JP4880899B2 - 局所皮膚使用及び治療用製剤 - Google Patents

Description

本発明は、一般に局所皮膚治療用製剤に関し、より詳細には、活性剤の徐放性を提供するシリコーンマトリックス及び親水性担体を含む製剤に関する。

シリコーンはアルキルシロキサン又はオルガノシロキサンの化学に基づく化合物であり、医薬用途において賦形剤及び加工補助剤として用いられるポリジメチルシロキサン材料を含む。こうした材料のいくつかは薬局方化合物の地位を得ている。制御された薬物送達システム、特に特定の特性の関連性が薬物デザイン、即ち生体適合性及び汎用性の要求を満たすのに重要な場合の適用におけるそのようなシリコーン化合物の使用は当該技術分野に公知である。インプラント、挿入物、粘膜接着、経皮、及び局所形態を含む新規持続薬物送達用途はシリコーンのユニークで固有の特性を利用する。これら送達システムは、標的領域に対し生物学的に適切な動態を有する活性分子の制御放出を可能にし、従来の経口及び非経口投薬法において一般に観察されるピーク投与量、コンプライアンスの低さ、及び薬物分解のような悪影響を妨げる。

経皮薬物送達システムは、無傷の皮膚に最高７日間接着する接着性パッチを含有する薬物から成る。パッチデザインは活性剤の放出を制御し、次に全身活性のために循環システムにより生物を通して運ばれる。投入点として皮膚を用いることにより、絆創膏又はフィルム形態及び実質的材料（例えばクリーム又はジェル）から成る局所形態が局部治療（筋肉又は皮膚疾患）に用いられる。しかしながら、シリコーンマトリックス内に分散した生化学薬剤が皮膚又は創傷に放出されて治癒を促進するこうした経皮薬物送達システムは、創傷包帯剤及び軟膏のような局所包帯剤適用には導入されていない。

したがって、シリコーンの有益な特性を利用し、活性剤の徐放性を提供できる製剤の関連技術において、必要性が残されている。

本発明は、シリコーンマトリックス、親水性担体、及び製剤から放出する少なくとも１つの活性剤を含む局所用製剤を提供することにより必要性を満たす。活性剤はタンパク質、特にヒドロラーゼ及びグルコースオキシダーゼのような酵素でもよい。シリコーンマトリックスは、高分子量ポリジメチルシロキサン、ゆるく又は軽く架橋したシリコーンエラストマー、ゲルのような架橋したシリコーンエラストマー（充填剤のないエラストマー）、シリカ強化ゴム又は発泡体を含むことができ、付加及び縮合硬化システム、シリコーン系粘着剤、及びシリコーンポリアミドのようなシリコーン−有機コポリマーを用いて架橋が達成される。製剤は包帯剤、軟膏などを形成するために用いてもよい。

本発明の１つの側面によれば、製剤は、障害組織を含む皮膚に適用できる薄いフィルム包帯剤を含んでいてもよい。本発明の他の側面によれば、製剤はパッチ包帯剤を含む。本発明の更に他の側面によれば、製剤は塗布剤付き包帯の包帯剤を含む。

本発明の他の側面によれば、製剤は軟膏を含む。薄いフィルム、パッチ、塗布剤付き包帯、及び軟膏は全て、外科的切開、創傷、又は他の皮膚病変、擦り傷、ひっかき傷、かすり傷、又は他の障害組織に対し、皮膚に適用することができる。製剤は液体に対して閉鎖性でもよく、皮膚表面から感染する微生物をブロックするのに有効である。１つの態様において、プロテアーゼのような活性剤は、酵素による創面清掃、血栓形成及び血栓除去、並びにｉｎ ｓｉｔｕペルオキシド及び／又は過酸産生のために創傷部位で製剤から放出させて創傷治癒を様々な段階で促進することができる。

好ましい態様において、局所用製剤は、シリコーンマトリックス全体に分散した活性剤を含有する親水性担体の混合物を含む。この混合物はシリコーンマトリックスとともに本発明のこの態様の局所用製剤を形成する。親水性担体は例えばプロピレングリコール溶液であり、これは例えばポリビニルアルコール（「ＰＶＡ」）又はポリビニルピロリドン（「ＰＶＰ」）のような水溶性又は親水性成分と混合してもよい。親水性担体と活性剤との混合物は、エマルジョン又は分散物である内相を形成してもよく、この内相はシリコーンマトリックス（外相）内に分散している。したがって、シリコーン界面活性剤を添加して内相を非常に小さな液滴に分散又は乳化し、活性剤の放出を促進することができる。

したがって、本発明の特徴は、活性剤の皮膚への制御放出を提供するのに有効な局所用製剤を提供することである。本発明のこの特徴及び他の特徴並びに有益性は、以下の本発明の詳細な説明により明らかとなるであろう。

以下の本発明の好ましい態様の詳細な説明は、図面と合わせて読む場合に最も理解することができる。

本発明の１つの側面によれば、シリコーンマトリックスを導入した局所用製剤が提供される。製剤は、活性剤のシリコーンマトリックスからの制御された徐放性を有効に提供する。活性剤を親水性担体と混合して、シリコーンマトリックス内に分散した混合物を形成する。活性剤はシリコーンマトリックス内で安定であり、マトリックスから制御可能に自由に放出される。

本発明の態様を定義し、記載するため、以下の用語は以後に提示される定義と一致するものとして理解されるであろう。
活性剤はタンパク質、特に酵素を意味するものとして理解されるべきである。

界面活性剤は、懸濁媒体に添加し、非混和液と、しばしばコロイドサイズの非常に細かい固体粒子の均一な最大の分離を促進する表面活性剤を意味するものとして理解されるべきである。界面活性剤は、湿潤、液体分散媒体中での非混和液、液滴、又は細かい固体粒子の効率的な分配、及び粒子の凝集に対する安定化を促進する。界面活性剤は一般に、粒子表面の完全な表面被覆を提供するのに十分な量で分散媒体に添加される。

包帯剤は、分泌物を吸収し、外傷から組織を保護し、組織へ医薬を投与し、環境から組織を保護し、出血を止め、湿潤環境を維持又は提供し、及びこれらの組み合わせのために、皮膚、創傷組織、又は病変組織に直接適用するのに好適な種々のタイプの被覆剤を意味するものとして理解されるべきである。例えば包帯剤はフィルム、パッチ、包帯、ゲルなどの形態でよい。

エマルジョンは、１つの液相の第２液相内への一時的又は永続的分散を意味するものとして理解されるべきである。一般に、液体の一方は水又は水溶液であり、他方はオイル又は他の水非混和液である。第２液は一般に連続相又は外相を意味する。エマルジョンは、分散した液体又は内相は単純な均一液である単純なエマルジョン、又は分散した液相は２重エマルジョン若しくは多重エマルジョンのような液相又は固相の不均一な組み合わせであるより複雑なエマルジョンに更に分類することができる。

親水性担体は、活性剤の溶媒として作用する、本発明の製剤の相の少なくとも１つの成分を意味するものとして理解されるべきである。親水性担体は、本発明の態様に用いられるシリコーンマトリックスからの活性剤の放出において助力する。

親水性成分は、本発明の態様において親水性担体と活性剤との混合物に添加される少なくとも１つの成分を意味するものとして理解されるべきである。親水性成分は、本発明の態様に用いられるシリコーンマトリックスからの活性剤の放出において助力することもできる。

タンパク質は、天然、合成、及び人工的な、オキシドレダクターゼ、トランスフェラーゼ、イソメラーゼ、リガーゼ、ヒドロラーゼのような酵素；抗体；ポリペプチド；ペプチド；ホルモン；サイトカイン；増殖因子；及び他の生物学的修飾物質、を意味するものとして理解されるべきである。

軟膏は、皮膚、創傷組織、及び病変組織のような外部に適用するのに好適な半固体製剤を意味するものとして理解されるべきである。
本発明によれば、製剤は、皮膚、創傷組織、及び病変組織に適用される種々の局所包帯剤に用いることができる。局所包帯剤は、活性剤が放出され、下層皮膚、創傷組織、及び病変組織に適用されることを可能にする。更に、製剤は軟膏を形成するのに用いてもよく、軟膏は、活性剤が放出され、下層皮膚、創傷組織、及び病変組織に適用されることを可能にする。

好ましい態様によれば、外相又は連続相内に内相又は非混和性分散相を含む製剤が提供される。外相は一般にシリコーンマトリックスを含み、内相は一般に少なくとも１つの活性剤を含有する親水性担体を含む。更に、内相は好適な親水性成分を更に含んでもよい。内相及び外相は、本発明の製剤を形成するために好適な方法で混合してもよい。例えば、本発明の製剤を形成する際に、高剪断ミキサーを用いて内相と外相を混合することができる。更に、内相と外相を手で混合してもよい。内相の液滴サイズは様々でよい。例えば液滴サイズは約０．１μｍ〜約２０００μｍ、約０．１μｍ〜約１０００μｍ、約０．１μｍ〜約５００μｍ、約０．１μｍ〜約２００μｍ、又は約０．１μｍ〜約１００μｍでよい。

内相は少なくとも１つの活性剤を含有する好適な親水性担体を含んでもよい。本発明の態様において、親水性担体は適切な温度の液体であり、好適な溶媒に溶解した固体材料（例えばソルビトール、マンニトール、ラクトース、塩化ナトリム及びクエン酸）を用いてもよい。例えばプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリエチレングリコール、ポロキサマー、グリセリン、アルコール、多価アルコール、水、又は他の好適な親水性担体の溶液中に活性剤を含有してもよい。

内相は水溶性及び親水性成分を更に含んでもよい。親水性成分は一般に活性剤の溶媒として作用しない。親水性成分はシリコーンマトリックスからの活性剤の放出速度を高めることができ、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ又はＰＶＯＨ）（例えばＣｌａｒｉａｎｔ社、Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ、Ｎ．Ｃ．から入手可能なＭｏｗｉｏｌ（登録商標）３−８３のようなもの）又は例えばＢＡＳＦ社、Ｍｏｕｎｔ Ｏｌｉｖｅ、Ｎ．Ｊ．から入手可能なＬｕｖｉｓｋｏｌ（登録商標）Ｋ−３０のようなポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を含むことができる。内相溶液は約３５重量％以下の水中のＰＶＡ溶液又は約５０重量％以下の水中のＰＶＰ溶液を含むことができる。本発明の態様において、親水性成分は、セルロース誘導体（カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、ポリアクリル酸、アルギン酸誘導体、キトサン誘導体、ゼラチン、ペクチン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセロール並びに他の好適な親水性分子及び高分子のような、水で希釈された水増粘剤であることもできる。ここで、活性剤は水溶性でも水溶性でなくてもよい。このような分子には親水性高分子が含まれる。

特定の理論に拘束されることを望まないが、親水性成分が、シリコーンマトリックス内に、活性剤の放出を容易にする孔、割れ目、亀裂、裂溝をつくることも意図される。内相をつくる際に、親水性担体に添加するＰＶＡ又はＰＶＰの量を増加させると、放出する活性剤の割合を増加させることができる。更に、内相の中の親水性担体量が増加すると、放出する活性剤の割合を増加させることができる。

更に、賦形剤を用いて活性剤を安定化又は生体適合性にすることができ、シリコーンマトリックスからの放出を補助する。本発明に用いるためのシリコーン賦形剤は、シリコーンポリエーテル、シリコーンフルイド、ジメチコーン、ジメチコーンコポリオール、ジメチコノール、シリコーンアルキルワックス、シリコーンポリアミドなどを含むことができる。他の可能な賦形剤には、限定されるものではないが、（ポリ）サッカリド誘導体、アクリル酸誘導体、ＰＶＡ誘導体、グリコール、グリセロール、グリセリド誘導体、プロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリエチレングリコール、ポロキサマー、グリセリン、アルコール、セルロース誘導体、ポリアクリル酸、アルギン酸誘導体、キトサン誘導体、ゼラチン、ペクチン及び多価アルコールのような親水性有機物が含まれる。

本発明のシリコーンマトリックスは、ＥＰ９６６９７２Ａ１、ＷＯ０１／１９１９０Ａ１、及びＷＯ２００１／２２９２３に開示されているような高分子量ポリジメチルシロキサン（ガム系材料に対し１２，５００ｃＳｔ）で構成されていてもよい。これらの開示は、本発明に用いる高分子量ポリジメチルシロキサンの教示に関し、本明細書に援用される。

シリコーンマトリックスは、ゆるく又は軽く架橋したシリコーンエラストマー、例えばダウコーニング（登録商標）９０４０ シリコーンエラストマーブレンド（ダウコーニング社、Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩから入手可能）で構成されていてもよい。ゆるく又は軽く架橋したシリコーンエラストマーは、以下の米国特許に開示されている。これらは、揮発性シリコーン溶媒（Ｄ５）に処理されたゆるく架橋したポリジメチルシロキサンを記載している。これらの開示は本明細書に援用される。米国特許第６，２００，５８１号、第６，２３８，６５７号、第６，１７７，０７１号、第６，１６８，７８２号、及び第６，２０７，７１７号。揮発性シリコーン溶媒が蒸発するにつれて、軽く又はゆるく架橋したシリコーンエラストマーは、ペースト状の堅さからエラストマー系シリコーンゲルへと厚くなる。

シリコーンマトリックスは、米国特許第５，１４５，９３７号及び第４，９９１，５７４号、並びにＥＰ０９５５３４７に記載されているような充填剤のないエラストマーで構成されていてもよい。これらは本発明に用いられるシリコーンゲル、例えばダウコーニング（登録商標）７−９８００ ＳＳＡ ＫＩＴ（ダウコーニング社、Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩから入手可能）の教示に関し本明細書に援用される。

あるいは、シリコーンマトリックスは、ＥＰ０４２５１６４、ＥＰ０５０６２４１、及び米国特許５，０１０，１１５号に記載されているような気泡エラストマー（充填剤のない又はシリカ強化）で構成されていてもよい。これらの開示は、本発明に用いられるシリコーンフォーム、例えばダウコーニング（登録商標）７−０１９２ フォーム パートＡ及びパートＢ（ダウコーニング社、Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩから入手可能）の教示に関し、本明細書に援用される。更に、シリコーンマトリックスは、付加硬化物（ゲルと同様だがシリカで強化されていない）又は縮合硬化物、例えばダウコーニング（登録商標）７−５３００ ＦＩＬＭ−ＩＮ−ＰＬＡＣＥ ＣＯＡＴＩＮＧ又はダウコーニング（登録商標）７−ＦＣ４２１０ ＦＩＬＭ ＦＯＲＭＩＮＧ ＢＡＳＥ ＡＮＤ ＣＵＲＥ ＡＧＥＮＴ（ダウコーニング社、Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩから入手可能）のようなシリコーンゴムで構成されることができる。

最後に、シリコーンマトリックスは、米国特許第２，７３６，７２１号、第２，８１４，６０１号、第２，８５７，３５６号、第３，５２８，９４０号、及び第６，３３７，０８６号に記載されているようなシリコーンポリマー中のシリカ樹脂のようなシリコーン粘着剤（シリコーンＰＳＡ）で構成されていてもよい。これは溶媒ベースでも熱溶解でもよい。これらの開示は、本発明に用いられるシリコーンＰＳＡの教示に関し、本明細書に援用される。例えばダウコーニング（登録商標）ＰＳＡ ７−４４０２（ダウコーニング社、Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩから入手可能）を用いてもよい。

本発明のシリコーンマトリックスは、親水性担体及び活性剤の小さな液滴への分散又は乳化を容易にし、こうしたより小さな液滴がより大きな液滴へと合体するのを妨げる、シリコーン界面活性剤、例えばダウコーニング（登録商標）９０１１ シリコーンエラストマーブレンド（ダウコーニング社、Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩから入手可能）を更に含んでいてもよい。例えば、シリコーン界面活性剤を用いる場合、内相の液滴は約０．１〜５００μｍでよい。シリコーン界面活性剤は、本発明の局所包帯剤を形成する際に安定なエマルジョンを作製するために用いてもよい。更に、本発明の外相は、揮発性シリコーン（即ちＤ５（ダウコーニング（登録商標）２４５フルイド）、ＭＤＭ（ダウコーニング（登録商標）２００フルイド １ｃＳｔ））、又は有機溶媒（即ちヘプタン又は酢酸エチル）のようなシリコーンマトリックスを送達するための希釈剤を含んでもよい。

本発明の活性剤は、一般に親水性担体に導入される酵素のようなタンパク質である。活性剤は親水性でもよい。包帯剤に導入するのに好適な酵素はいかなる酵素でもよい。酵素には、限定されるものではないが、市販のもの、改良型、組換え体、野生型、天然には見られない変異体、及びそれらの混合物が含まれる。例えば、好ましい酵素には、ヒドロラーゼ、クチナーゼ、オキシダーゼ、トランスフェラーゼ、レダクターゼ、ヘミセルラーゼ、エステラーゼ、イソメラーゼ、ペクチナーゼ、ラクターゼ、ペルオキシダーゼ、ラッカーゼ、カタラーゼ、及びそれらの組み合わせが含まれる。ヒドロラーゼには、限定されるものではないが、プロテアーゼ(細菌性、真菌性、酸性、中性、又はアルカリ性)、アミラーゼ(α又はβ)、リパーゼ、マンナナーゼ、セルラーゼ、コラーゲナーゼ及びそれらの組み合わせが含まれる。

本発明の製剤に含めるのに好適であると考えられるリパーゼには、英国特許第１，３７２，０３４号に開示されるシュードモナス−スタッツェリＡＴＣＣ１９．１５４；米国特許第５，３８９，５３６号に記載されるシュードモナス−メンドシナ；及び米国特許第５，１５３，１３５号に開示されるシュードモナス−シュードアルカリゲネスのようなシュードモナス属の微生物により産生されるものが含まれる。リパーゼは、微生物シュードモナス−フルオレッセンスＩＡＭ１０５７で産生されたリパーゼ抗体と陽性の免疫学的交差反応を示すものを更に含む。このリパーゼは、天野エンザイム株式会社、名古屋、日本からリパーゼＰ「アマノ」の商品名で入手可能である。リパーゼは、Ｍ１リパーゼ（登録商標）及びＬｉｐｏｍａｘ（登録商標）（Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ ＮＶ、Ｄｅｌｆｔ、オランダ）及びリポラーゼ（登録商標）（ノボザイムズＡ／Ｓ、Ｂａｇｓｖａｅｒｄ、デンマーク）を含む。リパーゼは、通常、シリコーンマトリックス重量に対し、約０．０００１％〜約２％活性酵素、又は約０．００１ｍｇ／ｇ〜約２０ｍｇ／ｇのレベルでシリコーンマトリックスに導入される。

プロテアーゼは、通常タンパク質又はペプチドのペプチド結合を切断するのに作用するカルボニルヒドロラーゼである。本明細書において「プロテアーゼ」は、天然のプロテアーゼ又は組換えプロテアーゼを意味する。天然のプロテアーゼには、α−アミノアシルペプチドヒドロラーゼ、ペプチジルアミノ酸ヒドロラーゼ、アシルアミノヒドロラーゼ、セリンカルボキシペプチダーゼ、メタロカルボキシペプチダーゼ、チオールプロテイナーゼ、カルボキシルプロテイナーゼ及びメタロプロテイナーゼが含まれる。セリン、メタロ、チオール及び酸プロテアーゼ、並びにエンドプロテアーゼ及びエクソプロテアーゼが含まれる。

プロテアーゼは動物、植物、又は微生物由来であることができる。例えば、プロテアーゼは細菌由来のセリンタンパク質分解酵素でよい。精製酵素を用いてもよいし、非精製酵素を用いてもよい。化学的に産生されたプロテアーゼ又は遺伝学的に修飾された変異体は、密接な構造変異体であるため定義により含まれる。プロテアーゼの例として特に好ましいのは、バチルス属、例えばバシラス−サブチリス、バシラス−レンタス、Bacillus amyloliquefaciens、及び／又はバシラス−リシェニフォルミスから得た細菌性セリンタンパク質分解酵素、特にスブチラーゼ（subtilase）である。本発明の組成物に含まれると考えられる好適な市販のタンパク質分解酵素には、Ａｌｃａｌａｓｅ（登録商標）、Ｅｓｐｅｒａｓｅ（登録商標）、Ｄｕｒａｚｙｍ（登録商標）、Ｅｖｅｒｌａｓｅ（登録商標）、Ｋａｎｎａｓｅ（登録商標）、Ｒｅｌａｓｅ（登録商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）、Ｍａｘａｔａｓｅ（登録商標）、Ｍａｘａｃａｌ（登録商標）、及びＭａｘａｐｅｍ（登録商標）１５（タンパク質操作されたＭａｘａｃａｌ）；Ｐｕｒａｆｅｃｔ（登録商標）、Ｐｒｏｐｅｒａｓｅ（登録商標）（タンパク質操作されたＰｕｒａｆｅｃｔ）並びにスブチリシンＢＰＮ及びＢＰＮ’が含まれる。

プロテアーゼは、天然にみられないアミノ酸配列を有するプロテアーゼ変異体も包含する。このアミノ酸は、天然にみられない異なるアミノ酸配列に置換した前駆体プロテアーゼに由来し、本明細書にその全体が援用される米国特許第ＲＥ３４，６０６号；第５，７００，６７６号；第５，９７２，６８２号及び／又は第６，４８２，６２８号に記載される、Bacillus amyloliquefaciens スブチリシンの番号付けによるところの＋７６、＋８
７、＋９９、＋１０１、＋１０３、＋１０４、＋１０７、＋１２３、＋２７、＋１０５、＋１０９、＋１２６、＋１２８、＋１３５、＋１５６、＋１６６、＋１９５、＋１９７、＋２０４、＋２０６、＋２１０、＋２１６、＋２１７、＋２１８、＋２２２、＋２６０、＋２６５、及び／又は＋２７４から成る群より選択される位置と同等なプロテアーゼ内の位置でアミノ酸残基を異なるアミノ酸に置換した前駆体プロテアーゼに由来する。

例示的プロテアーゼ変異体には、米国特許第ＲＥ３４，６０６号に記載されるようなバシラス−レンタス由来のスブチリシン変異体、以後プロテアーゼＡという、が含まれる。他の好適なプロテアーゼは、米国特許第５，７００，６７６号に記載されるようなBacillus amyloliquesfaciens由来のＹ２１７Ｌ変異体、以後プロテアーゼＢという、である。米国特許第６，４８２，６２８号に記載されるような修飾された細菌性セリンタンパク質分解酵素である、ここでプロテアーゼＣというもの；及び米国特許第５，９７２，６８２号に記載されるような修飾された細菌性セリンタンパク質分解酵素であるプロテアーゼＤも好適である。

本発明の実施に有用な他のプロテアーゼは、Ｓａｖｉｎａｓｅ（登録商標）、Ｅｓｐｅｒａｓｅ（登録商標）、Ｍａｘａｃａｌ（登録商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ（登録商標）、ＢＰＮ’、プロテアーゼＡ、プロテアーゼＢ、プロテアーゼＣ、プロテアーゼＤ及びそれらの混合物から成る群より選択することができる。プロテアーゼは、シリコーンマトリックスの約０．０１％〜約０．５重量％又は約０．１ｍｇ／ｇ〜約１０．０ｍｇ／ｇ、好ましくは約０．１ｍｇ／ｇ〜約５．０ｍｇ／ｇのレベルで一般に本発明の製剤中に存在する。

本発明は上記の酵素に限定されないことを当業者は理解するであろう。１つ以上の活性剤を本発明の局所用製剤に用いることができることを当業者は更に理解すべきである。
活性剤は種々の機能を行なうことができる。例えば、マトリックスは、壊死組織を除去し、一般的創傷清掃をするためのプロテアーゼ及び他の酵素学的創面清掃剤、血栓形成及び血栓除去酵素、自己殺菌、抗感染、及び治癒促進のためにペルオキシド、過酸、活性酸素種、及び抗接着触媒アンタゴニストを産生する薬剤、並びに皮膚治療などのための薬剤を局所的に放出することができる。

本発明の製剤は、好適な量の成分を有することができる。例えば外相は局所用製剤の約５０．０００％〜約９９．９９９％含むことができる。内相は約０．００１％〜約２．０００％の活性剤及び約０．００１％〜約４９．９９９％の親水性担体を含むことができる。界面活性剤を製剤に添加する場合、界面活性剤は約０．００１％〜約６０．０００％、より一般的には約０．１００％〜約５０．０００％含むことができる。親水性成分を添加する場合、親水性成分は製剤の約０．００１％〜約５０．０００％含むことができ、親水性成分はより一般的には局所用製剤の約５．０００％〜約４０．０００％含むことができる。他の態様において、親水性成分は製剤の約１０．０００％〜約３５．０００％含むことができる。更に他の態様において、親水性成分は製剤の約１５．０００％〜約３５．０００％含むことができる。

本発明の製剤は、活性剤を親水性成分溶液とともに含有するプロピレングリコール溶液のような親水性担体溶液を、回転ミキサーで約３０ｒｐｍ、約１５分間混合して内相をつくることにより作製することができる。シリコーンマトリックス及びシリコーン界面活性剤のような外相の成分を予め混合して均一な混合物を得る。

内相及び外相をそれぞれ製造後、乳化又は分散の機械的操作を行なうことができる。好ましくは、内相を外相へ添加して、高剪断実験室用ミキサー、即ち角孔高剪断スクリーンを有するＳｉｌｖｅｒｓｏｎ Ｌ４Ｒ（Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ Ｍａｃｈｉｎｅｓ社、Ｅａｓｔ Ｌｏｎｇｍｅａｄｏｗ、ＭＡから入手可能）で激しく攪拌する。こうした高剪断混合により、サイズ分布の非常に狭い直径約０．１〜５０μｍ、約０．１〜１０μｍ、及び約０．１〜５μｍの液滴を生ずる。混合物の攪拌を約５４００ｒｐｍで約９０秒間行なうことができる。次に得られた混合物を硬化させるため好適な容器に移してもよい。容器は所望のパッチを提供するサイズ及び／又は形のものであることができる。

あるいは、手で混合して包帯剤を製造することができる。本発明の他の態様によれば、内相及び外相は上記のように製造され、内相は外相に添加される。次に、小さなへらで円運動を行なうことにより混合物を容器内で約３０秒激しく攪拌し、包帯剤を形成する。内相と外相を手で混合することにより、直径約１０〜約１０００μｍの内相液滴を生ずる。

本発明の製剤は、皮膚に適用する前にフィルムに成型してもよいし、ｉｎ ｓｉｔｕで重合する場合は皮膚に直接適用してもよい。皮膚に適用する場合は「塗布剤付き」フィルムを重合し、チューブ、小袋、ロールオン、スプレー、パッチ、包帯などから本発明にしたがいクリーム又は軟膏として送達されてもよい。付加硬化物（ゲルに類似するが、シリカで強化されている）又は縮合硬化物、例えばダウコーニング社（Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩ）から入手可能なダウコーニング（登録商標）７−５３００ ＦＩＬＭ−ＩＮ−ＰＬＡＣＥ ＣＯＡＴＩＮＧのようなシリコーンゴムを外相へ導入することによりフィルムを作製することができる。内相と混合することにより、得られるエマルジョンは硬化可能になり、皮膚に適用したとき重合し、プロテアーゼのような活性剤を有効に放出する「塗布剤付き」フィルム、パッチ、又は包帯を提供する。エマルジョンを基材上に塗布して所望の厚さを達成する。本発明の包帯剤は好適な方法で製造してよく、製造方法は本明細書に記載されるものに限定されないことが当業者に理解されるであろう。

本発明による軟膏は、ダウコーニング社（Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩ）から入手可能な、ダウコーニング（登録商標）９０４１ シリコーンエラストマーブレンドのようなシリコーンエラストマー、及びダウコーニング（登録商標）５２００ ＦＯＲＭＵＬＡＴＩＯＮ ＡＩＤのようなシリコーン界面活性剤をいっしょに混合して外相を形成することにより、作製することができる。内相は活性剤溶液とＰＶＡのような親水性担体をいっしょに混合することにより製造することができる。内相は、一定の攪拌で内相を外相へゆっくり添加することにより外相へ導入することができる。

本発明の製剤は、所定の適用のために活性剤放出速度を最適化するように製造できることは当業者に理解されるであろう。例えばシリコーンマトリックスは活性剤放出速度を増加又は減少させるように選択することができる。ＰＶＡ及びＰＶＰのような親水性成分をシリコーンマトリックスへ添加することにより、活性剤放出速度を増加させることができる。同様に、親水性担体の重量を増加させることにより活性剤放出速度を増加させることができる。例えば約５０重量％以下の親水性担体を用いて製剤を形成することができる。あるいは、活性剤放出速度を増加させるようにシリコーンマトリックスを選択することができる。例えば架橋密度の小さいシリコーンマトリックスは架橋密度の大きいシリコーンマトリックスよりもより速い活性剤放出速度を提供するであろう。

活性剤放出速度に影響を与えるために包帯剤パッチの厚さを変化させてもよい。活性剤放出速度を増加させるために、パッチの厚さを下方に調節してもよい。更に、包帯剤を空気に対してより密閉性にするように製造してもよい。包帯剤の密閉性が増加するにつれて、活性剤放出速度も増加する。

同様に、創傷ベッドのパラメータは活性剤放出速度を増加させたり減少させたりする。例えば、創傷ベッドの水分量が増加するにつれて、活性剤放出速度も増加する。あるいは、創傷ベッドの温度が上昇するにつれて、活性剤放出速度は増加する。したがって、創傷ベッド及び包帯剤又は軟膏条件の所定のセットについて、活性剤が所望の放出速度で最適に送達されるように製剤の種々のパラメータが選択される。

一般に、製剤は、活性剤の活性が顕著な割合で失われることなく所定期間保存される包帯剤又は軟膏を提供するように製剤化される必要がある。例えば、包帯剤又は軟膏は、その活性が有効％よりも失われることなく６ヶ月以内の期間、室温で安定であることができる。

本発明をより容易に理解するために以下の実施例を参照するが、これは本発明を具体的に示すことを意図したものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。

シリコーンマトリックスからのプロテアーゼの徐放性を評価するために第１の実験を行なった。ゆるく又は軽く架橋したシリコーンエラストマー組成物（ダウコーニング（登録商標）９０４０）及びシリコーン界面活性剤（ダウコーニング（登録商標）９０１１）、これらはともにダウコーニング社（Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩ）から市販されている、を用いてダウコーニング（登録商標）９０４０及びダウコーニング（登録商標）９０４０／９０１１シリコーンエラストマー製剤を形成した。プロピレングリコールに溶解させた１．１ｍｇ／ｍｌのバシラス−レンタス由来プロテアーゼＡストック溶液を両方のダウコーニング（登録商標）組成物へ添加した。５ｍｌのストック溶液サンプルを、２０ｇの９０４０製剤、並びに１０ｇの９０４０製剤及び１０ｇの９０１１製剤を含む２０ｇの９０４０／９０１１製剤へ添加した。９０４０及び９０４０／９０１１に、ストック酵素溶液の代わりに水を含む対照を調製した。更に、シリコーンマトリックスの成分がプロテアーゼを阻害するか調べるため、等量のダウコーニング（登録商標）９０４０及び９０４０／９０１１酵素製剤、及び水を含みプロテアーゼのない対照を有する更なるサンプルを調製した。これらの阻害対照は、プロテアーゼのないサンプルからアリコートを取り、酵素製剤サンプルからの等量のアリコートへ添加することにより調製し、プロテアーゼ活性の阻害を観察した。次にサンプル材料をフード内で２週間空気乾燥させた。

ダウコーニング（登録商標）９０４０／９０１１製剤は薄いフィルムに乾燥させ、ダウコーニング（登録商標）９０４０組成物はケークに乾燥させた。Ｎ−スクシニル−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｐｈｅ−ｐ−ニトロアニリド（ＳＡＡＰＦｐＮＡ）を用いて、Ｄｅｌｍａｒ，Ｅ．Ｇ．ら（１９７９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９４，３１６−３２０；Ａｃｈｔｓｔｅｔｔｅｒ，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ ２０７：４４５−５４（１９８１））に記載されるように、プロテアーゼ標準アッセイでサンプルをアッセイした（ｐＨ６．５、２５℃）。アッセイは、ヒューレットパッカード８４５１Ａダイオードアッセイ分光光度計を用いて、４１０ｎｍで、放出されたプロテアーゼをｍＡｂｓ／分の単位で測定した。この実施例１の結果を以下の表１に示す。

これらのデータは、シリコーンマトリックスからのプロテアーゼの５時間にわたる有効な放出を示している。２週間以上乾燥保存した材料からデータを得ている。プロテアーゼのないシリコーン製剤の対照及び阻害対照を、プロテアーゼ含有シリコーン製剤と同量で同期間インキュベートした。阻害サンプルは、酵素製剤のプロテアーゼ活性よりも低い、ほとんど一貫したプロテアーゼ活性値を示している。更なる製剤を酵素サンプルに加えるとわずかに阻害化合物が存在することを結果は示している。

シリコーンマトリックスからのプロテアーゼの徐放性を評価するために他の実験を行なった。ポリエチレングリコールストック溶液中の０．８１ｍｇ／ｍｌプロテアーゼＡの０．５ｍｌアリコートを小さなポリプロピレン秤量皿へ移した。次に、５．０ｍｌのシリコーンゴム組成物（ダウコーニング社、Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩからのダウコーニング（登録商標）７−５３００）をプロテアーゼ溶液へ添加し、添加１５秒以内に混合した。ダウコーニング（登録商標）７−５３００組成物は、「塗布剤付き」フィルム、パッチ、又は包帯としての適用を有することを意図している。次に混合物を３０分間硬化させた。硬化後、１．０ｍｌの蒸留水を用いて混合物を３回洗浄した。上記のようにアリコートに対しＳＡＡＰＦｐＮＡアッセイを用いて各洗浄についてアッセイし、洗浄における酵素量を測定した。次に組成物をその側面で１５分間乾燥させ、続いて平らにして更に１５分間乾燥させた。最後に、５．０ｍｌの蒸留水を秤量皿に加え、数秒穏やかにグルグルかき混ぜた。ゼロ時間について２００μｌアリコートを取った。１時間ごとに２００μｌ取りながら、秤量皿を持続的にグルグルかき混ぜた。

この実験の結果を図１に報告する。洗浄において９％のプロテアーゼ活性が回収され、４時間で３．８％プロテアーゼがシリコーンマトリックスから放出された。
リパーゼ放出に関し、シュードモナス−メンドシナ由来リパーゼを用いて、直接上に記載された方法によりダウコーニング（登録商標）７−５３００シリコーンゴム組成物を更に試験した。この実験の結果をｍＡｂｓ／分の単位で以下の表２に示す。

洗浄において１８％のリパーゼ活性が回収され、９時間で２．２％のリパーゼが放出された。
図２Ａはダウコーニング（登録商標）７−５３００シリコーンゴム溶液からのプロテアーゼＡの放出／送達を表し、図２Ｂはダウコーニング（登録商標）７−５３００シリコーンゴム溶液からのリパーゼの放出／送達を表す。図は長時間にわたる２〜４％の更なる酵素のシリコーンマトリックスからの直線的放出を示している。

シリコーンマトリックスからのプロテアーゼＡの徐放性に対する親水性添加剤の効果を評価するために更に他の実験を行なった。第１に、試験包帯剤、より具体的にはプロテアーゼ含有パッチを、パッチの全量が一定（約２ｇ）であり、パッチ内の酵素濃度も一定（約０．６ｍｇ薬剤／パッチｇ）となるように小さなペトリ皿（直径およそ３ｃｍ）へ成型した。パッチはゆるく又は軽く架橋したシリコーンエラストマー組成物（ダウコーニング（登録商標）９０４０）及びシリコーン界面活性剤（ダウコーニング（登録商標）９０１１）、ともにダウコーニング社（Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩ）から市販されている、で構成されていた。更に、ダウコーニング（登録商標）７−５３００（シリコーンゴム組成物）も試験した。更に、製剤は、種々の量のＰＶＡ、高プロピレングリコールレベルでのＰＶＡ、又は攪拌により添加されたＰＶＰを含有した。

２つの方法を用いて酵素放出を評価した。第１の方法では、パッチを洗浄し、パッチ表面及びパッチ表面の非常に近くに存在する酵素を除去した。約１ｍｌの溶解バッファー（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１０ｍＭ ＣａＣｌ_２、及び０．００５％ Ｔｗｅｅｎ８０、ｐＨ５．４）を試験パッチのトップのペトリ皿へ添加した。次にバッファーを２０秒間グルグルかき混ぜ、分析用にバッファーをデカントでエッペンドルフチューブへ移した。洗浄工程を３回繰り返し、各洗浄について酵素活性を測定した。洗浄工程で放出された酵素の全量を出すため、結果をまとめた。図３Ａ〜３Ｃにおいて、この酵素量にはゼロ時間が含まれていた。

もう１つの方法は洗浄工程を含まない。約５ｍｌの溶解バッファーを試験パッチのトップにピペットで取り、ペトリ皿にフタをして蒸発を評価した。次に試験パッチ及び溶解バッファーを含有するペトリ皿を楕円ミキサー上で約７５ｒｐｍでかき混ぜ、酵素活性を分析するため、溶解バッファーの１０μｌのアリコートを１時間ごとに取り出した。アリコートをピペットでアッセイバッファー（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ及び０．００５％ Ｔｗｅｅｎ８０、ｐＨ８．６）を含有するキュベットに直接取り、ＵＶ／可視分光計で酵素活性を測定した。これにより溶解バッファー中の酵素濃度がｍｇ／ｍｌで出た。

図３Ａは、種々の量のＰＶＡ及び高ＰＧ（プロピレングリコール）含量を有するダウコーニング（登録商標）９０４０／９０１１シリコーンマトリックスからの酵素放出を表す。図３Ａに見られるように、より多量の親水性ＰＶＡをシリコーンマトリックスへ添加す
ることにより、酵素の放出速度を増加させる。同様に、図３Ｂは、種々のＰＶＡレベルでダウコーニング（登録商標）７−５３００製剤から放出したプロテアーゼＡの割合を表す。グラフからわかるように、放出速度はＰＶＡ量が増加するにつれて増加している。図３Ｃは、種々のＰＶＰ量を有するダウコーニング（登録商標）９０４０／９０１１シリコーンマトリックスからの酵素放出を表す。図３Ｃにみられるように、親水性ＰＶＰをシリコーンマトリックスへ添加することにより酵素の放出速度が増加している。

シリコーンマトリックスからのプロテアーゼＢの徐放性に対するシリコーンマトリクスの効果を評価するために実験を行なった。第１に、試験包帯剤、より具体的にはプロテアーゼ含有パッチを、パッチの全量が一定であり（約２ｇ）、パッチ内の酵素濃度も一定（約０．６ｍｇ薬剤／パッチｇ）となるように小さなペトリ皿（直径およそ３ｃｍ）へ成型した。パッチはゆるく又は軽く架橋したシリコーンエラストマー組成物（ダウコーニング（登録商標）９０４０）及びシリコーン界面活性剤（ダウコーニング（登録商標）９０１１）、ともにダウコーニング社（Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩ）から市販されている、で構成されていた。あるいは、パッチはダウコーニング（登録商標）ＰＳＡ ７−４４０２粘着剤又はダウコーニング（登録商標）７−ＦＣ−４２１０気泡エラストマー、ともにダウコーニング社（Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩ）から入手可能、で構成されていた。更に、製剤は０％又は２０％ＰＶＡを含有した。

２つの方法を用いて酵素放出を評価した。第１の方法では、パッチを洗浄して、パッチ表面及びパッチ表面の非常に近くに存在している酵素を除去した。約１ｍｌの溶解バッファー（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１０ｍＭＣａＣｌ_２、及び０．００５％ Ｔｗｅｅｎ８０、ｐＨ５．４）を試験パッチのトップのペトリ皿へ添加した。次にバッファーを２０秒間かき混ぜ、分析用にバッファーをデカンタでエッペンドルフチューブへ移した。洗浄工程を３回繰り返し、各洗浄について酵素活性を測定した。洗浄工程で放出された酵素の全量を出すため、結果をまとめる。図４において、この酵素量にはゼロ時間が含まれていた。

もう１つの方法は洗浄工程を含まない。約５ｍｌの溶解バッファーをピペットで試験パッチのトップに取り、ペトリ皿にフタをして蒸発を評価した。次に試験パッチ及び溶解バッファーを含有するペトリ皿を、楕円ミキサーで約７５ｒｐｍでかき混ぜ、酵素活性を解析するために溶解バッファーの１０μｌアリコートを１時間ごとに取り出した。アリコートをピペットでアッセイバッファー（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ及び０．００５％ Ｔｗｅｅｎ８０、ｐＨ８．６）を含有するキュベットに直接取り、ＵＶ／可視分光計で酵素活性を測定した。これにより溶解バッファー中の酵素濃度がｍｇ／ｍｌで出た。

図４はこの酵素放出試験の結果を表す。グラフからわかるように、ＰＳＡ ７−４４０２マトリックスは最大放出速度を示している。酵素の放出速度はシリコーンマトリックスの架橋密度に影響される。

酵素放出速度に対するパッチ厚の効果を観察するために実験を行なった。プロテアーゼＢ、７−５３００シリコーン、及びＰＶＡのような他の成分を含有する試験製剤を乳化した。製剤をＢｌａｄｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｏｒ（ＵＶ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｓｕｐｐｌｙ社、シカゴ）を用いてＭｙｌａｒ（登録商標）シートに塗布した。刃とＭｙｌａｒ（登録商標）シートとの間のギャップを調整することにより、適用被覆の厚さを制御した。それぞれ１３及び２５μｍで被覆を適用した。被覆を乾燥させて完全に硬化させた後、直径２５ｍｍの試験ディスクをＭｙｌａｒ（登録商標）シートから切り出した。被覆の最終乾燥厚を、デジタル被覆厚計（Ｅｌｃｏｍｅｔｅｒ、マンチェスター、ＵＫ）を用いて測定した。酵素ペイロードが正確にわかるように試験サンプルディスクの最終乾燥重量も測定した。Ｍｙｌａｒ（登録商標）単独の重量及び厚さを測定し、Ｍｙｌａｒ（登録商標）上のサンプルから差し引いて、サンプル単独の重量及び厚さを出した。

フランツ型拡散セル（Ａｍｉｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｒｉｅｇｅｌｓｖｉｌｌｅ、ＰＡ）を用いて酵素放出試験を行なった。試験サンプルを拡散セルのトップにマウントし、そのセルを３７℃に予め温めた１３．７ｍｌの溶解バッファー（１０ｍＭ ＮａＣｌ及び０．００５％ Ｔｗｅｅｎ８０含有１０ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ５．５）で満たした。拡散セル内部にある空気泡を除去するように注意した。セルの撹拌速度を５０ｒｐｍに予めセットした。０．１ｍｌのサンプルアリコートを定期的な時間間隔で拡散セルから回収し、酵素活性について分析して活性酵素濃度をｍｇ／ｍｌの単位で得た。放出酵素の割合も計算した。

図５を参照してわかるように、放出速度はパッチ厚に反比例することがわかった。したがって、酵素の１００％放出は最も薄いパッチで達成された。

軟膏製剤からのプロテアーゼ放出を試験するために実験を行なった。シリコーンエラストマー ダウコーニング９０４１及びシリコーン界面活性剤 ダウコーニング５２００製剤エイドを含有する外相をつくって試験軟膏製剤を調製した。これらはともにダウコーニング社（Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩ）から入手可能である。プロテアーゼＢストック溶液を含有する内相をつくった。更に、４０％ ＰＶＡ溶液を０又は２０％有する内相をつくった。プロテアーゼＢストック溶液は活性酵素、ギ酸ナトリウム、塩化カルシウム、水、及びＰＧを含有した。撹拌機を用いて内相と外相を混合した。軟膏は、軟膏１ｇあたり約３ｍｇの酵素を有していた。

軟膏製剤を作製後、Ｈａｎｓｅｎの軟膏セル（Ｈａｎｓｅｎ、Ｃｈａｔｗｏｒｔｈ、ＣＡ）を用いて放出速度を測定し、製剤の安定性を決定した。およそ０．５ｇの軟膏を軟膏投薬領域内の軟膏セルにロードした。０．４５μｍのＨＴ Ｔｕｆｆｒｙ ｎ（登録商標）メンブラン（Ｐａｌｌ社、Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）軟膏投薬領域のトップに置き、軟膏セルを密閉した。次に軟膏セルを軟膏セルフラスコ内に置き、そのフラスコを２５ｍｌのｐＨ５．５バッファー溶液（１０ｍＭ ＭＥＳ、１０ｍＭ ＣａＣｌ_２、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ）で満たして軟膏セルをバッファー溶液内に沈めた。３０℃で試験を行ない、へらを用いてバッファーを一定の５０ｒｐｍで撹拌した。１０分後、１時間後、２時間後、４時間後、８時間後、１６時間後及び２４時間後、オートサンプラーで０．５ｍｌのアリコートを取り出す。ＵＶ／可視分光計で酵素活性を測定し、溶解バッファー中の酵素濃度をｍｇ／ｍｌで得る。溶解試験を６回重複して行ない、平均量を報告する。

図６によると、ＰＶＡ溶液を添加することにより、２４時間にわたって酵素が軟膏から部分的に放出する。軟膏が、局所的に皮膚を治療するために用いられる製剤を提供するのは図６から明らかである。

室温保存した乾燥パッチ内での酵素の安定性を測定するために安定性試験を行なった。上記実施例に報告された初期放出データに匹敵する保存後の酵素放出は、酵素が保存のあいだも安定であることを示している。乾燥パッチを０〜６ヶ月の期間保存し、適当な時点で酵素放出を測定した。プロテアーゼＡ、９０４０／９０１１シリコーン及び他の成分を含有する試験製剤を乳化した。試験製剤は、乾燥重量３．１２５０ｇのＤＣ−９０４０シリコーン、乾燥重量３．２５００ｇのＤＣ−９０１１シリコーン界面活性剤、２．５ｍｇ／ｇのプロテアーゼＡ及び乾燥重量４．２０００ｇのＰＶＡを含んでいた。Ｂｌａｄｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｏｒ（ＵＶ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｓｕｐｐｌｙ社、シカゴ）を用いて製剤をＭｙｌａｒ（登録商標）シートに塗布した。刃とＭｙｌａｒ（登録商標）シートとの間のギャップを調整することにより、適用される被覆の厚さを制御した。被覆が乾燥して完全に硬化した後、直径２５ｍｍの試験ディスクをＭｙｌａｒ（登録商標）シートから切り出した。デジタル被覆厚計（Ｅｌｃｏｍｅｔｅｒ、マンチェスター、ＵＫ）を用いて被覆の最終乾燥厚さを測定したところ、サンプルの厚さはおよそ１００μｍであった。酵素ペイロードが正確にわかるように試験サンプルディスクの最終乾燥重量も測定した。単独の重量及び厚さを測定し、Ｍｙｌａｒ（登録商標）上のサンプルから差し引いて、サンプル単独の重量及び厚さを得た。

５０％プロピレングリコール中のプロテアーゼＡストック溶液（４００ｐｐｍの塩化カルシウムを含有する５０％ギ酸ナトリウムバッファー、ｐＨ５．５）を含む対照を調製した。対照を室温で保存し、種々の時点で保持された酵素活性を試験した。プロテアーゼＡは対照溶液内で安定であると予想される。

自動サンプリング付属品及び少量溶解キットを備えたＨａｎｓｏｎ（Ｈａｎｓｏｎ、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ）の溶解試験機を用いて酵素放出試験を行なった。ゴムセメントを用いて試験サンプルをサンプル（２５ｍｍ）と同じ直径の３／１６”厚ガラスディスクに固定した。次にサンプルを上向きの試験サンプル面で溶解容器にロードした。２５ｍｌの溶解バッファー（１０ｍＭ ＮａＣｌ及び０．００５％ Ｔｗｅｅｎ８０を含有する１０ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ５．５）を各サンプルのトップに注ぎ、自動サンプラーチューブに沿った撹拌へらを直ちにバッファー内へ下げた。溶解容器にキャップをして蒸発を最小にし、５０ｒｐｍで撹拌を開始した。自動サンプラーはプログラムされた時点で０．５ｍｌ又は１ｍｌのアリコートを取り出し、上記ＳＡＡＰＦｐＮＡプロテアーゼアッセイを用いてこれらサンプルの酵素活性を解析し、活性酵素濃度をｍｇ／ｍｌで得た。ある場合には、２８０ｎｍの吸収を測定し、適切な吸光係数を適用することにより、全タンパク質も各時点で測定した。

図７によると、０、１、３、及び６ヶ月保存した９０４０／９０１１乾燥パッチからのプロテアーゼＡの酵素安定性が表されている。データポイントは、各時点における６回の重複の平均から得ている。活性の損失は、シリコーンパッチよりも対照溶液のほうが大きい。したがって、シリコーンパッチは、酵素を保存し、続いて放出する、より安定な手段を提供する。

室温保存したＰＳＡ７−４４０２を有する乾燥パッチ内での酵素の安定性を測定するために安定性試験を行なった。上記実施例に報告された初期放出データに匹敵する保存後の酵素放出は、保存のあいだ酵素が安定であることを示している。乾燥パッチを０〜６ヶ月の一定期間保存し、適切な時点で酵素放出を測定した。プロテアーゼＢ、ＰＳＡ７−４４０２シリコーン及び他の成分を含有する試験製剤を乳化した。試験製剤は、乾燥重量３３．７５００のＰＳＡ７−４４０２シリコーン、乾燥重量２．３５００ｇのＤＣ１９３フルイド（ダウコーニング社、Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩから入手可能）、３．８６１２ｍｇ／ｇのプロテアーゼＢ、及び乾燥重量９．４１００ｇのＰＶＡを含んでいた。Ｂｌａｄｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｏｒ（ＵＶ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｓｕｐｐｌｙ社、シカゴ）を用いて製剤をＭｙｌａｒ（登録商標）シートに塗布した。刃とＭｙｌａｒ（登録商標）シートとのあいだのギャップを調整することにより、適用される被覆の厚さを制御した。被覆を乾燥させて完全に硬化させた後、Ｍｙｌａｒ（登録商標）シートから直径２５ｍｍの試験ディスクを切り出した。デジタル被覆厚計（Ｅｌｃｏｍｅｔｅｒ、マンチェスター、ＵＫ）を用いて被覆の最終乾燥厚を測定したところ、サンプルの厚さはおよそ１００μｍであった。酵素ペイロードが正確にわかるように試験サンプルディスクの最終乾燥重量も測定した。Ｍｙｌａｒ（登録商標）単独の重量及び厚さを測定し、Ｍｙｌａｒ（登録商標）上のサンプルから差し引いて、サンプル単独の重量及び厚さを得た。

５０％プロピレングリコール中のプロテアーゼＢストック溶液（４００ｐｐｍの塩化カルシウムを含有する５０％ギ酸ナトリウムバッファー、ｐＨ５．５）を含む対照を調製した。対照を室温で保存し、保持された酵素活性を種々の時点で試験した。プロテアーゼＢは対照溶液中で安定であると予想される。

自動サンプリング付属品及び少量溶解キットを備えたＨａｎｓｏｎ（Ｈａｎｓｏｎ、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ）の溶解試験機を用いて酵素放出試験を行なった。ゴムセメントを用いて、試験サンプルをサンプル（２５ｍｍ）と同じ直径の３／１６”厚ガラスディスクに固定した。次にサンプルを上向きの試験サンプル面で溶解容器にロードした。２５ｍｌの溶解バッファー（１０ｍＭ ＮａＣｌ及び０．００５％ Ｔｗｅｅｎ８０を含有する１０ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ５．５）を各サンプルのトップに注ぎ、自動サンプラーチューブに沿った撹拌へらを直ちにバッファー内へ下げた。溶解容器にキャップをして蒸発を最小にし、５０ｒｐｍで撹拌を開始した。自動サンプラーはプログラムされた時点で０．５ｍｌ又は１ｍｌのアリコートを取り出し、上記ＳＡＡＰＦｐＮＡプロテアーゼアッセイを用いてこれらサンプルの酵素活性を解析し、活性酵素濃度をｍｇ／ｍｌで得た。ある場合には、２８０ｎｍの吸収を測定し、適切な吸光係数を適用することにより、全タンパク質も各時点で測定した。

図８によると、０、１、３、及び６ヶ月保存したＰＳＡ７−４４０２乾燥パッチからのプロテアーゼＢの酵素安定性が表されている。データポイントは、各時点における６回の重複の平均から得ている。シリコーンパッチは、酵素を保存し、続いて放出する安定な手段を提供する。しかしながら、放出されたプロテアーゼＢの割合は、プロテアーゼＢ対照溶液で保持された活性の割合よりも少ない。

室温保存したＰＳＡ７−４４０１を有する乾燥パッチ内での酵素の安定性を測定するために安定性試験を行なった。上記実施例に報告された初期放出データに匹敵する保存後の酵素放出は、保存のあいだ酵素が安定であることを示している。乾燥パッチを０〜３ヶ月の一定期間保存し、適切な時点で酵素放出を測定した。プロテアーゼＢ、ＰＳＡ７−４４０１シリコーン及び他の成分を含有する試験製剤を乳化した。試験製剤は、乾燥重量３３．９０８８のＰＳＡ７−４４０１シリコーン、乾燥重量２．３５００ｇのＤＣ１９３フルイド、３．８７２３ｍｇ／ｇのプロテアーゼＢ、及び乾燥重量９．６１７０ｇのＰＶＡを含んでいた。Ｂｌａｄｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｏｒ（ＵＶ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｓｕｐｐｌｙ社、シカゴ）を用いて製剤をＭｙｌａｒ（登録商標）シートに塗布した。刃とＭｙｌａｒ（登録商標）シートとのあいだのギャップを調整することにより、適用される被覆の厚さを制御した。被覆を乾燥させて完全に硬化した後、Ｍｙｌａｒ（登録商標）シートから直径２５ｍｍの試験ディスクを切り出した。デジタル被覆厚計（Ｅｌｃｏｍｅｔｅｒ、マンチェスター、ＵＫ）を用いて被覆の最終乾燥厚を測定したところ、サンプルの厚さはおよそ１００μｍであった。酵素ペイロードが正確にわかるように試験サンプルディスクの最終乾燥重量も測定した。Ｍｙｌａｒ（登録商標）単独の重量及び厚さを測定し、Ｍｙｌａｒ（登録商標）上のサンプルから差し引いて、サンプル単独の重量及び厚さを得た。

５０％プロピレングリコール中のプロテアーゼＢストック溶液（４００ｐｐｍの塩化カルシウムを含有する５０％ギ酸ナトリウムバッファー、ｐＨ５．５）を含む対照を調製した。対照を室温で保存し、保持された酵素活性を種々の時点で試験した。

自動サンプリング付属品及び少量溶解キットを備えたＨａｎｓｏｎ（Ｈａｎｓｏｎ、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ）の溶解試験機を用いて酵素放出試験を行なった。ゴムセメントを用いて、試験サンプルをサンプル（２５ｍｍ）と同じ直径の３／１６”厚ガラスディスクに固定した。次にサンプルを上向きの試験サンプル面で溶解容器にロードした。２５ｍｌの溶解バッファー（１０ｍＭ ＮａＣｌ及び０．００５％ Ｔｗｅｅｎ８０を含有する１０ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ５．５）を各サンプルのトップに注ぎ、自動サンプラーチューブに沿った撹拌へらを直ちにバッファー内へ下げた。溶解容器にキャップをして蒸発を最小にし、５０ｒｐｍで撹拌を開始した。自動サンプラーはプログラムされた時点で０．５ｍｌ又は１ｍｌのアリコートを取り出し、上記ＳＡＡＰＦｐＮＡプロテアーゼアッセイを用いてこれらサンプルの酵素活性を解析し、活性酵素濃度をｍｇ／ｍｌで得た。ある場合には、２８０ｎｍの吸収を測定し、適切な吸光係数を適用することにより、全タンパク質も各時点で測定した。

図９によると、０、１、及び３ヶ月保存したＰＳＡ７−４４０１乾燥パッチから放出されたプロテアーゼＢの酵素安定性が表されている。データポイントは、各時点における６回の重複の平均から得ている。シリコーンパッチは、酵素を保存し、続いて放出する安定な手段を提供する。しかしながら、放出されたプロテアーゼＢの割合は、プロテアーゼＢ対照溶液で保持された活性の割合よりも少ない。

室温保存した７−ＦＣ４２１０を有する乾燥パッチ内での酵素の安定性を測定するために安定性試験を行なった。上記実施例に報告された初期放出データに匹敵する保存後の酵素放出は、保存のあいだ酵素が安定であることを示している。乾燥パッチを０〜１ヶ月の一定期間保存し、適切な時点で酵素放出を測定した。プロテアーゼＢ、７−ＦＣ４２１０基材及び硬化剤シリコーン並びに他の成分を含有する試験製剤を乳化した。試験製剤は、乾燥重量３６．００００ｇの７−ＦＣ４２１０基材シリコーン、乾燥重量７．２０００ｇの７−ＦＣ４２１０硬化剤、乾燥重量４．０８０００ｇのＤＣ２２５ジメチコーンフルイド（ダウコーニング社、Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩから入手可能）、４．２００６ｍｇ／ｇのプロテアーゼＢ、及び乾燥重量１２．２８８０ｇのＰＶＡを含んでいた。Ｂｌａｄｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｏｒ（ＵＶ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｓｕｐｐｌｙ社、シカゴ）を用いて製剤をＭｙｌａｒ（登録商標）シートに塗布した。刃とＭｙｌａｒ（登録商標）シートとのあいだのギャップを調整することにより、適用される被覆の厚さを制御した。被覆を乾燥させて完全に硬化させた後、Ｍｙｌａｒ（登録商標）シートから直径２５ｍｍの試験ディスクを切り出した。デジタル被覆厚計（Ｅｌｃｏｍｅｔｅｒ、マンチェスター、ＵＫ）を用いて被覆の最終乾燥厚を測定したところ、サンプルの厚さはおよそ１００μｍであった。酵素ペイロードが正確にわかるように試験サンプルディスクの最終乾燥重量も測定した。Ｍｙｌａｒ（登録商標）単独の重量及び厚さを測定し、Ｍｙｌａｒ（登録商標）上のサンプルから差し引いて、サンプル単独の重量及び厚さを得た。

５０％プロピレングリコール中のプロテアーゼＢストック溶液（４００ｐｐｍの塩化カルシウムを含有する５０％ギ酸ナトリウムバッファー、ｐＨ５．５）を含む対照を調製した。対照を室温で保存し、保持された酵素活性を種々の時点で試験した。

自動サンプリング付属品及び少量溶解キットを備えたＨａｎｓｏｎ（Ｈａｎｓｏｎ、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ）の溶解試験機を用いて酵素放出試験を行なった。ゴムセメントを用いて、試験サンプルをサンプル（２５ｍｍ）と同じ直径の３／１６”厚ガラスディスクに固定した。次にサンプルを上向きの試験サンプル面で溶解容器にロードした。２５ｍｌの溶解バッファー（１０ｍＭ ＮａＣｌ及び０．００５％ Ｔｗｅｅｎ８０を含有する１０ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ５．５）を各サンプルのトップに注ぎ、自動サンプラーチューブに沿った撹拌へらを直ちにバッファー内へ下げた。溶解容器にキャップをして蒸発を最小にし、５０ｒｐｍで撹拌を開始した。自動サンプラーはプログラムされた時点で０．５ｍｌ又は１ｍｌのアリコートを取り出し、上記ＳＡＡＰＦｐＮＡプロテアーゼアッセイを用いてこれらサンプルの酵素活性を解析し、活性酵素濃度をｍｇ／ｍｌで得た。ある場合には、２８０ｎｍの吸収を測定し、適切な吸光係数を適用することにより、全タンパク質も各時点で測定した。

図１０によると、０及び１ヶ月保存した７−ＦＣ４２１０乾燥パッチから放出されたプロテアーゼＢの酵素安定性が表されている。データポイントは、各時点における６回の重複の平均から得ている。シリコーンパッチは、酵素を保存し、続いて放出する安定な手段を提供する。しかしながら、放出されたプロテアーゼＢの割合は、プロテアーゼＢ対照溶液で保持された活性の割合よりも少ない。

創面清掃に好適な酵素の有効性を試験するために、廃棄された乾燥痂皮をｉｎ ｖｉｔｒｏモデルとして用いた。乾燥痂皮は、創傷又は壊疽由来の腐肉化した死滅組織である。酵素は、外科用メス又は他の鋭い外科用器具を利用する鋭い創面清掃を容易にするための接近が限られた又は全く接近できない患者の創傷を鋭く創面清掃する代替物を提供する。ヒト糖尿病患者に起こる脚の潰瘍の鋭い創面清掃から、廃棄された乾燥痂皮を得た。

創面清掃と同日に２片の大きな乾燥痂皮を得、２片に分けた。更にこの２片をそれぞれ３セクションに分けた。３×３の細かいメッシュゲージパッドを６枚のペトリ皿のそれぞれに置き、皿を秤量した。乾燥痂皮のセクションを各ゲージパッドに置き、ペトリ皿を再び秤量した。ペトリ皿、ゲージ及び乾燥痂皮の重量からペトリ皿及びゲージの重量を差し引いて乾燥痂皮の乾燥重量を得た。２０ｍｌの市販のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を各ペトリ皿へ添加した。６枚のペトリ皿のうちの２枚は、ＰＢＳ及び最初の２つの乾燥痂皮片のそれぞれに由来する乾燥痂皮サンプルのみを有する対照とした。６枚のペトリ皿のうちの次の２枚の中のＰＢＳは、２５０μｇ／２０ｍｌ ＰＢＳのクロストリジウム−ヒストリチカム（シグマ）由来タンパク質分解コラーゲナーゼを含有した。最後の２枚のペトリ皿中のＰＢＳ溶液のそれぞれは、２５０μｇ／２０ｍｌ ＰＢＳのＧｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社由来プロテアーゼＢ サブチリシン酵素を含有した。

次に乾燥痂皮を有するゲージパッドをＰＢＳ溶液に４８時間浸した。４８時間後、サンプルを検査し、４つの酵素サンプルペトリ皿のそれぞれと同一の２５０μｇ／２０ｍｌ ＰＢＳの酵素サンプルを含む各ペトリ皿に２度目の２０ｍｌ ＰＢＳを添加した。更に４８時間浸漬後、各ペトリ皿の乾燥痂皮を、新たなペトリ皿中の新たな３×３のゲージパッドへ移した。ペトリ皿を秤量した。

表３は６サンプルの重量変化を示す。全てのサンプルは、おそらく乾燥痂皮が液体を吸収したために膨張して９６時間後には重くなっていた。コラーゲナーゼサンプルは、おそらく乾燥痂皮の分解により重量増加％が小さかった。プロテアーゼサンプルも、おそらく乾燥痂皮の分解により重量増加％が小さかった。

乾燥痂皮の構造的完全性における変化の目視観察を９６時間に行ない、分解を確認した。プロテアーゼで試験したサンプルにおいて、乾燥痂皮はいくぶんゼラチン状になり、ある場合には、ＰＢＳで洗浄したとき乾燥痂皮は完全に分解した。対照及び乾燥痂皮コラーゲナーゼ処理サンプルは、ＰＢＳで洗浄してもゼラチン化せず、分解しなかった。

本発明の範囲を逸脱することなく種々の改変がなされ得ることは当業者には明らかであり、明細書に記載されたものに限定することを意図するものではない。

図１は本発明の態様による製剤からのプロテアーゼ徐放性のチャートである。 図２Ａは本発明の態様による製剤からのプロテアーゼ及びリパーゼの放出／送達を示すチャートである。 図２Ｂは本発明の態様による製剤からのプロテアーゼ及びリパーゼの放出／送達を示すチャートである。 図３Ａは種々の量の親水性成分を有する製剤からのプロテアーゼ放出を示すチャートである。 図３Ｂは種々の量の親水性成分を有する製剤からのプロテアーゼ放出を示すチャートである。 図３Ｃは種々の量の親水性成分を有する製剤からのプロテアーゼ放出を示すチャートである。 図４は種々のシリコーンマトリックスを有する製剤からのプロテアーゼ放出速度を示すチャートである。 図５は種々の厚さのパッチを有する製剤からのプロテアーゼ放出速度を示すチャートである。 図６は本発明の態様による軟膏製剤からのプロテアーゼ放出を示すチャートである。 図７は本発明の態様による製剤におけるプロテアーゼの安定性を示すチャートである。 図８は本発明の他の態様による製剤におけるプロテアーゼの安定性を示すチャートである。 図９は本発明の更に他の態様による製剤におけるプロテアーゼの安定性を示すチャートである。 図１０は本発明の態様による製剤におけるプロテアーゼの安定性を示すチャートである。

Claims (56)

1. 内相及び外相を含む徐放性局所用製剤であって、該内相は該外相の中に分散しており、該内相は少なくとも１つの親水性担体、少なくとも１つの親水性成分、及び活性剤としての少なくとも１つの酵素を含み；該外相は該局所用製剤からの該酵素の放出を制御するためのシリコーンマトリックスを含む、製剤。
2. 該少なくとも１つの活性剤が親水性であり、該シリコーンマトリックスから放出される、請求項１に記載の局所用製剤。
3. 該内相が該外相の中に分散した液滴を含み、該液滴の直径が０．１μｍ〜２０００μｍである、請求項１に記載の局所用製剤。
4. 該液滴の直径が０．１μｍ〜１０００μｍである、請求項３に記載の局所用製剤。
5. 該液滴の直径が０．１μｍ〜５００μｍである、請求項３に記載の局所用製剤。
6. 該液滴の直径が０．１μｍ〜２００μｍである、請求項３に記載の局所用製剤。
7. 該液滴の直径が０．１μｍ〜１００μｍである、請求項３に記載の局所用製剤。
8. 該液滴の直径が０．１μｍ〜５０μｍである、請求項３に記載の局所用製剤。
9. 該液滴の直径が０．１μｍ〜１０μｍである、請求項３に記載の局所用製剤。
10. 該液滴の直径が０．１μｍ〜５μｍである、請求項３に記載の局所用製剤。
11. 該少なくとも１つの親水性担体が、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポロキサマー、アルコール及び水、並びにそれらの組み合わせから選択される、請求項１に記載の局所用製剤。
12. 該少なくとも１つの親水性担体がポリプロピレングリコールを含む、請求項１に記載の局所用製剤。
13. 該少なくとも１つの親水性担体が局所用製剤の５０重量％以下を占める、請求項１に記載の局所用製剤。
14. 該少なくとも１つの酵素が、ヒドロラーゼ、クチナーゼ、オキシダーゼ、トランスフェラーゼ、レダクターゼ、ヘミセルラーゼ、エステラーゼ、イソメラーゼ、ペクチナーゼ、ラクターゼ、ペルオキシダーゼ、ラッカーゼ、カタラーゼ、及びそれらの組み合わせから選択される、請求項１に記載の局所用製剤。
15. 該少なくとも１つの酵素が少なくとも１つのヒドロラーゼ酵素を含む、請求項１に記載の局所用製剤。
16. 該ヒドロラーゼ酵素がリパーゼ及びプロテアーゼから選択される、請求項１５に記載の局所用製剤。
17. 該プロテアーゼがスブチリシンプロテアーゼを含む、請求項１６に記載の局所用製剤。
18. 該プロテアーゼがバシラス−レンタス由来のスブチリシン変異体又はBacillus amyloliquesfaciens由来のＹ２１７Ｌ変異体を含む、請求項１６に記載の局所用製剤。
19. 該ヒドロラーゼ酵素がリパーゼを含み、該リパーゼが該シリコーンマトリックスの０．０００１重量％〜０．２重量％を占める、請求項１５に記載の局所用製剤。
20. 該ヒドロラーゼ酵素がプロテアーゼを含み、該プロテアーゼ濃度が該局所用製剤の０．１ｍｇ／ｇ〜５．０ｍｇ／ｇである、請求項１５に記載の局所用製剤。
21. 該少なくとも１つの親水性成分がポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン及びそれらの組み合わせから選択される、請求項１に記載の局所用製剤。
22. 該少なくとも１つの親水性成分が該内相の５０重量％以下を占める、請求項１に記載の局所用製剤。
23. 該少なくとも１つの親水性成分が該内相の３５重量％以下を占める、請求項１に記載の局所用製剤。
24. 該少なくとも１つの親水性成分が該局所用製剤の５〜４０重量％を占める、請求項１に記載の局所用製剤。
25. 該少なくとも１つの親水性成分が該局所用製剤の１０〜３５重量％を占める、請求項１に記載の局所用製剤。
26. 該少なくとも１つの親水性成分が該局所用製剤の１５〜３５重量％を占める、請求項１に記載の局所用製剤。
27. 該少なくとも１つの親水性成分が水増粘剤を含む、請求項１に記載の局所用製剤。
28. 該シリコーンマトリックスが、高分子量ポリジメチルシロキサン、充填剤のないエラストマー、気泡エラストマー、シリコーンゴム、シリコーン系感圧接着剤、及びそれらの組み合わせから選択される、請求項１に記載の局所用製剤。
29. 該外相がシリコーン系界面活性剤を更に含む、請求項１に記載の局所用製剤。
30. パッチ包帯剤である、請求項１に記載の局所用製剤。
31. 該パッチ包帯剤の厚さが２５μｍ以下である、請求項３０に記載の局所用製剤。
32. 該親水性担体がプロピレングリコールであり、該酵素がプロテアーゼである、請求項３０に記載の局所用製剤。
33. 該親水性成分が、ポリビニルアルコール及びポリビニルプロピレンから選択される、請求項３２に記載の局所用製剤。
34. フィルム上の塗布剤である、請求項１に記載の局所用製剤。
35. 該外相がシリコーンゴムを含む、請求項３４に記載の局所用製剤。
36. 軟膏である、請求項１に記載の局所用製剤。
37. 該外相が少なくとも１つのシリコーンエラストマー及び少なくとも１つのシリコーン界面活性剤を含む、請求項３６に記載の局所用製剤。
38. 該親水性担体がプロピレングリコールである、請求項３７に記載の局所用製剤。
39. 該親水性成分がポリビニルアルコールである、請求項３８に記載の局所用製剤。
40. 少なくとも１つの親水性担体、少なくとも１つの親水性成分、及び活性剤としての少なくとも１つの酵素を含む内相をつくり；
    該酵素の放出を制御するためのシリコーンマトリックスを含む外相をつくり；
    該内相を該外相の中に分散させて局所用製剤を形成する、
    ことを含む、徐放性局所用製剤の形成方法。
41. 該分散工程が、該内相及び該外相を手でいっしょに攪拌することを含む、請求項４０に記載の方法。
42. 該分散工程が、高剪断ミキサーを用いて該内相及び該外相をいっしょに混合することを含む、請求項４０に記載の方法。
43. 該局所用製剤をパッチに成型することを更に含む、請求項４０に記載の方法。
44. 該分散工程が、該内相が該外相の中に分散した液滴を形成するように行われる、請求項４０に記載の方法。
45. 該液滴のサイズが０．１μｍ〜２０００μｍである、請求項４４に記載の方法。
46. 該液滴のサイズが０．１μｍ〜１０００μｍである、請求項４４に記載の方法。
47. 該液滴のサイズが０．１μｍ〜５００μｍである、請求項４４に記載の方法。
48. 該液滴のサイズが０．１μｍ〜２００μｍである、請求項４４に記載の方法。
49. 該液滴のサイズが０．１μｍ〜１００μｍである、請求項４４に記載の方法。
50. 該液滴の直径が０．１μｍ〜５０μｍである、請求項４４に記載の方法。
51. 該液滴の直径が０．１μｍ〜１０μｍである、請求項４４に記載の方法。
52. 該液滴の直径が０．１μｍ〜５μｍである、請求項４４に記載の方法。
53. 該活性剤が該シリコーンマトリックスから患者の皮膚へ局所的に放出されるように、該患者の該皮膚に接触して置かれる、請求項１に記載の局所用製剤。
54. 該活性剤が該シリコーンマトリックスから放出される、請求項５３に記載の局所用製剤。
55. 該アルコールが、多価アルコールから選択される、請求項１１に記載の局所用製剤。
56. 該多価アルコールが、プロピレングリコール及びグリセリンから選択される、請求項５５に記載の局所用製剤。

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