JP4689940B2 - ヘテロ二本鎖の相補性を増大させる方法 - Google Patents
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Description
本発明は、ヘテロ二本鎖分子を形成し、そして次にミスマッチの部位の配列情報が一方の鎖から他方に移されるように当該ミスマッチを取り扱うことによって、関連するポリヌクレオチド間の突然変異を再編成させる方法を提供する。1つの好ましい態様において、当該ミスマッチは、ミスマッチニッキング酵素、dNTPの存在下で3’から5’にプルーフリーディングする活性を有するポリメラーゼ、及びリガーゼを含む反応液中でヘテロ二本鎖分子をインキュベートすることによって取り扱われる。これらの各活性は、所定のミスマッチ部位において、ヘテロ二本鎖がニックされ、不対塩基が切り出され、鋳型として反対の鎖を用いて置き換えられ、そしてニックが塞がれるように一斉に働く。アウトプットのポリヌクレオチドはクローニング前に増幅されるか、又は直接クローニングされ、そして向上した特性について試験される。ミスマッチの解消の再編成及び試験の追加のサイクルは更なる向上をもたらす。
本明細書で使用する場合、用語「増幅」は、ポリヌクレオチドのコピー数が増大する過程を言及する。
本発明は、少なくとも2つの相補的でないヌクレオチドの塩基対を有する少なくとも1つのヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドから配列変異体を生成するin vitroの方法であって;少なくとも1つのヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを調製し;前記ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを、有効量のエキソヌクレアーゼ活性、ポリメラーゼ活性及び鎖の開裂活性を有する1又は複数の因子と組み合わせ;そして相補性のパーセンテージを増大させるのに十分な時間を与えることを含んで成り、少なくとも1つ又は複数の変異体が生成する、方法を提供する。
CEL IによるミスマッチのDNA基質の開裂
本実施例は、CEL I酵素の調製及びミスマッチのDNA基質の開裂におけるその使用を教示する。
ミスマッチ解消カクテルによる完全長GFP遺伝子の変換
本実施例は、完全長のGFP遺伝子を保存する、種々のミスマッチ解消カクテルを教示する。
DNAミスマッチ解消の後のGFPヘテロ二本鎖DNAへの制限部位の復元(GRAMMR)
この実験は、制限部位の復元を証明することによって、DNAミスマッチ解消による遺伝子再編成(GRAMMR)の実現可能性を教示する。
GRAMMRによって再編成されたGFP遺伝子
この実施例は、GRAMMRがヘテロ二本鎖内の2つの遺伝子配列間の配列のばらつきを再編成することができ、そして直接的にクローニングされ、又はクローニング前にPCR増幅されたGRAMMR産物中に有意な差異がないことを示す。
GFPプラスミドの、DNAミスマッチ解消によるプラスミド対プラスミド(plasmid-on-plasmid)の遺伝子再編成(POP GRAMMR)のためのヘテロ二本鎖基質の調製
この実験は、DNAミスマッチ解消による遺伝子再編成のためのヘテロ二本鎖基質が無傷の環状プラスミドの形態であってもよいことを教示する。サイクル3-GFP及び野生型GFPのヘテロ二本鎖分子が、プラスミド対プラスミド(POP)の形式で調製された。この形式において、GFP配列は、環状二本鎖プラスミドベクター主鎖の観点で再編成された。このことは、GRAMMR反応のアリコートを用いるE,コリの直接的な形質転換による再編成産物の回収を可能にした。その結果、GRAMMR処理したDNAのPCR増幅も他の追加的な操作も、再編成されたクローンを得るために必要ではなかった。
DNAのミスマッチ解消による遺伝子再編成のための例示的な反応の要因
CEL IとT4 DNAポリメラーゼの濃度の比較
GRAMMR反応は、多くの酵素活性の相互作用を包含する。GRAMMR反応に関連する複数の要因が試験され、例えばCEL Iの濃度、T4 DNAポリメラーゼの濃度、反応温度、T7 DNAポリメラーゼによるT4 DNAポリメラーゼの置換、Taq DNAポリメラーゼの存在、及びCEL I酵素の起源、である。3つの異なるCEL Iの濃度対2つのT4 DNAポリメラーゼの濃度の行列は、in vitroでのDNAのミスマッチ解消反応の限界を試験するために設定された。
Taq DNAポリメラーゼはDNAミスマッチ解消による遺伝子再編成に必要とされない
この実験は、Taq DNAポリメラーゼが、仮にあったとしても、DNAミスマッチ解消による遺伝子再編成(GRAMMR)の働きに劇的には寄与せず、又はそれを妨害しないことを教示する。Taq DNAポリメラーゼは、5’フラッパーゼ活性を有することが報告されており、そしてGRAMMRを受けるヘテロ二本鎖DNA中の不所望な5’フラップの起こりうる形成及び持続に対する保護手段としてこれまでの例に含められてきた。
DNAミスマッチ解消による遺伝子再編成のための別の校正DNAポリメラーゼ
この実験は、DNAミスマッチ解消による遺伝子再編成がT4 DNAポリメラーゼの使用に限定されず、且つ別のDNAポリメラーゼがその代わりとなりうることを教示する。
GRAMMR反応におけるクローニングされたCEL Iの使用
本実施例は、クローニングされた供給源に由来するCEL Iが、セロリから精製された天然のCEL I酵素の代わりに、DNAミスマッチ解消による遺伝子再編成において、結果が顕著に変化することなく使用されうることを教示する。
ウイルスベクターにおけるトバモウイルスの30K遺伝子の分子育種
これまでの実施例において、DNAミスマッチ解消による遺伝子再編成は、高度に相同性がある配列(例えば、wtGFPとサイクル3GFPは96%同一である)を再編成するのに有用であると教示してきた。本実施例は、GRAMMRが、更に多様性のある核酸配列、例えばトバモウイルス移動(movement)タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を再編成するために使用されうることを教示する。
向上したヒ酸塩解毒細菌を産生するためのGRAMMR再編成
ヒ酸塩の解毒は、硫ヒ鉄鉱を含む金鉱の採掘及び他の用途、例えば環境の改善にとって重要である。ヒ酸塩解毒オペロンを含むプラスミドpGJ103(Ji and Silver, 1992) (Ji, G. and Silver, S., Regulation and expression of the arsenic resistance operon from Staphylococcus aureus plasmid pI258, J. Bacteriol. 174,3684-3694 (1992).引用によって本明細書に組み入れられる)を、サイモン・シルバー博士(イリノイ大学、シカゴ、イリノイ州)から入手する。pUC19内にクローニングされたpI258 arsオペロンを含む、E.コリのTG1含有pGJ103は、LBアンピシリンアガープレート上で4μg/mlのMIC(最小阻害濃度)を有する。arsオペロンは、変異原性PCR(mutagenic PCR)によって増幅され[REF]、pUC19内にクローニングされ、そしてE.コリ TG1を形質転換させた。形質転換細胞を、一定範囲のヒ酸ナトリウム濃度(2, 4, 8, 16mM)でプレーティングする。最高のヒ酸塩レベルを有する当該プレート由来のコロニーを選択する。当該コロニーを、適切なヒ酸塩選択ができる混合培地中で生育する。プラスミドDNAを培養液から単離する。当該プラスミドDNAを、pUC19プラスミド主鎖内に一度切れ目を入れる制限エンドヌクレアーゼによる消化によって直鎖化する。直鎖化されたプラスミドは、94℃で10分間加熱することによって変性される。反応は、一本鎖のアニーリングを促進するために冷却させられる。ハイブリダイズする部分的に相補的な鎖は、ミスマッチの部位に塩基対合していないヌクレオチドを有する。CEL I(実施例9の方法によって精製)による処理は、各ミスマッチの一方又は他方のポリヌクレオチド鎖の3’側にニックを入れる。3’→5’のエキソヌクレアーゼ(「校正」)活性を含むポリメラーゼ、例えばT4 DNAポリメラーゼの存在は、ミスマッチの切除を可能にし、そして次に、5’→3’ポリメラーゼ活性は、鋳型として他の鎖を用いてギャップを埋める。続いて、T4 DNAリガーゼが、修復された鎖のリン酸主鎖を修復することによって、ニックを塞ぐ。この結果は、インプットの鎖間の突然変異のランダム化によるものであり、潜在的に向上した特性を有するアウトプット鎖を生成する。これらのアウトプットポリヌクレオチドで、直接的にE.コリ TG1を形質転換し、そしてより高度なヒ酸塩レベル;8, 16, 32, 64mMでプレーティングする。最高のヒ酸塩レベルを有するコロニーを当該プレートから選び、新たな再編成が、生じた形質転換細胞が32, 64, 128, 256mMのヒ酸塩でプレーティングされることを除き、上述の通り実施される。当該工程は、更なる向上を得る目的で、選択されたクローンを用いて1又は複数回繰り返されてもよい。
Claims (25)
- 少なくとも1つの相補的なヌクレオチドの塩基対によって分離された少なくとも2つの相補的でないヌクレオチドの塩基対を有する少なくとも1つのヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドから、配列変異体を生成するin vitroの方法であって、
a.第一の鎖及び第二の鎖を有する少なくとも1つのヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを調製し;
b.前記ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを、3’→5’エキソヌクレアーゼ活性を有する有効量の1又は複数の酵素、ポリメラーゼ活性を有する有効量の1又は複数の酵素、及び所定のミスマッチ部位でミスマッチに対する鎖開裂活性を有する有効量の1又は複数の酵素と組み合わせ;そして
c.相補性のパーセンテージが増大するのに十分な時間を与え、少なくとも1又は複数の変異体を生成させること、
を含んで成る方法。 - 前記ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドが環状である、請求項1に記載の方法。
- 前記ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドが直鎖状である、請求項1に記載の方法。
- 前記ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドがレプリコンである、請求項2又は3に記載の方法。
- 前記変異体が異なる程度の相補性を有する、請求項1に記載の方法。
- エキソヌクレアーゼ活性、ポリメラーゼ活性、及び鎖開裂活性を有する前記酵素が順次添加される、請求項1に記載の方法。
- エキソヌクレアーゼ活性、ポリメラーゼ活性、及び鎖開裂活性を有する前記酵素が同時に添加される、請求項1に記載の方法。
- 段階(b)において更にリガーゼ活性を含んで成る、請求項1に記載の方法。
- エキソヌクレアーゼ活性、ポリメラーゼ活性、リガーゼ活性、及び鎖開裂活性を有する前記酵素が順次添加される、請求項1に記載の方法。
- エキソヌクレアーゼ活性、ポリメラーゼ活性、リガーゼ活性、及び鎖開裂活性を有する前記酵素が同時に添加される、請求項1に記載の方法。
- 前記リガーゼがT4 DNAリガーゼ、E.コリのDNAリガーゼ、又はTaq DNAリガーゼである、請求項8に記載の方法。
- 鎖開裂活性を有する前記酵素がミスマッチエンドヌクレアーゼである、請求項1に記載の方法。
- 鎖開裂活性を有する前記酵素が、CEL I、T4エンドヌクレアーゼVII、T7エンドヌクレアーゼI、及びSPヌクレアーゼ、から成る群から選択される、請求項1に記載の方法。
- ポリメラーゼ活性を有する前記酵素がT4 DNAポリメラーゼである、請求項1に記載の方法。
- ポリメラーゼ活性を有する前記酵素がT7 DNAポリメラーゼである、請求項1に記載の方法。
- ポリメラーゼ活性及び3’→5’エキソヌクレアーゼ活性の両方を有する前記酵素が、T4 DNAポリメラーゼ、T7 DNAポリメラーゼ、E.コリのPol 1、又はPfu DNAポリメラーゼである、請求項1に記載の方法。
- ポリメラーゼ活性及び3’→5’エキソヌクレアーゼ活性の両方を有する前記酵素がE.コリのPol 1である、請求項1に記載の方法。
- 前記有効量の鎖開裂活性、及びエキソヌクレアーゼ活性/ポリメラーゼ活性及びリガーゼ活性が、それぞれCEL I、T7 DNAポリメラーゼ、及びT4 DNAリガーゼによって提供される、請求項1に記載の方法。
- 前記有効量の鎖開裂活性、及びエキソヌクレアーゼ活性/ポリメラーゼ活性及びリガーゼ活性が、それぞれT4エンドヌクレアーゼVII、T4 DNAポリメラーゼ、及びT4 DNAリガーゼによって提供される、請求項1に記載の方法。
- 配列群の多様性を増大させるin vitroの方法であって、
請求項1〜19のいずれか1項に記載の方法に従い、
第一及び第二の鎖を有する少なくとも1つのヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを調製し、ここで、前記ヘテロ二本鎖が少なくとも1つの相補的なヌクレオチド塩基対によって分離された少なくとも2つの相補的でないヌクレオチド塩基対を有する;前記ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを、3’→5’エキソヌクレアーゼ活性を有する有効量の1又は複数の酵素、ポリメラーゼ活性を有する有効量の1又は複数の酵素、及びミスマッチに対する鎖開裂活性を有する有効量の1又は複数の酵素と所定のミスマッチ部位で組み合わせ;そして、相補性のパーセンテージが増大するのに十分な時間を与え、前記群の多様性を増大させること、
を含んで成る方法。 - 配列群の多様性を増大させるin vitroの方法であって、
a. 第一及び第二の鎖を有する少なくとも1つのヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを調製し、ここで、前記ヘテロ二本鎖が少なくとも1つの相補的なヌクレオチド塩基対によって分離された少なくとも2つの相補的でないヌクレオチド塩基対を有する;
b.前記ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを、有効量のCEL I、T4 DNAポリメラーゼ、及びT4 DNAリガーゼと組み合わせ;そして
c.相補性のパーセンテージが増大するのに十分な時間を与え、当該群の多様性を増大させること、
を含んで成る方法。 - 所望の機能的特性をコードするポリヌクレオチドを得る方法であって、
請求項1〜19のいずれか1項に記載の方法に従い、
a. 第一及び第二の鎖を有する少なくとも1つのヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを調製し、ここで、前記ヘテロ二本鎖が少なくとも1つの相補的なヌクレオチド塩基対によって分離された少なくとも2つの相補的でないヌクレオチド塩基対を有する;
b.前記ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを、3’→5’エキソヌクレアーゼ活性を有する有効量の1又は複数の酵素、ポリメラーゼ活性を有する有効量の1又は複数の酵素、及びミスマッチに対する鎖開裂活性を有する有効量の1又は複数の酵素と所定のミスマッチ部位で組み合わせ;
c.ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチド鎖間の相補性のパーセンテージが増大するのに十分な時間を与え、配列変異体を生成させ、それによりポリヌクレオチド群の多様性を増大させ;そして
d.所望の機能的特性について、変異体群をスクリーニングし、又は選択すること、
を含んで成る方法。 - 所望の機能的特性をコードするポリヌクレオチドを得る方法であって、
請求項1〜19に記載の方法に従い、
a. 第一及び第二の鎖を有する少なくとも1つのヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを調製し、ここで、前記ヘテロ二本鎖が少なくとも1つの相補的なヌクレオチド塩基対によって分離された少なくとも2つの相補的でないヌクレオチド塩基対を有する;
b. 前記ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを、3’→5’エキソヌクレアーゼ活性を有する有効量の1又は複数の酵素、ポリメラーゼ活性を有する有効量の1又は複数の酵素、及びミスマッチに対する鎖開裂活性を有する有効量の1又は複数の酵素と所定のミスマッチ部位で組み合わせ;
c.ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチド鎖間の相補性のパーセンテージが増大するのに十分な時間を与え、配列変異体を生成させ、それによりポリヌクレオチド群の多様性を増大させ、
d.DNAをRNAに変換し、RNA変異体群を作り出し;そして
e.所望の機能的特性について、前記RNA変異体群をスクリーニングし、又は選択すること、
を含んで成る方法。 - 所望の機能的特性を有するポリペプチドを得る方法であって、
請求項1〜19に記載の方法に従い、
a. 第一及び第二の鎖を有する少なくとも1つのヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを調製し、ここで、前記ヘテロ二本鎖が少なくとも1つの相補的なヌクレオチド塩基対によって分離された少なくとも2つの相補的でないヌクレオチド塩基対を有する;
b. 前記ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを、3’→5’エキソヌクレアーゼ活性を有する有効量の1又は複数の酵素、ポリメラーゼ活性を有する有効量の1又は複数の酵素、及びミスマッチに対する鎖開裂活性を有する有効量の1又は複数の酵素と所定のミスマッチ部位で組み合わせ;
c.ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチド鎖間の相補性のパーセンテージが増大するのに十分な時間を与え、配列変異体を生成させ、それによりポリヌクレオチド群の多様性を増大させ;
d.前記ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドをRNAに、そして前記RNAをポリペプチド変異体群に変換し;そして
e.所望の機能的特性について、前記ポリペプチド変異体群をスクリーニングし、又は選択すること、
を含んで成る方法。 - 所望の機能的特性コードするポリヌクレオチドを得る方法であって、
請求項1〜19に記載の方法に従い、
a. 第一及び第二の鎖を有する少なくとも1つのヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを調製し、ここで、前記ヘテロ二本鎖が少なくとも1つの相補的なヌクレオチド塩基対によって分離された少なくとも2つの相補的でないヌクレオチド塩基対を有する;
b. 前記ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを、3’→5’エキソヌクレアーゼ活性を有する有効量の1又は複数の酵素、ポリメラーゼ活性を有する有効量の1又は複数の酵素、及びミスマッチに対する鎖開裂活性を有する有効量の1又は複数の酵素と所定のミスマッチ部位で組み合わせ;
c.ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチド鎖間の相補性のパーセンテージが増大するのに十分な時間を与え、配列変異体を生成させ;
d.所望の機能的特性を有する変異体群をスクリーニングし、又は選択し;
e.一本鎖ポリヌクレオチドを得るために前記変異体群を変性させ;
f.少なくとも1つの第二のヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを形成するために、前記一本鎖ポリヌクレオチドをアニーリングし;
g.前記第二ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチドを、エキソヌクレアーゼ活性、ポリメラーゼ活性、及びミスマッチに対する鎖開裂活性を有する有効量の1又は複数の酵素と組み合わせ;そして
h.ヘテロ二本鎖ポリヌクレオチド鎖間の相補性のパーセンテージが増大するのに十分な時間を与えること、
を含んで成る方法。
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US7429596B2 (en) * | 2003-06-20 | 2008-09-30 | The Regents Of The University Of California | 1H-pyrrolo [2,3-D] pyrimidine derivatives and methods of use thereof |
US20060029612A1 (en) * | 2004-04-15 | 2006-02-09 | Large Scale Biology Corporation | Prevention and treatment of recurrent respiratory papillomatosis |
KR20070073917A (ko) * | 2004-10-21 | 2007-07-10 | 뉴 잉글랜드 바이오랩스, 인크 | 개선된 증폭을 위한 핵산 복구 |
WO2007038145A2 (en) * | 2005-09-08 | 2007-04-05 | Large Scale Biology Corporation | Modified tobacco mosaic virus particles as scaffolds for display of protein antigens for vaccine applications |
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EP2102365A4 (en) * | 2006-12-29 | 2010-06-09 | Applied Biosystems Llc | ENRICHMENT THROUGH HETERODUPLEX MOLECULES |
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US20210147830A1 (en) | 2018-06-29 | 2021-05-20 | Thermo Fisher Scientific Geneart Gmbh | High throughput assembly of nucleic acid molecules |
GB201905303D0 (en) | 2019-04-15 | 2019-05-29 | Thermo Fisher Scient Geneart Gmbh | Multiplex assembly of nucleic acid molecules |
EP4114972A1 (en) | 2020-03-06 | 2023-01-11 | Life Technologies Corporation | High sequence fidelity nucleic acid synthesis and assembly |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH09504437A (ja) * | 1993-11-01 | 1997-05-06 | ユナイテッド・ステイツ・バイオケミカル・コーポレイション | 誤対合修復系を利用したdnaの解析方法および操作方法 |
WO1999029902A1 (en) * | 1997-12-08 | 1999-06-17 | California Institute Of Technology | Method for creating polynucleotide and polypeptide sequences |
WO2000000632A1 (en) * | 1998-06-29 | 2000-01-06 | Phylos, Inc. | Methods for generating highly diverse libraries |
JP2004509628A (ja) * | 2000-09-21 | 2004-04-02 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | 組換えポリヌクレオチドの製造方法 |
Family Cites Families (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB2183661B (en) * | 1985-03-30 | 1989-06-28 | Marc Ballivet | Method for obtaining dna, rna, peptides, polypeptides or proteins by means of a dna recombinant technique |
US4994368A (en) * | 1987-07-23 | 1991-02-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Amplification method for polynucleotide assays |
US4994366A (en) * | 1988-04-28 | 1991-02-19 | Jac Creative Foods, Inc. | Shrimp analog forming process |
US5459039A (en) * | 1989-05-12 | 1995-10-17 | Duke University | Methods for mapping genetic mutations |
US5556750A (en) * | 1989-05-12 | 1996-09-17 | Duke University | Methods and kits for fractionating a population of DNA molecules based on the presence or absence of a base-pair mismatch utilizing mismatch repair systems |
US5556747A (en) * | 1990-07-09 | 1996-09-17 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Method for site-directed mutagenesis |
DE4112440C1 (ja) | 1991-04-16 | 1992-10-22 | Diagen Institut Fuer Molekularbiologische Diagnostik Gmbh, 4000 Duesseldorf, De | |
US5795747A (en) * | 1991-04-16 | 1998-08-18 | Evotec Biosystems Gmbh | Process for manufacturing new biopolymers |
AU3919293A (en) | 1992-03-27 | 1993-11-08 | University Of Maryland At Baltimore | Detection of gene mutations with mismatch repair enzymes |
US6165793A (en) * | 1996-03-25 | 2000-12-26 | Maxygen, Inc. | Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination |
EP0832210B1 (en) * | 1995-06-07 | 2004-10-27 | Trevigen, Inc. | Nucleic acid repair enzyme methods for point mutation detection and in vitro mutagenesis |
US6057103A (en) * | 1995-07-18 | 2000-05-02 | Diversa Corporation | Screening for novel bioactivities |
US6171820B1 (en) * | 1995-12-07 | 2001-01-09 | Diversa Corporation | Saturation mutagenesis in directed evolution |
EP0870060B1 (en) * | 1995-12-15 | 2003-04-02 | Duke University | Methods using mismatch repair systems for the detection and removal of mutant sequences that arise during enzymatic amplification |
US7115413B2 (en) | 1996-04-01 | 2006-10-03 | Mixis France S.A. | Meiotic recombination in vivo of partially homologous DNA sequences |
US5869245A (en) * | 1996-06-05 | 1999-02-09 | Fox Chase Cancer Center | Mismatch endonuclease and its use in identifying mutations in targeted polynucleotide strands |
AU721493B2 (en) | 1996-06-05 | 2000-07-06 | Fox Chase Cancer Center | Mismatch endonucleases and uses thereof in identifying mutations in targeted polynucleotide strands |
FR2772048B1 (fr) | 1997-12-04 | 2001-12-21 | Biomethodes | Procede de clonage par digestion multiple, vecteurs pour sa mise en oeuvre et ses applications |
JP2002503478A (ja) * | 1998-02-11 | 2002-02-05 | マキシジェン, インコーポレイテッド | 遺伝子ワクチンベクターの標的化 |
US6846655B1 (en) * | 1998-06-29 | 2005-01-25 | Phylos, Inc. | Methods for generating highly diverse libraries |
US6376246B1 (en) * | 1999-02-05 | 2002-04-23 | Maxygen, Inc. | Oligonucleotide mediated nucleic acid recombination |
FR2789696A1 (fr) | 1999-02-12 | 2000-08-18 | Biomethodes | Procede de mutagenese d'un fragment d'acide nucleique par clonage et polymerisation-ligation |
FR2793807B1 (fr) | 1999-05-20 | 2003-05-16 | Biomethodes | Methode d'insertion d'un fragment d'acide nucleique dans un vecteur, ses applications et les kits pour sa mise en oeuvre |
DE19953854C2 (de) * | 1999-11-09 | 2002-01-17 | Max Planck Gesellschaft | Verfahren zur Herstellung von Biopolymeren mit veränderten Eigenschaften |
JP4986358B2 (ja) | 2000-02-22 | 2012-07-25 | フォックス・チェイス・キャンサー・センター | ミスマッチエンドヌクレアーゼをコードする核酸分子およびその使用方法 |
US6391557B1 (en) * | 2000-02-22 | 2002-05-21 | Fox Chase Cancer Center | Nucleic acid molecule encoding a mismatch endonuclease and methods of use thereof |
AU2001263411A1 (en) * | 2000-05-23 | 2001-12-03 | California Institute Of Technology | Gene recombination and hybrid protein development |
FR2813314B1 (fr) | 2000-08-25 | 2004-05-07 | Biomethodes | Procede de mutagenese dirigee massive |
US6783941B2 (en) * | 2000-12-06 | 2004-08-31 | Novozymes A/S | Method for producing a polynucleotide library in vitro by mismatch repair of heteroduplexes |
US20020146732A1 (en) * | 2001-02-02 | 2002-10-10 | Padgett Hal S. | Method of increasing complementarity in a heteroduplex |
US7078211B2 (en) * | 2002-02-01 | 2006-07-18 | Large Scale Biology Corporation | Nucleic acid molecules encoding endonucleases and methods of use thereof |
DE10248258A1 (de) | 2002-10-16 | 2004-05-06 | Biopsytec Analytik Gmbh | Mutierte Nukleinsäure einer Cel I-Endonuklease und Verfahren zur Herstellung des rekombinanten vollständigen Cel I-Proteins |
-
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2007
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH09504437A (ja) * | 1993-11-01 | 1997-05-06 | ユナイテッド・ステイツ・バイオケミカル・コーポレイション | 誤対合修復系を利用したdnaの解析方法および操作方法 |
WO1999029902A1 (en) * | 1997-12-08 | 1999-06-17 | California Institute Of Technology | Method for creating polynucleotide and polypeptide sequences |
WO2000000632A1 (en) * | 1998-06-29 | 2000-01-06 | Phylos, Inc. | Methods for generating highly diverse libraries |
JP2004509628A (ja) * | 2000-09-21 | 2004-04-02 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | 組換えポリヌクレオチドの製造方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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