JP4780565B2 - 乳酸菌培地 - Google Patents
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Description
プロバイオティク乳酸菌の一つとして知られるL.acidophilusグループ(L.acidophilus,
L.gasseri, L.amylovorus, L.crispatus, L.gallinarum,そしてL.johnsoniiの6菌種)のうちヒト腸管由来の菌株はその成育に強い嫌気条件を必要とせず、生菌の生存性も高いことから、利用価値が高い。しかしながらL.acidophilusグループは一般に乳中での増殖が緩慢なため、例えばヨーグルト等の製品に用いる場合、ヨーグルト等の製品とは別の培地で増殖させて、その菌を製品に添加する方法がとられることが多い。
ホエーは栄養価が高く、安価である。また乳から得られる成分であるため安全な食品原料として利用できる。従って、廃棄されているホエーを有効に利用して、MRS培地に変わり得る乳酸菌培地を得ることができれば、安価で工業的に利用可能な培地を得ることができる。
ここで得られた安価かつ安全な培地により、乳酸菌を大量に培養することが可能となるだけでなく、この培地によって培養される乳酸菌を用い、食品、医薬等の開発や製造が可能となることから、工業的に価値の高い培地が得られる。
さらに詳しくは窒素源として、酵母エキス及び/又はホエーやカゼインの酵素分解物を含有せしめることにより、培地の窒素源を強化することを特徴とする。また、添加成分を認可されている食品添加物のみとすることで、安価かつ安全な培地を得ることを特徴とする。
(1)窒素源を強化したホエーを含有することを特徴とする培地。
(2)窒素源の強化が酵母エキス及び/又は蛋白質酵素分解物の含有によるものである(1)に記載の培地。
(3)窒素源の強化が酵素分解ホエーの含有によるものである(2)に記載の培地。
(4)窒素源の強化がカゼイン酵素分解物の含有によるものである(2)に記載の培地。
(5)酵素分解ホエー又はカゼイン酵素分解物がプロテアーゼで分解されたものである(3) 又は(4)のいずれかに記載の培地。
(6)プロテアーゼがプロテアーゼPである(5)に記載の培地。
(7)さらにグルコース及びオレイン酸化合物を含有する(1)〜(6)のいずれかに記載の培地。
(8)オレイン酸化合物が、Tween(登録商標)80、オレイン酸ナトリウム、ショ糖オレイン酸エステル、グリセリンオレエートである(1)〜(7)のいずれかに記載の培地。
(9)成分が全て認可された食品添加物からなる(1)〜(8)のいずれかに記載の培地。
(10)(1)〜(9)のいずれかに記載の培地を用いて乳酸菌を培養する方法。
(11)乳酸菌がL.acidophilus、L.gasseri、L.amylovorus、L.crispatus、L.helveticus、L.rhamnosus、L.casei、L.bulgaricus等の乳酸桿菌である(10)に記載の培養方法。
(12)(9)〜(11)のいずれかの方法で培養された乳酸菌を用いる食品、健康食品、特定保健用食品、栄養機能性食品、医薬の製造方法。
(13)製造する食品、健康食品、特定保健用食品、栄養機能性食品、医薬がヨーグルト、チーズ、乳酸菌を含有する錠剤である(12)に記載の方法。
窒素源の強化にあたり、培地に含まれる酵母エキスの濃度は、培養する乳酸菌に有効な量であれば特に限定されないが、0.3%以上であることが好ましく、高い生育促進効果を得るためには、0.6%以上、さらに0.9%以上であることが好ましい。
また、酵母エキスは食品用に市販されているものであればいずれも用いることができるが、例えば酵母エキス協和C(商標)、酵母エキス協和H(商標)、酵母エキス協和L(商標)、酵母エキス協和W(商標)、酵母エキス武田HR(商標)、酵母エキス武田SL‐W(商標)、酵母エキスJT‐21A(商標)等の酵母エキスを用いることができる。
オレイン酸化合物としてTween(登録商標)80は食品添加物として認可されていないので、認可されている食品添加物である例えばオレイン酸ナトリウム、ショ糖オレイン酸エステル、デカグリセリンモノオレエート及びその他のオレイン酸のグリセリンエステル(グリセリンオレート)等をTween(登録商標)80の代替物として用いることがより好ましい。これらの成分を用いることにより、安価かつ安全な培地を提供することができる。
本発明の培地には、さらに、必要に応じてMgSO4、MnSO4、K2HPO4、(NH4)3C6H5O7、NaC2H3O2等も加えることができる。
本発明の乳酸菌培地において比較に用いたMRS培地の組成及び調製方法を参考例として次に示す。
26gのMRS粉末(M.R.S.BROTH;オキソイド社製)に蒸留水500mlを加え60℃で加温溶解後、1N-NaOHを用いてpHを6.5に調整して滅菌(121℃、15min)した。MRS培地の組成を表1に示した。
1)酵素分解ホエー溶液
125gのチーズホエーパウダーに375mlの蒸留水を加え溶解し、0.6gのプロテアーゼP「アマノ3G」(天野エンザイム株式会社)を加え(蛋白質:プロテアーゼP=25:1)、攪拌しながら37℃で反応させた。酵素反応の時間は、2時間と6時間の2つの条件で行った。反応後、オートクレーブで加熱(110℃、15min)し、酵素の失活及び蛋白質を凝固させた。冷却後、溶液を遠心分離(8000rpm、5℃、15min)し、上清を濾紙(No.131、90mm)を二枚重ねにして吸引濾過をした。
2)酵素分解ホエー培地
酵素分解ホエー溶液に蒸留水を加えて、3.5倍(固形分約7%)に希釈し、1N-NaOHを用いてpHを6.5に調整した。その後培地成分をそれぞれ添加し、オートクレーブで加熱滅菌(115℃、15min)を行った。調製した培地の組成を表2に示した。
125gのチーズホエーパウダーを375mlの蒸留水に溶解し25%のホエー溶液を調製した。これをオートクレーブで加熱滅菌(110℃、15min)し、冷却・攪拌後、冷却高速遠心機を用いて遠心分離(8000rpm、5℃、15min)を行い、上清を、濾紙を二枚重ねにして吸引濾過し、加熱変性した蛋白質を取り除いた。
2)基礎ホエー培地の調製
除蛋白質ホエー溶液に蒸留水を加えて3.5倍(固形分約7%)に希釈し、1N-NaOH試薬を用いてpHを6.5に調整し、基礎ホエー培地として用いた。
a, カゼイン酵素分解物
3gのカゼイン(Casein From Bovine Milk Purified
Powder :シグマ社)に100mlの蒸留水を加え分散させ、1N-NaOHを用いてpHを7.0に調整しながら溶解させた。その後、冷却遠心機を用いて遠心分離(8000rpm、5℃、15min)を行い、上清に0.12gのプロテアーゼPを加え、攪拌しながら37℃で2時間反応させた。反応後、カゼイン溶液を加熱して酵素を失活させた(内温90℃、15min保持)。冷却後、その溶液をナス型フラスコに分注し、−38℃で予備凍結した後、凍結乾燥した。
b, グルコース
グルコースはD(+)-Glucose(Dextrose, Anhydrous:和光純薬株式会社)を使用した。
c, 酵母エキス
酵母エキスは、培地用Yeast Extract(バクト社)と、食品用に市販されている酵母エキス協和C(商標)、酵母エキス協和H(商標)、酵母エキス協和L(商標)、酵母エキス協和W(商標)(いずれも協和発酵工業株式会社)、酵母エキス武田HR(商標)、酵母エキス武田SL‐W(商標)(いずれも武田キリン食品株式会社)又は酵母エキスJT‐21A(商標)(JTフーズ株式会社)を使用した。
d, オレイン酸化合物
オレイン酸化合物は、Tween(登録商標)80(ディフコ社)と、認可されている食品添加物であるオレイン酸ナトリウム(関東化学株式会社)、リョートシュガーエステルO-1570(食品添加物・ショ糖オレイン酸エステル 三菱化学フーズ株式会社)又はデカグリセリンモノオレエート(理研ビタミン株式会社)を使用した。
参考例2で調製した基礎ホエー培地に培地成分をそれぞれ添加し、オートクレーブで加熱滅菌(115℃、15min)を行った。調製した培地の組成を表3に示した。
Tween(登録商標)80代替物添加培地として、参考例2で調製した基礎ホエー培地にグルコース、カゼイン酵素分解物、酵母エキスを添加し、オレイン酸化合物としてオレイン酸ナトリウム、リョートシュガーエステルO-1570又はデカグリセリンモノオレエートのいずれかをそれぞれ添加して培地を調製した。比較としてオレイン酸化合物無添加培地及びTween(登録商標)80添加培地を調製した。培地の組成は表4に示した。
表4のアルファベットは、次の成分の略を示す。G=グルコース、C=カゼイン酵素分解物、YEB=培地用Yeast Extract(バクト社)、YE=食品添加用酵母エキス、O=オレイン酸化合物。
T80=Tween(登録商標)80、SO=ショ糖オレイン酸エステル、ON=オレイン酸ナトリウム、DM=デカグリセリンモノオレエート、(W)=酵母エキス協和W(商標)。
培地用Yeast Extract代替物添加培地は基礎ホエー培地にグルコース、カゼイン酵素分解物、Tween(登録商標)80を添加し、酵母エキスとして、酵母エキス協和C(商標)、酵母エキス協和H(商標)、酵母エキス協和L(商標)、酵母エキス協和W(商標)、酵母エキス武田HR(商標)、酵母エキス武田SL-W(商標)又は酵母エキスJT-21A(商標)のいずれかをそれぞれ添加して培地を調製した。比較として培地用Yeast Extract添加培地を調製した。調製した培地の組成は表5に示し、培地番号1、3、5、7、9、11〜13の培地には、さらにMgSO4 0.05%、MnSO4 0.025%、K2HPO4 0.2%、(NH4)3C6H5O7 0.2%、NaC2H3O2 0.5%を添加した。
表5のアルファベットは、次の成分の略を示す。G=グルコース、C=カゼイン酵素分解物、YEB=培地用Yeast Extract(バクト社)、YE=食品添加物用酵母エキス、O=オレイン酸化合物。
(YEB)=培地用Yeast Extract(バクト社)、(C)=酵母エキス協和C(商標)、(H)=酵母エキス協和H(商標)、(L)=酵母エキス協和L(商標)、(W)=酵母エキス協和W(商標)、(HR)=酵母エキス武田HR(商標)、(SL-W)=酵母エキス武田SL-W(商標)、(21A)=酵母エキスJT-21A(商標)、T80=Tween(登録商標)80。
酵母エキス添加培地は基礎ホエー培地にグルコース、カゼイン酵素分解物、Tween(登録商標)80と、酵母エキスとして、酵母エキス協和W(商標)又は酵母エキス武田HR(商標)をそれぞれ0.3%添加した培地と、カゼイン酵素分解物を添加せず、酵母エキス協和W(商標)又は酵母エキス武田HR(商標)をそれぞれ0.3%、0.6%又は0.9%添加した培地を調製した。調製した培地の組成は表6に示した。
表6のアルファベットは、次の成分の略を示す。G=グルコース、C=カゼイン酵素分解物、YE=食品添加物用酵母エキス、O=オレイン酸化合物。(W)=酵母エキス協和W(商標)、(HR)=酵母エキス武田HR(商標)、T80=Tween(登録商標)80。
供試菌にはL. acidophilus JCM11047又はL. gasseri JCM1131を用いた。凍結保存しておいた供試菌液を5mlのMRS培地に3%量接種した。インキュベーターで培養(37℃、24hr)した。その後その培養液をさらに5mlのMRS培地に3%量接種し、培養を行った。
実施例1〜6記載の培地に供試菌の前培養後菌液を3%接種し、攪拌後、ねじ口試験管に分注した。37℃のインキュベーターで培養し、培地を培養0、4、8、16、24時間後と経時的にサンプリングし、培地の濁度及びpHを測定することで、培地における供試菌の生育性を検討した。
基礎ホエー培地にグルコース、カゼイン酵素分解物、酵母エキス協和C(商標)、Tween(登録商標)80を添加した培地と、さらにMgSO4、MnSO4の無機塩を添加した培地とを調製し、MRS培地で前培養した供試菌液を3%量接種し、ミニジャーファーメンター(株式会社高杉製作所)を用いて37℃、80rpmで培養した。また、3N-NaOH溶液を滴下することにより、pH5.5に保持するようにした。培地を経時的にサンプリングし、濁度を測定することで、培地における供試菌の生育性を検討した。
酵素分解ホエー培地における供試菌の生育性の検討
(1)培地
実施例1で調製した表2の酵素分解ホエー培地を用いた。比較としてMRS培地を用いた。
(2)培養
50mlの培地に実施例7に記載の方法で前培養したL. acidophilus JCM11047の菌液を3%量接種し、攪拌後、7mlずつねじ口試験管7本に分注した。3本は37℃のインキュベーターで培養し、0、4、8、16、24時間後に濁度及びpHを測定し、酵素分解ホエー培地における供試菌の生育性を検討した。
供試菌を接種した3本の試験管の濁度をデジタル比色計(mini photo 10:三紳工業株式会社)を用いて経時的に測定(測定波長:620nm)し、3本の測定値の平均から培養開始前の濁度(ブランク)を差し引いた値で比較を行った。また、pHはpHメーター(F―21型:株式会社堀場製作所)を用いて経時的に測定した。
結果を図1及び図2に示した。図1において、酵素分解を2時間行った酵素分解ホエー培地にさらにカゼイン酵素分解物を添加した培地と添加しなかった培地では、培養後24時間の濁度には差がみられず、酵素分解を行ったホエーのみでも低分子化した窒素化合物が充分存在することが示された。また、図2において、酵素分解を2時間行った酵素分解ホエー培地と6時間行った酵素分解ホエー培地の比較では、培養後24時間の濁度には差がみられなかった。
カゼイン酵素分解物添加培地における供試菌の生育性の検討
(1)カゼイン酵素分解物を添加した基礎ホエー培地
実施例3で調製した表3のカゼイン酵素分解物添加培地を用いた。
前培養したL.acidophilus JCM11047の菌液を3%量接種して、試験例1と同様の方法で培養した。濁度、pHの測定は試験例1と同様の方法で行った。
結果を図3に示した。図3において、カゼイン酵素分解物を基礎ホエー培地中に添加し培養を行ったものは添加しなかったものに比べ高い濁度を示し、カゼイン酵素分解物を添加することで、供試菌の生育が促進されることが確認された。
供試菌として、L.acidophilus JCM11047、L.acidophilus JCM1132T、L.gasseri JCM1131T、L.gasseri JCM11657、L.amylovorus JCM5811、L.crispatus JCM8779、L.helveticus JCM1120T、L.rhamnosus JCM1136、L.casei JCM1134T又はL.bulgaricus B5bを用い、カゼイン酵素分解物及び酵母エキスを添加した基礎ホエー培地における生育性を調べた。菌はそれぞれMRS培地(M.R.S.BROTH;オキソイド社製)で実施例7と同様の方法で前培養を行った。
培地は基礎ホエー培地に、グルコース1.0%、カゼイン酵素分解物0.3%、Tween(登録商標)80 0.1%、培地用Yeast Extractの代替物として酵母エキス協和W(商標) 0.3%を添加したものであり、さらにMgSO4 0.05%、MnSO4 0.025%、K2HPO4 0.2%、(NH4)3C6H5O7 0.2%、NaC2H3O2 0.5%を添加して調製した。比較として参考例1のMRS培地を用いた。
(2)培養及び濁度の測定
菌ごとに前培養した菌液を3%量接種して、試験例1と同様の方法で37℃、16時間培養を行い、培養終了後に濁度を測定し、培地における各供試菌の生育性を検討した。
結果を図4に示した。図4において、いずれの菌も、MRS培地で培養した場合と同等又はそれ以上の濁度を示した。特に、L.bulgaricus B5bはMRS培地ではほとんど濁度が変化しないが、本発明の培地では高い濁度を示した。従って、培地は、種々の乳酸菌の培養において充分な生育促進効果を有することが示された。
食品添加物を添加した培地における供試菌の生育性の検討
(1)Tween(登録商標)80の代替による供試菌の生育性の検討
1)培地
実施例4で調製した表4のTween(登録商標)80代替物添加培地を用いた。比較として参考例1のMRS培地を用いた。
MRS培地及び表4の培地番号1及び3〜5の培地に前培養したL. acidophilus JCM11047の菌液を3%量接種して、試験例1と同様の方法で培養した。濁度、pHの測定を試験例1と同様の方法で測定した。Tween(登録商標)80の代替物としてオレイン酸ナトリウムを添加した培地は濁度が高いため、蒸留水で3倍に希釈してから測定し、その濁度を3倍した値を結果として用いた。
また、表4の培地番号2、6、7の培地を用いて、培養後16、24時間後に濁度及びpHを測定し、培地における供試菌の生育性を確認した。
結果を 図5及び 図6に示した。 図5において、Tween(登録商標)80の代替物としてオレイン酸ナトリウムを添加した培地はTween(登録商標)80を添加した培地よりも高い濁度を示した。また、培養後16時間、24時間目ではMRS培地よりも高い濁度を示した。一方、ショ糖オレイン酸エステルを添加した培地は、他のオレイン酸化合物を添加した培地に比べ、低い濁度を示した。
また図6において、0.1%又は0.2%のデカグリセリンモノオレエートを添加した培地はTween(登録商標)80を添加した培地と同等程度の濁度を示した。従って、Tween(登録商標)80の代替物として、オレイン酸ナトリウム及びデカグリセリンモノオレエートを用いた培地は、供試菌に対して充分な生育促進効果を有することが示された。
1)培地
実施例5で調製した表5の培地用Yeast Extract代替物添加培地を用いた。コントロールとして、MRS培地を用いた。
MRS培地及び表5の培地番号2、4、6、8及び10の調製した培地にL. acidophilus JCM11047の前培養後菌液を3%量接種して、試験例1と同様の方法で培養した。濁度は試験例1と同様の方法で測定した。
また、その他の酵母エキス添加培地は表5の培地番号1、3、5、7、9及び11〜13の培地を用いた。この培地において、L. acidophilus JCM11047又はL. gasseri JCM1131の前培養後菌液を3%量接種して、試験例1と同様の方法で培養した。濁度を試験例1と同様の方法で測定した。これらの培地の濁度より、各培地における供試菌の生育性を確認した。
結果を図7〜 図9に示した図7において、表5の培地番号2、4、6、8及び10の培地として酵母エキス協和C(商標)、酵母エキス協和H(商標)、酵母エキス協和L(商標)、酵母エキス協和W(商標)のいずれかをそれぞれ添加した培地は培地用Yeast Extractを添加した培地よりもいずれも高い濁度を示し、各培地におけるL. acidophilus JCM11047の生育が促進されることが確認された。
また、図8において、表5の培地番号1、3、5、7、9及び11〜13の培地として、酵母エキス協和C(商標)、酵母エキス協和H(商標)、酵母エキス協和L(商標)、酵母エキス協和W(商標)、酵母エキス武田HR(商標)、酵母エキス武田SL-W(商標)又は酵母エキスJT-21A(商標)のいずれかをそれぞれ添加した培地は、培地用Yeast Extractを添加した培地よりも高い濁度を示し、培地におけるL. acidophilus JCM11047の良好な生育が確認された。
また、図9において、 図8と同様に酵母エキス協和C(商標)、酵母エキス協和L(商標)、酵母エキス協和W(商標)、酵母エキス武田HR(商標)、酵母エキス武田SL-W(商標)又は酵母エキスJT-21A(商標)のいずれかをそれぞれ添加した培地は、培地用Yeast Extractを添加した培地と比べて同等又はそれ以上の濁度を示し、培地におけるL. gasseri JCM1131の良好な生育が確認された。
従って、培地用Yeast Extractの代替物として、酵母エキス協和C(商標)、酵母エキス協和H(商標)、酵母エキス協和L(商標)、酵母エキス協和W(商標)、酵母エキス武田HR(商標)、酵母エキス武田SL-W(商標)及び酵母エキスJT-21A(商標)を用いた培地は、供試菌に対する充分な生育促進効果を有することが示された。
1)基礎ホエー培地に食品添加物用酵母エキスのみを添加した培地
実施例6で調製した表6の食品添加物用酵母エキス添加培地を用いた。比較として参考例と同様の方法で調製したMRS培地を用いた。
酵母エキス添加培地として、表6の培地番号1〜8の培地を用いてL. acidophilus JCM11047の前培養後の菌液を3%量接種して、試験例1と同様の方法で培養した。濁度の測定も試験例1と同様の方法で行った。これらの培地の濁度より、各培地における供試菌の生育性を確認した。
結果を図10に示した。図10において、表6の培地番号1〜8の培地として、酵母エキス協和W(商標)、酵母エキス武田HR(商標)又はのいずれかをそれぞれ添加した培地は、L. acidophilus JCM11047及びL. gasseri JCM1131のいずれにおいても、高い濁度が示された。
従って酵母エキスを0.6%又は0.9%添加した培地は0.3%のカゼイン酵素分解物を添加した培地より高い濁度を示し、供試菌に対する充分な生育促進効果を有することが示された。
乾燥菌体重量の比較による供試菌の生育性の検討
(1)培地の調製
基礎ホエー培地にグルコース、カゼイン酵素分解物、酵母エキス協和C(商標)
、Tween(登録商標)80を添加したホエー培地Aと、さらにMgSO4、MnSO4の無機塩を添加したホエー培地Bを調製した。調製した培地の組成は表7に示した。比較として参考例と同様の方法で調製したMRS培地を用いた。
参考例に記載の方法で前培養した供試菌をさらにMRS培地で16時間培養した菌液を用いた。MRS培地及び調製した培地にL. acidophilus JCM11047の菌液を3%量接種して、ミニジャーファーメンターを用いて37℃、80rpmで培養した。また、3N-NaOH溶液を滴下することにより、pH5.5に保持するようにした。培地を経時的にサンプリングし、濁度を試験例1と同様の方法で測定し、また培養終了後の菌体の重量を測定することで供試菌の生育性を検討した。
培養24時間目で培養を終了し、培地を冷却高速遠心機を用いて遠心分離(3000rpm、5℃、15min)し、沈殿した菌体を回収し、滅菌蒸留水を加え、遠心分離(3000rpm、5℃、15min)で2回洗浄を行った。洗浄後の菌体分散溶液をナス型フラスコに分注し、‐38℃で予備凍結した後、凍結乾燥をして、菌体の重量を測定した。
培養後の菌体の重量を図11に示した。図11において、MRS培地で培養した菌体の重量と比較して、ホエー培地Aでは2倍以上、ホエー培地Bでは3倍以上の乾燥菌体重量を示した。
また、培養後0、4、8、16、24時間目の濁度と16、24時間目のpHを表8に示した。培養後24時間目の濁度は、図12に示したように、試験管を用いてインキュベーターで培養した場合と比較して高い濁度を示し、ジャーファーメンターによって、pHを生育に適した状態に保つことで、ホエーを用いた培地における供試菌の生育の効果がさらに高められることが示された。
Claims (9)
- ホエーに次のa)〜d)の成分を添加することを特徴とする乳酸桿菌用培地。
a)グルコース
b)カゼイン酵素分解物
c)Tween(登録商標)80、オレイン酸ナトリウムまたはデカグリセリンモノオレエート
d) 酵母エキス - さらに、MgSO4、MnSO4を含む請求項1に記載の乳酸桿菌用培地。
- さらに、MgSO4、MnSO4、K2HPO4、(NH4)3C6H5O7、NaC2H3O2を含む請求項1に記載の乳酸桿菌用培地。
- 酵母エキスを0.3〜0.9%含有することを特徴とする請求項1〜3のいずれかに記載の乳酸桿菌用培地。
- 請求項1〜4のいずれかに記載の乳酸桿菌用培地を用いて乳酸桿菌を培養する方法。
- 乳酸桿菌がL.acidophilus、L.gasseri、L.amylovorus、L.crispatus、L.helveticus、L.rhamnosus、L.casei、L.bulgaricusのいずれかである請求項5に記載の培養方法。
- ジャーファーメンターまたはインキュベーターを用いて培養を行う、請求項5または6に記載の培養方法。
- 請求項5〜7のいずれかの方法で乳酸桿菌を培養し、該方法によって培養された乳酸菌を用いて食品、健康食品、特定保健用食品、栄養機能性食品、医薬を製造する方法。
- 製造する食品、健康食品、特定保健用食品、栄養機能性食品、医薬がヨーグルト、チーズ、乳酸桿菌を含有する錠剤である請求項8に記載の方法。
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Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08173151A (ja) * | 1994-12-28 | 1996-07-09 | Res Dev Corp Of Japan | ビフィズス菌の増殖促進剤 |
JP2003250530A (ja) * | 2002-03-01 | 2003-09-09 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 培養物及びその製造方法 |
JP2003252772A (ja) * | 2002-03-04 | 2003-09-10 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 加齢に伴う代謝異常症の予防・改善・治療剤 |
JP2003274851A (ja) * | 2002-03-22 | 2003-09-30 | Ajinomoto Co Inc | 液状ヨーグルト様食品の製造方法 |
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---|---|---|---|---|
JPH08173151A (ja) * | 1994-12-28 | 1996-07-09 | Res Dev Corp Of Japan | ビフィズス菌の増殖促進剤 |
JP2003250530A (ja) * | 2002-03-01 | 2003-09-09 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 培養物及びその製造方法 |
JP2003252772A (ja) * | 2002-03-04 | 2003-09-10 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 加齢に伴う代謝異常症の予防・改善・治療剤 |
JP2003274851A (ja) * | 2002-03-22 | 2003-09-30 | Ajinomoto Co Inc | 液状ヨーグルト様食品の製造方法 |
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20210010242A (ko) * | 2019-07-19 | 2021-01-27 | 유한회사 비피코리아 | 반려동물용 고체 유산균 및 이의 제조방법 |
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