JP5015505B2 - コア４型構造を有するｏ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物およびその製造方法 - Google Patents
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Description
本発明は、糖鎖機能の解明に有用なコア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物およびその製造方法に関するものである。
天然に存在するタンパク質の半数以上は糖鎖が結合した糖タンパク質として存在するといわれている。この糖鎖はタンパク質の構造や物理化学的性質を保持する役割の他に、糖タンパク質が他の生体分子との相互作用のなかで正しくその機能を果たすためのシグナルあるいは機能制御の役割を担っているものと考えられている。糖タンパク質糖鎖は主にアスパラギン残基の側鎖アミド上に糖鎖が結合するN-結合型糖鎖とセリンやトレオニンの側鎖水酸基に糖鎖が結合するO-結合型糖鎖に大別される。後者はアミノ酸水酸基とαグリコシド結合したN-アセチルガラクトサミンを共通とし、さらに生合成過程において糖残基付加がなされ、大きな糖鎖へと変換されるが、付加する糖残基、結合位置、グリコシド結合様式（立体配置）によって基本分岐構造であるコア１−８型に分類される。
O-結合型糖鎖をもつ典型的な糖タンパク質としてムチンが知られている。ムチンは４００-１０００kDaに及ぶ巨大な分子量をもつ糖タンパク質であり、その大分子量の大半は糖鎖に由来する。タンパク質部分には、８アミノ酸残基からなる繰り返し配列を基本骨格とするMUC5ACをはじめ１６９アミノ酸の繰り返しを持つMUC6までさまざまな長さの基本構造が知られ、ヒトムチンでは１０数種のMUC構造の存在が報告されている。これらの配列には多くのトレオニン残基とセリン残基が含まれており、その大部分に上記O-結合型糖鎖が結合して糖鎖クラスターを呈している。ムチンにおけるこれらの構造は高い親水性を保持するものであることから、粘膜の乾燥からの保護や、病原性微生物からの保護、さらに機械的な損傷からの保護のためにその役割があるものと考えられている。粘膜表面に存在するムチンばかりでなく、例えば乳汁などに分泌されるムチンも多くは組織や個体の保護を目的として存在しているものと思われている。
一方、ムチンあるいはムチン様糖タンパク質が、ガン化や悪性化を生じた細胞から発現される場合、ムチン自身の発現量の変化とともに、その結合している糖鎖構造に大きな変化が現れることが知られている。発現する糖鎖は正常細胞のそれと異なり不完全なものであったり、糖鎖の伸長に関わる糖転移酵素の異常な発現により、長大なN-アセチルラクトサミン繰り返し構造が付加したものであったりする。これらは腫瘍マーカーとして免疫学的な診断の基盤となっている。一方、異常糖鎖の発現は診断のみでなく、免疫に着目した療法やワクチンの開発につながるものとして注目されている。クラスター状で存在する糖鎖の構造は均質なものではなく、いくつかのコア構造に属する糖鎖群の混在したものである。
したがって、糖鎖機能を応用する新しい生体制御技術の開発をめざすには先ず糖鎖構造の定性的および定量的な変化を的確にとらえる方法を確立することが必須の要件となる。現在マススペクトルを活用した糖タンパク質の構造解析法が種々研究されている。それにより、糖タンパク質の分子量を知ることができるばかりでなく、糖鎖の構成および結合様式までを明らかにできるようになった。
これらの研究を遂行する上で確定した糖鎖構造をもつ、均一な構造を有する糖タンパク質の安定的な取得は不可欠である。しかしながら、極微量にしか得られない天然の糖タンパク質にこれを求めることは困難である。糖タンパク質の化学合成法は構造解析のための試料を提供するばかりでなく、糖鎖機能を応用するワクチン開発などの技術につながるため、その化学合成法の確立が重要である。
本発明で対象とするコア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物は近縁のコア２型、コア３型糖鎖構造を持つものとともに、嚢胞性線維症患者の気管支ムチン、ヒト大腸がん細胞由来ムチン、ヒト胎便ムチン、ヒツジ胃ムチンなどからその存在が見いだされている糖鎖構造を有するが、その生理的な意義はまだ不明である。ムチン型糖鎖の構造上の多様性はその構造解析ばかりでなく生物現象の解析をも困難にしており、糖鎖生物学研究や応用面での進展の大きな障害となっている。
コア４型糖鎖関連の糖アミノ酸複合体化合物の化学合成法はすでに提案されている〔非特許文献１〕。それによると、糖鎖水酸基の保護基としてアセチル基が使用されているため、糖ペプチド合成に用いたときには最後の脱保護で塩基性条件が必須となる。強い塩基性条件ではアミノ酸部のラセミ化やβ脱離などの副反応が懸念される。また糖転移酵素基質として糖鎖のみの誘導体の合成とその酵素化学的な研究が報告されている〔非特許文献２〕。
J. Chem. Soc., Perkin 1, 1997, 2359-2368. Carbohydr. Lett. 2001, 4, 71-76.
J. Chem. Soc., Perkin 1, 1997, 2359-2368. Carbohydr. Lett. 2001, 4, 71-76.
本発明は、従来のコア４構造を有するO-結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物が有する、前記課題を解消した新規なコア４構造を有するO-結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物を提供することが目的である。すなわち、Fmoc法による糖ペプチドの固相合成に用いたときに、最後の脱保護で塩基性条件を必須としないコア４構造を有するO-結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物およびその化合物の化学的合成方法を提供することが目的である。
本発明は、構造式（１）で表される、N-アセチルガラクトサミンの３位と６位水酸基に結合し、ラクトサミンガラクトシル-β-(1→4)-N-アセチルグルコサミン構造（ラクトサミン）が残基のすべての水酸基が、ベンジル基またはベンジリデン基で保護され、かつ、トレオニン残基またはセリン残基のアミノ基が９−フルオレニルメトキシカルボニル基で保護された、コア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物、である。
（式中、Ｂｎはベンジル基を、Ｐｈはフェニル基を、Ａｃはアセチル基を、Ｆｍ
ｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル基を、Ｒは水素原子またはメチル
基を表す。）
ｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル基を、Ｒは水素原子またはメチル
基を表す。）
また、本発明は、下記の工程からなる前記構造式（１）で表される、コア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物の製造方法、である。
（第一工程）アミノ化合物を用いて、構造式（２）で表される、ガラクトシル-β-(1→4)-N-アセチルグルコサミン構造（ラクトサミン）のフタロイル化物３の脱フタロイル化を行い、構造式（３）で表される、アミノ体４を合成し、
（式中、Ｂｎはベンジル基を、Ｐｈｔｈはフタロイル基を、ＳｉＰｈ2Ｂｕtはｔ
−ブチルジフェニルシリル基を表す。）
（第一工程）アミノ化合物を用いて、構造式（２）で表される、ガラクトシル-β-(1→4)-N-アセチルグルコサミン構造（ラクトサミン）のフタロイル化物３の脱フタロイル化を行い、構造式（３）で表される、アミノ体４を合成し、
−ブチルジフェニルシリル基を表す。）
（第二工程）該アミノ体４にトリクロロアセチルクロリドを付加して、構造式（３）で表される、トリクロロアセチル化体５を合成し、
（式中、Ｂｎはベンジル基を、ＳｉＰｈ2Ｂｕtはｔ−ブチルジフェニルシリル基
を、Ｒは水素原子またはメチル基を表す。）
を、Ｒは水素原子またはメチル基を表す。）
（第三工程）該トリクロロアセチル化体５を、好ましくは弱酸の存在下、テトラブチルアンモニウムフルオリドで処理して、ｔ−ブチルジフェニルシリル基の脱離を行い、構造式（４）で表される、ヘミアセタール化体６を合成し、
（式中、Ｂｎはベンジル基を、ＴＣＡはトリクロロアセチル基を表す。）
（第四工程）該ヘミアセタール化体６、好ましくはジエチルアミノサルファートリフルオリドを用いてフッ素化して、構造式（５）で表される、フッ素化体７を合成し、
（式中、Ｂｎはベンジル基を、ＴＣＡはトリクロロアセチル基を表す。）
（第五工程）該フッ素化体７を、構造式（６）で表される、単糖アミノ酸誘導体８、９と縮合して、構造式（７）で表される、ベンジル基およびベンジリデン基を有するコア３型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１０、１１を合成し、
（式中、Ｐｈはフェニル基を、Ｒは水素原子またはメチル基を、Ｆｍｏｃは９−
フルオレニルメトキシカルボニル基を、Ａｌｌはアリル基を表す。）
（式中、Ｂｎはベンジル基を、ＴＣＡはトリクロロアセチル基を、Ｐｈはフェニ
ル基を、Ｒは水素原子またはメチル基を、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキ
シカルボニル基を、Ａｌｌはアリル基を表す。）
フルオレニルメトキシカルボニル基を、Ａｌｌはアリル基を表す。）
ル基を、Ｒは水素原子またはメチル基を、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキ
シカルボニル基を、Ａｌｌはアリル基を表す。）
（第六工程）該糖鎖関連化合物１０、１１を、好ましくは強酸で処理して、ベンジリデン基を除去して構造式（８）で表される、コア３型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１２、１３を合成し、
（式中、Ｂｎはベンジル基を、ＴＣＡはトリクロロアセチル基を、Ｒは水素原子
またはメチル基を、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル基を、Ａ
ｌｌはアリル基を表す。）
またはメチル基を、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル基を、Ａ
ｌｌはアリル基を表す。）
（第七工程）該糖鎖関連化合物１２、１３を、構造式（９）で表される、ガラクトース残基およびＮ−アセチルグルコサミン残基のすべての水酸基がベンジル基またはベンジリデン基で保護され、かつ、Ｎ−アセチルグルコサミン残基のＮ−アセチル基がＮ−トリクロロアセチル基であって、該残基の１位がフッ素原子で置換された二糖類１４によりグリコシド化して、構造式（１０）で表される、ベンジル基およびベンジリデン基を有するコア４型構造を有する５糖性のＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１５、１６を合成し、
（式中、Ｂｎはベンジル基を、ＴＣＡはトリクロロアセチル基を、Ｐｈはフェニ
ル基を表す。）
（式中、Ｂｎはベンジル基を、ＴＣＡはトリクロロアセチル基を、Ｐｈはフェニ
ル基を、Ｒは水素原子またはメチル基を、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキ
シカルボニル基を、Ａｌｌはアリル基を表す。）
ル基を表す。）
ル基を、Ｒは水素原子またはメチル基を、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキ
シカルボニル基を、Ａｌｌはアリル基を表す。）
（第八工程）該糖鎖関連化合物１５、１６から金属還元条件下で脱塩素化し、さらにアジド基から変換されたアミノ基をアセチル化して、構造式（１１）で表される、トリアセトアミド体１７、１８を合成する工程である。この反応は、マイクロ波の照射下で行うことが好ましい。
（式中、Ｂｎはベンジル基を、Ａｃはアセチル基を、Ｐｈはフェニル基を、Ｒは
水素原子またはメチル基を、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル
基を、Ａｌｌはアリル基を表す。）
水素原子またはメチル基を、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル
基を、Ａｌｌはアリル基を表す。）
（第九工程）該トリアセトアミド体１７、１８の脱アリル化を行い、構造式（１）で表される、コア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物を合成する
（式中、Ｂｎはベンジル基を、Ｐｈはフェニル基を、Ａｃはアセチル基を、Ｆｍ
ｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル基を、Ｒは水素原子またはメチル
基を表す。）
ことを特徴とする、構造式（１）で表される、コア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物の製造方法、である。
ｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル基を、Ｒは水素原子またはメチル
基を表す。）
ことを特徴とする、構造式（１）で表される、コア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物の製造方法、である。
本発明の構造式（１）で表されるコア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１、２は、Fmoc法による糖ペプチドの固相合成のための鍵中間体として有用な新規な糖鎖化合物である。該糖鎖化合物の保護基は、ペプチド類の化学的安定性を損なわない酸条件で糖のグリコシド結合を侵すことなく除去できる。
また、本発明の製造方法は、糖鎖関連化合物１２、１３の糖供与体として、構造式（９）で表される二糖類１４を用いるため、グルコシド化反応の際の副生物が少なく、最終生成物である、構造式（１）で表されるコア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１、２を好収率で製造することができる。
また、本発明の製造方法は、糖鎖関連化合物１２、１３の糖供与体として、構造式（９）で表される二糖類１４を用いるため、グルコシド化反応の際の副生物が少なく、最終生成物である、構造式（１）で表されるコア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１、２を好収率で製造することができる。
本発明の構造式（１）で表される、コア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１，２は、N-アセチルガラクトサミンの３位と６位水酸基にガラクトシル-β-(1→4)-N-アセチルグルコサミン構造（ラクトサミン）が結合した単位を有する、新規化合物である。該糖鎖関連化合物は、糖水酸基の保護基としてベンジル基およびベンジリデン基を有する点に特徴がある。これらの保護基はペプチド鎖の化学的安定性を損なわない酸性条件下で、糖のグリコシルド結合をも侵すことなく脱離させることができる。化合物１は、セリン誘導体であり、タンパク質中のセリン残基がコア４型糖鎖によってグリコシル化された糖アミノ酸構造を表すものである。化合物２は、トレオニンがグリコシル化されたものに相当する。
本発明の構造式（１）で表される、コア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１，２を製造する方法、すなわち、ラクトサミンのアミノ体４を合成する第一工程から、ラクトサミンのフッ素化体７を合成する第四工程、および、該フッ素化体７を二糖類で縮合してグルコシド化する第五工程を経て、コア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物を合成する第九工程に至る方法を以下に説明する。なお、各工程の反応は一般的な条件で実施可能である。
第一工程は、アミノ化合物を用いて、構造式（２）で表される、フタロイル化物３の脱フタロイル化により、構造式（３）で表される、アミノ体４を合成する工程である。フタロイル化物３は、文献（Biosci. Biotechnol. Biochem. 2002, 66, 1904-1914.）に記載された既知化合物である。アミノ化合物はヒドラジン、エチレンジアミン、プロピレンジアミンなどのジアミンが好適であり、エチレンジアミンが特に好適である。ブチルアミンなどのアルキルアミンを用いることもできる。溶媒は１−ブタノールなどのアルコールが好適であるが、これに限定されない。反応は不活性ガス雰囲気下、５０〜１２０℃の温度で実施される。
第二工程は、該アミノ体４に、トリクロロアセチルクロリドを付加して、構造式（３）で表される、トリクロロアセチル化体５を合成する工程である。該反応はピリジン、ピリジンとジクロロメタンの混合溶媒などを溶媒に用い、５０℃以下の低温で実施される。トリクロロアセチルクロリドの代わりに無水トリクロロ酢酸を用いて反応させることもできる。
第三工程は、該トリクロロアセチル化体５を、好ましくは弱酸の存在下、テトラブチルアンモニウムフルオリドで処理して、トリクロロアセチル化体６を合成するとともに、該トリクロロアセチル化体６の還元末端アノマー位のｔ−ブチルジフェニルシリル基などのシリルエーテル型保護基を脱離して、構造式（４）で表される、ヘミアセタール化体６を合成する工程である。該反応は、不活性ガスの雰囲気下、テトラヒドロフラン、アセトニトリルなどの溶媒を用いて、５０℃以下の低温で実施される。弱酸は酢酸が好適であるが、その他の有機酸や希塩酸なども使用することができる。また、希釈したフッ化水素酸を用いて、アセトニトリル中で脱シリル化反応を行うこともできるし、ピリジン、フッ化水素塩を代わりに用いることもできる。
第四工程は、該ヘミアセタール化体６を、好ましくはジエチルアミノサルファートリフルオリドまたはモルフォリノサルファートリフルオリドを用いて、該ヘミアセタール化体７をフッ素化して、構造式（５）で表される、フッ素化体７を合成する工程である。該反応は不活性ガスの雰囲気下、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、エーテルなどを溶媒に用いて、２０℃以下の低温で実施される。
第五工程は、該フッ素化体７を、構造式（６）で表される、単糖アミノ酸誘導体８、９と縮合して、ベンジリデン保護基を有するコア３型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１０、１１を合成する工程である。単糖アミノ酸誘導体８および９は、それぞれ、文献（Carbohydr. Res. 1995, 269, 227-257.およびCarbohydr. Res. 2000, 325, 132-142.）に記載された既知化合物である。
該フッ素化体７と、該単糖アミノ酸誘導体８または９との縮合は、好ましくは縮合促進剤として、予め調製したビスシクロペンタジエニルジルコノセンジクロリドと過塩素酸銀と粉末モレキュラーシーヴスのジクロロメタン溶液を用いて、低温下に実施すると、立体選択的なグリコシド化が進み、該糖鎖関連化合物１０または１１が主成分として得られる。縮合促進剤としては、ビスシクロペンタジエニルハフノセンジクロリドなども使用することができる。また、過塩素酸銀の代わりに、トリフルオロメタンスルホン酸銀、トリフルオロメタンスルホン酸第一スズを使用してもよい。該反応は、−２０〜０℃程度の低温で行うと、副反応が少なく、好ましい。溶媒は、該フッ素化体７および該単糖アミノ酸誘導体８、９を溶解するものであれば、特に限定されないが、ジクロロメタン、ジクロロエタン、ジエチルエーテル、トルエン、アセトニトリルなどが好適である。
縮合反応生成物をろ過し、ろ液を濃縮し、抽出により、生成物である該糖鎖関連化合物１０または１１を精製分離する。
該フッ素化体７と、該単糖アミノ酸誘導体８または９との縮合は、好ましくは縮合促進剤として、予め調製したビスシクロペンタジエニルジルコノセンジクロリドと過塩素酸銀と粉末モレキュラーシーヴスのジクロロメタン溶液を用いて、低温下に実施すると、立体選択的なグリコシド化が進み、該糖鎖関連化合物１０または１１が主成分として得られる。縮合促進剤としては、ビスシクロペンタジエニルハフノセンジクロリドなども使用することができる。また、過塩素酸銀の代わりに、トリフルオロメタンスルホン酸銀、トリフルオロメタンスルホン酸第一スズを使用してもよい。該反応は、−２０〜０℃程度の低温で行うと、副反応が少なく、好ましい。溶媒は、該フッ素化体７および該単糖アミノ酸誘導体８、９を溶解するものであれば、特に限定されないが、ジクロロメタン、ジクロロエタン、ジエチルエーテル、トルエン、アセトニトリルなどが好適である。
縮合反応生成物をろ過し、ろ液を濃縮し、抽出により、生成物である該糖鎖関連化合物１０または１１を精製分離する。
第六工程は、該糖鎖関連化合物１０または１１を酸で処理して、ベンジリデン基を除去してコア３型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１２または１３を合成する工程である。強酸は、トリフルオロ酢酸が好適であるが、希塩酸または加熱条件下での８０％酢酸なども使用することができる。該反応は８０℃以下の低温で実施される。
第七工程は、該糖鎖関連化合物１２または１３を、構造式（９）で表される、ガラクトース残基およびＮ−アセチルグルコサミン残基のすべての水酸基がベンジル基またはベンジリデン基で保護され、かつ、Ｎ−アセチルグルコサミン残基のＮ−アセチル基がＮ−トリクロロアセチル基であって、該残基の１位がフッ素原子で置換された二糖類１４によりグリコシド形成反応を行い、ベンジル基およびベンジリデン基を保護基として有するコア４型構造を有する５糖性のＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１５または１６を合成する工程である。
該糖鎖関連化合物１２または１３と、該二糖類１４との反応は、好ましくは縮合促進剤として、予め調製したビスシクロペンタジエニルジルコノセンジクロリドと過塩素酸銀と粉末モレキュラーシーヴスのジクロロメタン溶液を用いて、不活性ガス気流下、低温で実施される。
縮合促進剤としては、ビスシクロペンタジエニルハフノセンジクロリドなども使用することができる。また、過塩素酸銀の代わりに、トリフルオロメタンスルホン酸銀、トリフルオロメタンスルホン酸第一スズを使用してもよい。該反応は、−３０〜０℃程度の低温で行うと、副反応が少なく好ましい。
該糖鎖関連化合物１２または１３と、該二糖類１４との反応は、好ましくは縮合促進剤として、予め調製したビスシクロペンタジエニルジルコノセンジクロリドと過塩素酸銀と粉末モレキュラーシーヴスのジクロロメタン溶液を用いて、不活性ガス気流下、低温で実施される。
縮合促進剤としては、ビスシクロペンタジエニルハフノセンジクロリドなども使用することができる。また、過塩素酸銀の代わりに、トリフルオロメタンスルホン酸銀、トリフルオロメタンスルホン酸第一スズを使用してもよい。該反応は、−３０〜０℃程度の低温で行うと、副反応が少なく好ましい。
糖鎖関連化合物１２または１３を受容体として、前記フッ素化体７を糖供与体として用いて、グリコシド形成のために縮合反応を行うと、該フッ素化体７の反応性が高すぎるためか、通常のグリコシド形成反応では可能な４位と６位間の位置選択的な反応ではなく、４位での反応生成物が生成物の４０％程度副生する。ところが、該二糖類１４を糖供与体として用いると、該副生量が低減し、所望のコア４型構造を有する５糖性のＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１５または１６の収率が向上する。よって、該二糖類１４の使用は重要である。
第八工程は、該糖鎖関連化合物１５または１６の脱塩素化を金属還元条件下で行い、かつアセチル化してトリアセトアミド体１７または１８を合成する工程である。反応は、該糖鎖関連化合物１５または１６を有機溶媒に溶解し、好ましくは過剰の金属亜鉛と酢酸の存在下に、不活性ガス雰囲気下、マイクロ波を照射して行うと反応速度を速めることができる。その後、有機溶媒溶液に好ましくは無水酢酸を加えて、アセチル化する。マイクロ波を照射しない場合は、反応の終結に２日以上要し、大過剰の亜鉛が必要になる。亜鉛の使用量は反応物１mmol当たり１０〜５０ｇ、好ましくは１０〜２０ｇである。マイクロ波の照射は、強度１５〜１５０Ｗのマイクロ波を０．５〜６時間かけて実施される。
第九工程は、該トリアセトアミド体１７または１８の脱アリル化を行い、コア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１または２を合成する工程である。脱アリル化触媒としては、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム触媒が好適であり、その使用量は５〜２０％程度である。脱アリル化反応は、不活性ガス気流下、室温程度の温度で行うと、副反応が少ない。有機溶媒は特に限定されないが、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどが好適である。
以下、本発明の実施例を示すが、本発明は、これら実施例に限定されるものではない。
＜工程［１］： tert-ブチルジフェニルシリル 2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-2-アミノ-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-b-D-グルコピラノシド（化合物４）の合成＞
tert-ブチルジフェニルシリル 2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)- 3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-フタルイミド-b-D-グルコピラノシド（化合物３）(703 mg)の1-ブタノール(25 mL)溶液に、エチレンジアミン(0.75 mL)を加え、アルゴン雰囲気下、９０ ℃で２日間攪拌を続けた。反応液を減圧濃縮した後、クロロホルムで希釈した。有機層を分液ロートに移し、水および飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。クロロホルムで溶出して化合物４(603 mg、収率 96%)を得た。
＜工程［１］： tert-ブチルジフェニルシリル 2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-2-アミノ-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-b-D-グルコピラノシド（化合物４）の合成＞
tert-ブチルジフェニルシリル 2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)- 3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-フタルイミド-b-D-グルコピラノシド（化合物３）(703 mg)の1-ブタノール(25 mL)溶液に、エチレンジアミン(0.75 mL)を加え、アルゴン雰囲気下、９０ ℃で２日間攪拌を続けた。反応液を減圧濃縮した後、クロロホルムで希釈した。有機層を分液ロートに移し、水および飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。クロロホルムで溶出して化合物４(603 mg、収率 96%)を得た。
＜化合物４の同定＞
[a]D -5.3° (c = 1.0 クロロホルム)
1H-NMR d: 7.71-7.67, 7.49-7.10 (40H, m, Ar), 5.16 (1H, d, J = 10.5 Hz, PhCH2-), 4.97 (1H, d, J = 11.2 Hz, PhCH2-), 4.76-4.69 (4H, m, 4 PhCH2-), 4.58-4.47 (2H, m, 2 PhCH2-), 4.45 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1b), 4.39 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.37 (1H, d, J = 7.1 Hz, H-1a), 4.36 (1H, d, J = 12.2 Hz, PhCH2-), 4.26 (1H, d, J = 11.7 Hz, PhCH2-), 4.20 (1H, d, J = 12.2 Hz, PhCH2-), 4.01 (1H, t, J = 9.3 Hz, H-4a), 3.91 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-4b), 3.72 (1H, t, J = 8.1 Hz, H-2b), 3.67 (1H, dd, J = 2.9, 11.2 Hz, H-6a), 3.53 (1H, m, H-6a), 3.43-3.37 (3H, m, H-3b, H-5b, H-6b), 3,26-3.21 (2H, m, H-3a, H-6b), 2.91-2.98 (2H, m, H-2a, H-5a), 1.10 (9H, s, tBu).
MALDI TOF MS : calcd for C70H77NO10Si: 1119.53, found 1142.75 (+Na)+,.
元素分析 Calcd. for C70H77NO10Si ; C: 75.04, H: 6.93, N: 1.25, Found C: 75.01, H: 6.83, N: 1.14.
以上の測定結果から、構造式４で表される化合物であることが同定された。
[a]D -5.3° (c = 1.0 クロロホルム)
1H-NMR d: 7.71-7.67, 7.49-7.10 (40H, m, Ar), 5.16 (1H, d, J = 10.5 Hz, PhCH2-), 4.97 (1H, d, J = 11.2 Hz, PhCH2-), 4.76-4.69 (4H, m, 4 PhCH2-), 4.58-4.47 (2H, m, 2 PhCH2-), 4.45 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1b), 4.39 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.37 (1H, d, J = 7.1 Hz, H-1a), 4.36 (1H, d, J = 12.2 Hz, PhCH2-), 4.26 (1H, d, J = 11.7 Hz, PhCH2-), 4.20 (1H, d, J = 12.2 Hz, PhCH2-), 4.01 (1H, t, J = 9.3 Hz, H-4a), 3.91 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-4b), 3.72 (1H, t, J = 8.1 Hz, H-2b), 3.67 (1H, dd, J = 2.9, 11.2 Hz, H-6a), 3.53 (1H, m, H-6a), 3.43-3.37 (3H, m, H-3b, H-5b, H-6b), 3,26-3.21 (2H, m, H-3a, H-6b), 2.91-2.98 (2H, m, H-2a, H-5a), 1.10 (9H, s, tBu).
MALDI TOF MS : calcd for C70H77NO10Si: 1119.53, found 1142.75 (+Na)+,.
元素分析 Calcd. for C70H77NO10Si ; C: 75.04, H: 6.93, N: 1.25, Found C: 75.01, H: 6.83, N: 1.14.
以上の測定結果から、構造式４で表される化合物であることが同定された。
＜工程［2］： tert-ブチルジフェニルシリル 2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-トリクロロアセタミド-b-D-グルコピラノシド（化合物５）の合成＞
化合物４(3.43 g)をピリジン(40 mL)に溶かして氷冷し、トリクロロアセチルクロリド(513 mL)を加え氷冷下で１．５時間撹拌した。反応終了後、減圧濃縮し、クロロホルムで希釈し、水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。減圧濃縮後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン：酢酸エチル = 4：1)で精製し、化合物５(3.23 g, 84%)を得た。
化合物４(3.43 g)をピリジン(40 mL)に溶かして氷冷し、トリクロロアセチルクロリド(513 mL)を加え氷冷下で１．５時間撹拌した。反応終了後、減圧濃縮し、クロロホルムで希釈し、水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。減圧濃縮後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン：酢酸エチル = 4：1)で精製し、化合物５(3.23 g, 84%)を得た。
＜化合物５の同定＞
[a]D -3.3° (c = 1.0 クロロホルム)
1H-NMR d: 7.69-7.62, 7.39-7.10 (40H, m, Ar), 6.88 (1H, d, J = 7.8 Hz, -NH), 4.95 (1H, d, J = 10.5 Hz, PhCH2-), 4.94 (1H, d, J = 11.5 Hz, PhCH2-), 4.89 (1H, d, J = 7.1 Hz, H-1a), 4.76-4.66 (4H, m, PhCH2-x4), 4.54 (1H, d, J = 10.5 Hz, PhCH2-), 4.52 (1H, d, J = 11.5 Hz, PhCH2-), 4.44 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1b), 4.37 (1H, d, J = 12.2 Hz, PhCH2-), 4.33 (1H, d, J = 11.7 Hz, PhCH2-), 4.23 (1H, d, J = 11.7 Hz, PhCH2-), 4.22 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.04 (1H, t, J = 8.8 Hz, H-4a), 3.89 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-4b), 3.83 (1H, t, J = 7.8 Hz, H-3a), 3.77 (1H, dd, J = 7.8, 9.8 Hz, H-2b), 3.71 (1H, dd, J = 7.8, 9.8 Hz, H-2b), 3.66 (1H, dd, J = 3.4, 11.2 Hz, H-6a), 3.41 (1H, dd, J = 2.9, 9.8 Hz, H-3b), 3.40-3.37 (1H, m, H-5b), 3.33-3.29 (2H, m, H-6a, H-6b), 3.07-3.05 (1H, m, H-5a), 1.05 (9H, s, tBu).
MALDI TOF MS : calcd for C72H76Cl3NO11Si: 1263.42, found 1286.26 (+Na)+..
元素分析 Calcd. for C72H76Cl3NO11Si ; C : 68.32, H : 6.05, N: 1.11, Found C : 68.51, H : 5.84, N : 1.01.
以上の測定結果から、構造式５で表される化合物であることが同定された。
[a]D -3.3° (c = 1.0 クロロホルム)
1H-NMR d: 7.69-7.62, 7.39-7.10 (40H, m, Ar), 6.88 (1H, d, J = 7.8 Hz, -NH), 4.95 (1H, d, J = 10.5 Hz, PhCH2-), 4.94 (1H, d, J = 11.5 Hz, PhCH2-), 4.89 (1H, d, J = 7.1 Hz, H-1a), 4.76-4.66 (4H, m, PhCH2-x4), 4.54 (1H, d, J = 10.5 Hz, PhCH2-), 4.52 (1H, d, J = 11.5 Hz, PhCH2-), 4.44 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1b), 4.37 (1H, d, J = 12.2 Hz, PhCH2-), 4.33 (1H, d, J = 11.7 Hz, PhCH2-), 4.23 (1H, d, J = 11.7 Hz, PhCH2-), 4.22 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.04 (1H, t, J = 8.8 Hz, H-4a), 3.89 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-4b), 3.83 (1H, t, J = 7.8 Hz, H-3a), 3.77 (1H, dd, J = 7.8, 9.8 Hz, H-2b), 3.71 (1H, dd, J = 7.8, 9.8 Hz, H-2b), 3.66 (1H, dd, J = 3.4, 11.2 Hz, H-6a), 3.41 (1H, dd, J = 2.9, 9.8 Hz, H-3b), 3.40-3.37 (1H, m, H-5b), 3.33-3.29 (2H, m, H-6a, H-6b), 3.07-3.05 (1H, m, H-5a), 1.05 (9H, s, tBu).
MALDI TOF MS : calcd for C72H76Cl3NO11Si: 1263.42, found 1286.26 (+Na)+..
元素分析 Calcd. for C72H76Cl3NO11Si ; C : 68.32, H : 6.05, N: 1.11, Found C : 68.51, H : 5.84, N : 1.01.
以上の測定結果から、構造式５で表される化合物であることが同定された。
＜工程［3］： 2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-トリクロロアセタミド-D-グルコピラノース（化合物６）の合成＞
化合物５(2.03 g)をテトラヒドロフラン(20 mL)に溶かし、氷冷下で酢酸(917 mL)を加えて１５分間撹拌した。その後、１Ｍ テトラブチルアンモニウムフルオリドーテトラヒドロフラン溶液(6.41 mL)を加え、一晩撹拌した。反応終了後、反応液を濃縮し、残渣をクロロホルムで希釈し、水、飽和食塩水で順次洗浄した。無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥し、減圧濃縮後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン：酢酸エチル 4：1 - 2 : 1)で精製し、化合物６(1.46 g)を収率89%で得た。
化合物５(2.03 g)をテトラヒドロフラン(20 mL)に溶かし、氷冷下で酢酸(917 mL)を加えて１５分間撹拌した。その後、１Ｍ テトラブチルアンモニウムフルオリドーテトラヒドロフラン溶液(6.41 mL)を加え、一晩撹拌した。反応終了後、反応液を濃縮し、残渣をクロロホルムで希釈し、水、飽和食塩水で順次洗浄した。無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥し、減圧濃縮後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン：酢酸エチル 4：1 - 2 : 1)で精製し、化合物６(1.46 g)を収率89%で得た。
＜化合物６の同定＞
1H-NMR d: 7.70-7.69, 7.44-7.11 (30H, m, Ar), 6.88 (1H, d, J = 7.8 Hz, -NH), 5.33 (1H, brt, J = 3.4 Hz, H-1a), 5.02 (1H, d, J = 11.0 Hz, PhCH2-), 4.94 (1H, d, J = 11.5 Hz, PhCH2-), 4.83 (1H, d, J = 11.2 Hz, PhCH2), 4.78 (1H, d, J = 11.0 Hz, PhCH2-), 4.71 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.68 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.53 (1H, d, J = 11.5 Hz, PhCH2-), 4.50 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.32 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-1b), 4.30 (1H, d, J = 12.6 Hz, PhCH2-), 4.29 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.19 (1H, d, J = 11.7 Hz, PhCH2-), 4.14-4.08 (1H, m, H-2a), 4.02-3.93 (2H, m, H-4a, H-5a), 3.89 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-4b), 3.82-3.74 (3H, m, H-2b, H-3a, H-6a), 3.59 (1H, brd, J = 9.8 Hz, H-6a), 3.43-3.34 (4H, m, H-3b, H-5b, H-6b, OH), 3.32-3.28 (1H, m, H-6b).
MALDI TOF MS : calcd for C56H58Cl3NO11 : 1025.30, found 1048.27 (Na)+.
元素分析 Calcd. for C56H58Cl3NO11 ; C : 65.46, H : 5.69, N: 1.36, Found C : 65.73, H : 5.72, N : 1.24.
以上の測定結果から、構造式６で表される化合物であることが同定された。
1H-NMR d: 7.70-7.69, 7.44-7.11 (30H, m, Ar), 6.88 (1H, d, J = 7.8 Hz, -NH), 5.33 (1H, brt, J = 3.4 Hz, H-1a), 5.02 (1H, d, J = 11.0 Hz, PhCH2-), 4.94 (1H, d, J = 11.5 Hz, PhCH2-), 4.83 (1H, d, J = 11.2 Hz, PhCH2), 4.78 (1H, d, J = 11.0 Hz, PhCH2-), 4.71 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.68 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.53 (1H, d, J = 11.5 Hz, PhCH2-), 4.50 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.32 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-1b), 4.30 (1H, d, J = 12.6 Hz, PhCH2-), 4.29 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.19 (1H, d, J = 11.7 Hz, PhCH2-), 4.14-4.08 (1H, m, H-2a), 4.02-3.93 (2H, m, H-4a, H-5a), 3.89 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-4b), 3.82-3.74 (3H, m, H-2b, H-3a, H-6a), 3.59 (1H, brd, J = 9.8 Hz, H-6a), 3.43-3.34 (4H, m, H-3b, H-5b, H-6b, OH), 3.32-3.28 (1H, m, H-6b).
MALDI TOF MS : calcd for C56H58Cl3NO11 : 1025.30, found 1048.27 (Na)+.
元素分析 Calcd. for C56H58Cl3NO11 ; C : 65.46, H : 5.69, N: 1.36, Found C : 65.73, H : 5.72, N : 1.24.
以上の測定結果から、構造式６で表される化合物であることが同定された。
＜工程［4］： 2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-トリクロロアセタミド-a-D-グルコピラノシルフルオリド（化合物７）の合成＞
化合物６(635 mg) をアルゴン下でテトラヒドロフラン(10 mL)に溶かし、氷冷下でジエチルアミノサルファートリフルオリド(121 mL)を加え、1時間撹拌した。反応終了後、メタノールを加え、減圧濃縮した。残渣をクロロホルムで希釈し、水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。減圧濃縮後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル 19：1 - 9 : 1)で精製し、化合物７(582 mg, 92%)をa：b = 19：1の混合物で得た。
化合物６(635 mg) をアルゴン下でテトラヒドロフラン(10 mL)に溶かし、氷冷下でジエチルアミノサルファートリフルオリド(121 mL)を加え、1時間撹拌した。反応終了後、メタノールを加え、減圧濃縮した。残渣をクロロホルムで希釈し、水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。減圧濃縮後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル 19：1 - 9 : 1)で精製し、化合物７(582 mg, 92%)をa：b = 19：1の混合物で得た。
＜化合物７の同定＞
1H-NMR d: 7.36-7.14 (30H, m, Ar), 6.54 (1H, d, J = 8.1 Hz, -NH), 5.75 (1H, dd, J = 2.4, 53.7 Hz, H-1a), 5.03 (1H, d, J = 11.0 Hz, PhCH2-), 4.96 (1H, d, J = 11.5 Hz, PhCH2-), 4.84 (1H, d, J = 11.2 Hz, PhCH2), 4.76 (1H, d, J = 11.2 Hz, PhCH2-), 4.72-4.67 (2H, m, 2PhCH2-), 4.66 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-1b), 4.63 (1H, d, J = 11.2 Hz, PhCH2-), 4.56 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.54 (1H, d, J = 11.5 Hz, PhCH2-), 4.38-4.36 (4H, m, 4PhCH2-), 4.24 (1H, d, J = 11.3 Hz, PhCH2-), 4.15 (1H, t, J = 9.5 Hz H-2a), 3.92-3.89 (2H, m, H-4b, H-5a), 3.86 (1H, brd, J = 11.4 Hz, H-2b), 3.79-3.72 (2H, m, H-3a, H-6a), 3.56 (1H, dd, J = 1.22, 11.0 Hz, H-6a), 3.52-3.43 (1H, m, H-6b), 3.38-3.32 (3H, m, H-4a, H-5b, H-6b).
MALDI TOF MS : calcd for C56H57Cl3FNO10 (M+Na)+, m/z 1050.29, found 1050.39.
元素分析 Calcd. for C56H57Cl3FNO10 ; C : 65.34, H : 5.58, N: 1.36, Found C : 65.45, H : 5.58, N : 1.33.
以上の測定結果から、構造式７で表される化合物であることが同定された。
1H-NMR d: 7.36-7.14 (30H, m, Ar), 6.54 (1H, d, J = 8.1 Hz, -NH), 5.75 (1H, dd, J = 2.4, 53.7 Hz, H-1a), 5.03 (1H, d, J = 11.0 Hz, PhCH2-), 4.96 (1H, d, J = 11.5 Hz, PhCH2-), 4.84 (1H, d, J = 11.2 Hz, PhCH2), 4.76 (1H, d, J = 11.2 Hz, PhCH2-), 4.72-4.67 (2H, m, 2PhCH2-), 4.66 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-1b), 4.63 (1H, d, J = 11.2 Hz, PhCH2-), 4.56 (1H, d, J = 12.0 Hz, PhCH2-), 4.54 (1H, d, J = 11.5 Hz, PhCH2-), 4.38-4.36 (4H, m, 4PhCH2-), 4.24 (1H, d, J = 11.3 Hz, PhCH2-), 4.15 (1H, t, J = 9.5 Hz H-2a), 3.92-3.89 (2H, m, H-4b, H-5a), 3.86 (1H, brd, J = 11.4 Hz, H-2b), 3.79-3.72 (2H, m, H-3a, H-6a), 3.56 (1H, dd, J = 1.22, 11.0 Hz, H-6a), 3.52-3.43 (1H, m, H-6b), 3.38-3.32 (3H, m, H-4a, H-5b, H-6b).
MALDI TOF MS : calcd for C56H57Cl3FNO10 (M+Na)+, m/z 1050.29, found 1050.39.
元素分析 Calcd. for C56H57Cl3FNO10 ; C : 65.34, H : 5.58, N: 1.36, Found C : 65.45, H : 5.58, N : 1.33.
以上の測定結果から、構造式７で表される化合物であることが同定された。
＜工程［5］： N-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-O-[2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-トリクロロアセトアミド-b-D-グルコピラノシル-(1→3)-2-アジド-4,6-O-ベンジリデン-2-デオキシ-a-D-ガラクトピラノシル]-L-セリン アリルエステル（化合物10）の合成＞
予め減圧下で加熱乾燥した粉末モレキュラーシーヴス 4A (1 g)、ビスシクロペンタジエニルジルコノセンジクロリド(315 mg)、および過塩素酸銀(447 mg)の混合物を褐色フラスコ中アルゴン気流下室温でジクロロメタン(3 mL)を加えて３０分攪拌した。この混合物を−１５℃に冷却し、ここに化合物８(415 mg)および化合物７(554 mg)のジクロロメタン(7 mL)溶液を加えた。反応液を−１５℃で１時間攪拌した後、過剰の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を止め、酢酸エチルで希釈した。その後、セライト上でろ過をした。ろ液の有機層を集めて分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(90 : 10)の混合溶媒で溶出した後、トルエンー酢酸エチル(88 : 12)の混合溶媒で溶出して化合物10(670 mg、収率 75%)を得た。
予め減圧下で加熱乾燥した粉末モレキュラーシーヴス 4A (1 g)、ビスシクロペンタジエニルジルコノセンジクロリド(315 mg)、および過塩素酸銀(447 mg)の混合物を褐色フラスコ中アルゴン気流下室温でジクロロメタン(3 mL)を加えて３０分攪拌した。この混合物を−１５℃に冷却し、ここに化合物８(415 mg)および化合物７(554 mg)のジクロロメタン(7 mL)溶液を加えた。反応液を−１５℃で１時間攪拌した後、過剰の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を止め、酢酸エチルで希釈した。その後、セライト上でろ過をした。ろ液の有機層を集めて分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(90 : 10)の混合溶媒で溶出した後、トルエンー酢酸エチル(88 : 12)の混合溶媒で溶出して化合物10(670 mg、収率 75%)を得た。
＜化合物10の同定＞
[a]D +62.9° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 7.76 (2H, d, J = 7.6 Hz, Ar-H), 7.62 (2H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.61-7.06 (40H, m, Ar-H and TCANH), 5.98-5.85 (2H, m, -CH=, FmocNH), 5.351 [1H, s, PhCH(O)2], 5.350 (1H, d, J = 17.1 Hz, =CH2), 5.28 (1H, d, J = 10.7 Hz, =CH2), 5.26 (1H, d, J = 7.1 Hz, H-1b), 5.04 (1H, d, J = 10.3 Hz, -CH2Ph), 4.97 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.95 (1H, d, J = 3.5 Hz, H-1a), 4.85 (1H, d, J = 11.6 Hz, -CH2Ph), 4.82 (1H, d, J = 11.6 Hz, -CH2Ph), 4.74 (1H, d, J = 12.2 Hz, -CH2Ph), 4.73-4.68 (1H, m, -CH2Ph), 4.69 (2H, d, J = 5.9 Hz, -CH2C=), 4.55 (1H, d, J = 10.3 Hz, -CH2Ph), 4.54 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 3.92 (1H, d, J = 2.7 Hz, H-4c), 3.83 (1H, dd, J = 10.7, 3.5 Hz, H-2a), 3.73-3.67 (1H, m, H-5b), 3.59 (1H, brs, H-4a), 3.45 (1H, dd, J = 9.8, 2.7 Hz, H-3c), 3.39 (1H, dd, J = 7.6, 4.9 Hz, H-5c), 3.32 (1H, dd, J = 8.5, 4.9 Hz, H-6c); 13C-NMR (CDCl3) d .169.2 (-CO2), 161.7 (Cl3CCONH), 155.7 (OCONH), 131.1 (-CH=), 119.0 (=CH2), 103.1 (1JCH 160.1 Hz, Gal C-1), 100.4 [PhCH(O)2], 99.8 (GlcNTCA C-1, GalN3 C-1), 92.3 (-CCl3).
MALDI TOF MS: calcd for C90H90N5O19Cl3 1649.53, found; 1672.56 (+Na) +, 1688.34 (+K) +.
元素分析 Calcd for C90H90N5O19Cl3: C, 65.43; H, 5.49; N, 4.24. Found: C, 65.61; H, 5.64 ; N, 3.90. （アジド基不安定のためNの値が少なめである）
以上の測定結果から、構造式10で表される化合物であることが同定された。
[a]D +62.9° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 7.76 (2H, d, J = 7.6 Hz, Ar-H), 7.62 (2H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.61-7.06 (40H, m, Ar-H and TCANH), 5.98-5.85 (2H, m, -CH=, FmocNH), 5.351 [1H, s, PhCH(O)2], 5.350 (1H, d, J = 17.1 Hz, =CH2), 5.28 (1H, d, J = 10.7 Hz, =CH2), 5.26 (1H, d, J = 7.1 Hz, H-1b), 5.04 (1H, d, J = 10.3 Hz, -CH2Ph), 4.97 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.95 (1H, d, J = 3.5 Hz, H-1a), 4.85 (1H, d, J = 11.6 Hz, -CH2Ph), 4.82 (1H, d, J = 11.6 Hz, -CH2Ph), 4.74 (1H, d, J = 12.2 Hz, -CH2Ph), 4.73-4.68 (1H, m, -CH2Ph), 4.69 (2H, d, J = 5.9 Hz, -CH2C=), 4.55 (1H, d, J = 10.3 Hz, -CH2Ph), 4.54 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 3.92 (1H, d, J = 2.7 Hz, H-4c), 3.83 (1H, dd, J = 10.7, 3.5 Hz, H-2a), 3.73-3.67 (1H, m, H-5b), 3.59 (1H, brs, H-4a), 3.45 (1H, dd, J = 9.8, 2.7 Hz, H-3c), 3.39 (1H, dd, J = 7.6, 4.9 Hz, H-5c), 3.32 (1H, dd, J = 8.5, 4.9 Hz, H-6c); 13C-NMR (CDCl3) d .169.2 (-CO2), 161.7 (Cl3CCONH), 155.7 (OCONH), 131.1 (-CH=), 119.0 (=CH2), 103.1 (1JCH 160.1 Hz, Gal C-1), 100.4 [PhCH(O)2], 99.8 (GlcNTCA C-1, GalN3 C-1), 92.3 (-CCl3).
MALDI TOF MS: calcd for C90H90N5O19Cl3 1649.53, found; 1672.56 (+Na) +, 1688.34 (+K) +.
元素分析 Calcd for C90H90N5O19Cl3: C, 65.43; H, 5.49; N, 4.24. Found: C, 65.61; H, 5.64 ; N, 3.90. （アジド基不安定のためNの値が少なめである）
以上の測定結果から、構造式10で表される化合物であることが同定された。
＜工程［5’］： N-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-O-[2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-トリクロロアセトアミド-b-D-グルコピラノシル-(1→3)-2-アジド-4,6-O-ベンジリデン-2-デオキシ-a-D-ガラクトピラノシル]-L-トレオニン アリルエステル（化合物11）の合成＞
予め減圧下で加熱乾燥した粉末モレキュラーシーヴス 4A (1 g)、ビスシクロペンタジエニルジルコノセンクロリド(273 mg)、および過塩素酸銀 (387 mg) の混合物を褐色フラスコ中アルゴン気流下室温でジクロロメタン(3 mL)を加えて３０分攪拌した。この混合物を−１５℃に冷却し、ここに化合物９(368 mg) および化合物７(481 mg)のジクロロメタン(7 mL)溶液を加えた。反応液を−１５℃で１時間攪拌した後、過剰の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を止め、酢酸エチルで希釈した。その後、セライト上でろ過をした。ろ液の有機層を集めて分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(90 : 10)の混合溶媒で溶出した後、トルエンー酢酸エチル(88 : 12)の混合溶媒で溶出して化合物11(622 mg、収率 80%)を得た。
予め減圧下で加熱乾燥した粉末モレキュラーシーヴス 4A (1 g)、ビスシクロペンタジエニルジルコノセンクロリド(273 mg)、および過塩素酸銀 (387 mg) の混合物を褐色フラスコ中アルゴン気流下室温でジクロロメタン(3 mL)を加えて３０分攪拌した。この混合物を−１５℃に冷却し、ここに化合物９(368 mg) および化合物７(481 mg)のジクロロメタン(7 mL)溶液を加えた。反応液を−１５℃で１時間攪拌した後、過剰の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を止め、酢酸エチルで希釈した。その後、セライト上でろ過をした。ろ液の有機層を集めて分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(90 : 10)の混合溶媒で溶出した後、トルエンー酢酸エチル(88 : 12)の混合溶媒で溶出して化合物11(622 mg、収率 80%)を得た。
＜化合物11の同定＞
[a]D +58.8° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 7.77 (2H, d, J = 7.6 Hz, Ar-H), 7.64 (2H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.52-7.06 (40H, m, Ar-H and TCANH), 5.92 (1H, ddt, J = 17.1, 10.5, 6.1 Hz, -CH=), 5.72 (1H, d, J = 9.5 Hz, FmocNH), 5.36 [1H, s, PhCH(O)2], 5.35 (1H, dd, J = 17.1, 1.2 Hz, =CH2), 5.33 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1b), 5.25 (1H, dd, J = 10.5, 1.2 Hz, =CH2), 5.05 (1H, d, J = 10.3 Hz, -CH2Ph), 5.01 (1H, d, J = 3.7 Hz, H-1a), 4.97 (1H, d, J = 11.2 Hz, -CH2Ph), 4.85 (1H, d, J = 11.2 Hz, -CH2Ph), 4.82 (1H, d, J = 11.2 Hz, -CH2Ph), 4.74 (1H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph), 4.70 (1H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph), 4.66 (2H, m, -CH2C=), 4.54 (2H, d, J = 11.2 Hz, -CH2Ph), 4.49-4.39 (4H, m, -CHMe, H-6a, and -CH2CH), 4.40 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1c), 4.33 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.32 (1H, d, J = 11.7 Hz, -CH2Ph), 4.31-4.27 (3H, m, H-3b, H-6a, and -CH2CH), 4.22 (1H, d, J = 11.7 Hz, -CH2Ph), 4.18 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.11-4.04 (2H, m, H-6b and H-3a), 3.92 (1H, d, J = 2.7 Hz, H-4c), 3.93-3.78 (2H, m, H-4b, and H-5a), 3.85 (1H, dd, J = 10.7, 3.7 Hz, H-2a), 3.80 (1H, dd, J = 9.3, 7.8 Hz, H-2c), 3.76-3.72 (2H, m, H-5b, -CHCO2), 3.63 (1H, brd, J = 12.0 Hz, H-6b), 3.58 (1H, brs, H-4a), 3.52-3.45 (3H, m, H-2b, H-6c, and H-3c), 3.41 (1H, dd, J = 7.8, 5.1 Hz, H-5c), 3.32 (1H, dd, J = 8.8, 5.1 Hz, H-6c), 1.30 (3H, d, J = 6.3 Hz, -CH3); 13C-NMR (CDCl3) d .169.7 (-CO2), 161.8 (Cl3CCONH), 156.6 (OCONH), 131.1 (-CH=), 119.2 (=CH2), 103.1 (1JCH 160.1 Hz, Gal C-1), 100.5 [PhCH(O)2], 99.6 (1JCH 160.1 Hz, GlcNTCA C-1), 99.3 (1JCH 173.4 Hz , GalN3 C-1), 92.3 (-CCl3).
MALDI TOF MS: calcd for C91H92N5O19Cl3 1663.55, found; 1686.85 (+Na) +, 1702.75 (+K) +.
元素分析 Calcd for C91H92N5O19Cl3: C, 65.60; H, 5.57; N, 4.20. Found: C, 65.84; H, 5.74; N, 3.87. （アジド基不安定のためNの値が少なめである）
以上の測定結果から、構造式11で表される化合物であることが同定された。
[a]D +58.8° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 7.77 (2H, d, J = 7.6 Hz, Ar-H), 7.64 (2H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.52-7.06 (40H, m, Ar-H and TCANH), 5.92 (1H, ddt, J = 17.1, 10.5, 6.1 Hz, -CH=), 5.72 (1H, d, J = 9.5 Hz, FmocNH), 5.36 [1H, s, PhCH(O)2], 5.35 (1H, dd, J = 17.1, 1.2 Hz, =CH2), 5.33 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1b), 5.25 (1H, dd, J = 10.5, 1.2 Hz, =CH2), 5.05 (1H, d, J = 10.3 Hz, -CH2Ph), 5.01 (1H, d, J = 3.7 Hz, H-1a), 4.97 (1H, d, J = 11.2 Hz, -CH2Ph), 4.85 (1H, d, J = 11.2 Hz, -CH2Ph), 4.82 (1H, d, J = 11.2 Hz, -CH2Ph), 4.74 (1H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph), 4.70 (1H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph), 4.66 (2H, m, -CH2C=), 4.54 (2H, d, J = 11.2 Hz, -CH2Ph), 4.49-4.39 (4H, m, -CHMe, H-6a, and -CH2CH), 4.40 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1c), 4.33 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.32 (1H, d, J = 11.7 Hz, -CH2Ph), 4.31-4.27 (3H, m, H-3b, H-6a, and -CH2CH), 4.22 (1H, d, J = 11.7 Hz, -CH2Ph), 4.18 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.11-4.04 (2H, m, H-6b and H-3a), 3.92 (1H, d, J = 2.7 Hz, H-4c), 3.93-3.78 (2H, m, H-4b, and H-5a), 3.85 (1H, dd, J = 10.7, 3.7 Hz, H-2a), 3.80 (1H, dd, J = 9.3, 7.8 Hz, H-2c), 3.76-3.72 (2H, m, H-5b, -CHCO2), 3.63 (1H, brd, J = 12.0 Hz, H-6b), 3.58 (1H, brs, H-4a), 3.52-3.45 (3H, m, H-2b, H-6c, and H-3c), 3.41 (1H, dd, J = 7.8, 5.1 Hz, H-5c), 3.32 (1H, dd, J = 8.8, 5.1 Hz, H-6c), 1.30 (3H, d, J = 6.3 Hz, -CH3); 13C-NMR (CDCl3) d .169.7 (-CO2), 161.8 (Cl3CCONH), 156.6 (OCONH), 131.1 (-CH=), 119.2 (=CH2), 103.1 (1JCH 160.1 Hz, Gal C-1), 100.5 [PhCH(O)2], 99.6 (1JCH 160.1 Hz, GlcNTCA C-1), 99.3 (1JCH 173.4 Hz , GalN3 C-1), 92.3 (-CCl3).
MALDI TOF MS: calcd for C91H92N5O19Cl3 1663.55, found; 1686.85 (+Na) +, 1702.75 (+K) +.
元素分析 Calcd for C91H92N5O19Cl3: C, 65.60; H, 5.57; N, 4.20. Found: C, 65.84; H, 5.74; N, 3.87. （アジド基不安定のためNの値が少なめである）
以上の測定結果から、構造式11で表される化合物であることが同定された。
＜工程［6］： N-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-O-[2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-トリクロロアセトアミド-b-D-グルコピラノシル-(1→3)-2-アジド-2-デオキシ-a-D-ガラクトピラノシル]-L-セリン アリルエステル（化合物12）の合成＞
化合物10(266 mg)のジクロロメタン(8 mL)溶液に氷冷下で攪拌しつつ８０％トリフルオロ酢酸水溶液(4 mL)をゆっくり加えた。反応液を氷冷下で３０分攪拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて中和し、酢酸エチルで希釈した。有機層を分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(67 : 33)の混合溶媒で溶出した後、トルエンー酢酸エチル (60 : 40) の混合溶媒で溶出して化合物12(237 mg、収率 94%)を得た。
化合物10(266 mg)のジクロロメタン(8 mL)溶液に氷冷下で攪拌しつつ８０％トリフルオロ酢酸水溶液(4 mL)をゆっくり加えた。反応液を氷冷下で３０分攪拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて中和し、酢酸エチルで希釈した。有機層を分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(67 : 33)の混合溶媒で溶出した後、トルエンー酢酸エチル (60 : 40) の混合溶媒で溶出して化合物12(237 mg、収率 94%)を得た。
＜化合物12の同定＞
[a]D +41.9° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 7.74 (2H, d, J = 7.6 Hz, Ar-H), 7.62 (2H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.57-7.06 (35H, m, Ar-H and TCANH), 6.09 (1H, d, J = 8.3 Hz, FmocNH), 5.90 (1H, ddt, J = 16.8, 10.5, 5.9 Hz, -CH=), 5.33 (1H, d, J = 16.8 Hz, =CH2), 5.25 (1H, d, J = 10.5 Hz, =CH2), 5.21 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1b), 5.02 (1H, d, J = 10.5 Hz, -CH2Ph), 4.97 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.85 (1H, d, J = 11.0 Hz, -CH2Ph), 4.84-4.83 (1H, m, H-1a), 4.79 (1H, d, J = 11.0 Hz, -CH2Ph), 4.74 (1H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph), 4.71 (1H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph), 4.69-4.63 (2H, m, -CH2C=), 4.55 (1H, d, J = 10.5 Hz, -CH2Ph), 4.54 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.56-4.52 (1H, m, NCHCO2), 4.44-4.28 (1H, m, H-1c, -NCO2CH2CH, -CH2Ph x 3), 4.23 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.10 (1H, brs, H-4a), 3.34 (1H, dd, J = 8.5, 4.9 Hz, H-6c), 3.24 (1H, brs, -OH), 2.41 (1H, brs, -OH),; 13C-NMR (CDCl3) d .169.3 (-CO2), 161.9 (Cl3CCONH), 155.6 (OCONH), 131.1 (-CH=), 118.9 (=CH2), 103.1 (1JCH 160.9 Hz, Gal C-1), 99.3 (1JCH 168.4 Hz , GalN3 C-1), 98.8 (1JCH 167.6 Hz, GlcNTCA C-1), 92.1 (-CCl3).
MALDI TOF MS: calcd for C83H86N5O19Cl3 1561.50, found; 1584.27 (+Na) +, 1600.24 (+K) +.
元素分析 Calcd for C83H86N5O19Cl3: C, 63.74; H, 5.54; N, 4.48. Found: C, 63.42 ; H, 5.72; N, 4.09. （アジド基不安定のためNの値が少なめである）
以上の測定結果から、構造式12で表される化合物であることが同定された。
[a]D +41.9° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 7.74 (2H, d, J = 7.6 Hz, Ar-H), 7.62 (2H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.57-7.06 (35H, m, Ar-H and TCANH), 6.09 (1H, d, J = 8.3 Hz, FmocNH), 5.90 (1H, ddt, J = 16.8, 10.5, 5.9 Hz, -CH=), 5.33 (1H, d, J = 16.8 Hz, =CH2), 5.25 (1H, d, J = 10.5 Hz, =CH2), 5.21 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1b), 5.02 (1H, d, J = 10.5 Hz, -CH2Ph), 4.97 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.85 (1H, d, J = 11.0 Hz, -CH2Ph), 4.84-4.83 (1H, m, H-1a), 4.79 (1H, d, J = 11.0 Hz, -CH2Ph), 4.74 (1H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph), 4.71 (1H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph), 4.69-4.63 (2H, m, -CH2C=), 4.55 (1H, d, J = 10.5 Hz, -CH2Ph), 4.54 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.56-4.52 (1H, m, NCHCO2), 4.44-4.28 (1H, m, H-1c, -NCO2CH2CH, -CH2Ph x 3), 4.23 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.10 (1H, brs, H-4a), 3.34 (1H, dd, J = 8.5, 4.9 Hz, H-6c), 3.24 (1H, brs, -OH), 2.41 (1H, brs, -OH),; 13C-NMR (CDCl3) d .169.3 (-CO2), 161.9 (Cl3CCONH), 155.6 (OCONH), 131.1 (-CH=), 118.9 (=CH2), 103.1 (1JCH 160.9 Hz, Gal C-1), 99.3 (1JCH 168.4 Hz , GalN3 C-1), 98.8 (1JCH 167.6 Hz, GlcNTCA C-1), 92.1 (-CCl3).
MALDI TOF MS: calcd for C83H86N5O19Cl3 1561.50, found; 1584.27 (+Na) +, 1600.24 (+K) +.
元素分析 Calcd for C83H86N5O19Cl3: C, 63.74; H, 5.54; N, 4.48. Found: C, 63.42 ; H, 5.72; N, 4.09. （アジド基不安定のためNの値が少なめである）
以上の測定結果から、構造式12で表される化合物であることが同定された。
＜工程［6’］： N-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-O-[2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-トリクロロアセトアミド-b-D-グルコピラノシル-(1→3)-2-アジド-2-デオキシ-a-D-ガラクトピラノシル]-L-トレオニン アリルエステル（化合物13）の合成＞
化合物11(403 mg)のジクロロメタン(12 mL)溶液に氷冷下で攪拌しつつ８０％トリフルオロ酢酸水溶液(6 mL)をゆっくり加えた。反応液を氷冷下で１５分攪拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて中和し、酢酸エチルで希釈した。有機層を分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(67 : 33)の混合溶媒で溶出した後、トルエンー酢酸エチル (60 : 40) の混合溶媒で溶出して化合物13(319 mg、収率 83%)を得た。
化合物11(403 mg)のジクロロメタン(12 mL)溶液に氷冷下で攪拌しつつ８０％トリフルオロ酢酸水溶液(6 mL)をゆっくり加えた。反応液を氷冷下で１５分攪拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて中和し、酢酸エチルで希釈した。有機層を分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(67 : 33)の混合溶媒で溶出した後、トルエンー酢酸エチル (60 : 40) の混合溶媒で溶出して化合物13(319 mg、収率 83%)を得た。
＜化合物13の同定＞
[a]D +34.5° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 7.76 (2H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.63 (2H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.41-7.12 (35H, m, Ar-H and TCANH), 5.92 (1H, ddt, J = 17.1, 10.5, 5.9 Hz, -CH=), 5.66 (1H, d, J = 9.3 Hz, FmocNH), 5.34 (1H, brd, J = 17.1 Hz, =CH2), 5.29 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1b), 5.25 (1H, d, J = 10.5 Hz, =CH2), 5.02 (1H, d, J = 10.5 Hz, -CH2Ph), 4.97 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.95 (1H, d, J = 5.1 Hz, H-1a), 4.85 (1H, d, J = 11.0 Hz, -CH2Ph), 4.79 (1H, d, J = 11.0 Hz, -CH2Ph), 4.75 (1H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph), 4.71 (1H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph), 4.65 (2H, d, J = 5.9 Hz, -CH2C=), 4.54 (2H, d, J = 11.2 Hz, -CH2Ph x 2), 4.48-4.20 (1H, m, H-1c), 4.15 (1H, brs, H-4a), 4.01 (1H, dd, J = 10.5, 2.7 Hz, H-3a), 3.94 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-4c), 3.35 (1H, dd, J = 8.5, 4.9 Hz, H-6c), 3.25 (1H, brs, -OH), 2.30 (1H, brs, -OH), 1.30 (3H, d, J = 6.3 Hz, -CH3); 13C-NMR (CDCl3) d .169.8 (-CO2), 162.1 (Cl3CCONH), 156.6 (OCONH), 131.2 (-CH=), 119.2 (=CH2), 103.2 (1JCH 160.1 Hz, Gal C-1), 98.9 (1JCH 175.1 Hz , GalN3 C-1), 98.4 (1JCH 161.8 Hz, GlcNTCA C-1), 92.1 (-CCl3).
MALDI TOF MS: calcd for C84H88N5O19Cl3 1575.51 found; 1598.69 (+Na) +.
元素分析 Calcd for C84H88N5O19Cl3: C, 63.94; H, 5.62; N, 4.44. Found: C, 64.11; H, 5.46; N, 4.15.
以上の測定結果から、構造式13で表される化合物であることが同定された。
[a]D +34.5° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 7.76 (2H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.63 (2H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.41-7.12 (35H, m, Ar-H and TCANH), 5.92 (1H, ddt, J = 17.1, 10.5, 5.9 Hz, -CH=), 5.66 (1H, d, J = 9.3 Hz, FmocNH), 5.34 (1H, brd, J = 17.1 Hz, =CH2), 5.29 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1b), 5.25 (1H, d, J = 10.5 Hz, =CH2), 5.02 (1H, d, J = 10.5 Hz, -CH2Ph), 4.97 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.95 (1H, d, J = 5.1 Hz, H-1a), 4.85 (1H, d, J = 11.0 Hz, -CH2Ph), 4.79 (1H, d, J = 11.0 Hz, -CH2Ph), 4.75 (1H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph), 4.71 (1H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph), 4.65 (2H, d, J = 5.9 Hz, -CH2C=), 4.54 (2H, d, J = 11.2 Hz, -CH2Ph x 2), 4.48-4.20 (1H, m, H-1c), 4.15 (1H, brs, H-4a), 4.01 (1H, dd, J = 10.5, 2.7 Hz, H-3a), 3.94 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-4c), 3.35 (1H, dd, J = 8.5, 4.9 Hz, H-6c), 3.25 (1H, brs, -OH), 2.30 (1H, brs, -OH), 1.30 (3H, d, J = 6.3 Hz, -CH3); 13C-NMR (CDCl3) d .169.8 (-CO2), 162.1 (Cl3CCONH), 156.6 (OCONH), 131.2 (-CH=), 119.2 (=CH2), 103.2 (1JCH 160.1 Hz, Gal C-1), 98.9 (1JCH 175.1 Hz , GalN3 C-1), 98.4 (1JCH 161.8 Hz, GlcNTCA C-1), 92.1 (-CCl3).
MALDI TOF MS: calcd for C84H88N5O19Cl3 1575.51 found; 1598.69 (+Na) +.
元素分析 Calcd for C84H88N5O19Cl3: C, 63.94; H, 5.62; N, 4.44. Found: C, 64.11; H, 5.46; N, 4.15.
以上の測定結果から、構造式13で表される化合物であることが同定された。
＜工程［7］： N-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-O-[2,3-ジ-O-ベンジル-4,6-O-ベンジリデン-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-トリクロロアセトアミド-b-D-グルコピラノシル-(1→6)-[2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-トリクロロアセトアミド-b-D-グルコピラノシル-(1→3)]-2-アジド-2-デオキシ-a-D-ガラクトピラノシル]-L-セリン アリルエステル（化合物15）の合成＞
予め減圧下で加熱乾燥した粉末モレキュラーシーヴス 4A (700 mg)、ビスシクロペンタジエニルジルコノセンクロリド(89 mg)、および過塩素酸銀(127 mg)の混合物を褐色フラスコ中アルゴン気流下室温でジクロロメタン(5 mL)を加えて３０分攪拌した。この混合物を−４０℃に冷却し、ここに予め−４０℃に冷却した、化合物12(218 mg)および2,3-ジ-O-ベンジル-4,6-O-ベンジリデン-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-トリクロロアセトアミド-α-D-グルコピラノシルフルオリド（化合物14） (143 mg)のジクロロメタン(15 mL)溶液を加えた。反応液を-15℃で2時間攪拌した後、過剰の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を止め、酢酸エチルで希釈した。その後、セライト上でろ過をした。ろ液の有機層を集めて分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(80 : 20)の混合溶媒で溶出した後、トルエンー酢酸エチル(75 : 25)の混合溶媒で溶出して化合物15(233 mg、収率 68%)を得た。
予め減圧下で加熱乾燥した粉末モレキュラーシーヴス 4A (700 mg)、ビスシクロペンタジエニルジルコノセンクロリド(89 mg)、および過塩素酸銀(127 mg)の混合物を褐色フラスコ中アルゴン気流下室温でジクロロメタン(5 mL)を加えて３０分攪拌した。この混合物を−４０℃に冷却し、ここに予め−４０℃に冷却した、化合物12(218 mg)および2,3-ジ-O-ベンジル-4,6-O-ベンジリデン-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-トリクロロアセトアミド-α-D-グルコピラノシルフルオリド（化合物14） (143 mg)のジクロロメタン(15 mL)溶液を加えた。反応液を-15℃で2時間攪拌した後、過剰の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を止め、酢酸エチルで希釈した。その後、セライト上でろ過をした。ろ液の有機層を集めて分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(80 : 20)の混合溶媒で溶出した後、トルエンー酢酸エチル(75 : 25)の混合溶媒で溶出して化合物15(233 mg、収率 68%)を得た。
＜化合物15の同定＞
[a]D +28.5 ° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 7.71 (1H, d, J = 6.6 Hz, Ar-H), 7.70 (1H, d, J = 6.8 Hz, Ar-H), 7.61 (1H, d, J = 7.6 Hz, Ar-H), 7.55 (1H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.54-7.09 (60H, m, Ar-H and TCANH), 5.96-5.83 (1H, m, -CH=), 5.80 (1H, d, J = 7.3 Hz, FmocNH), 5.46 [1H, s, PhCH(O)2], 5.31 (1H, d, J = 16.6 Hz, =CH2), 5.21 (1H, d, J = 9.3 Hz, TCANH), 5.21 (1H, d, J = 10.3 Hz, =CH2), 5.13 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1b), 5.01 (1H, d, J = 10.5 Hz, -CH2Ph), 4.97 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.95 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1d), 4.80 (1H, d, J = 5.1 Hz, H-1a), 4.84 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 2.98 (1H, brs, -OH), 2.95 (1H, s, H-4e); 13C-NMR (CDCl3) d 169.0 (-CO2), 161.8 (Cl3CCONH), 161.4 (Cl3CCONH), 155.5 (OCONH), 131.1 (-CH=), 118.9 (=CH2), 102.9 (1JCH 160.1 Hz, Gal C-1), 102.6 (1JCH 160.9 Hz, Gal C-1), 101.2 [PhCH(O)2], 99.3 (1JCH 163.4 Hz, GlcNTCA C-1d), 99.0 (1JCH 169.3 Hz, GlcNTCA C-1b), 97.5 (1JCH 173.4 Hz , GalN3 C-1a), 92.4 (-CCl3), 92.1 (-CCl3).
MALDI TOF MS: calcd for C132H134N6O29Cl6 2476.73, found; 2499.82 (+Na)+.
元素分析 Calcd for C132H134N6O29Cl6: C, 63.90; H, 5.44; N, 3.39. Found: C, 63.68; H, 5.47; N, 3.20.
以上の測定結果から、構造式15で表される化合物であることが同定された。
[a]D +28.5 ° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 7.71 (1H, d, J = 6.6 Hz, Ar-H), 7.70 (1H, d, J = 6.8 Hz, Ar-H), 7.61 (1H, d, J = 7.6 Hz, Ar-H), 7.55 (1H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.54-7.09 (60H, m, Ar-H and TCANH), 5.96-5.83 (1H, m, -CH=), 5.80 (1H, d, J = 7.3 Hz, FmocNH), 5.46 [1H, s, PhCH(O)2], 5.31 (1H, d, J = 16.6 Hz, =CH2), 5.21 (1H, d, J = 9.3 Hz, TCANH), 5.21 (1H, d, J = 10.3 Hz, =CH2), 5.13 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1b), 5.01 (1H, d, J = 10.5 Hz, -CH2Ph), 4.97 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.95 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1d), 4.80 (1H, d, J = 5.1 Hz, H-1a), 4.84 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 2.98 (1H, brs, -OH), 2.95 (1H, s, H-4e); 13C-NMR (CDCl3) d 169.0 (-CO2), 161.8 (Cl3CCONH), 161.4 (Cl3CCONH), 155.5 (OCONH), 131.1 (-CH=), 118.9 (=CH2), 102.9 (1JCH 160.1 Hz, Gal C-1), 102.6 (1JCH 160.9 Hz, Gal C-1), 101.2 [PhCH(O)2], 99.3 (1JCH 163.4 Hz, GlcNTCA C-1d), 99.0 (1JCH 169.3 Hz, GlcNTCA C-1b), 97.5 (1JCH 173.4 Hz , GalN3 C-1a), 92.4 (-CCl3), 92.1 (-CCl3).
MALDI TOF MS: calcd for C132H134N6O29Cl6 2476.73, found; 2499.82 (+Na)+.
元素分析 Calcd for C132H134N6O29Cl6: C, 63.90; H, 5.44; N, 3.39. Found: C, 63.68; H, 5.47; N, 3.20.
以上の測定結果から、構造式15で表される化合物であることが同定された。
＜工程［7'］： N-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-O-[2,3-ジ-O-ベンジル-4,6-O-ベンジリデン-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-トリクロロアセトアミド-b-D-グルコピラノシル-(1→6)-[2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-トリクロロアセトアミド-b-D-グルコピラノシル-(1→3)]-2-アジド-2-デオキシ-a-D-ガラクトピラノシル]-L-トレオニン アリルエステル（化合物16）の合成＞
予め減圧下で加熱乾燥した粉末モレキュラーシーヴス 4A (1 g)、ビスシクロペンタジエニルジルコノセンクロリド (127 mg)、および過塩素酸銀(181 mg)の混合物を褐色フラスコ中アルゴン気流下室温でジクロロメタン(10 mL)を加えて３０分攪拌した。この混合物を−４０℃に冷却し、ここに予め−４０℃に冷却した、化合物13(312 mg)および化合物14(204 mg)のジクロロメタン(20 mL)溶液を加えた。反応液を−１５℃で２時間攪拌した後、過剰の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を止め、酢酸エチルで希釈した。その後、セライト上でろ過をした。ろ液の有機層を集めて分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル (88 : 12) の混合溶媒で溶出した後、トルエンー酢酸エチル(80 : 20)の混合溶媒で溶出して化合物16(351 mg、収率 71%)を得た。
予め減圧下で加熱乾燥した粉末モレキュラーシーヴス 4A (1 g)、ビスシクロペンタジエニルジルコノセンクロリド (127 mg)、および過塩素酸銀(181 mg)の混合物を褐色フラスコ中アルゴン気流下室温でジクロロメタン(10 mL)を加えて３０分攪拌した。この混合物を−４０℃に冷却し、ここに予め−４０℃に冷却した、化合物13(312 mg)および化合物14(204 mg)のジクロロメタン(20 mL)溶液を加えた。反応液を−１５℃で２時間攪拌した後、過剰の飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を止め、酢酸エチルで希釈した。その後、セライト上でろ過をした。ろ液の有機層を集めて分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル (88 : 12) の混合溶媒で溶出した後、トルエンー酢酸エチル(80 : 20)の混合溶媒で溶出して化合物16(351 mg、収率 71%)を得た。
＜化合物16の同定＞
[a]D +21.7° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 7.74 (2H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.60 (2H, t, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.60-7.05 (60H, m, Ar-H and TCANH), 6.95 (1H, d, J = 7.3 Hz, TCANH), 6.00-5.80 (1H, m, -CH=), 5.59 (1H, d, J = 9.5 Hz, FmocNH), 5.45 [1H, s, PhCH(O)2], 5.33 (1H, d, J = 17.1 Hz, =CH2), 5.24 (1H, d, J = 10.3 Hz, =CH2), 5.23 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1b), 5.19 (1H, d, J = 10.5 Hz, -CH2Ph), 5.00 (1H, d, J = 10.5 Hz, -CH2Ph), 4.96 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.88 (1H, d, J = 8.8 Hz, H-1d), 4.87 (1H, d, J = 4.1 Hz, H-1a), 4.84 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.49-4.28 (10H, m, H-1c, H-1e, one of H-6a, -CH2CH-, -CHMe, and one of CH2Ph x 4), 2.99 (1H, brs, -OH), 2.90 (1H, s, H-4e), 1.29 (3H, d, J = 6.3 Hz, -CH3); 13C-NMR (CDCl3) d 169.6 (-CO2), 161.9 (Cl3CCONH), 161.3 (Cl3CCONH), 156.5 (OCONH), 131.1 (-CH=), 119.1 (=CH2), 102.9 (1JCH 160.1 Hz, Gal C-1), 102.5 (1JCH 160.1 Hz, Gal C-1), 101.2 [PhCH(O)2], 99.9 (1JCH 165.9 Hz, GlcNTCA C-1d), 99.0 (1JCH 172.5 Hz , GalN3 C-1a), 98.6 (1JCH 169.2 Hz, GlcNTCA C-1b), 92.4 (-CCl3), 92.1 (-CCl3).
MALDI TOF MS: calcd for C133H136N6O29Cl6 2490.75, found; 2514.13 (+Na) +.
元素分析 Calcd for C133H136N6O29Cl6: C, 64.02; H, 5.49; N, 3.37. Found: C, 64.02; H, 5.32; N, 3.22.
以上の測定結果から、構造式16で表される化合物であることが同定された。
[a]D +21.7° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 7.74 (2H, d, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.60 (2H, t, J = 7.3 Hz, Ar-H), 7.60-7.05 (60H, m, Ar-H and TCANH), 6.95 (1H, d, J = 7.3 Hz, TCANH), 6.00-5.80 (1H, m, -CH=), 5.59 (1H, d, J = 9.5 Hz, FmocNH), 5.45 [1H, s, PhCH(O)2], 5.33 (1H, d, J = 17.1 Hz, =CH2), 5.24 (1H, d, J = 10.3 Hz, =CH2), 5.23 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1b), 5.19 (1H, d, J = 10.5 Hz, -CH2Ph), 5.00 (1H, d, J = 10.5 Hz, -CH2Ph), 4.96 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.88 (1H, d, J = 8.8 Hz, H-1d), 4.87 (1H, d, J = 4.1 Hz, H-1a), 4.84 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.49-4.28 (10H, m, H-1c, H-1e, one of H-6a, -CH2CH-, -CHMe, and one of CH2Ph x 4), 2.99 (1H, brs, -OH), 2.90 (1H, s, H-4e), 1.29 (3H, d, J = 6.3 Hz, -CH3); 13C-NMR (CDCl3) d 169.6 (-CO2), 161.9 (Cl3CCONH), 161.3 (Cl3CCONH), 156.5 (OCONH), 131.1 (-CH=), 119.1 (=CH2), 102.9 (1JCH 160.1 Hz, Gal C-1), 102.5 (1JCH 160.1 Hz, Gal C-1), 101.2 [PhCH(O)2], 99.9 (1JCH 165.9 Hz, GlcNTCA C-1d), 99.0 (1JCH 172.5 Hz , GalN3 C-1a), 98.6 (1JCH 169.2 Hz, GlcNTCA C-1b), 92.4 (-CCl3), 92.1 (-CCl3).
MALDI TOF MS: calcd for C133H136N6O29Cl6 2490.75, found; 2514.13 (+Na) +.
元素分析 Calcd for C133H136N6O29Cl6: C, 64.02; H, 5.49; N, 3.37. Found: C, 64.02; H, 5.32; N, 3.22.
以上の測定結果から、構造式16で表される化合物であることが同定された。
＜工程［8］： N-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-O-[2,3-ジ-O-ベンジル-4,6-O-ベンジリデン-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-2-アセトアミド- 3,6-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-b-D-グルコピラノシル-(1→6)-[2,3,4,6-テトラ-O
-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-アセトアミド-2-デオキシ-b-D-グルコピラノシル-(1→3)]-2-アセトアミド-2-デオキシ-a-D-ガラクトピラノシル]-L-セリン アリルエステル（化合物17）の合成＞
化合物15(254 mg)の酢酸エチル(10 mL)溶液に、室温で攪拌しつつ酢酸(1 mL)と亜鉛末(1 g)を加え、アルゴン雰囲気下、１５０Ｗのマイクロウェーブ照射下にて３０分間攪拌を続けた。クロロホルムで希釈した後、セライト上でろ過をした。ろ液の有機層を集めて分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧濃縮した。得られた残渣をジクロロメタン（8 mL）ーメタノール（2 mL）の混合溶液に溶解し、無水酢酸（1 mL）を加えて室温で一時間撹拌を続けた。反応液を減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(20 : 80)の混合溶媒で溶出した後、クロロホルムーメタノール（95 : 5）の混合溶媒で溶出して化合物17(200 mg、収率 85%)を得た。
-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-アセトアミド-2-デオキシ-b-D-グルコピラノシル-(1→3)]-2-アセトアミド-2-デオキシ-a-D-ガラクトピラノシル]-L-セリン アリルエステル（化合物17）の合成＞
化合物15(254 mg)の酢酸エチル(10 mL)溶液に、室温で攪拌しつつ酢酸(1 mL)と亜鉛末(1 g)を加え、アルゴン雰囲気下、１５０Ｗのマイクロウェーブ照射下にて３０分間攪拌を続けた。クロロホルムで希釈した後、セライト上でろ過をした。ろ液の有機層を集めて分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧濃縮した。得られた残渣をジクロロメタン（8 mL）ーメタノール（2 mL）の混合溶液に溶解し、無水酢酸（1 mL）を加えて室温で一時間撹拌を続けた。反応液を減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(20 : 80)の混合溶媒で溶出した後、クロロホルムーメタノール（95 : 5）の混合溶媒で溶出して化合物17(200 mg、収率 85%)を得た。
＜化合物17の同定＞
[a]D +26.7 ° (c 1.1, クロロホルム)
1H-NMR (DMSO-d6): d 7.85 (3H, d, J = 7.8 Hz, Ar-H), 7.75 (2H, d, J = 8.3 Hz, Ar-H), 7.70-7.67 (2H, m, Ar-H), 7.56-7.02 (60H, m, Ar-H and NH x 4), 5.92-5.81 (1H, m, -CH=), 5.64 [1H, s, PhCH(O)2], 5.29 (1H, d, J = 17.3 Hz, =CH2), 5.18 (1H, d, J = 10.5 Hz, =CH2), 5.09 (1H, d, J = 11.0 Hz, -CH2Ph), 4.88 (1H, d, J = 10.7 Hz, -CH2Ph), 4.84 (1H, d, J = 11.7 Hz, -CH2Ph), 1.83 (3H, s, CH3CO), 1.77 (6H, s, CH3CO x 2); 13C-NMR (CDCl3) d 170.5, 170.1, 170.0, 169.7 (CH3CONH x 3, -CO2All), 155.8 (OCONH), 131.1 (-CH=), 118.8 (=CH2), 102.8 (1JCH 160.9 Hz, Gal C-1), 102.5 (1JCH 165.1 Hz, Gal C-1), 101.0 [PhCH(O)2], 100.3 (1JCH 165.9 Hz, GlcNAc C-1 x 2), 97.8 (1JCH 172.6 Hz , GalNAc C-1), 23.41, 23.36, 23.2 (CH3CO x 3).
MALDI TOF MS: calcd for C134H144N4O30 2288.99 found; 2312.28 (+Na) +, 2328.31 (+K) +.
元素分析 Calcd for C134H144N4O30・0.8H2O: C, 69.82; H, 6.37; N, 2.43. Found: C, 69.82; H, 6.46; N, 2.39.
以上の測定結果から、構造式17で表される化合物であることが同定された。
[a]D +26.7 ° (c 1.1, クロロホルム)
1H-NMR (DMSO-d6): d 7.85 (3H, d, J = 7.8 Hz, Ar-H), 7.75 (2H, d, J = 8.3 Hz, Ar-H), 7.70-7.67 (2H, m, Ar-H), 7.56-7.02 (60H, m, Ar-H and NH x 4), 5.92-5.81 (1H, m, -CH=), 5.64 [1H, s, PhCH(O)2], 5.29 (1H, d, J = 17.3 Hz, =CH2), 5.18 (1H, d, J = 10.5 Hz, =CH2), 5.09 (1H, d, J = 11.0 Hz, -CH2Ph), 4.88 (1H, d, J = 10.7 Hz, -CH2Ph), 4.84 (1H, d, J = 11.7 Hz, -CH2Ph), 1.83 (3H, s, CH3CO), 1.77 (6H, s, CH3CO x 2); 13C-NMR (CDCl3) d 170.5, 170.1, 170.0, 169.7 (CH3CONH x 3, -CO2All), 155.8 (OCONH), 131.1 (-CH=), 118.8 (=CH2), 102.8 (1JCH 160.9 Hz, Gal C-1), 102.5 (1JCH 165.1 Hz, Gal C-1), 101.0 [PhCH(O)2], 100.3 (1JCH 165.9 Hz, GlcNAc C-1 x 2), 97.8 (1JCH 172.6 Hz , GalNAc C-1), 23.41, 23.36, 23.2 (CH3CO x 3).
MALDI TOF MS: calcd for C134H144N4O30 2288.99 found; 2312.28 (+Na) +, 2328.31 (+K) +.
元素分析 Calcd for C134H144N4O30・0.8H2O: C, 69.82; H, 6.37; N, 2.43. Found: C, 69.82; H, 6.46; N, 2.39.
以上の測定結果から、構造式17で表される化合物であることが同定された。
＜工程［8'］： N-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-O-[2,3-ジ-O-ベンジル-4,6-O-ベンジリデン-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-アセトアミド-2-デオキシ-b-D-グルコピラノシル-(1→6)-[2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-アセトアミド-2-デオキシ-b-D-グルコピラノシル-(1→3)]-2-アセトアミド-2-デオキシ-a-D-ガラクトピラノシル]-L-トレオニン アリルエステル（化合物18）の合成＞
化合物16(46 mg)の酢酸エチル(2 mL)溶液に、室温で攪拌しつつ酢酸(0.2 mL)と亜鉛末(180 mg)を加え、 アルゴン雰囲気下、１５０Ｗのマイクロウェーブ照射下にて３０分間攪拌を続けた。クロロホルムで希釈した後、セライト上でろ過をした。ろ液の有機層を集めて分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧濃縮した。得られた残渣をジクロロメタン（2 mL）ーメタノール（0.5 mL）の混合溶液に溶解させ無水酢酸（0.2 mL）を加え、室温で一時間撹拌を続けた。反応液を減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(20 : 80)の混合溶媒で溶出した後、クロロホルムーメタノール（95 : 5）の混合溶媒で溶出して化合物18(33.3 mg、収率 80%)を得た。
化合物16(46 mg)の酢酸エチル(2 mL)溶液に、室温で攪拌しつつ酢酸(0.2 mL)と亜鉛末(180 mg)を加え、 アルゴン雰囲気下、１５０Ｗのマイクロウェーブ照射下にて３０分間攪拌を続けた。クロロホルムで希釈した後、セライト上でろ過をした。ろ液の有機層を集めて分液ロートに移し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧濃縮した。得られた残渣をジクロロメタン（2 mL）ーメタノール（0.5 mL）の混合溶液に溶解させ無水酢酸（0.2 mL）を加え、室温で一時間撹拌を続けた。反応液を減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。トルエンー酢酸エチル(20 : 80)の混合溶媒で溶出した後、クロロホルムーメタノール（95 : 5）の混合溶媒で溶出して化合物18(33.3 mg、収率 80%)を得た。
＜化合物18の同定＞
[a]D +29.5 ° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 3.64 (1H, t, J = 8.5 Hz, H-17), ; 13C-NMR (CDCl3) d 170.6 (CH3CONH), 170.33 (CH3CONH), 170.26 (CH3CONH), 169.8 (-CO2), 156.3 (OCONH), 130.9 (-CH=), 119.3 (=CH2), 103.0 (1JCH 160.9 Hz, Gal C-1), 102.7 (1JCH 165.1 Hz, Gal C-1), 101.1 [PhCH(O)2], 100.5 (1JCH 163.4 Hz, GlcNAc C-1), 100.3 (1JCH 167.6 Hz, GlcNAc C-1), 99.0 (1JCH 170.1 Hz , GalNAc C-1).
MALDI TOF MS: calcd for C135H146N4O30 2303.00, found; 2325.96 (+Na)+, 2341.92 (+K)+.
元素分析 Calcd for C135H146N4O30・H2O: C, 69.81; H, 6.42; N, 2.43. Found: C, 69.84; H, 6.16; N, 2.30.
以上の測定結果から、構造式18で表される化合物であることが同定された。
[a]D +29.5 ° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (CDCl3): d 3.64 (1H, t, J = 8.5 Hz, H-17), ; 13C-NMR (CDCl3) d 170.6 (CH3CONH), 170.33 (CH3CONH), 170.26 (CH3CONH), 169.8 (-CO2), 156.3 (OCONH), 130.9 (-CH=), 119.3 (=CH2), 103.0 (1JCH 160.9 Hz, Gal C-1), 102.7 (1JCH 165.1 Hz, Gal C-1), 101.1 [PhCH(O)2], 100.5 (1JCH 163.4 Hz, GlcNAc C-1), 100.3 (1JCH 167.6 Hz, GlcNAc C-1), 99.0 (1JCH 170.1 Hz , GalNAc C-1).
MALDI TOF MS: calcd for C135H146N4O30 2303.00, found; 2325.96 (+Na)+, 2341.92 (+K)+.
元素分析 Calcd for C135H146N4O30・H2O: C, 69.81; H, 6.42; N, 2.43. Found: C, 69.84; H, 6.16; N, 2.30.
以上の測定結果から、構造式18で表される化合物であることが同定された。
＜工程［9］： N-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-O-[2,3-ジ-O-ベンジル-4,6-O-ベンジリデン-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-アセトアミド-2-デオキシ-b-D-グルコピラノシル-(1→6)-[2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-アセトアミド-2-デオキシ-b-D-グルコピラノシル-(1→3)]-2-アセトアミド-2-デオキシ-a-D-ガラクトピラノシル]-L-セリン（化合物1）の合成＞
化合物17(49 mg)、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム(3 mg)、5,5-ジメチル-1,3-シクロヘキサンジオン(60 mg)のテトラヒドロフラン(5 mL)溶液をアルゴン気流下、室温で３０分攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。先ずクロロホルムーメタノール(95 : 5)の混合溶媒で過剰の5,5-ジメチル-1,3-シクロヘキサンジオンおよび低極性の副生成物を溶出し、次に酢酸 (2%) を含むクロロホルムーメタノール(95 : 5)の混合溶媒で溶出して化合物1(44 mg、収率 93%)を得た。
化合物17(49 mg)、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム(3 mg)、5,5-ジメチル-1,3-シクロヘキサンジオン(60 mg)のテトラヒドロフラン(5 mL)溶液をアルゴン気流下、室温で３０分攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。先ずクロロホルムーメタノール(95 : 5)の混合溶媒で過剰の5,5-ジメチル-1,3-シクロヘキサンジオンおよび低極性の副生成物を溶出し、次に酢酸 (2%) を含むクロロホルムーメタノール(95 : 5)の混合溶媒で溶出して化合物1(44 mg、収率 93%)を得た。
＜化合物1の同定＞
[a]D +31.1 ° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (DMSO-d6): d 7.85 (2H, d, J = 7.6 Hz, Ar-H), 7.80-7.03 (65H, m, Ar-H and NH x 4), 5.63 [1H, s, PhCH(O)2], 5.09 (1H, d, J = 10.7 Hz, -CH2Ph), 4.87 (1H, d, J = 11.0 Hz, -CH2Ph), 4.84 (1H, d, J = 11.7 Hz, -CH2Ph), 1.85 (3H, s, CH3CO), 1.79 (3H, s, CH3CO), 1.77 (3H, s, CH3CO); 13C-NMR (DMSO-d6) d 171.5 (-CO2H), 169.0, 168.8, 168.7 (CH3CONH x 3), 155.8 (OCONH), 102.0 (Gal C-1 x 2), 101.8, 101.4 (GlcNAc C-1 x 2), 99.7 [PhCH(O)2], 97.7 (GalNAc C-1), 23.0 (CH3CO x 3).
MALDI TOF MS: calcd for C131H140N4O30 2248.96 found; 2271.87 (+Na) +, 2287.85 (+K) +.
元素分析 Calcd for C131H140N4O30・H2O: C, 69.36; H, 6.31; N, 2.47. Found: C, 69.34; H, 6.33; N, 2.47.
以上の測定結果から、構造式１で表される化合物であることが同定された。
[a]D +31.1 ° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (DMSO-d6): d 7.85 (2H, d, J = 7.6 Hz, Ar-H), 7.80-7.03 (65H, m, Ar-H and NH x 4), 5.63 [1H, s, PhCH(O)2], 5.09 (1H, d, J = 10.7 Hz, -CH2Ph), 4.87 (1H, d, J = 11.0 Hz, -CH2Ph), 4.84 (1H, d, J = 11.7 Hz, -CH2Ph), 1.85 (3H, s, CH3CO), 1.79 (3H, s, CH3CO), 1.77 (3H, s, CH3CO); 13C-NMR (DMSO-d6) d 171.5 (-CO2H), 169.0, 168.8, 168.7 (CH3CONH x 3), 155.8 (OCONH), 102.0 (Gal C-1 x 2), 101.8, 101.4 (GlcNAc C-1 x 2), 99.7 [PhCH(O)2], 97.7 (GalNAc C-1), 23.0 (CH3CO x 3).
MALDI TOF MS: calcd for C131H140N4O30 2248.96 found; 2271.87 (+Na) +, 2287.85 (+K) +.
元素分析 Calcd for C131H140N4O30・H2O: C, 69.36; H, 6.31; N, 2.47. Found: C, 69.34; H, 6.33; N, 2.47.
以上の測定結果から、構造式１で表される化合物であることが同定された。
＜工程［9'］： N-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-O-[2,3-ジ-O-ベンジル-4,6-O-ベンジリデン-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-アセトアミド-2-デオキシ-b-D-グルコピラノシル-(1→6)-[2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-b-D-ガラクトピラノシル-(1→4)-3,6-ジ-O-ベンジル-2-アセトアミド-2-デオキシ-b-D-グルコピラノシル-(1→3)]-2-アセトアミド-2-デオキシ-a-D-ガラクトピラノシル]-L-トレオニン（化合物2）の合成＞
化合物18(102 mg)、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム(5 mg)、5,5-ジメチル-1,3-シクロヘキサンジオン(124 mg)のテトラヒドロフラン(10 mL)溶液をアルゴン気流下、室温で１時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。先ずクロロホルムーメタノール(95 : 5)の混合溶媒で過剰の5,5-ジメチル-1,3-シクロヘキサンジオンおよび低極性の副生成物を溶出し、次に酢酸 (2%) を含むクロロホルムーメタノール (95 : 5) の混合溶媒で溶出して化合物2(92 mg、収率 92%)を得た。
化合物18(102 mg)、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム(5 mg)、5,5-ジメチル-1,3-シクロヘキサンジオン(124 mg)のテトラヒドロフラン(10 mL)溶液をアルゴン気流下、室温で１時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。先ずクロロホルムーメタノール(95 : 5)の混合溶媒で過剰の5,5-ジメチル-1,3-シクロヘキサンジオンおよび低極性の副生成物を溶出し、次に酢酸 (2%) を含むクロロホルムーメタノール (95 : 5) の混合溶媒で溶出して化合物2(92 mg、収率 92%)を得た。
＜化合物 2の同定＞
[a]D +32.2 ° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (DMSO-d6): d 7.93-7.77, 7.77-7.55, 7.48-7.03 (67H, m, Ar-H and NH x 4), 5.64 [1H, s, PhCH(O)2], 5.08 (1H, d, J = 10.7 Hz, -CH2Ph), 4.88 (1H, d, J = 10.7 Hz, -CH2Ph), 4.84 (1H, d, J = 11.7 Hz, -CH2Ph), 4.82-4.73 (5H, m, H-1b, -CH2Ph x 4), 4.70 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.69 (3H, d, J = 12.7 Hz, -CH2Ph x 3), 4.63 (1H, d, J = 12.5 Hz, -CH2Ph), 4.61 (2H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph x 2), 1.91, 1.794, 1.790 (3H x 3, s, CH3CO x 3), 1.11 (3H, d, J = 6.1 Hz, -CHCH3); 13C-NMR (DMSO-d6) d 171.4 (-CO2H), 169.0, 168.8, 168.4 (CH3CONH x 3), 156.3 (OCONH), 102.0 (1JCH 161.8 Hz, Gal C-1 x 2), 101.3 (1JCH 157.6 Hz, GlcNAc C-1 x 2), 99.7 [PhCH(O)2], 98.5 (1JCH 168.4 Hz , GalNAc C-1), 23.03, 22.97 (CH3CO x 3), 18.8 (CH3CH-).
MALDI TOF MS: calcd for C132H142N4O30 2262.97 found; 2285.75 (+Na)+, 2301.72 (+K)+.
元素分析 Calcd for C131H140N4O30・H2O: C, 69.46; H, 6.36; N, 2.45. Found: C, 69.22; H, 6.22; N, 2.35.
以上の測定結果から、構造式2で表される化合物であることが同定された。
[a]D +32.2 ° (c 1.0, クロロホルム)
1H-NMR (DMSO-d6): d 7.93-7.77, 7.77-7.55, 7.48-7.03 (67H, m, Ar-H and NH x 4), 5.64 [1H, s, PhCH(O)2], 5.08 (1H, d, J = 10.7 Hz, -CH2Ph), 4.88 (1H, d, J = 10.7 Hz, -CH2Ph), 4.84 (1H, d, J = 11.7 Hz, -CH2Ph), 4.82-4.73 (5H, m, H-1b, -CH2Ph x 4), 4.70 (1H, d, J = 11.5 Hz, -CH2Ph), 4.69 (3H, d, J = 12.7 Hz, -CH2Ph x 3), 4.63 (1H, d, J = 12.5 Hz, -CH2Ph), 4.61 (2H, d, J = 12.0 Hz, -CH2Ph x 2), 1.91, 1.794, 1.790 (3H x 3, s, CH3CO x 3), 1.11 (3H, d, J = 6.1 Hz, -CHCH3); 13C-NMR (DMSO-d6) d 171.4 (-CO2H), 169.0, 168.8, 168.4 (CH3CONH x 3), 156.3 (OCONH), 102.0 (1JCH 161.8 Hz, Gal C-1 x 2), 101.3 (1JCH 157.6 Hz, GlcNAc C-1 x 2), 99.7 [PhCH(O)2], 98.5 (1JCH 168.4 Hz , GalNAc C-1), 23.03, 22.97 (CH3CO x 3), 18.8 (CH3CH-).
MALDI TOF MS: calcd for C132H142N4O30 2262.97 found; 2285.75 (+Na)+, 2301.72 (+K)+.
元素分析 Calcd for C131H140N4O30・H2O: C, 69.46; H, 6.36; N, 2.45. Found: C, 69.22; H, 6.22; N, 2.35.
以上の測定結果から、構造式2で表される化合物であることが同定された。
本発明の糖鎖構造をもつ糖ペプチドを合成する方法を確立することは、糖鎖機能の研究、しいては生体制御技術の開発のために重要である。本発明は糖鎖構造をもつ糖ペプチドの化学合成法の基本技術を提供するものであり、さらにペプチド上に展開したり、酵素によって糖鎖の伸長を施すなどの関連分子ライブラリー作成への応用が期待できるのである。
Claims (2)
- 構造式（１）で表される、N-アセチルガラクトサミンの３位と６位水酸基にガラクトシル-β-(1→4)-N-アセチルグルコサミン構造（ラクトサミン）が結合し、ラクトサミン残基のすべての水酸基が、ベンジル基またはベンジリデン基で保護され、かつ、トレオニン残基またはセリン残基のアミノ基が９−フルオレニルメトキシカルボニル基で保護された、コア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物。
ｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル基を、Ｒは水素原子またはメチル
基を表す。） - アミノ化合物を用いて、構造式（２）で表される、ガラクトシル-β-(1→4)-N-アセチルグルコサミン構造（ラクトサミン）のフタロイル化物３の脱フタロイル化を行い、構造式（３）で表される、アミノ体４を合成し（第一工程）、
−ブチルジフェニルシリル基を表す。）
該アミノ体４にトリクロロアセチルクロリドを付加して、構造式（３）で表される、トリクロロアセチル化体５を合成し（第二工程）、
を、Ｒは水素原子またはメチル基を表す。）
該トリクロロアセチル化体５からｔ−ブチルジフェニルシリル基の脱離を行い、構造式（４）で表される、ヘミアセタール化体６を合成し（第三工程）、
該ヘミアセタール化体６をフッ素化して、構造式（５）で表される、フッ素化体７を合成し（第四工程）、
該フッ素化体７を、構造式（６）で表される、単糖アミノ酸誘導体８、９と縮合して、構造式（７）で表される、ベンジル基およびベンジリデン基を有するコア３型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１０、１１を合成し（第五工程）、
フルオレニルメトキシカルボニル基を、Ａｌｌはアリル基を表す。）
ル基を、Ｒは水素原子またはメチル基を、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキ
シカルボニル基を、Ａｌｌはアリル基を表す。）
該糖鎖関連化合物１０、１１を酸で処理して、構造式（８）で表される、ベンジリデン基を除去してコア３型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１２、１３を合成し（第六工程）、
またはメチル基を、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル基を、Ａ
ｌｌはアリル基を表す。）
該糖鎖関連化合物１２、１３を、構造式（９）で表される、ガラクトース残基およびＮ−アセチルグルコサミン残基のすべての水酸基がベンジル基またはベンジリデン基で保護され、かつ、Ｎ−アセチルグルコサミン残基のＮ−アセチル基がＮ−トリクロロアセチル基であって、該残基の１位がフッ素原子で置換された二糖類１４によりグリコシド化して、構造式（１０）で表される、ベンジル基およびベンジリデン基を有するコア４型構造を有する５糖性のＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物１５、１６を合成し（第七工程）、
ル基を表す。）
ル基を、Ｒは水素原子またはメチル基を、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキ
シカルボニル基を、Ａｌｌはアリル基を表す。）
該糖鎖関連化合物１５、１６から金属還元条件下で脱塩素化し、さらにアジド基から変換されたアミノ基をアセチル化して、構造式（１１）で表される、トリアセトアミド体１７、１８を合成し（第八工程）、
水素原子またはメチル基を、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル
基を、Ａｌｌはアリル基を表す。）
該トリアセトアミド体１７、１８の脱アリル化を行い、構造式（１）で表される、コア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物を合成する（第九工程）
ｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル基を、Ｒは水素原子またはメチル
基を表す。）
ことを特徴とする、構造式（１）で表される、コア４型構造を有するＯ−結合型糖タンパク質糖鎖関連化合物の製造方法。
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