JP5009478B2 - 細菌毒素の吸着材、その吸着除去方法および該吸着材を充填してなる吸着器 - Google Patents

Description

技術分野
本発明は、細菌毒素の吸着材、その吸着除去方法および該吸着材を充填してなる吸着器に関する。
背景技術
細菌毒素とは「細菌の代謝産物あるいは構成成分であり、微量で生体に不利な反応を引き起こす物質」と定義される。細菌毒素はその存在部位により内毒素と外毒素の二つに大別でき、前者はタンパク毒素、後者はリポ多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ：以下ＬＰＳと記す）とも呼ばれる。細菌毒素は数多く、現在までに約２００種類の毒素が知られている。代表的な例としては、コレラ毒素、ブドウ球菌α毒素、ボツリヌス毒素、破傷風毒素、エンテロトキシン（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ Ａ、Ｂ、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉの１０種類が知られており、以下各々ＳＥＡ、ＳＥＢ、ＳＥＣ１、ＳＥＣ２、ＳＥＣ３、ＳＥＤ、ＳＥＥ、ＳＥＧ、ＳＥＨ、ＳＥＩと記す）、ベロ毒素、ジフテリア毒素、百日咳毒素、トキシックショックシンドロームトキシン−１（Ｔｏｘｉｃ ｓｈｏｃｋ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｔｏｘｉｎ−１：以下ＴＳＳＴ−１と記す）、エンドトキシンなどが挙げられる。
この中でエンテロトキシンやＴＳＳＴ−１はスーパー抗原と呼ばれている。
一般の抗原は抗原提示細胞に取り込まれ、断片化（１０〜１５個のアミノ酸からなるペプチド化）された抗原フラグメントがＭＨＣ（ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ）のクラスＩＩ分子のポケット部に結合した形で抗原提示細胞表面に提示される。これを特定のＴ細胞クローンのＴＣＲ（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）のα鎖とβ鎮が認識してＴ細胞が活性化され、免疫反応が進んで行く。
一方、スーパー抗原の場合、抗原がフラグメント化されずに抗原提示細胞上のＭＨＣクラスＩＩ分子に直接結合する。さらにこれがＴ細胞上のＴＣＲに認識されＴ細胞が活性化される。この際ＴＣＲのＶβ領域で抗原が認識されるが、一般の抗原の場合と異なり、特定のＶβを表現するほとんど全てのＴ細胞集団に認識され、Ｔ細胞の活性化、ひいてはサイトカインの産生を引き起こす。
このように、スーパー抗原に曝露した個体では、通常の特異的な免疫応答に比べて膨大な量のＴ細胞が活性化され、サイトカイン等の放出が短時間に起こるために生体の異常反応が惹起されると考えられている。
スーパー抗原としては、グラム陽性菌である黄色ブドウ球菌の産生するＴＳＳＴ−１、エンテロトキシン、表皮剥脱毒Ａ（ｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅ Ａ：ＥＴＡ）、レンサ球菌の産生する外毒素（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ｐｙｒｏｇｅｎｉｃ ｅｘｏｔｏｘｉｎ Ａ、Ｂ、Ｃ：ＳＰＥ−Ａ、ＳＰＥ−Ｂ、ＳＰＥ−Ｃ）などが知られている。
エンテロトキシンとは細菌の産生する毒素のひとつで、催吐作用、発熱活性、マイトジェン活性など種々の生物活性を持ち食中毒症状を引き起こしたり、トキシックショックシンドローム（Ｔｏｘｉｃ ｓｈｏｃｋ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：以下ＴＳＳと記す）の原因ともなる。「エンテロトキシン」とは、腸管を意味する「エンテロ」と毒素を表す「トキシン」を組み合わせた言葉で、本来的には下痢を起こす毒素を意味するが、エンテロトキシンが下痢を起こすという証明は成されておらず、実体は完全には明らかになっていない。
エンテロトキシン活性を持つ毒素とは、催吐作用、発熱活性、マイトジェン活性など種々の生物活性を持ち食中毒症状を引き起こしたり、ＴＳＳの原因となる毒素を指し、ブドウ球菌の産生するエンテロトキシン、キャンピロバクターの産生する易熱性エンテロトキシン（ｈｅａｔ−ｌａｂｉｌｅ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ：以下ＬＴと記す）、毒素原性大腸菌の産生するＬＴ、耐熱性エンテロトキシン（ｈｅａｔ−ｓｔａｂｌｅ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ：ＳＴ）等が知られている。
ブドウ球菌は、ヒトをはじめとする各種動物の皮膚、鼻腔、口腔、咽頭、泌尿器、腸管、あるいは空気中、下水、河川、食品などに広く分布しており、菌種も多い。数多いブドウ球菌の中で、ヒトに病原性を示すのはコアグラーゼ腸性菌であるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（以下黄色ブドウ球菌と記す）である。黄色ブドウ球菌は種々の感染症、例えば、ＴＳＳやブドウ球菌性熱傷様皮膚症候群（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ ｓｃａｌｅｄ ｓｋｉｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ＳＳＳＳ）を引き起こしたり、院内感染の起因菌となり問題となっている。また、コアグラーゼ陰性菌あっても、例えばＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓは心内膜炎、髄膜炎、敗血症などの起因菌となり、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｔｉｃｕｓは尿路感染症の起因菌となる。
ブドウ球菌由来病原性因子として、Ｃｌｕｍｐｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ、ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ、ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ、ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ、ｃｏｌｌａｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ、ｃｏａｇｕｌａｓｅ、ｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅ／ａｄｈｅｓｉｎ、ｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｎ、２２０−ｋＤａ ａｄｈｅｓｉｎ、ＳＥＡ、ＳＥＢ、ＳＥＣ１、ＳＥＣ２、ＳＥＣ３、ＳＥＤ、ＳＥＥ、ＳＥＧ、ＳＥＨ、ＳＥＩ、ＴＳＳＴ−１、ｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅ ｔｏｘｉｎ Ａ、ｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅ ｔｏｘｉｎ Ｂ、ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ、ｌｉｐａｓｅ、Ｖ８ ｐｒｏｔｅａｓｅ、ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ、ｐａｎｔｏｎ−ｖａｌｅｎｔｉｎｅ ｌｅｕｃｏｃｉｄｉｎ、ｌｅｕｃｏｃｉｄｉｎｅ Ｒ、ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅ、ｓｔａｐｈｙｌｏｋｉｎａｓｅ、α−ｔｏｘｉｎ、β−ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ、γ−ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ、δ−ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ、ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ｃ、ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅ（ｅｌａｓｔａｓｅ）、ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ等の種々の毒素、酵素等の生物活性物質が知られている。
これら細菌毒素により引き起こされる病気も多種多様である。食中毒、旅行者下痢症などの比較的軽度なものから、致死的下痢、破傷風、百日咳、ボツリヌス症、ジフテリア、コレラ、ＴＳＳ、敗血症などの死に至る可能性のある重篤なものまで、様々な病気が細菌毒素によって引き起こされる。
例えば敗血症、ＴＳＳの治療には抗生物質、γ−グロブリン製剤などが用いられているが、依然死亡率は高い。食中毒に関しても、いくら衛生面に気をつけても食中毒の発生を完全に防ぐことは困難であり、さらに充分に加熱した食品を摂取しても、既に食品中にエンテロトキシン等の耐熱性毒素が含まれていれば食中毒を引き起こす。
スーパー抗原の吸着・除去に関しては特開平８−３１９４３１号公報で、ある特定の側鎖を持つ吸着材が開示されているが、能力的に充分とはいえない。
また、本発明者らは以前にｌｏｇＰ（Ｐはオクタノール−水系での分配係数）値が２．５０以上の化合物を固定してなる材料が良好なＴＳＳＴ−１（細菌毒素の一種）吸着能を有することを見出した（特開平１０−２９０８３３号公報）が、このような吸着材を得るには多くの工程が必要となる。
各種毒素に特異的な抗体等を用いれば血液、血漿、血清等の体液や培養上清、食料品、飲料物中から細菌毒素を除去することは可能であるが、これらは高価であるし、滅菌により変性し吸着能力が著しく低下する等の欠点を有している。
また、エンドトキシンに関しては、体液中から除去するための吸着材が種々知られている。例えば、特公平１−１６３８９号公報では、適当な担体にエンドトキシンの解毒剤として知られているポリミキシンを固定した吸着材が開示されている。本吸着材はグラム陰性菌の感染に対しては有効であるが、グラム陽性菌の感染、あるいはグラム陽性菌とグラム陰性菌の複合感染の場合、エンドトキシンの除去のみでは高い効果は期待できない。
さらに、近年ＴＳＳＴ−１がスーパー抗原として免疫系を賦活化しエンドトキシンの毒性を数千倍にも増強するため、臨床的には敗血症がおきない低濃度のエンドトキシンの存在によっても敗血症が引き起こされることが示されている。
そこで、安価で簡便に製造でき、効果の高い細菌毒素の吸着材が強く望まれていた。
発明の要約
本発明の目的は、従来技術の欠点を解消した細菌毒素の吸着材、その吸着除去方法および該吸着材を充填してなる吸着器を提供することである。
本発明者らは課題解決に向けて鋭意検討し、細孔半径の最頻値が２０オングストロームから１０００オングストロームの多孔質水不溶性材料を用いることにより、非常に高率に細菌毒素を吸着できることを見出した。即ち、本発明は、細孔半径の最頻値が２０オングストロームから１０００オングストロームである多孔質水不溶性材料から成ることを特徴とする細菌毒素の吸着材に関する。
発明の詳細な開示
本発明者らは、細菌毒素の吸着に有効な化合物の探索にあたり、種々の水不溶性材料、あるいはこれらを修飾したものの細菌毒素吸着能を評価した。その結果、細菌毒素吸着体として好適な吸着材は、細孔半径の最頻値が２０オングストロームから１０００オングストロームの多孔質水不溶性材料であった。細孔半径の最頻値が２０オングストローム以下の吸着材を用いた場合は、細菌毒素の吸着量が少なく、そのために実用性が低下する。また細孔半径の最頻値が１０００オングストローム以上の吸着材を用いた場合は、細菌毒素以外のタンパク質（主としてアルブミン）の吸着量が多くなり、実質的に細菌毒素の吸着量が低下するとともに、選択性の点で実用性が低下する。したがって、本発明に用いる多孔質水不溶性材料の有する好ましい細孔半径の最頻値は２０オングストロームから１０００オングストローム、さらに好ましくは４０オングストロームから６００オングストローム、特に好ましくは５０オングストロームから４００オングストロームである。
本発明における多孔質水不溶性材料とは、内部に細孔構造を持っており、常温常圧で固体であり水に対する溶解度が極めて小さい材料のことをいう。
多孔質水不溶性材料の細孔構造は、細孔容積、比表面積、細孔径分布などで表される。これらの指標は、窒素等の気体の吸着等温線から求める気体吸着法、水銀ポロシメーターによる水銀圧入法、電子顕微鏡法、Ｘ線小角散乱法、などで測定できる（多孔質体の性質とその応用技術２４８ページ〜２８８ページ、監修者竹内 雍、発行所 株式会社フジ・テクノシステム）。厳密に区分はできないが、一般的に孔径１００オングストローム以上の、いわゆるマクロ孔は水銀圧入法を用い、１００オングストローム以下の、いわゆるミクロ孔は気体吸着法を用いるのが好ましいと考えられている。
しかし、材料の性質によっては水銀圧入法による測定時の圧力による細孔の変形が起こるため、測定方法の選択は、その材料の物性も加味して適切な方法を選択する必要がある。
通常、細孔径分布はＸ軸に細孔半径（単位はオングストロームなど）を、Ｙ軸に積算細孔容積（単位はｍＬ／ｇなど）を微分した値（単位はｍＬ／ｇ・オングストロームなど）をとって示される。最頻値（モード、並数）とは分布の中で最も度数の高い値のことである。よって、本発明における細孔半径の最頻値とは、前述の測定方法などから求められる細孔径分布において、積算細孔容積の微分値が最大になる細孔半径を指す。
本発明における多孔質水不溶性材料の形状としては、例えば粒状、板状、繊維状および中空糸状などがあげられるが、これらに限定されず、また大きさも特に限定されない。
本発明における吸着材として用いられる多孔質水不溶性材料は、活性炭などの疎水性無機材料、アクリル系材料などの中間極性有機材料、およびポリスチレン系材料などの疎水性有機材料、またこれらの組み合わせにより得られる有機−有機、有機−無機などの複合材料などが好ましく、さらには疎水性有機材料であるポリスチレン系材料がより好ましい。
ここでいうポリスチレン系材料とは主としてスチレンおよびその誘導体の重合体を包含する高分子材料であり、スチレンおよびその誘導体のホモポリマーでも、スチレン以外の高分子を含む共重合体であっても良く、ジビニルベンゼン及び／又はその誘導体との共重合体も含む。
またここでいうアクリル系材料とは、主としてアクリル酸、メタクリル酸およびそれらの誘導体の重合体を包含する高分子化合物であり、アクリルおよびその誘導体のホモポリマーでも、アクリル以外の高分子を含む共重合体であっても良く、中間極性を示す有機材料をいい、親水性有機材料であるポリアクリルアミドは除く。アクリル系高分子の中ではメタクリル酸エステル樹脂が特に好ましい。
更に、本発明でいう活性炭およびその類似物質とは、一般的に用いられる活性炭および炭化表面を持つ水不溶性多孔体を指す。活性炭は形態的に粉末活性炭、粒状活性炭、繊維状活性炭、成形活性炭などに分類され、またその材料も木片、製糖廃物などの植物系、泥炭、石油ピッチなどの鉱物系、アクリル樹脂、フェノール樹脂などの合成素材、海草、穀物などの天然素材など様々であるが、これらに限定されず、また大きさも特に限定されない。
血液適合性向上等の目的で、細菌毒素の吸着能を損なわない程度に、これら材料への適当な側鎖やリガンドの導入、または親水性の材料による被覆などの処理をしても良い。側鎖やリガンドの例としては、水酸基、アミノ基を有するものがあげられ、親水性の材料の例としては、ヒドロキシエチルメタクリレートの重合体、セルロースなどがあげられるが、これらに限定されるものではない。ただし、上記処理を行わなくても、細孔半径の最頻値が上記範囲内にあれば、本発明の効果を達成することができる。
本発明における細菌毒素とは「細菌の代謝産物あるいは構成成分であり、微量で生体に不利な反応を引き起こす物質」であり、エルトール型コレラ溶血毒、レンサ球菌ストレプトリシンＯ、レンサ球菌ストレプトリシンＳ、ブドウ球菌α毒素、緑膿菌ロイコシジン、ボツリヌス毒素、破傷風毒素、毒素原性大腸菌耐熱性エンテロトキシン、腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒、ベロ毒素、ジフテリア毒素、百日咳毒素、コアグラーゼ、エキソホリアチン、テトロドトキシン、ＴＳＳＴ−１、エンドトキシンなどが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明におけるスーパー抗原とは、通常の特異的な免疫応答に比べて膨大な量のＴ細胞が活性化することにより、生体に異常反応を惹起する物質を指し、黄色ブドウ球菌の産生するＴＳＳＴ−１、エンテロトキシン、表皮剥脱毒Ａ（ｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅ Ａ：ＥＴＡ）、レンサ球菌の産生する外毒素（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ｐｙｒｏｇｅｎｉｃ ｅｘｏｔｏｘｉｎ Ａ、Ｂ、Ｃ：ＳＰＥ−Ａ、ＳＰＥ−Ｂ、ＳＰＥ−Ｃ）などが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明におけるエンテロトキシン活性を持つ毒素とは、催吐作用、発熱活性、マイトジェン活性など種々の生物活性を持ち、食中毒症状を引き起こしたりＴＳＳの原因となる毒素を指し、ブドウ球菌の産生するエンテロトキシン、キャンピロバクターの産生するＬＴ、毒素原性大腸菌の産生するＬＴ、耐熱性エンテロトキシン（ｈｅａｔ−ｓｔａｂｌｅ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ：ＳＴ）などが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明におけるブドウ球菌由来病原性因子とは、ブドウ球菌が産生する生体に異常反応を惹起する物質を指し、Ｃｌｕｍｐｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ、ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ、ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ、ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ、ｃｏｌｌａｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ、ｃｏａｇｕｌａｓｅ、ｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅ／ａｄｈｅｓｉｎ、ｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｎ、２２０−ｋＤａａｄｈｅｓｉｎ、ＳＥＡ、ＳＥＢ、ＳＥＣ１、ＳＥＣ２、ＳＥＣ３、ＳＥＤ、ＳＥＥ、ＳＥＧ、ＳＥＨ、ＳＥＩ、ＴＳＳＴ−１、ｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅ ｔｏｘｉｎ Ａ、ｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅ ｔｏｘｉｎ Ｂ、ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ、ｌｉｐａｓｅ、Ｖ８ ｐｒｏｔｅａｓｅ、ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ、ｐａｎｔｏｎ−ｖａｌｅｎｔｉｎｅ ｌｅｕｃｏｃｉｄｉｎ、ｌｅｕｃｏｃｉｄｉｎｅ Ｒ、ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅ、ｓｔａｐｈｙｌｏｋｉｎａｓｅ、α−ｔｏｘｉｎ、β−ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ、γ−ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ、δ−ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ、ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ｃ、ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅ（ｅｌａｓｔａｓｅ）、ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ等の種々の毒素、酵素等の生物活性物質が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明による吸着材は優れた細菌毒素の吸着能力を有しているが、特にスーパー抗原、エンテロトキシン活性を持つ毒素、ブドウ球菌由来病原性因子の吸着に優れている。
本発明における細菌毒素吸着材は、体液、培養上清、食料品、飲料物中からの細菌毒素の吸着に適しているが、特に体液からの細菌毒素の吸着除去に適している。
本発明における体液としては、血液、血漿、血清、腹水、リンパ液、関節内液、およびこれらから得られた分画成分、ならびにその他の生体由来の液性成分があげられる。
本発明による吸着材を用いて体液中より細菌毒素を吸着除去する方法には種々の方法がある。最も簡便な方法としては、体液を取り出してバッグなどに貯留し、これに吸着材を混合して黄色細菌毒素を吸着除去したのち、吸着材を濾別して細菌毒素が除去された体液をえる方法があげられる。ほかの方法としては、体液の入口と出口を有し、少なくとも出口には体液は通過するが吸着材は通過しないフィルターを装着した容器に吸着材を充填し、これに体液を流す方法がある。いずれの方法も用いうるが、後者の方法は操作も簡便であり、また体外循環回路に組み込むことにより、患者の体液、とくに血液から効率よくオンラインで細菌毒素を除去することが可能である。
ここでいう体外循環回路では、本発明の吸着材を単独で用いることもできるが、ほかの体外循環治療システムとの併用も可能である。併用の例としては、たとえば人工透析回路などがあげられ、透析療法との組み合わせに用いることもできる。
つぎに、前記細菌毒素の吸着材を用いた本発明の細菌毒素吸着器を、一実施例の概略断面図である図１に基づき説明する。図１中、１は体液の流入口、２は体液の流出口、３は本発明の細菌毒素吸着材、４および５は吸着材流出防止フィルター、６はカラム、７は細菌毒素吸着器である。しかしながら、細菌毒素吸着器はこのような具体例に限定されるものではなく、液の入口、出口を有し、かつ細菌毒素吸着材の容器外への流出防止具を備えた容器内に前記吸着材を充填したものであれば、どのようなものでもよい。
前記流出防止具には、メッシュ、不織布、綿栓などのフィルターがあげられる。また、容器の形状、材質、大きさにはとくに限定はないが、形状としては筒状容器が好ましい。容器の材質として好ましいのは耐滅菌性を有する素材であるが、具体的にはシリコンコートされたガラス、ポリプロピレン、塩化ビニール、ポリカーボネート、ポリサルフォン、ポリメチルペンテンなどが挙げられる。容器の容量は５０〜１５００ｍｌで直径は２〜２０ｃｍが好ましく、さらに容量は１００〜８００ｍｌで直径は３〜１５ｃｍが好ましく、特に容量は１５０〜４００ｍｌで直径は４〜１０ｃｍが好ましい。
発明を実施するための最良の形態
以下、実施例に基づき本発明をさらに詳細に述べるが、本発明は以下の実施例にのみ限定されるものではない。
（実施例１）
細菌毒素吸着材としてスチレン−ジビニルベンゼン共重合体（ＤＩＡＩＯＮＨＰ−２０：三菱化学社製）を使用し、以下の実験を実施した。本材料は細孔半径の最頻値が１００オングストロームから２００オングストロームの範囲にある吸着材である。細孔径は水銀圧入法による測定結果である。
細菌毒素としてＴＳＳＴ−１（トキシンテクノロジー社製）を用い、ウシ胎児血清中（ＦＢＳ）での吸着能力を評価した。ＴＳＳＴ−１濃度は約５ｎｇ／ｍＬに設定した。
すなわち、上記吸着材料０．２ｍＬとＴＳＳＴ−１を含むＦＢＳ１．２ｍＬとを混合し、３７℃にて２Ｈｒｓ振盪した。２Ｈｒｓ後、吸着材と上清を分離し、上清のＴＳＳＴ−１濃度をＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏ Ｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ）法にて測定した。
ＴＳＳＴ−１のＥＬＩＳＡは以下のようにして行った。一次抗体ウサギ抗ＴＳＳＴ−１ ＩｇＧ（トキシンテクノロジー社製）をコーティング緩衝液で１６００倍に希釈しマイクロプレートに１００μｌずつ分注した。４℃で一晩おいたのち、マイクロプレートを洗浄した。３％ウシ血清アルブミン溶液を２００μｌずつマイクロプレートに分注し、室温で２時間おいたのち、マイクロプレートを洗浄した。そこにＴＳＳＴ−１の標準液およびインキュベート前後の上清を１００μｌマイクロプレートに入れた。室温で２時間おいたのち洗浄した。二次抗体ウサギ抗ＴＳＳＴ−１ ＨＲＰ（トキシンテクノロジー社製）を１％ウシ血清アルブミン溶液で４００倍に希釈し１００μｌずつ分注した。室温で２時間おいたのち洗浄した。オルトフェニレンジアミン溶液を１００μｌずつ分注し室温で１０分間おいた。４規定硫酸を１００μｌずつ分注し、４９２ｎｍでの吸光度を測定した。標準液の吸光度と比較してインキュベート前後の上清のＴＳＳＴ−１濃度を求めた。
（実施例２）
細菌毒素吸着材としてスチレン−ジビニルベンゼン共重合体（ＤＩＡＩＯＮＨＰ−４０：三菱化学社製）を使用し、実施例１と同様の条件でＴＳＳＴ−１の吸着能力を評価した。本材料は細孔半径の最頻値が２００オングストロームから３００オングストロームの範囲にある吸着材である。細孔径は水銀圧入法による測定結果である。
（実施例３）
細菌毒素吸着材としてスチレン−ジビニルベンゼン共重合体（ＤＩＡＩＯＮＨＰ−５０：三菱化学社製）を使用し、実施例１と同様の条件でＴＳＳＴ−１の吸着能力を評価した。本材料は細孔半径の最頻値が９００オングストロームから１０００オングストロームの範囲にある吸着材である。細孔径は水銀圧入法による測定結果である。
（実施例４）
細菌毒素吸着材としてスチレン−ジビニルベンゼン共重合体（ＤＩＡＩＯＮＳＰ−８７５：三菱化学社製）を使用し、実施例１と同様の条件でＴＳＳＴ−１の吸着能力を評価した。本材料は細孔半径の最頻値が２０オングストロームから３０オングストロームの範囲にある吸着材である。細孔径は窒素吸着法による測定結果である。
（実施例５）
細菌毒素吸着材としてメタクリル酸エステル樹脂（アンバーライトＸＡＤ−７：オルガノ株式会社製）を使用し、実施例１と同様の条件でＴＳＳＴ−１の吸着能力を評価した。本材料は細孔半径の最頻値が５００オングストロームから６００オングストロームの範囲にある吸着材である。細孔径は水銀圧入法による測定結果である。
（実施例６）
細菌毒素吸着材として石油ピッチ系球状活性炭を使用し、実施例１と同様の条件でＴＳＳＴ−１の吸着能力を評価した。本材料は細孔半径の最頻値が２０オングストロームから３０オングストロームの吸着材である。細孔径は窒素吸着法による測定結果である。
（比較例１）
吸着材と同容積の生理食塩液とＴＳＳＴ−１添加ＦＢＳを混合して実施例１と同様の評価を実施した。
実施例１から６、及び比較例１の結果を表１に示す。ここで吸着率は次式により算出した。
吸着率（％）＝１００×（比較例１の濃度−実施例の濃度）／比較例１の濃度

（実施例７）
細菌毒素吸着材としてスチレン−ジビニルベンゼン共重合体（ＤＩＡＩＯＮＨＰ−２０：三菱化学社製）を使用し、以下の実験を実施した。本材料は細孔半径の最頻値が１００オングストロームから２００オングストロームの範囲にある吸着材である。細孔径は水銀圧入法による測定結果である。
細菌毒素としてエンテロトキシンのうちＳＥＡ、ＳＥＢ、ＳＥＣ１、ＣＥＤ、ＳＥＥ（トキシンテクノロジー社製）を用い、ウシ胎児血清中（ＦＢＳ）での吸着能力を評価した。
すなわち、上記吸着材料０．２ｍＬとエンテロトキシンを適当量含むＦＢＳ１．２ｍＬとを混合し、３７℃にて２Ｈｒｓ振盪した。２Ｈｒｓ後、吸着材と上清を分離し、上清のエンテロトキシン濃度をＥＬＩＳＡキット（ｒ−Ｂｉｏｐｈａｒｍ社製）にて測定した。
（比較例２）
吸着材と同容積の生理食塩液とエンテロトキシン添加ＦＢＳを混合して実施例７と同様の評価を実施した。
実施例７、及び比較例２の結果を表２に示す。ここで吸着率は次式により算出した。
吸着率（％）＝１００×（比較例２の濃度−実施例７の濃度）／比較例２の濃度

産業上の利用の可能性
本発明によれば、細孔半径の最頻値が２０オングストロームから１０００オングストロームの多孔質水不溶性材料から成ることを特徴とする細菌毒素の吸着材を用いることにより細菌毒素を効率良く吸着・除去することが可能である。
【図面の簡単な説明】
図１は、本発明の細菌毒素吸着器の一実施例の概略断面説明図である。
符号の説明
１ 体液の入口
２ 体液の出口
３ 細菌毒素吸着材
４、５ 吸着材流出防止フィルター
６ カラム
７ 細菌毒素吸着器

Claims (3)

1. 細孔半径の最頻値が１００オングストロームから６００オングストロームである、ポリスチレン系材料又はアクリル系材料からなる多孔質水不溶性材料から成ることを特徴とする、トキシックショックシンドロームトキシン−１、及び、エンテロトキシン活性を持つ毒素からなる群より選択される少なくとも１種の細菌毒素の吸着材。
2. 請求項１に記載の吸着材と、細菌毒素を含有する液体を接触させる工程を包含する、細菌毒素の吸着除去方法。
3. 液の入口および出口を有し、かつ、吸着材の容器外への流出防止手段を備えた容器内に、請求項１に記載の吸着材を充填してなる細菌毒素の吸着器。

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