JP4913355B2 - バイオセンサ - Google Patents

Description

本発明は、バイオセンサに関する。詳細には、本発明は、生体試料などに含まれる成分の濃度をバイオセンサにより測定する際の精度を向上させるための改良に関する。

近年、バイオセンサが医療などの分野において応用されている。バイオセンサの測定対象は低分子から高分子に至るまでの様々な化学物質であり、測定対象に応じて、種々の機能を有するバイオセンサの開発が進められている。

なかでも、酵素センサは、酵素の基質認識能と触媒能とを利用したバイオセンサであり、酸化還元酵素および電子受容体を含む反応層が電極系の表面に形成されてなる構造を有する。

酵素センサの例としては、グルコースセンサがある。グルコースセンサは、臨床検査の現場などにおいて血糖値を測定する目的で利用されている。以下、グルコースセンサの作動原理を簡単に説明する。

グルコースセンサに試料溶液（血液試料など）が滴下されると、電極系（作用極および対極）の表面に形成された反応層が溶解し、酵素（グルコースオキシダーゼ）と試料溶液中のグルコースとが反応して、下記化学反応式（１）で表される反応が進行する。

上記反応式（１）により生成した過酸化水素は、反応層中の電子受容体（例えば、フェリシアンイオン）に電子を供与することで当該電子受容体を還元し、自身は酸化されて酸素となる。かような反応が充分に進行した後、還元された電子受容体を電気化学的に酸化し、この際に測定される酸化電流の値から、試料溶液中のグルコース濃度を算出する。

ここで、血液試料や果汁などをバイオセンサの試料溶液として用いると、試料溶液中の血球や種々のタンパク質などの吸着性成分が電極系の表面に吸着し、正しい測定結果が得られないという問題があった。実際に市販されている血糖センサにおいても、ヘマトクリット値の測定結果に誤差が生じる場合があるとの指摘がある（例えば、非特許文献１を参照）。

かような問題を解決するための技術として、例えば、電極表面にカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース、デンプン等の親水性高分子を塗布することにより、吸着性成分の電極への吸着を抑制する技術が提案されている（例えば、特許文献１〜３を参照）。また、例えば、分離用フィルタを電極上に設けて血球等の吸着性成分を物理的に除去することで、上記のような吸着の問題を解決する技術も提案されている（例えば、特許文献４を参照）。
糖尿病、４２（５）３６７−３７２、１９９９ 特公平６−５４３０４号公報 特公平７−１０７５２５号公報 特開平９−２４３５９１号公報 特開２００２−２０２２８３号公報

しかしながら、上記特許文献に記載のバイオセンサを用いた場合であっても、吸着性成分の電極への吸着が必ずしも充分に抑制されるとは限らず、吸着性成分の吸着をより一層抑制しうる手段の開発が望まれているのが現状である。

そこで本発明は、バイオセンサにおいて、吸着性成分の電極への吸着をより一層抑制し、バイオセンサの精度を向上させうる手段を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記の課題を解決すべく、鋭意研究を行った。その結果、バイオセンサにおいて、酸化還元酵素および電子受容体を含む反応層に、所定の水溶性高分子をさらに含ませることで、吸着性物質の電極への吸着が効果的に抑制されうることを見出し、本発明を完成させるに至った。

すなわち、本発明は、絶縁性基板と、前記絶縁性基板上に形成された、作用極および対極を含む電極系と、前記作用極上に形成された、酸化還元酵素および電子受容体を含む反応層と、を備え、前記電極系に流れる電流値に基づいて前記酸化還元酵素の基質の濃度を測定するための、バイオセンサであって、前記反応層が、タンニン酸、ペクチン、カゼイン、カラギナン、ファーセレラン、プルラン、コラーゲン、キチン、キトサン、コンドロイチン硫酸ナトリウム、リグニンスルホン酸、およびこれらの誘導体からなる群から選択される１種または２種以上の水溶性高分子をさらに含むことを特徴とする、バイオセンサである。

本発明のバイオセンサによれば、反応層に含まれる所定の水溶性高分子により、吸着性成分の電極への吸着が効果的に抑制されうる。よって本発明は、バイオセンサの測定精度の向上に有効に寄与しうる。

以下、本発明を実施するための好ましい一実施形態について説明するが、本発明の技術的範囲は下記の形態のみには制限されない。

本発明は、絶縁性基板と、前記絶縁性基板上に形成された、作用極および対極を含む電極系と、前記作用極上に形成された、酸化還元酵素および電子受容体を含む反応層と、を備え、前記電極系に流れる電流値に基づいて前記酸化還元酵素の基質の濃度を測定するための、バイオセンサであって、前記反応層が、タンニン酸、ペクチン、カゼイン、カラギナン、ファーセレラン、プルラン、コラーゲン、キチン、キトサン、コンドロイチン硫酸ナトリウム、リグニンスルホン酸、およびこれらの誘導体からなる群から選択される１種または２種以上の水溶性高分子をさらに含むことを特徴とする、バイオセンサである。

図１は、本発明のバイオセンサ１０の各構成要素の形成パターンを示す平面図である。なお、図１の各図においては、各図により説明するための構成要素に加えて、絶縁性基板２０の外形を示す仮想線が図示されている。図１（ａ）は、絶縁性基板２０上でのリード部３０およびコネクタ部３２の形成パターンを示す平面図である。図１（ｂ）は、電極系４０を構成する参照極４２の形成パターンを示す平面図である。図１（ｃ）は、電極系４０を構成する作用極４４および対極４６の形成パターンを示す平面図である。図１（ｄ）は、絶縁層５０の形成パターンを示す平面図である。図１（ｅ）は、スペーサ６０および反応層７０の形成パターンを示す平面図である。図２は、図１の各図に示す各構成要素の積層順序を示す分解斜視図である。図３は、図１および図２の各図に示す各構成要素が形成されてなるバイオセンサ１０を示す平面図である。図２および図３に示すように、バイオセンサ１０においては、絶縁性基板２０上に、一体化されたリード部３０およびコネクタ部３２、電極系４０、絶縁層５０、スペーサ６０および反応層７０が、絶縁層基板２０の側からこの順に積層されている。なお、バイオセンサ１０は、カバーによりさらに覆われた状態で使用および貯蔵される場合があるが、図１〜図３においてはかようなカバーの図示は省略されている。また、説明の都合上、図面の寸法比率は誇張されており、図示する形態が実際とは異なる場合がある。

バイオセンサ１０は、体液などの試料溶液中の特定成分（以下、「基質」とも称する）の濃度を測定するための装置である。以下、バイオセンサ１０を構成する各部材について詳細に説明する。

バイオセンサ１０は、その基体として絶縁性基板２０を備える。絶縁性基板２０は、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）やポリエチレン等の樹脂、ガラス、セラミックス、紙などの従来公知の絶縁性材料により構成されうる。絶縁性基板２０の形状やサイズについては、特に制限されない。

絶縁性基板２０上には、図２および図３に示すように、リード部（３０ａ、３０ｂ、３０ｃ）およびコネクタ部（３２ａ、３２ｂ、３２ｃ）が形成されている。コネクタ部（３２ａ、３２ｂ、３２ｃ）は、後述する電極系４０とバイオセンサ１０外部とを電気的に接続するための手段として機能し、リード部（３０ａ、３０ｂ、３０ｃ）を介して電極系４０と電気的に接続されている。リード部（３０ａ、３０ｂ、３０ｃ）は、図１〜図３に示すように、コネクタ部（３２ａ、３２ｂ、３２ｃ）から、電極系４０の位置まで延長されており、電極系４０の各電極（４２、４４、４６）の下地層を構成する。リード部（３０ａ、３０ｂ、３０ｃ）およびコネクタ部（３２ａ、３２ｂ、３２ｃ）を構成する材料は特に制限されないが、例えば、銀、金、白金、パラジウム、カーボンなどにより構成されうる。導電性およびコストの観点から、リード部およびコネクタ部は銀により構成される。リード部およびコネクタ部の形成方法は特に制限されず、スクリーン印刷法やスパッタリング法などの従来公知の手法により形成されうる。

図１〜図３に示すように、リード部（３０ａ、３０ｂ、３０ｃ）が延長されてなる下地層の上層には、電極系４０が形成されている。この電極系４０は、バイオセンサ１０の使用時において、後述する反応層７０中の試料溶液に電圧を印加するための電圧印加手段、および、試料溶液中に流れる電流を検出するための電流検出手段として機能する。

図示する形態において、電極系４０は、参照極４２、作用極４４、および対極４６の３極からなる。すなわち、図示する形態のバイオセンサ１０は、３電極式センサである。ただし、本発明のバイオセンサは３電極式のみに制限されず、参照極を含まない電極系を備えた２電極式センサであってもよい。なお、電極系４０における電圧の制御がより高精度に行われるという観点からは、２電極式よりも３電極式が好ましく用いられうる。

作用極４４および対極４６は、バイオセンサ１０の使用時に一対となって、後述する反応層７０中の試料溶液に電圧を印加した際に流れる酸化電流（応答電流）を測定するための電流測定手段として機能する。バイオセンサ１０の使用時には、参照極４２と作用極４６との間に所定の電圧が印加される。各電極を構成する材料は特に制限されないが、例えば、銀／塩化銀、カーボン、銀、金、白金などにより構成されうる。なお、各電極の構成材料は、それぞれ同一であってもよいし、異なっていてもよい。ただし、耐腐食性およびコストの観点から、作用極４４および対極４６はカーボンにより構成される。また、印加電位の安定性が高いという観点から、参照極４２は好ましくは銀／塩化銀により構成される。電極系４０の形成方法は特に制限されず、スクリーン印刷法やスパッタリング法などの従来公知の手法により形成されうる。

絶縁性基板２０上に形成されたリード部（３０ａ、３０ｂ、３０ｃ）およびコネクタ部（３２ａ、３２ｂ、３２ｃ）、並びに電極系４０の上層には、図１〜図３に示すように、電極系４０が露出するように、絶縁層５０が形成されている。絶縁層５０の存在により、電極系４０を構成する各電極間の短絡が防止されうる。絶縁層５０を構成する材料は特に制限されないが、例えば、レジストインク、ＰＥＴやポリエチレン等の樹脂、ガラス、セラミックスなどにより構成されうる。絶縁層５０の形成方法についても特に制限はなく、スクリーン印刷法や接着法などの従来公知の手法により形成されうる。

電極系４０および絶縁層５０の上層には、図１〜図３に示すように、スペーサ６０および反応層７０が形成されている。バイオセンサ１０の使用時には、反応層７０において、後述する酵素反応が進行する。また、スペーサ６０を設けることで、バイオセンサ１０の使用時における反応層７０および試料溶液の漏出が防止される。図示する形態において、スペーサ６０は、電極系４０に対応する部位に矩形の開口部を有しており、この開口部に反応層７０が設けられている。ただし、スペーサ６０の有する開口部の形状は矩形のみに制限されず、任意の形状が用いられうる。スペーサ６０を構成する材料は特に制限されないが、例えば、ＰＥＴやポリエチレン等の樹脂、ガラス、セラミックス、紙などにより構成されうる。スペーサ６０および反応層７０の形成方法は特に制限されず、例えば、所定の部位に開口部を有するスペーサ６０を載置し、この開口部に反応層７０を形成するための溶液を滴下して、乾燥させるという手法が用いられうる。

反応層７０は１層のみからなる層であってもよいし、２層以上からなる層であってもよい。反応層７０が２層からなる形態としては、例えば、電子受容体および上記の所定の水溶性高分子を含み、酸化還元酵素を実質的に含まない第１反応層と、前記第１反応層の上層に形成された、酸化還元酵素および上記の所定の水溶性高分子を含み、電子受容体を実質的に含まない第２反応層とから、反応層７０が構成される形態が挙げられる。また、反応層７０が３層からなる形態としては、例えば、電子受容体および上記の所定の水溶性高分子を含み、酸化還元酵素を実質的に含まない第１反応層と、前記第１反応層の上層に形成された、上記の所定の水溶性高分子を含み、酸化還元酵素および電子受容体を実質的に含まない第２反応層と、前記第２反応層の上層に形成された、酸化還元酵素および上記の所定の水溶性高分子を含み、電子受容体を実質的に含まない第３反応層とから、反応層７０が構成される形態が挙げられる。

また、図示する形態において、反応層７０は電極系４０の上層に形成されているが、場合によっては、図示する形態とは異なり、電極系４０の近傍に反応層７０を形成し、電極系４０と反応層７０とが直接接触しない形態としてもよい。なお、反応層７０が電極系４０の「近傍」に形成される形態としては、電極系４０と反応層７０との間に空間やフィルタが介在する形態や、試料供給口と電極系４０との間に反応層７０が形成される形態などが例示される。

反応層７０は、酸化還元酵素および電子受容体を含む。また、本発明は、反応層７０が所定の水溶性高分子をさらに含む点に特徴を有する。以下、反応層７０を構成する成分について、詳細に説明する。

酸化還元酵素は、バイオセンサ１０の使用時において、試料溶液中の基質を酸化するという機能を有する。酸化還元酵素の種類は特に制限されず、測定を希望する成分に応じて、適宜選択されうる。反応層７０に含まれる酸化還元酵素の一例を挙げると、グリセロールオキシダーゼ、グリセロールデヒドロゲナーゼ、コレステロールオキシダーゼ、コレステロールデヒドロゲナーゼ、サルコシンオキシダーゼ、乳酸オキシダーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、フルクトースオキシダーゼ、フルクトースデヒドロゲナーゼ、アルコールオキシダーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、グルタミン酸オキシダーゼ、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、ソルビトールデヒドロゲナーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼなどが例示されうる。また、種々の目的で改良が施された改良型の酵素が用いられてもよい。反応層７０における酸化還元酵素の含有量についても特に制限はなく、測定を希望する成分の種類や試料溶液の添加量などに応じて適宜調節されうる。一例を挙げると、通常は０．００１〜１００活性単位、好ましくは０．０１〜１０活性単位、より好ましくは０．０１〜５活性単位の酸化還元酵素が反応層７０に含まれるとよい。

電子受容体は、バイオセンサ１０の使用時において、酸化還元酵素の作用によって生成した電子を受け取る、すなわち還元される。そして、還元された電子受容体は、酵素反応終了後に電極系４０に流される電流によって電気化学的に酸化される。この際に流れる電流（酸化電流と称する）の大きさから、試料溶液中の所望の成分の濃度が算出されうる。電子受容体の種類についても特に制限はなく、従来公知の電子受容体が適宜選択されうる。一例を挙げると、フェリシアンイオン、ｐ−ベンゾキノンおよびその誘導体、フェナジニウムメチルサルフェートおよびその誘導体、メチレンブルー、チオニン、インジゴカーミン、ガロシアニン、α−ナフトキノンおよびその誘導体、並びにサフラニンからなる群から選択される１種または２種以上の電子受容体が例示される。また、ｐ−ベンゾキノン誘導体、フェナジニウムメチルサルフェート誘導体、α−ナフトキノン誘導体としては、ｐ−ベンゾキノン、フェナジニウムメチルサルフェート、α−ナフトキノンに炭素数１または２のアルキル基、炭素数１または２のアルコキシ基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子などのハロゲン原子等が結合したものなどが挙げられる。反応層７０における電子受容体の含有量についても特に制限はなく、試料溶液の添加量などに応じて適宜調節されうる。一例を挙げると、０．５〜１０μＬの試料溶液を添加して用いるバイオセンサ１０の反応層７０には、通常は０．０１〜１０００μｇ、好ましくは０．１〜１００μｇ、より好ましくは１〜５０μｇの電子受容体が含まれるとよい。

本発明のより好ましい形態において、反応層７０は、酸化還元酵素として補酵素であるピロロキノリンキノン（ＰＱＱ）依存型のグリセロールデヒドロゲナーゼを含む。この際、電子受容体としてはフェナジニウムメチルサルフェート誘導体である１−メトキシ−５−フェナジニウムメチルサルフェートを含むことがより好ましい。さらに好ましくは、反応層７０がリポプロテインリパーゼをさらに含む。ここで、ＰＱＱ依存型グリセロールデヒドロゲナーゼは溶液中の電子受容体のみを反応に使用し、溶存酸素の影響を受けない。従って、上記のより好ましい形態によれば、還元型の電子受容体の酸化電流を測定することにより、試料溶液中のグリセロール濃度がより正確に測定されうる。

続いて、本発明の特徴的な構成である水溶性高分子の好ましい形態について、詳細に説明する。

本発明のバイオセンサ１０において、反応層７０は、タンニン酸、ペクチン、カゼイン、カラギナン、ファーセレラン、プルラン、コラーゲン、キチン、キトサン、コンドロイチン硫酸ナトリウム、リグニンスルホン酸、およびこれらの誘導体からなる群から選択される水溶性高分子を含む。反応層７０がこれらの水溶性高分子を含むことにより、タンパク質などの吸着性成分の電極系４０への吸着が効果的に抑制されうる。また、これらの高分子を含むことで、電極系４０表面からの反応層７０の剥離や、反応層７０の割れも効果的に防止されうる。よって本発明によれば、測定精度および信頼性に優れるバイオセンサが提供されうる。なかでも、タンニン酸、ペクチン、カゼイン、およびこれらの誘導体が反応層７０に含まれると、吸着性成分の電極への吸着がより一層抑制されうる。なお、上記の水溶性高分子は、１種のみが単独で反応層７０に含まれてもよいし、２種以上が併せて反応層７０に含まれてもよい。また、上記の所定の高分子が反応層７０に含まれることにより吸着性物質の電極系への吸着が抑制されるメカニズムは完全に明らかとはなっていないが、反応層７０を形成するための溶液中に上記の所定の高分子が含まれると、当該溶液を所定の位置に滴下し乾燥させて反応層７０を形成する際に、より均一な層が形成され、かつ、より細かい網目構造が形成されることが何らかの関与をしているものと推測される。ただし、かようなメカニズムはあくまでも推測に過ぎず、他のメカニズムに基づいて吸着性物質の電極系への吸着が抑制されていたとしても、本発明の技術的範囲は何ら影響を受けることはない。

反応層７０は、場合によっては、上記以外の高分子を含んでもよい。上記以外の高分子としては特に制限されないが、例えば、セルロース、グアーガム、スターチ、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。

以上、本発明の特徴的な構成について詳細に説明したが、上記の形態のみに制限されることはなく、従来公知の知見を適宜参照して、種々の改良を施すことも可能である。従来公知の知見としては、例えば、特開平２−０６２９５２号公報、特開平５−８７７６８号公報、特開平１１−２０１９３２号公報などが挙げられる。

続いて、本発明のバイオセンサ１０の動作について説明する。

まず、濃度の測定を希望する成分を含む試料溶液の所定量を、バイオセンサ１０の反応層７０に供給する。試料溶液の具体的な形態は特に制限されず、バイオセンサ１０に用いられる酸化還元酵素の基質を含む溶液が適宜用いられうる。試料溶液としては、例えば、血液、尿、唾液などの生体試料、果物、野菜、加工食品原料などの食品等が用いられうる。ただし、その他の溶液が試料として用いられてもよい。また、試料溶液は原液がそのまま用いられてもよいし、粘度などを調節する目的で適当な溶媒で希釈された溶液が用いられてもよい。試料溶液に含まれる基質についても特に制限はなく、上述した酸化還元酵素と反応しうる物質であればよい。基質としては、例えば、グルコースなどの糖類、グリセロール、ソルビトール、アラビトールなどの多価アルコール、中性脂肪、コレステロールなどの脂質、グルタミン酸や乳酸などの有機酸類、クレアチン、クレアチニンなどが挙げられる。試料溶液を反応層７０へ供給する形態は特に制限されず、所定量の試料溶液を反応層７０に対して垂直に直接滴下することにより供給してもよいし、別途設けた試料溶液供給手段により、反応層７０に対して水平方向から試料溶液を供給してもよい。

反応層７０へと試料溶液が供給されると、試料溶液中の所望の成分は、反応層７０に含まれる酸化還元酵素の作用によって酸化され、自身の酸化と同時に電子を放出する。基質から放出された電子は、電子受容体に捕捉され、これに伴って電子受容体は酸化型から還元型へと変化する。試料溶液の添加後、バイオセンサ１０を所定時間放置することにより、酸化還元酵素によって基質が完全に酸化され、一定量の電子受容体が酸化型から還元型へと変換される。基質と酵素との反応を完結させるための放置時間については特に制限はないが、試料溶液添加後、通常は０〜５分間、好ましくは０〜１分間、バイオセンサ１０を放置すればよい。

その後、還元型の電子受容体を酸化する目的で、電極系４０を介して、作用極４４と対極４６との間に、所定の電圧を印加する。これにより、反応層７０中に電流（以下、「酸化電流」とも称する）が流れ、この電流によって還元型の電子受容体が電気化学的に酸化され、酸化型へと変換される。この際に測定される酸化電流の値から、電圧印加前の還元型の電子受容体の量が算出され、さらに、酵素と反応した基質の量が定量されうる。酸化電流を流す際に印加される電圧の値は特に制限されず、従来公知の知見を参照して適宜調節されうる。一例を挙げると、−２００〜７００ｍＶ程度、好ましくは０〜５００ｍＶの電圧を、参照極４２と作用極４４との間に印加すればよい。電圧を印加するための電圧印加手段についても特に制限はなく、従来公知の電圧印加手段が適宜用いられうる。

酸化電流値の測定、および当該電流値から基質濃度への換算の手法としては、所定の電圧を印加してから一定時間後の電流値を測定するクロノアンペロメトリー法が用いられてもよいし、クロノアンペロメトリー法による電流応答を時間で積分して得られる電荷量を測定するクロノクーロメトリー法が用いられてもよい。簡単な装置系により測定されるという点で、クロノアンペロメトリー法が好ましく用いられうる。

以上、還元型の電子受容体を酸化する際の電流（酸化電流）を測定することにより基質濃度を算出する形態を例に挙げて説明したが、場合によっては、還元されずに残存している酸化型の電子受容体を還元する際の電流（還元電流）を測定することにより基質濃度を算出する形態が採用されてもよい。

次に実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、下記の実施例は本発明の技術的範囲に何ら影響を及ぼすことはない。

文献（ディスポーザブルグルコース電極の開発と工業化、電気化学、６３（７）５９２−５９５、１９９５）を参考に、種々の水溶性高分子による吸着性物質の電極系への吸着抑制効果を試験した。具体的には、市販のセンサ電極（ＢＶＴ社製；ＡＣ１．Ｗ５．Ｒ１）の表面に、下記の表１に示す種々の水溶性高分子を種々の濃度の水溶液として展開し、室温にて乾燥させて、本実施例および本参考例における反応層を形成し、バイオセンサを作製した。従って、本実施例および本参考例のバイオセンサにおいて、反応層は酸化還元酵素および電子受容体を含まない。なお、本実施例において、水溶性高分子としてはタンニン酸を用い、本参考例において、水溶性高分子としてはペクチンまたはカゼインナトリウムを用い、比較例において、水溶性高分子としてはカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を用いた。

一方、試料溶液として、還元型電子受容体であるフェロシアン化カリウムを５ｍＭの濃度で含有する１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）、および前記緩衝液にウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を５質量％の濃度で含有する溶液を準備した。

その後、これらの試料溶液をそれぞれ、上記で作成したバイオセンサの反応層上に滴下した。試料溶液の滴下から３０秒後に、参照極に対して４５０ｍＶの電圧を作用極に印加し、還元型電子受容体であるフェロシアン化カリウムが酸化される際の酸化電流値を測定した。酸化電流値の測定には、電気化学測定システムＨＺ−５０００（北斗電工社製、ＨＡＧ１５１２ｍ／ＢＰ）を使用した。そして、ＢＳＡ非含有溶液を滴下した際に得られた酸化電流値（１００％）に対する、ＢＳＡ含有溶液を滴下した際に得られた酸化電流値の割合（％）を算出した。算出された割合を下記の表１に示す。

（結果）
表１からわかるように、バイオセンサにおいて、反応層がタンニン酸のような水溶性高分子を含有すると、従来反応層への添加が知られていたＣＭＣを含有する場合と比較して、ＢＳＡによる応答特性の低下がより一層抑制されうる。従って、本発明は、バイオセンサの測定精度の向上に有効に寄与しうる。

本発明のバイオセンサの各構成要素の形成パターンを示す平面図である。（ａ）は、絶縁性基板上でのリード部およびコネクタ部の形成パターンを示す平面図である。（ｂ）は、電極系を構成する参照極の形成パターンを示す平面図である。（ｃ）は、電極系を構成する作用極および対極の形成パターンを示す平面図である。（ｄ）は、絶縁層の形成パターンを示す平面図である。（ｅ）は、スペーサおよび反応層の形成パターンを示す平面図である。 図１の各図に示す各構成要素の積層順序を示す分解斜視図である。 図１および図２の各図に示す各構成要素が形成されてなるバイオセンサを示す平面図である。

符号の説明

１０ バイオセンサ、
２０ 絶縁性基板、
３０、３０ａ、３０ｂ、３０ｃ リード部、
３２、３２ａ、３２ｂ、３２ｃ コネクタ部、
４０ 電極系、
４２ 参照極、
４４ 作用極、
４６ 対極、
５０ 絶縁層、
６０ スペーサ、
７０ 反応層。

Claims (7)

1. 絶縁性基板と、
   前記絶縁性基板上に形成された、作用極および対極を含む電極系と、
   前記電極系の上層または近傍に形成された、酸化還元酵素および電子受容体を含む反応層と、
   を備え、前記電極系に流れる電流値に基づいて前記酸化還元酵素の基質の濃度を測定するための、バイオセンサであって、
   前記反応層が、タンニン酸、ファーセレラン、コンドロイチン硫酸ナトリウム、リグニンスルホン酸、およびこれらの誘導体からなる群から選択される１種または２種以上の水溶性高分子をさらに含むことを特徴とする、バイオセンサ。
2. 前記水溶性高分子が、タンニン酸、およびこれらの誘導体からなる群から選択される１種または２種以上の水溶性高分子である、請求項１に記載のバイオセンサ。
3. 前記酸化還元酵素が、グリセロールオキシダーゼ、グリセロールデヒドロゲナーゼ、コレステロールオキシダーゼ、コレステロールデヒドロゲナーゼ、およびサルコシンオキシダーゼからなる群から選択される１種または２種以上である、請求項１または２に記載のバイオセンサ。
4. 前記電子受容体が、フェリシアンイオン、ｐ−ベンゾキノンおよびその誘導体、フェナジニウムメチルサルフェートおよびその誘導体、メチレンブルー、チオニン、インジゴカーミン、ガロシアニン、α−ナフトキノンおよびその誘導体、並びにサフラニンからなる群から選択される１種または２種以上である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のバイオセンサ。
5. 前記反応層が、
   前記電子受容体および前記水溶性高分子を含み、前記酸化還元酵素を実質的に含まない、第１反応層と、
   前記第１反応層の上層に形成された、前記酸化還元酵素および前記水溶性高分子を含み、前記電子受容体を実質的に含まない、第２反応層と、
   からなる、請求項１〜４のいずれか１項に記載のバイオセンサ。
6. 前記第１反応層と前記第２反応層との間に、実質的に前記水溶性高分子からなる第３反応層が形成された、請求項５に記載のバイオセンサ。
7. 前記酸化還元酵素がＰＱＱ依存性グリセロールデヒドロゲナーゼであり、前記電子受容体が１−メトキシ−５−フェナジニウムメチルサルフェートであり、前記反応層がリポプロテインリパーゼをさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載のバイオセンサ。

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