RU2631603C1 - Средство для ингибирования продукции стафилококками энтеротоксинов и удаления их из биологических субстратов - Google Patents
Средство для ингибирования продукции стафилококками энтеротоксинов и удаления их из биологических субстратов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2631603C1 RU2631603C1 RU2016128486A RU2016128486A RU2631603C1 RU 2631603 C1 RU2631603 C1 RU 2631603C1 RU 2016128486 A RU2016128486 A RU 2016128486A RU 2016128486 A RU2016128486 A RU 2016128486A RU 2631603 C1 RU2631603 C1 RU 2631603C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- enterosgel
- production
- enterotoxins
- staphylococci
- inhibition
- Prior art date
Links
- 231100000655 Enterotoxin Toxicity 0.000 title claims abstract description 40
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims abstract description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title abstract description 18
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 title description 12
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 title description 8
- -1 polymethylsiloxane Polymers 0.000 claims abstract description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims abstract 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 24
- 239000002609 media Substances 0.000 description 19
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 11
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 11
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 7
- UNJFKXSSGBWRBZ-BJCIPQKHSA-N Ceftibuten Chemical compound S1C(N)=NC(C(=C\CC(O)=O)\C(=O)N[C@@H]2C(N3C(=CCS[C@@H]32)C(O)=O)=O)=C1 UNJFKXSSGBWRBZ-BJCIPQKHSA-N 0.000 description 6
- 208000005374 Poisoning Diseases 0.000 description 6
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 6
- 231100000617 Superantigen Toxicity 0.000 description 5
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 101700032127 ETX1 Proteins 0.000 description 4
- 101700029730 ETX2 Proteins 0.000 description 4
- 231100000614 Poison Toxicity 0.000 description 4
- 101710023118 btfP Proteins 0.000 description 4
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 4
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 4
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 4
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 239000004111 Potassium silicate Substances 0.000 description 3
- 231100000765 Toxin Toxicity 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 230000000688 enterotoxigenic Effects 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000009114 investigational therapy Methods 0.000 description 3
- 230000000813 microbial Effects 0.000 description 3
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 108020003112 toxins Proteins 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 2
- 208000009863 Chronic Kidney Failure Diseases 0.000 description 2
- 231100000601 Intoxication Toxicity 0.000 description 2
- 206010038444 Renal failure chronic Diseases 0.000 description 2
- 101710044433 SAG Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 2
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 2
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic Effects 0.000 description 2
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 101700009135 etxB Proteins 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal Effects 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 2
- 230000000607 poisoning Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 206010027654 Allergic conditions Diseases 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 206010067410 Endotoxaemia Diseases 0.000 description 1
- 230000036826 Excretion Effects 0.000 description 1
- 206010016952 Food poisoning Diseases 0.000 description 1
- 206010017916 Gastroenteritis staphylococcal Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 Gastrointestinal Tract Anatomy 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 229940047122 Interleukins Drugs 0.000 description 1
- 206010022678 Intestinal infection Diseases 0.000 description 1
- 208000002551 Irritable Bowel Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000001083 Kidney Disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001821 Langerhans Cells Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 Mucous Membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003819 Peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000006641 Skin Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000008582 Staphylococcal Food Poisoning Diseases 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229940076185 Staphylococcus aureus Drugs 0.000 description 1
- 101710037438 TST Proteins 0.000 description 1
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 description 1
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010001801 Tumor Necrosis Factor-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloids Natural products 0.000 description 1
- 230000002009 allergen Effects 0.000 description 1
- 230000000172 allergic Effects 0.000 description 1
- 201000005794 allergic hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001994 anti-enterotoxic Effects 0.000 description 1
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 1
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming Effects 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000095 emetic Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable Effects 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric Effects 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000009673 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 150000003961 organosilicon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- BFPJYWDBBLZXOM-UHFFFAOYSA-L potassium tellurite Chemical compound [K+].[K+].[O-][Te]([O-])=O BFPJYWDBBLZXOM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating Effects 0.000 description 1
- 230000000770 pro-inflamatory Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylaxis Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000000405 serological Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 201000002190 staphyloenterotoxemia Diseases 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccines Drugs 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
Abstract
Изобретение относится к области медицины и предназначено для использования в клинической микробиологии. Для ингибирования продукции стафилококковых энтеротоксинов и удаления стафилококковых энтеротоксинов типов А и В из биологических субстратов применяют 18,2% раствора энтеросгеля - при содержании полиметилсилоксана полигидрата - 70 г, вода очищенная - 30 г на 100 г продукта. Использование изобретения обеспечивает эффективное ингибирование продукции стафилококковых энтеротоксинов и удаление стафилококковых энтеротоксинов типов А и В из биологических субстратов. 1 ил., 6 табл., 6 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины и клинической микробиологии и может быть использовано для ингибирования продукции стафилококками энтеротоксинов, и удаления их из биологических субстратов.
Известно, что стафилококки продуцируют 23 иммунологически различных типа энтеротоксинов, имеющих большое значение, как факторы патогенности более 100 различных заболеваний, вызванных стафилококками. Стафилококковые энтеротоксины (СЭТ) обладают: рвотным действием; пирогенностью; способностью увеличивать токсичность эндотоксинов (липополисахаридов, продуктов грамотрицательных бактерий) в 100000 раз.
Энтеротоксины стафилококка являются суперантигенами: они способны вызвать активацию Т-лимфоцитов, обладающих определенным типом рецепторов, без предварительного формирования приобретенного иммунитета. Такая активация приводит к системному отравлению, которое в тяжелых случаях заканчивается смертью. Для этого необходимо, чтобы эти вещества проникли в кровь.
Все СЭТ являются суперантигенами и в концентрации от 1 пкг/мл до 1 мкг/мл могут вызывать активацию до 50% Т-лимфоцитов и выработку ряда интерлейкинов, которые вызывают интоксикацию и необратимое нарушение нормального функционирования разных систем организма, вплоть до летального исхода. В концентрации 100 нг СЭТ могут вызвать пищевое отравление.
Борьба со СЭТ затруднена из-за невозможности создания анатоксинов, способных индуцировать выработку антител к исходному токсину, поэтому вакцинная профилактика СЭТ не возможна или затруднена. В связи с этим основное внимание в этой области уделяется вопросам профилактики попадания энтеротоксигенных штаммов стафилококков и их энтеротоксинов в организм человека.
Известно, что СЭТ являются белками с молекулярной массой 25000-30000 дальтон, обладающими способностью выступать в качестве аллергенов и индуцировать продукцию специфических IgE. Такими свойствами обладают энтеротоксины А, В и С, эксфолиативный токсин и токсин синдрома токсического шока (ТСТШ-1) (см. Leung D.Y.M., Travers J.B., Norris D.A. The Role of Superantigen in Skin Dis-ease // J. Invest. Dermatol. 1995,105: 37-42).
Доказано, что СЭТ способны также приводить к выбросу макрофагами и клетками Лангерганса IL-1, IL-12 и TNFα, являющихся провоспалительными цитокинами, которые способны поддерживать аллергическое воспаление при АтД (Yokomizo Y., Mori Y Shimoji Y. et. al. Proliferative response and cytokine production of bovine peripheral blood mononuclear cells induced by the superantigens staphylococcal enterotoxins and toxic shock syndrome toxin-1.Vet. Med. Scientist. 1995,57 (2): 299-305).
Одним из важных аспектов борьбы с энтеротоксигенными штаммами стафилококков является поиск благоприятных физиологичных способов ингибирования роста стафилококков, ингибирование продукции стафилококковых энтеротоксинов и эффективного средства удаления СЭТ из организма больного.
Известно средство для подавления продукции энтеротоксинов у стафилококков - применение 2,0% раствора свекловичного пектина (см. патент РФ №2325168, опубл. 27.05.2008, авторы Меньшиков Д.Д., Флуер Ф.С., Прохоров В.Я., Лазарева Е.Б., Веснин A.В.). Данное средство позволяет подавлять продукцию стафилококковых энтеротоксинов, однако оно не обладает способностью удалять СЭТ из биологических субстратов.
Известен адсорбент, энтеросгель - полиметилсилоксана полигидрат (ПМСПГ) - представляющий собой полимерное гелевидное кремнийорганическое соединение (см. патент РФ №2293744, опубл. 20.02.2007, авторы Кадничанский Э.Г., Бадаев СВ., Храмов B.Г.), предназначенное для связывания в желудочно-кишечном тракте и выведения из организма токсических веществ различной природы, возбудителей заболеваний, метаболитов. Гель диспергирован в воде до частиц, размером не более 300 мкм. Препарат представляет собой суспензию и применяется внутрь. Пористая структура гелеобразующей матрицы определяет поглотительные способности по механизму молекулярной адсорбции и позволяет преимущественно поглощать среднемолекулярные токсические вещества и метаболиты (например, билирубин, продукты распада белков).
Благодаря гелевидной консистенции ПМСПГ по механизму соосаждения в геле поглощает высокомолекулярные токсические вещества (например, бактериальные токсины) и проявляет защитные свойства. При этом эластичные гелевидные частички препарата образуют слой на поверхности слизистых оболочек, что способствует регенерации слизистой оболочки ЖКТ. ПМСПГ может снижать токсическую нагрузку на естественные системы детоксикации организма и использоваться в лечении и профилактике эндотоксикоза, а также нормализует уровень эндотоксина грамотрицательных бактерий в крови. Препарат в составе комплексной терапии может применяться в лечении острых кишечных инфекций любого генеза, т.к. создает условия для восстановления микробиоценоза кишечника. При различных аллергических состояниях ПМСПГ снижает тяжесть клинических проявлений аллергии, а также применяется в качестве детоксикационного средства у взрослых и детей с раннего возраста при заболеваниях почек, осложненных и неосложненных хронической почечной недостаточностью (ХПН), заболеваниях печени, гнойно септических заболеваниях сопровождающихся выраженной интоксикацией. ПМСПГ применяют также в лечении острых и хронических интоксикаций различного происхождения, для профилактики хронических интоксикаций у работников вредных производств; отравления сильнодействующими и ядовитыми веществами, в т.ч. алкоголем, алкалоидами, солями тяжелых металлов и др.
Известные из уровня техники средства, подавляющие рост стафилококков и стафилококковых энтеротоксинов, не позволяют добиться значительных результатов в этой области.
Задачей настоящего изобретения является расширение арсенала средств, для борьбы со стафилококковыми энтеротоксинами, путем создания средства, способного удалять СЭТ из биологических субстратов и подавлять рост стафилококков.
Решение указанной задачи обеспечивается тем, что в качестве средства для удаления СЭТ из биологических субстратов используют 18,2% раствор энтеросгеля.
Для изучения способности энтеросгеля ингибировать рост стафилококков, ингибировать продукцию СЭТ и удалять СЭТ типов А и В проводили исследование по его влиянию на рост стафилококков и ингибирования продукции СЭТ и способности удалять СЭТ из культуральной среды. Способность подавлять рост стафилококков и удалять СЭТ из культуральной среды исследовали с помощью модельной микробиологической системы, состоящей из штаммов стафилококков, обладающих способностью продуцировать СЭТ, питательной среды для культивирования стафилококков и энтеросгеля.
Культивирование стафилококков, продуцирующих СЭТ, проводили на специальной жидкой питательной среде с ферментативной казеиновой основой (Casman Е. Serological studies of staphilococcal Enterotoxins. Public Health Repts. 1958, 73:599- 609; Schlievert P.M., Case L.C., Strandberg K.L., et al. Superantigen profile of Staph-ylococcus aureus isolates from patients with steroid-resistant atopic dermati-tis. Clin. Infect. Dis. 2008, 46: 1562-1567).
Содержание аминного азота в среде 200 мг %. В среду добавляли 1,0% сердечно-мозговую вытяжку. Устанавливали pH среды 7,2. Затем среду разливали по 4,5 мл и стерилизовали 15 мин при 1 атмосфере и 120°C, после чего в пробирки с питательной средой вносили по 0,5 мл суточной культуры стафилококков, содержащей 10 колонеобразующих единиц (КОЕ/мл), и асептически вносили энтеросгель в конечных концентрациях в среде 1,82%, 9,09% и 18,2%. В работе использовали энтеросгель фирмы ООО «ТНК Силма».
Влияние различных концентраций геля (1,82%; 9,09%;18,2%) на рост стафилококков показано на фигуре 1, для культуры S. aureus FRI-722 и S. aureus S6 715 Н.
Выращивание проводили на шуттель-аппарате при непрерывном встряхивании 210 об/мин в течение 24 часов при 37°C. Сразу после окончания культивирования из каждой пробирки проводили разведение культуры, используя стерильный физиологический раствор с pH 7,0, и из разведений производили количественные высевы на чашки Петри с плотной питательной средой Baird-Рагкег с теллуритом калия количественным методом (Мейнелл Дж., Мейнелл Э. «Экспериментальная микробиология» Пер. с анг. - Мир, 1967. - 347 с.).
Рост микробных клеток определяли также нефелометрическим методом путем измерения оптической плотности культуры при Е560 нм на спектрофотометре фирмы Unicum 1800. Контролем служили те же штаммы стафилококков, культивируемые в тех же условиях, что и опытные образцы, но без добавления энтеросгеля. Затем микробные клетки удаляли центрифугированием при 10000 об/мин в течение 15 минут.
СЭТ в опытных и контрольных образцах определяли методом двойной диффузии в геле (Зильбер А. Реакция двойной диффузии в геле. Иммунохимический анализ. М.: Медицина, 1968: 99-117) с использованием моноспецифических антиэнтеротоксических сывороток типа А и В и иммуноферментным методом (ИФА) с использованием иммуноферментных тест-систем для определения стафилококковых энтеротоксинов типов А и В.
Авторами изобретения был проведен сравнительный анализ определения дифференцированного регуляторного воздействия энтеросгеля на способность подавления продукции СЭТ типов А и В.
В патентной и научно-технической литературе сведений о способности энтеросгеля ингибировать рост стафилококков, ингибировать продукцию СЭТ и удалять СЭТ из биологических субстратов не обнаружено.
Иммунологический способ определения СЭТ дает возможность точно установить количество продуцируемого энтеротоксина в зависимости от концентрации энтеросгеля в среде. Уникальная возможность этой модели заключается в том, что in vitro возможно тестировать специфические, индивидуальные способности энтеросгеля удалять СЭТ из культуральной среды у референс штаммов S. aureus FRI- 722 и S. aureus S6 715 Н, а также у других штаммов стафилококков, выделенных из различных источников.
Таким образом, в данном изобретении предлагается средство для ингибирования роста стафилококков, для ингибирования продукции СЭТА, СЭТВ и для удаления СЭТ типов А и В с использованием -18,2% концентрацией энтеросгеля, которая является физиологичной, и может быть использовано в медицине для борьбы со стафилококками (у ожоговых больных, у пациентов с диагнозом дисбактериоза кишечника и синдром раздраженного кишечника, при аллергических заболеваниях (атопическом дерматите и др.), заболеваниях стафилококковой этиологии при обнаружении у них энтеротоксигенных штаммов стафилококков, а также ветеринарии) и также при пищевых отравлениях стафилококковой этиологии для эффективного удаления энтеротоксинов из биологических субстратов.
Изобретение поясняется следующими примерами:
Пример №1
Культуру S. aureus FRI- 722 (референс, продуцирующий СЭТА) и клинический изолят S. aureus выращивали в питательной среде, содержащей Энтеросгель в концентрации 1,82%, 9,09% и 18,2%. После культивирования определяли концентрацию микробных клеток в мл путем измерения оптической плотности при Е560 нм на приборе Ultraviolet Spectrophotometer Unicam SP1800, Англия, а также определяли активность в опытных и контрольных пробах. Результаты представлены в таблице №1.
Установлено, что при добавлении в питательную среду при выращивании S. aureus 1,82% энтеросгеля не происходило ингибирования роста стафилококков и не происходило ингибирования продукции СЭТА и не происходило значительного удаления СЭТА из культурального фильтрата. Установлено, что при добавлении в питательную среду при выращивании S. aureus FRJ- 722 9,09% энтеросгеля происходило ингибирование продукции СЭТА и его удаление из культурального фильтрата. Следует отметить, что при добавлении в питательную среду при культивировании S. aureus FRI- 722 18,2% энтеросгеля происходило ингибирование роста стафилококков, ингибирование продукции энтеротоксина и удаление СЭТА из культурального фильтрата (таблица 1, фото фиг. 1 слева).
Пример №2
Исследование продукции СЭТА методом иммуноферментного анализа штаммом S. aureus FRI- 722 (референс, продуцирующий СЭТА) и клинический изолят S. aureus при выращивании их в питательной среде, содержащей различные концентрации энтеросгеля. В опытных образцах питательной среды вносили энтеросгель в концентрации 1,82%, 9,09% и 18,2%, выращивали и после культивирования определяли оптическую плотность при Е560нм и содержание СЭТА в опытных и контрольных пробах. Результаты представлены в таблице №2.
Установлено, что при добавлении в питательную среду при выращивании S. aureus 18,2% энтеросгеля происходило ингибирование роста стафилококков, ингибирование продукции СЭТА и удаление СЭТА, из культурального фильтрата как референс-штамма, так и клинического штамма.
Пример №3
Исследование возможности энтеросгеля сорбировать СЭТА и удалять его из биологического материала.
При исследовании возможности энтеросгеля сорбировать и выводить СЭТА из культуральной жидкости показано, что энтеросгель обладает способностью выводить из культуральной жидкости до 50,0% СЭТ типа А. Результаты представлены в таблице №3.
Пример №4
Исследование влияния различных концентраций энтеросгеля на рост стафилококка и продукции СЭТ типа В.
Культуру S. aureus S6 715 Н, референс, продуцирующий СЭТВ выращивали в среде содержащей 1,82%, 9,09% 18,2% энтеросгеля и определяли количество КОЕ/мл и активность в опытных и контрольных пробах. Наличие в культуральной жидкости СЭТВ определяли методом двойной диффузии в геле.
Результаты представлены в таблице №4. Влияния различных концентраций геля в среде на рост стафилококков представлены на фото (фигура 1, справа). Установлено, что при добавлении в питательную среду при выращивании S. aureus S6 715H 1,82% энтеросгеля он не влиял на рост стафилококков, на продукцию СЭТВ и не удалял СЭТВ из культуральной среды. Показано, что при добавлении в питательную среду 18,2% концентрации энтеросгеля происходило подавление роста стафилококков, ингибирование продукции СЭТВ и сорбции энтеротоксина и, как следствие, установлено, что СЭТВ в культуральной жидкости не содержалось (результаты представлены в табл. №4).
Пример №5
Исследование влияния различных концентраций энтеросгеля на рост S. aureus штамм S6715H ингибирования продукции СЭТВ и удаление СЭТВ из культуральной среды методом иммуноферментного анализа. Показано, что при добавлении 18,2% концентрация энтеросгеля в питательную среду при культивировании S. aureus S6 715Н происходит ингибирование роста стафилококков, ингибирование продукции СЭТВ и удаление энтеротоксина типа В.
Штамм S. aureus S6715H при выращивании в питательной среде без добавления энтеросгеля образует энтеротоксин типа В, который выявляется иммуноферментным методом в разведении 1:3200 - 1:6400 (контроль), в то же время этот же штамм S. aureus S6715H, который выращивали в среде с содержанием 18,2 % энтеросгеля в культуральном фильтрате СЭТ типа В был обнаружен иммуноферментным методом всего лишь в разведении 1:10.
Таким образом, при выращивании энтеротоксигенного штамма стафилококка S. aureus S6 715H в питательной среде с содержанием 18,2% энтеросгеля происходило ингибирование роста стафилококков, ингибирование продукции СЭТВ и сорбция СЭТВ на энтеросгеле и в результате этого наличие СЭТВ в культуральном фильтрате оказалось в 320-640 раз меньше, чем в контроле.
Пример №6
Исследование сорбции СЭТ типа В из культуральных супернатантов с помощью энтеросгеля.
Нами исследована возможность энтеросгеля сорбировать и выводить из культуральных фильтратов СЭТВ. Результаты представлены на таблице №6.
Как видно из таблицы №6, энтеросгель обладает способностью сорбировать СЭТВ и удалять до 50,0% СЭТ типа В культуральной жидкости. Следует отметить, что вместе с энтеротоксином СЭТВ происходит удаление из культуральной жидкости компонентов питательной среды, а также других соединений.
Claims (1)
- Применение 18,2% раствора энтеросгеля (при содержании полиметилсилоксана полигидрата - 70 г, вода очищенная - 30 г на 100 г продукта) для ингибирования роста стафилококков, для ингибирования продукции стафилококковых энтеротоксинов и для удаления стафилококковых энтеротоксинов типов А и В из биологических субстратов.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016128486A RU2631603C1 (ru) | 2016-07-13 | 2016-07-13 | Средство для ингибирования продукции стафилококками энтеротоксинов и удаления их из биологических субстратов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016128486A RU2631603C1 (ru) | 2016-07-13 | 2016-07-13 | Средство для ингибирования продукции стафилококками энтеротоксинов и удаления их из биологических субстратов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2631603C1 true RU2631603C1 (ru) | 2017-09-25 |
Family
ID=59931242
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016128486A RU2631603C1 (ru) | 2016-07-13 | 2016-07-13 | Средство для ингибирования продукции стафилококками энтеротоксинов и удаления их из биологических субстратов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2631603C1 (ru) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA7472U (en) * | 2004-12-27 | 2005-06-15 | Method for manufacturing antibacterial composition "pharmasil" | |
| UA74722C2 (en) * | 2004-06-02 | 2006-01-16 | Univ Nat Agrarian | Device to clean and transport roots |
| RU2325168C2 (ru) * | 2006-06-08 | 2008-05-27 | НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ СКОРОЙ ПОМОЩИ ИМ. Н.В. СКЛИФОСОВСКОГО ДЕПАРТАМЕНТА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ г. Москвы | Средство для подавления продукции энтеротоксинов у стафилококков |
| RU2343914C1 (ru) * | 2007-04-18 | 2009-01-20 | Закрытое акционерное общество "Биологические исследования и системы" | Способ лечения атопического дерматита (варианты) |
| RU2445083C1 (ru) * | 2010-12-03 | 2012-03-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Средство для лечения гнойно-воспалительных процессов мягких тканей и слизистых оболочек |
| RU2491941C1 (ru) * | 2011-12-27 | 2013-09-10 | Вадим Алексеевич Козловский | Композиционный энтеросорбент |
-
2016
- 2016-07-13 RU RU2016128486A patent/RU2631603C1/ru active IP Right Revival
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA74722C2 (en) * | 2004-06-02 | 2006-01-16 | Univ Nat Agrarian | Device to clean and transport roots |
| UA7472U (en) * | 2004-12-27 | 2005-06-15 | Method for manufacturing antibacterial composition "pharmasil" | |
| RU2325168C2 (ru) * | 2006-06-08 | 2008-05-27 | НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ СКОРОЙ ПОМОЩИ ИМ. Н.В. СКЛИФОСОВСКОГО ДЕПАРТАМЕНТА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ г. Москвы | Средство для подавления продукции энтеротоксинов у стафилококков |
| RU2343914C1 (ru) * | 2007-04-18 | 2009-01-20 | Закрытое акционерное общество "Биологические исследования и системы" | Способ лечения атопического дерматита (варианты) |
| RU2445083C1 (ru) * | 2010-12-03 | 2012-03-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Средство для лечения гнойно-воспалительных процессов мягких тканей и слизистых оболочек |
| RU2491941C1 (ru) * | 2011-12-27 | 2013-09-10 | Вадим Алексеевич Козловский | Композиционный энтеросорбент |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lonnemann et al. | Permeability of dialyzer membranes to TNFα-inducing substances derived from water bacteria | |
| Sitkiewicz et al. | Emergence of a bacterial clone with enhanced virulence by acquisition of a phage encoding a secreted phospholipase A2 | |
| Spaulding et al. | Comparison of Staphylococcus aureus strains for ability to cause infective endocarditis and lethal sepsis in rabbits | |
| JP2020063252A (ja) | ポリマーの使用法 | |
| CN101395476A (zh) | 多重耐药葡萄球菌的免疫色谱检测方法和诊断试剂盒 | |
| Ataee et al. | Bacterial meningitis: a new risk factor | |
| Andersen et al. | The endotoxin‐liberating effect of antibiotics on meningococci in vitro | |
| RU2631603C1 (ru) | Средство для ингибирования продукции стафилококками энтеротоксинов и удаления их из биологических субстратов | |
| Kuroishi et al. | Concentrations and specific antibodies to staphylococcal enterotoxin-C and toxic shock syndrome toxin-1 in bovine mammary gland secretions, and inflammatory response to the intramammary inoculation of these toxins | |
| EP1312387B1 (en) | Method for removal of bacterial toxins from a bacterial toxin-containing fluid | |
| JP3148895B2 (ja) | 精製方法 | |
| Ameen et al. | Investigating the bacterial barrier properties of four contemporary wound dressings | |
| Sato et al. | Positive Effects of Oral Antibiotic Administration in Murine Chronic Graft-Versus-Host Disease | |
| Holbrook et al. | Toxic shock syndrome in a horse with Staphylococcus aureus pneumonia. | |
| Hamouda et al. | Acute post-infectious glomerulonephritis in adults: a single center report | |
| Donohue et al. | Characterization of nigerlysin©, hemolysin produced by Aspergillus niger, and effect on mouse neuronal cells in vitro | |
| RU2448897C1 (ru) | Способ комплексной очистки физиологических жидкостей | |
| US6803183B2 (en) | Method for removing pyrogens from plasma and blood for treatment of septic shock | |
| Garcia‐Romo et al. | Immunization with heat‐inactivated Staphylococcus aureus induced an antibody response mediated by IgG1 and IgG2 in patients with recurrent tonsillitis | |
| Bentley et al. | Bacterial toxins and sudden unexpected death in a young child | |
| Cheng et al. | Comparison of virulence variations on MDCK monolayers by Escherichia coli isolated from acute lobar nephronia and acute pyelonephritis | |
| RU2749193C1 (ru) | Способ получения бетулина для использования в качестве адъюванта в вакцине против коронавируса SARS-CoV-2 | |
| Trautmann et al. | An enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of soluble Klebsiella pneumoniae capsular polysaccharide | |
| West et al. | Antiserum agar method for identification of Smith type exopolysaccharides in clinical isolates of Staphylococcus aureus | |
| Homenta et al. | The 38.8 kDa pili subunit hemaglutinin protein of Acinetobacter baumannii is an adhesin protein that can activate s-IgA production |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210714 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20220425 |