JP4895711B2 - 魚類用のイリドウイルス感染症,連鎖球菌感染症,及びこれ等の合併症に対する混合不活化ワクチン - Google Patents
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(1)魚類のイリドウイルス感染症の病原体に由来の不活化抗原と,連鎖球菌感染症の病原体に由来の不活化抗原とを,少なくとも2種,混合することを特徴とする混合不活化ワクチンの製造方法;及び
(2)魚類のイリドウイルス感染症の病原体に由来の不活化抗原と,連鎖球菌感染症の病原体に由来の不活化抗原とを,少なくとも2種,混合することにより調製される混合不活化ワクチンが,それぞれ提供される。また,この発明は,イリドウイルス感染症,連鎖球菌感染症,及びこれ等両者の合併症の予防を迅速かつ省力的に,しかも低コストで達成するものである。
イリドウイルスの量産:マダイイリドウイルスEhime−1/GF14株をシードに用いてイリドウイルス(ワクチン用抗原)を量産した。
培地にBME(Basal Medium Eagle)を用い,1L容のルー瓶5本に培養したGF細胞モノシートに、上記シードウイルスを接種し(感染多重度MOI=0.01),25℃で14日間,静置培養した。新鮮培地との交換は,培養開始日から3日目ごとに行った。但し,培養10−14日目の間は培地交換をしなかった。CPE(cytopathogenic effect)が細胞モノシートの約80%に達した14日目に,培養液を採取し,低速遠心(3,000rpm,20分)の後,その上清を回収しウイルス浮遊液500mlを得た。
連鎖球菌の量産:α溶血性連鎖球菌No.43株を種菌に用い,連鎖球菌(ワクチン用抗原)を量産した。
2L容の培養容器中のブイヨン培地(1L中にトリプトン17.0g,ソイペプトン3.0g,ブドウ糖2.5g,リン酸二カリウム2.5g及び塩化ナトリウム5.0gをそれぞれ含有)500mlに,上記種菌0.5mlを植菌した後,これを30℃で24時間,培養した。
混合不活化ワクチンの調製:参考例1及び参考例2で得た両ワクチン原液を各50mlずつ分取し,これ等の両者を混合することにより,混合不活化ワクチンを調製し,これをイリド・レンサ混合不活化ワクチン(以下「2混」という)と命名した。
2混の安全性と有効性:実施例1で調製した2混ワクチンの安全性と有効性とを確認するため,ブリ稚魚(体重18.65−28.34g,体長12.0−13.3cm),及びカンパチ稚魚(体重17.83−29.52g,体長10.6−12.5cm)をそれぞれ200尾ずつ用い,直接攻撃法による試験を行った。即ち,先ず,上記の両稚魚を,25尾/試験区,合計8試験区に無作為に分配した後、2混ワクチンを接種する試験区,及びその比較対照として,実施例1で調製したイリドとレンサの各ワクチンを接種する試験区,及びワクチンを接種しない無処理の試験区にわりあてた。次に,ワクチンを各稚魚の腹腔内に0.1ml接種した後,その11日目にイリドウイルス(106 TCID50/尾)又は連鎖球菌(106 CFU/尾)を各稚魚の腹腔内に0.1ml接種することにより直接攻撃し,飼育下で発症の有無を観察した。尚,飼育は,水温25±1℃の隔離した水槽(内容積60Lの水槽に海水40Lを入れ,これに新鮮海水を2L/min流入かつ旧水を等量排出し飼育海水を連続交換する)内で行った。その結果を表1に示す。
RPS=[(無処理区死亡率−接種区死亡率)]/無処理区死亡率]×100.
2混の接種部位が安全性と有効性に及ぼす影響:実施例1で調製した2混ワクチンの接種部位の違いと安全性・有効性との相関を確認するため,350尾のブリ稚魚(体重17.28−26.54g,体長11.8−13.1cm)を用い,直接攻撃試験を行った。これ等の稚魚を,25尾/試験区,合計14試験区に無作為に分配した後,ワクチンを各稚魚の腹腔内,又は筋肉内に0.1ml接種した。 尚,2混ワクチンを接種した試験区の比較対照の設定,直接攻撃による試験方法,飼育観察,及びRPSの算出は,実施例2の記載と同様にして行った。
2混ワクチンのイリド・連鎖混合感染に対する予防効果:次の点以外は,実施例2の記載と同様にして行った。50尾のブリ稚魚(体重17.13−26.67g,体長11.6−13.2cm)を試験区と比較対照区(無処理区)の合計2区に無作為に25尾ずつ分配した後,試験区の各稚魚の腹腔内に2混ワクチンを0.1mlずつ接種し,無処理区にはワクチンを接種しなかった。また,混合感染に係る直接攻撃は,ワクチン接種後11日目に,イリドウイルス(106 TCID50/尾),及び連鎖球菌(106 CFU/尾)を腹腔内にそれぞれ0.1ml接種することにより行った。その後の観察の結果,死亡率は無処理区が96%,ワクチンを接種した試験区が4%,そして,RPSは96であり,この発明の2混はイリド・連鎖混合感染の予防に有効であると判断された。
Claims (4)
- 魚類のイリドウイルス浮遊液を0.03%(V/V)の最終濃度のホルマリンで不活化して得たワクチン原液と連鎖球菌培養液を0.1%(V/V)の最終濃度のホルマリンで不活化して得たワクチン原液とを等量ずつ混合することを特徴とする混合不活化ワクチンの製造方法。
- 魚類のイリドウイルス浮遊液を0.03%(V/V)の最終濃度のホルマリンで不活化して得たワクチン原液と、連鎖球菌培養液を0.1%(V/V)の最終濃度のホルマリンで不活化して得たワクチン原液とを等量ずつ含む、混合不活化ワクチン。
- 前記連鎖球菌がα溶血性連鎖球菌感染症の病原体である、請求項2に記載の混合不活化ワクチン。
- 腹腔内または筋肉内に接種用である、請求項2又は3に記載の混合不活化ワクチン。
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