム内に核酸含有液体試料を吸引し、上記抽出カラム内の液面を超音波センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記核酸含有液体試料が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記核酸含有液体試料を一定量残留させて上記核酸含有試料を上記抽出カラムから吐出し、核酸を上記核酸結合性固相に結合し、
上記抽出カラム内に洗浄液を吸引し、上記抽出カラム内の液面を上記超音波センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記洗浄液が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記洗浄液を一定量残留させて上記洗浄液及び非特異的な結合物を上記抽出カラムから吐出し、上記核酸結合性固相から非特異的な結合物を除去し、
上記抽出カラム内に溶出液を吸引し、上記抽出カラム内の液面を上記超音波センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記溶出液が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記溶出液を一定量残留させて上記溶出液及び目的の核酸を上記抽出カラムから吐出し、目的の核酸を上記核酸結合性固相から溶出させることを特徴とする核酸抽出方法。 - 核酸結合性固相を有する抽出カラムを用いて、核酸含有液体試料から目的の核酸を抽出する核酸抽出方法において、
上記抽出カラム内に核酸含有液体試料を吸引し、上記抽出カラム内の液面を画像センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記核酸含有液体試料が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記核酸含有液体試料を一定量残留させて上記核酸含有試料を上記抽出カラムから吐出し、核酸を上記核酸結合性固相に結合し、
上記抽出カラム内に洗浄液を吸引し、上記抽出カラム内の液面を上記画像センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記洗浄液が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記洗浄液を一定量残留させて上記洗浄液及び非特異的な結合物を上記抽出カラムから吐出し、上記核酸結合性固相から非特異的な結合物を除去し、
上記抽出カラム内に溶出液を吸引し、上記抽出カラム内の液面を上記画像センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記溶出液が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記溶出液を一定量残留させて上記溶出液及び目的の核酸を上記抽出カラムから吐出し、目的の核酸を上記核酸結合性固相から溶出させることを特徴とする核酸抽出方法。 - 請求項1、2、3のうちのいずれか一項記載の核酸抽出方法において、上記洗浄液は、第1洗浄液と第2洗浄液からなり、第1洗浄液で上記核酸結合性固相から除去できなかった非特異的な結合物を、第2洗浄液で除去することを特徴とする核酸抽出方法。
- 核酸含有液体試料から目的の核酸を抽出する核酸抽出装置において、
核酸結合性固相を有する抽出カラムと、
上記抽出カラムに溶液を吸引させ、吐出させる吸引吐出手段と、
上記抽出カラム内の液面を検出することにより、上記抽出カラム内の一定量の溶液が残留しているか否かを検出する光センサと、
上記吸引吐出手段の動作を制御し、上記残量検出手段からの検出信号に基づいて、上記吸引吐出手段の吐出動作を停止させる制御手段と、
を備え、上記制御手段は上記吸引吐出手段の動作を制御して、
上記抽出カラム内に核酸含有液体試料を吸引させ、上記抽出カラム内の液面を上記光センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記核酸含有液体試料が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に核酸含有液体試料を一定量残留させて上記核酸含有試料を上記抽出カラムから吐出させ、
上記抽出カラム内に洗浄液を吸引させ、上記抽出カラム内の液面を上記光センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記洗浄液が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記洗浄液を一定量残留させて上記洗浄液及び非特異的な結合物を上記抽出カラムから吐出させ、
上記抽出カラム内に溶出液を吸引させ、上記抽出カラム内の液面を上記光センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記溶出液が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記溶出液を一定量残留させて上記溶出液及び目的の核酸を上記抽出カラムから吐出させ、目的の核酸を上記核酸結合性固相から溶出させることを特徴とする核酸抽出装置。 - 核酸含有液体試料から目的の核酸を抽出する核酸抽出装置において、
核酸結合性固相を有する抽出カラムと、
上記抽出カラムに溶液を吸引させ、吐出させる吸引吐出手段と、
上記抽出カラム内の液面を検出することにより、上記抽出カラム内の一定量の溶液が残留しているか否かを検出する超音波センサと、
上記吸引吐出手段の動作を制御し、上記残量検出手段からの検出信号に基づいて、上記吸引吐出手段の吐出動作を停止させる制御手段と、
を備え、上記制御手段は上記吸引吐出手段の動作を制御して、
上記抽出カラム内に核酸含有液体試料を吸引させ、上記抽出カラム内の液面を上記超音波センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記核酸含有液体試料が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に核酸含有液体試料を一定量残留させて上記核酸含有試料を上記抽出カラムから吐出させ、
上記抽出カラム内に洗浄液を吸引させ、上記抽出カラム内の液面を上記超音波センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記洗浄液が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記洗浄液を一定量残留させて上記洗浄液及び非特異的な結合物を上記抽出カラムから吐出させ、
上記抽出カラム内に溶出液を吸引させ、上記抽出カラム内の液面を上記超音波センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記溶出液が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記溶出液を一定量残留させて上記溶出液及び目的の核酸を上記抽出カラムから吐出させ、目的の核酸を上記核酸結合性固相から溶出させることを特徴とする核酸抽出装置。 - 核酸含有液体試料から目的の核酸を抽出する核酸抽出装置において、
核酸結合性固相を有する抽出カラムと、
上記抽出カラムに溶液を吸引させ、吐出させる吸引吐出手段と、
上記抽出カラム内の液面を検出することにより、上記抽出カラム内の一定量の溶液が残留しているか否かを検出する画像センサと、
上記吸引吐出手段の動作を制御し、上記残量検出手段からの検出信号に基づいて、上記吸引吐出手段の吐出動作を停止させる制御手段と、
を備え、上記制御手段は上記吸引吐出手段の動作を制御して、
上記抽出カラム内に核酸含有液体試料を吸引させ、上記抽出カラム内の液面を上記画像センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記核酸含有液体試料が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に核酸含有液体試料を一定量残留させて上記核酸含有試料を上記抽出カラムから吐出させ、
上記抽出カラム内に洗浄液を吸引させ、上記抽出カラム内の液面を上記画像センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記洗浄液が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記洗浄液を一定量残留させて上記洗浄液及び非特異的な結合物を上記抽出カラムから吐出させ、
上記抽出カラム内に溶出液を吸引させ、上記抽出カラム内の液面を上記画像センサを用いて検出することにより上記抽出カラム内に上記溶出液が一定量残留していることを判断し、上記抽出カラム内に上記溶出液を一定量残留させて上記溶出液及び目的の核酸を上記抽出カラムから吐出させ、目的の核酸を上記核酸結合性固相から溶出させることを特徴とする核酸抽出装置。 - 請求項5、6、7のうちのいずれか一項記載の核酸抽出装置において、上記洗浄液は、第1洗浄液と第2洗浄液からなり、上記制御手段は、第1洗浄液で上記核酸結合性固相から除去できなかった非特異的な結合物を、第2洗浄液で除去させることを特徴とする核酸抽出装置。
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