JP4785753B2 - 低密度リポプロテインからのコレステロールの室温での直接テストストリップ測定のための試薬組み合わせ、および方法 - Google Patents
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Description
本発明は、一般的には、血漿、血清、または全血液サンプルのドライテストストリップを使用したインビトロ解析に関し、そしてより特定的には、サンプルに含まれる低密度リポプロテインからのコレステロール(LDL−C)の測定に関する。
発明の概要
LDL−C測定の先行技術のこれらの問題および他の問題は、本発明によって解決される。本発明は、血漿、血清、または全血液サンプル中の低密度リポプロテインからのコレステロールの検出及び測定のための、直接、室温測定法である。その方法は、非−LDL−Cの酵素転換が遅らせられるか、またはブロックされている間に、LDL−Cの酵素転換は促進されるように、LDLと非−LDLの両方を含むサンプルを処理する工程を含む。そのサンプルは、LDLと非−LDLの異なった表面電荷密度の作用として、それらに異なって作用する試薬の組み合わせと接触させることにより処理される。リポプロテインによりもたらされる表面電荷密度の作用として、LDLによってもたらされるコレステロールの酵素転換を選択的に促進し、存在する他のタイプのリポプロテインコレステロールの転換をブロックするか遅らせるようにサンプル中の様々なリポプロテインと作用するいずれの試薬であっても使用することができる。
好ましい態様の説明
本発明の思想の理解を助けるために、図面に示された態様、および以下の詳細な説明を参照してほしい。本発明の範囲はそれによって何ら制限される意図ではないことは理解されるべきである。本発明は、示された態様の変更および修正を含むこと、および本発明が関係する当業者が普通に考える本発明の思想のさらなる適用を含むことは、さらに理解されるべきである。
実施例1
ドライストリップは、以下の膜と図1に示す配置に基づいて構成された:
層M−1;“部分A”に記載されているように、染み込ませたタフグラス(Tuffglass)。
層M−3;処置されていないSupor 1200
層M−4;部分B”に記載されているように、染み込ませたBTS-300
層M−5;2003年9月16日に出願されUS特許出願番号10/663555が付与された継続中の出願に述べられているビオダインA(Biodyne A)。
部分A
実験室の脱イオン水300mlに、以下を添加した:MES緩衝液3.50g、ソルビトール9.0g、スクロース9.0g、ポリエチレングリコール200mwt7.0g、デキストラン硫酸10Kmwt10.03g、塩化ナトリウム2.01g。溶液のpHは、5N水酸化ナトリウムにて5.90+/−0.1に調整した。トータル5N水酸化ナトリウムを2.80ml添加して、最終pHは5.85となった。
実験室の脱イオン水200.15gに、以下を順に添加した:MES緩衝液2.0g、ソルビトール9.06g、塩化マグネシウム6水和物7.04g。pHは、5N水酸化ナトリウム1.025mlにて6.03に調整した。溶液を5℃に冷却し、続いて以下を添加した:α−シクロデキストリン硫酸1.38g、Silwet l-77 0.73g、プルロニック(Pluronic)L121 1.66g、プルロニックL43 0.45g。すべてを添加する間、溶液を冷却した。膜を浸すのに使用されるパイレックスガラスディッシュを、試薬混合液に浸す前にフリーザーにて冷却した。“部分B”溶液約70mlを、冷却したガラス容器に添加した。膜を浸し、そして乾燥のために垂直に吊るした。過剰な試薬を膜から落とし、加熱や空気流を使用することなく乾燥した。
ドライストリップは、以下の膜と図1に示す配置に基づいて構成された:
層M−1;“部分C”に記載されているように、染み込ませたタフグラス(Tuff Glass)。
層M−3;処置されていないSupor 1200
層M−4;“部分D”に記載されているように、染み込ませたBTS-SP300
層M−5;ビオダインA(Biodyne A)。
アモルファスファイバー、またはガラス、ポリマーもしくはランダム複合マトリックスのいずれかの複合材料を含むことができる深さフィルター(depth filter)に、以下の溶液を染み込ませた。染み込ませは、ドライストリップの上部試薬層を調製するために、浸漬、スプレーまたは凍結乾燥のような知られたいずれの方法によってもよい。
全血液から赤血球を分離して、血漿または血清のいずれかを検出層M−5へ生じさせるために、ならびにここで処理された膜または続いて試薬処理される膜または他の物質のいずれかの試薬再構成をコントロールするために部分的に利用されることができる膜に、以下の溶液を染み込ませた。
ドライストリップは、以下の膜と図1に示す配置に基づいて構成された:
層M−1;“部分E”に記載されているように、染み込ませたタフグラス(TuffGlass)。
層M−3;処置されていないSupor 1200
層M−4;存在しない。
部分E
脱イオン水50mlに、以下を添加した:MOPS緩衝液1.2g、デキストラン硫酸10K2.5g、α−シクロデキストリン硫酸0.5g、ソルビトール2.01g、スクロース2.0g、および塩化マグネシウム0.6g。pHを、5N水酸化ナトリウム1mlにて7.16に調整した。
実験室の脱イオン水300mlに、以下の試薬を添加した:6.19gのプルロニック L121、塩化マグネシウム3.22g、MOPS緩衝液3.0g、α−シクロデキストリン硫酸4.0g、MOPS緩衝液0.55g、ソルビトール1.1g、スクロース1.12g、1.88gSilwet L-77、1.05gのプルロニック L121。調整していない溶液の最終pHは7.0であった。前記層を本溶液60.09gで処理した。
本実施例のドライストリップは、実施例3と同じ膜、すなわちタフグラス(TuffGlass)(M−1)、BTS SP300(M−2)、Supor 1200(M−3)、およびコレステロール反応膜(M−5)で構成された。
本実施例のドライストリップは、実施例3と同じ膜、すなわちタフグラス(TuffGlass)(M−1)、BTS SP300(M−2)、Supor 1200(M−3)、およびコレステロール反応膜(M−5)で構成された。
ドライストリップは、以下の膜と図1に示す配置に基づいて構成された:
層M−1;“部分G”に記載されているように染み込ませ、続いて“部分H”に記載されているように染み込ませ、そして“部分I”に記載されているように処理されたタフグラス(TuffGlass)。
層M−4;存在しない。
層M−5;ビオダインA(Biodyne A)。
脱イオン水1875.0gに、以下を添加した:8.95gのプルロニックL121、17.85gのテトロニック304、MES緩衝液39.1g、デキストラン硫酸10K77.64g、α−シクロデキストリン硫酸19.2g、ソルビトール62.5g、スクロース29.11g、および塩化マグネシウム27.35g、2.5gSilwet L-77。pHを、5N水酸化ナトリウム0.4mlにて6.14に調整した。
部分Gで染み込ませた膜を処理するために、以下の溶液を使用した。脱イオン水199.6ml中に以下を添加した:デキストラン硫酸10K8.16g、α−シクロデキストリン硫酸1.41g、塩化マグネシウム1.85g、MES緩衝液3.45g、ソルビトール3.14g。pHは、5N水酸化ナトリウム1.4mlにて6.24に調整した。
2.0%ポリビニルアルコール溶液を、層M−1と層M−2の両方を続いて処理するために調製した。
脱イオン水749.8gに、以下の化学物質を添加した:16.1gのプルロニック L121、デキストラン硫酸10K9.0g、α−シクロデキストリン硫酸5.0g、MOPS緩衝液7.9g、ソルビトール12.8g、スクロース4.7g、塩化マグネシウム7.0g、3.42gのテトロニック1107、2.2gSilwet L-77。溶液の最終pHは、5N水酸化ナトリウム3.0mlにて7.22であった。
脱イオン水100gに、以下の化学物質を添加した。:1.5gSilwet L-77、1.05gのプルロニックL121。
ドライテストストリップは、実施例3と同じ膜、すなわち:タフグラス(TuffGlass)(M−1)、BTS SP300(M−2)、Supor 1200(M−3)、およびコレステロール反応膜(M−5)で構成された。タフグラス(TuffGlass)層(M−1)を、脱イオン水599.63g中の64.6gのプルロニックL121、5.79gのテトロニック304、MES緩衝液12.58g、デキストラン硫酸10K24.97g、α−シクロデキストリン硫酸6.16g、ソルビトール20.0g、スクロース9.3g、および塩化マグネシウム8.77g、0.79gSilwet L-77にて処理した。pHを、5N水酸化ナトリウム5.5mlにて6.21に調整した。
ドライテストストリップは、実施例3と同じ膜、すなわち:タフグラス(TuffGlass)(M−1)、BTS SP300(M−2)、Supor 1200(M−3)、およびコレステロール反応膜(M−5)で構成された。タフグラス(TuffGlass)層(M−1)を、脱イオン水75.0g中の0.35gのプルロニック L121、0.06gのテトロニック304、MES緩衝液1.56g、デキストラン硫酸10K3.11g、α−シクロデキストリン硫酸0.7687g、ソルビトール2.51g、スクロース1.17g、および塩化マグネシウム1.1g、0.1mlSilwet L-77にて処理した。pHを、5N水酸化ナトリウム0.4mlにて6.14に調整した。
本実施例のドライテストストリップは、非−グラスファイバー最上層(M−1)、すなわちAccuwick Ultra、BTS SP300層(M−2)、BTS SP300層(M−4)、およびコレステロール検出膜(M−5)で構成された。Accuwick Ultra層を、脱イオン水375g中に以下の化学物質を溶解した溶液で処理した:MES緩衝液7.80g、デキストラン硫酸10000mwt15.57g、α−シクロデキストリン硫酸3.85g、D−ソルビトール12.5g、スクロース5.82g、塩化マグネシウム5.47g、1.79gのプルロニックL121、3.59gのテトロニック304、および0.5gSilwet L-77。pHを、5N水酸化ナトリウム2mlにて6.16に調整した。
実施例10
本実施例のドライストリップは、タフグラス(TuffGlass)(M−1)、BTS SP300(M−2)、Supor 1200(M−3)、およびコレステロール検出膜(M−5)で構成された。タフグラス(TuffGlass)層(M−1)を、脱イオン水300g中に以下の化学物質を溶解した溶液で処理した:MES緩衝液6.27g、デキストラン硫酸10K12.41g、α−シクロデキストリン硫酸3.06g、D−ソルビトール10.01g、スクロース4.65g、硫酸マグネシウム4.37g、1.43gのプルロニックL121、2.90gのテトロニック304、および0.4gのSilwet L-77。pHを、5N水酸化ナトリウム1.8mlにて6.15に調整した。BTS SP300層を、脱イオン水296.5g中に以下の化学物質を溶解した溶液で処理した:7.20gのプルロニックL121、デキストラン硫酸10K3.6g、硫酸マグネシウム3.58g、MOPS緩衝液3.15g、α−シクロデキストリン硫酸3.20g、D−ソルビトール8.13g、スクロース2.38g、および1.2gのテトロニック304。溶液のpHは、5N水酸化ナトリウム1ml添加後に7.12であった。Supor 1200には何ら処理しなかった。
実施例11
本実施例のドライストリップは、タフグラス(TuffGlass)(M−1)、BTS SP300(M−2)、Supor 1200(M−3)、およびコレステロール検出膜(M−5)で構成された。タフグラス(TuffGlass)層(M−1)を、脱イオン水300g中に以下の化学物質を溶解した溶液で処理した:MES緩衝液6.67g、デキストラン硫酸10K12.57g、α−シクロデキストリン硫酸3.07g、D−ソルビトール10.08g、スクロース5.33g、硫酸マグネシウム4.41g、2.86gのテトロニック304、および0.0710gのアジ化ナトリウム。pHを、5N水酸化ナトリウム2.25mlにて6.22に調整した。膜をこの溶液に浸すことによりこの溶液で処理し、続いて2つのローラーの間を回転させ、そしてオープンファイバーマトリックス(open fiber matrix)上で空気乾燥させた。
実施例12
本実施例のドライストリップは、タフグラス(TuffGlass)(M−1)、BTS SP300(M−2)、Supor 1200(M−3)、およびコレステロール検出膜(M−5)で構成された。タフグラス(TuffGlass)層(M−1)を、脱イオン水300ml中に以下の化学物質を溶解した溶液で処理した:MES緩衝液6.67g、デキストラン硫酸10K12.57g、α−シクロデキストリン硫酸3.07g、ソルビトール10.08g、スクロース5.33g、硫酸マグネシウム4.41g、2.86gのテトロニック 304、および0.0710gのアジ化ナトリウム。pHを、5N水酸化ナトリウム2.25mlにて6.22に調整した。
実施例13
本実施例のドライストリップは、タフグラス(TuffGlass)(M−1)、BTS SP300(M−2)、Supor 1200(M−3)、およびコレステロール膜(M−5)で構成された。タフグラス(TuffGlass)層(M−1)を、脱イオン水300ml中に、MES緩衝液6.67g、デキストラン硫酸10K12.57g、α−シクロデキストリン硫酸3.07g、ソルビトール10.08g、スクロース5.33g、硫酸マグネシウム4.41g、2.86gのテトロニック304、および0.0710gのアジ化ナトリウムをすべて溶解した液で処理した。pHを、5N水酸化ナトリウム2.25mlにて6.22に調整した。膜を乾燥後、脱イオン水100g中に、デキストラン硫酸10K4.03g、α−シクロデキストリン硫酸0.6g、硫酸マグネシウム0.57g、MES緩衝液1.75g、およびD−ソルビトール2.0gすべてを含んだ液をスプレー処理した。pHは、5N水酸化ナトリウム1.5mlで6.31に調整した。
実施例14
本実施例のドライストリップは、タフグラス(TuffGlass)(M−1)、BTS SP300(M−2)、Supor 1200(M−3)、およびコレステロール膜(M−5)で構成された。タフグラス(TuffGlass)層(M−1)を、脱イオン水300ml中に、MES緩衝液6.6g、デキストラン硫酸10K12.57g、α−シクロデキストリン硫酸3.07g、ソルビトール10.08g、スクロース5.33g、硫酸マグネシウム4.41g、2.86gのテトロニック 304、および0.0710gのアジ化ナトリウムをすべて溶解した液で処理した。pHを、5N水酸化ナトリウム2.25mlにて6.22に調整した。膜を乾燥後、脱イオン水100g中に、デキストラン硫酸10K4.03g、α−シクロデキストリン硫酸0.6g、硫酸マグネシウム0.57g、MES緩衝液1.75g、およびソルビトール2.0gを溶解した液でスプレー処理した。pHは、5N水酸化ナトリウム1.50mlで6.31に調整した。タフグラス(TuffGlass)層に、次にPVA2%溶液をスプレーした。
実施例15
本実施例のドライストリップは、非−グラスファイバー層Accuwick Ultra(M−1)、BTS SP300(M−2)、Supor 1200(M−3)、およびコレステロール膜(M−5)で構成された。Accuwick Ultra層(M−1)を、脱イオン水300g中に以下の化学物質を溶解した者で処理した:MES緩衝液6.30g、デキストラン硫酸10K12.43g、α−シクロデキストリン硫酸3.08g、ソルビトール10.04g、スクロース4.63g、硫酸マグネシウム4.37g、2.86gのテトロニック304、0.4gSilwet L-77、および以下を含む1.47gの溶液:1.03gのβ−シクロデキストリンポリマー、0.99gのランダムにメチル化されたβ−シクロデキストリン。その層をさらに、以下を含む2.98gの溶液で処理した:2.99gエマルゲン(Emulgen)210P、9.00gのプルロニックL121、1.98gのポリプロピレングリコール3,500mwt。pHを、5N水酸化ナトリウム1.75mlにて6.22に調整した。Supor 1200には何ら処理しなかった。
本発明は、図面および上述の記載により詳細に示され、そして記載されているが、同時に例示であると考えるべきで、特徴を限定的に解釈すべきではない。好ましい態様のみが示されていて、本発明の精神の範囲内の全ての変化、修正、およびさらなる応用は保護されることが望ましいことは理解される。
Claims (14)
- 全血液、血漿、または血清サンプル中の低密度リポプロテインから生じるコレステロールの直接検出に使用するための垂直流テストストリップであって、前記テストストリップが:
a)テストストリップにおける赤血球細胞の移動をブロックするか減速させるための赤血球細胞膜;
b)コレステロールの存在によって色の変化を与えるためのコレステロール検出膜;および
c)テストストリップ中の前記赤血球細胞膜と前記コレステロール検出膜の間に、低密度リポプロテインコレステロール(LDL−C)が直接的に検出されることを選択的に可能にしつつ、非−LDL−リポプロテイン中のコレステロールを前記コレステロール検出膜中で測定されることからブロックするために、非−LDLリポプロテインと結合することができる試薬の組合せの供給部;
を含む、前記テストストリップ。 - 請求項1のテストストリップであって、前記試薬がカチオン、ポリアニオン、シクロデキストリン誘導体、コポリマー界面活性剤、および前記コポリマー界面活性剤のための界面活性剤からなる群から選択される、前記テストストリップ。
- 請求項2のテストストリップであって、前記カチオンが2価金属を含む、前記テストストリップ。
- 請求項3のテストストリップであって、前記2価金属がマグネシウムである、前記テストストリップ。
- 請求項2のテストストリップであって、前記カチオンがリポプロテインに結合するのに有効な正に荷電されたアミンを含む、前記テストストリップ。
- 請求項5のテストストリップであって、前記アミンがトリエタノールアミン塩酸塩である、前記テストストリップ。
- 請求項2のテストストリップであって、前記ポリアニオンがデキストラン硫酸である、前記テストストリップ。
- 請求項2のテストストリップであって、前記シクロデキストリン誘導体がα−シクロデキストリン硫酸である、前記テストストリップ。
- 請求項2のテストストリップであって、前記コポリマー界面活性剤が、分子量約2100〜約6000であるポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンの混成物(hybrid)でポリオキシプロピレンを優位に含む、前記テストストリップ。
- 請求項1のテストストリップであって、前記試薬が非−LDLと結合するのに有効な高分子量のブロッキングコポリマー界面活性剤と前記ブロッキングコポリマー界面活性剤の溶解性を高めるのに有効な低分子量界面活性剤を含む、前記テストストリップ。
- 請求項1のテストストリップであって、前記赤血球細胞ブロッキング膜が、試薬の組み合わせの供給部の少なくともいくつかで染み込まされる、前記テストストリップ。
- 請求項1のテストストリップであって、さらに試薬の組み合わせの供給部の少なくともいくつかで染み込まされた、少なくとも1つの中間膜を含む、前記テストストリップ。
- 請求項1のテストストリップであって、試薬の組み合わせが非−LDL−リポプロテインの酵素転換をブロックする、前記テストストリップ。
- 請求項1のテストストリップであって、試薬の組み合わせがLDL−リポプロテインの酵素転換を促進する、前記テストストリップ。
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