JP4685369B2 - 関節リウマチ診断用試薬 - Google Patents
関節リウマチ診断用試薬 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4685369B2 JP4685369B2 JP2004135484A JP2004135484A JP4685369B2 JP 4685369 B2 JP4685369 B2 JP 4685369B2 JP 2004135484 A JP2004135484 A JP 2004135484A JP 2004135484 A JP2004135484 A JP 2004135484A JP 4685369 B2 JP4685369 B2 JP 4685369B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- rheumatoid arthritis
- antibody
- antigen
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
皮細胞由来のcDNAライブラリーのスクリーニングをSEREX法によって行ったところ、該血清と陽性反応を示す15種のタンパク質を抗原タンパク質として同定することに成功し、本発明を完成させるに至った。
(1) 配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、または30に示すアミノ酸配列からなるタンパク質、またはそれらの部分ペプチドの少なくとも1種以上を含む、関節リウマチ診断用試薬。
(2) 配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、または30に示すアミノ酸配列からなるタンパク質、またはそれらの部分ペプチドの少なくとも1種以上を含む、関節リウマチ診断用試薬キット。
(3) 配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、または30に示すアミノ酸配列からなるタンパク質、またはそれらの部分ペプチドの少なくとも1種以上を被験試料と接触させ、該被験試料中の関節リウマチ特異抗原に対する自己抗体を抗原抗体反応によって検出することを特徴とする、関節リウマチの診断方法。
(4) 配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、または30に示すアミノ酸配列からなるタンパク質、またはそれらの部分ペプチドに対する抗体。
(5) (4)に記載の抗体の少なくとも1種以上を含む、関節リウマチ診断用試薬。
(6) (4)に記載の抗体の少なくとも1種以上を含む、関節リウマチ診断用試薬キット。
(7) (4)に記載の抗体の少なくとも1種以上を被験試料と接触させ、該被験試料中の関節リウマチ特異抗原を抗原抗体反応によって検出することを特徴とする、関節リウマチの診断方法。
本発明において、関節リウマチ患者体液中の自己抗体と結合し、関節リウマチの診断に用いることができる抗原タンパク質(以下、「本発明の抗原タンパク質」ともいう)は、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、または30に示すアミノ酸配列からなるタンパク質である。
これらの抗原タンパク質を下記表1にまとめる。
No.1:核タンパクのひとつで、二重鎖DNAのcitidine-rich部分に結合し、MH1,MH2,MH3ドメインを持つ。転写されたRNAのパッケージング、輸送、プロセッシングに関与する。
No.2:核タンパクのひとつで、神経冠由来細胞の分化に必要と考えられる。
No.3:核タンパクのひとつで、HP1 familyに属する染色体タンパク質と相互作用し、遺伝子発現の制御に関与していると考えられる。
No.4:リソソームに含まれるパパインファミリーのシステインプロテアーゼである。
No.5:N末にhelix-loop-helixDNA結合部位をもつDNA結合タンパクである。セントロメアのサテライイトDNA配列のCENP-Boxを認識し結合する。中間期の核や分裂期のクロマチンでの特異的なセントロメア構造の集合に重要な働きを果たすと考えられる。
No.6:微小管依存性モータータンパクのひとつで、キネシンファミリーに属する。細胞小器官の輸送、有糸分裂、減数分裂、軸索に沿ったシナプス小胞の輸送などに関与している
。
No.8:細胞分裂の際、中心小体の凝集に必要なタンパク質である。中心体と関連のあるNIMA−related kinase2(NEK2)と相互作用する。
No.9:細胞がストレスを受けていないときに、細胞質内でp53と結合し、p53の核内への移行を阻害し、その作用を抑制する。
No.10:前立腺ガンのガン抗原として同定されたタンパク質である。Rabファミリーに属し、GTPase活性をもち、細胞の分化、増殖に関与すると考えられる。
No.11:zinc finger DNA結合部位をもつ核タンパクあり、細胞増殖の制御に関与していると考えられる。
No.12:ラミンAは、真核細胞の核ラミナを構成する中間径フィラメントタンパクである。
No.13:クロマチン結合タンパクであるMCM familyに属し、DNA複製や細胞周期の制御に関与していると考えられる。
No.14:機能不明
No.15:中間径フィラメントタンパクのひとつであり、細胞骨格をつくり、細胞内小胞を微小管へ送る役割を果たすと考えられている。しかしながら、これら15種のタンパク質について、関節リウマチとの関係はよく知られていない。
上記のタンパク質中の部分アミノ酸配列を含むペプチド(部分ペプチドともいう)も含まれる。かかる部分ペプチドを構成するアミノ酸数は、少なくとも10個以上、好ましくは30個以上、より好ましくは80個以上である。また、自己抗体が一次構造ではなくタンパク質の立体構造を認識する場合には、部分ペプチドは、単なるドメインペプチドではなく、自己抗体によって認識される立体構造の再現に必要な領域を含むものとする。
的のタンパク質を発現する形質転換真核細胞を得ることができる。発現ベクターとしては、pKA1、pCDM8、pSVK3、pMSG、pSVL、pBK-CMV、pBK-RSV、EBVベクター、pRS、pYES2などが例示できる。真核細胞としては、ヒト胎児腎臓細胞HEK293、サル腎臓細胞COS7、チャイニーズハムスター卵巣細胞CHOなどの哺乳動物培養細胞、あるいはヒト臓器から単離した初代培養細胞、出芽酵母、分裂酵母、カイコ細胞、アフリカツメガエル卵細胞などが使用できる。
本発明の関節リウマチ特異抗原タンパク質に対する抗体は、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、または30に示すアミノ酸配列を有するタンパク質のエピトープに結合することができる全体分子、およびFab、F(ab')2、Fv断片等が全て含まれる。このような抗体は、例えばポリクローナル抗体の場合には、タンパク質やその一部断片を免疫原として動物を免役した後、血清から得ることができる。あるいは、上記の真核細胞用発現ベクターを注射や遺伝子銃によって、動物の筋肉や皮膚に導入した後、血清を採取することによって作製することができる。動物としては、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ニワトリなどが用いられる。
であること、抗体と結合させても安定であること、基質を特異的に着色させる等の条件を満たすものであれば特段の制限はなく、通常のEIAに用いられる酵素、例えば、ペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、グルコース−6−リン酸化脱水素酵素、リンゴ酸脱水素酵素等を用いることもできる。また、酵素阻害物質や補酵素等を用いることもできる。これら酵素と抗体との結合は、マレイミド化合物等の架橋剤を用いる公知の方法によって行うことができる。基質としては、使用する酵素の種類に応じて公知の物質を使用することができる。例えば酵素としてペルオキシダーゼを使用する場合には、o-フェニレンジアミン等を、また酵素としてアルカリホスファターゼを用いる場合には、p-ニトロフェニルリン酸等を用いることができる。放射性同位体としては、125Iや3H等の通常のRIAで用いられているものを使用することができる。蛍光色素としては、フルオレッセンスイソチオシアネート(FITC)やテトラメチルローダミンイソチオシアネート(TRITC)等の通常の蛍光抗体法に用いられるものを使用することができる。
本発明の抗原タンパク質またはその部分ペプチド(以下、特に断らない場合には「抗原タンパク質」はその部分ペプチドも含むものとする)は、関節リウマチ患者体液(例えば、血清)中の自己抗体を認識し、結合する機能を有する。
己免疫疾患の患者に比べて有意に高い抗体をいう。
リウマチの臨床指標として利用する。関節リウマチ患者における抗原−抗体複合体量は、健常者におけるそれと対比して、有意に増加し、また、疾患の治療が進むに伴って低下する。従って、この抗原−抗体複合体量及びその変化、特に抗原−抗体複合体量の経時的変化を臨床指標とすることによって、関節リウマチの存在、病態及び予後を診断することができる。
(1) エンザイムイムノアッセイ法
エンザイムイムノアッセイ法は、被験試料中のリウマチ特異抗原に対する自己抗体を、固相に固定化された抗原タンパク質と反応させ、ヒト免疫グロブリンに対する標識二次抗体を添加し、自己抗体に結合した標識二次抗体を測定することによって行う。
凝集反応法は、被験試料中の関節リウマチ特異抗原に対する自己抗体を、担体粒子上に固定化された本発明の抗原タンパク質と反応させ、該抗原タンパク質と自己抗体との反応により生じる凝集を測定することにより行う。担体粒子としては、例えばポリスチレンラテックス、カオリン、ベントナイト、炭素末、ヒツジ、ニワトリ等の赤血球などを使用することができる。抗原タンパク質を担体粒子上に固定化する方法は公知の方法を適用することができる。例えば、タンニン酸、グルタルアルデヒド、ビスアゾベンジジン、カルボジイミド類、キノン類、塩化クロム類等のカップリング剤を使用する方法、物理的吸着による方法などにより行うことができる。
(1)cDNAライブラリーのスクリーニング
関節リウマチ患者(26例)の血清を、本人または家族の了解を得て関節リウマチ特異抗原タンパク質のスクリーニングに用いた。スクリーニングは、ヒト臍帯静脈内皮細胞由来cDNAライブラリー(Stratagene社から購入)を対象として行った。
得られた陽性クローンから、PCR法によりインサートDNAを複製し、得られた産物を、Big Dye DNA Sequencing Kit(ABI社)とABI Prism(Perkin Elmer社)とを用いて配列決定した。既存データベースを用いて検索した結果、15種の新規な関節リウマチ特異的抗原タンパク質を同定した。
Claims (6)
- 配列番号30に示すアミノ酸配列からなるタンパク質、またはその部分ペプチドを含む、関節リウマチ診断用試薬。
- 配列番号30に示すアミノ酸配列からなるタンパク質、またはその部分ペプチドを含む、関節リウマチ診断用試薬キット。
- 配列番号30に示すアミノ酸配列からなるタンパク質、またはその部分ペプチドを被験試料と接触させ、該被験試料中の関節リウマチ特異抗原に対する自己抗体を抗原抗体反応によって検出することを特徴とする、関節リウマチの指標とするための方法。
- 配列番号30に示すアミノ酸配列からなるタンパク質、またはその部分ペプチドに対する抗体を含む、関節リウマチ診断用試薬。
- 配列番号30に示すアミノ酸配列からなるタンパク質、またはその部分ペプチドに対する抗体を含む、関節リウマチ診断用試薬キット。
- 配列番号30に示すアミノ酸配列からなるタンパク質、またはその部分ペプチドに対する抗体を被験試料と接触させ、該被験試料中の関節リウマチ特異抗原を抗原抗体反応によって検出することを特徴とする、関節リウマチの指標とするための方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2004135484A JP4685369B2 (ja) | 2004-04-30 | 2004-04-30 | 関節リウマチ診断用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2004135484A JP4685369B2 (ja) | 2004-04-30 | 2004-04-30 | 関節リウマチ診断用試薬 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2005315772A JP2005315772A (ja) | 2005-11-10 |
JP4685369B2 true JP4685369B2 (ja) | 2011-05-18 |
Family
ID=35443352
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004135484A Expired - Fee Related JP4685369B2 (ja) | 2004-04-30 | 2004-04-30 | 関節リウマチ診断用試薬 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4685369B2 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ581742A (en) * | 2007-06-08 | 2012-09-28 | Biogen Idec Inc | Biomarkers for predicting anti-tnf responsiveness or non-responsiveness |
EP2307451B1 (en) * | 2008-03-21 | 2016-05-25 | Universiteit Hasselt | Biomarkers for rheumatoid arthritis |
JP5924659B2 (ja) * | 2010-10-14 | 2016-05-25 | 国立大学法人 長崎大学 | 免疫複合体の網羅的解析方法および新規関節リウマチバイオマーカー |
EP2700945B1 (en) * | 2011-04-22 | 2016-11-02 | Kyoto University | Use of myelin basic protein as a novel genetic factor for rheumatoid arthritis |
KR20140045409A (ko) * | 2011-05-13 | 2014-04-16 | 인쎄름 (엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔) | 초기 류마티스성 관절염의 진단 방법 |
ES2806498T3 (es) | 2015-06-08 | 2021-02-17 | Arquer Diagnostics Ltd | Métodos para el análisis de una muestra de orina |
US11391744B2 (en) | 2015-06-08 | 2022-07-19 | Arquer Diagnostic Limited | Methods and kits |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003057242A (ja) * | 2001-08-08 | 2003-02-26 | Erc:Kk | リウマチ検査診断薬 |
WO2003027285A1 (en) * | 2001-09-27 | 2003-04-03 | Bionomics Limited | Dna sequences for human angiogenesis genes |
-
2004
- 2004-04-30 JP JP2004135484A patent/JP4685369B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003057242A (ja) * | 2001-08-08 | 2003-02-26 | Erc:Kk | リウマチ検査診断薬 |
WO2003027285A1 (en) * | 2001-09-27 | 2003-04-03 | Bionomics Limited | Dna sequences for human angiogenesis genes |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2005315772A (ja) | 2005-11-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5555846B2 (ja) | 急性中枢神経障害の予後判定方法 | |
US8592169B2 (en) | Tumour marker proteins and uses thereof | |
US9244079B2 (en) | Testing method and testing reagent for angiitis | |
US20120046181A1 (en) | Biomarkers for the Diagnosis of Renal Allograft and Kidney Status | |
KR20190088510A (ko) | 항체 에세이 | |
CN115398239A (zh) | 帕金森氏病诊断用生物标记物及利用其的帕金森氏病诊断方法 | |
JP2014516155A (ja) | 早期関節リウマチの診断のための方法 | |
JP5191544B2 (ja) | 皮膚筋炎の検出方法および診断キット | |
JP4685369B2 (ja) | 関節リウマチ診断用試薬 | |
US9354241B2 (en) | Moesin fragments associated with aplastic anemia | |
US9347950B2 (en) | Moesin fragments associated with immune thrombocytopenia | |
JP5484549B2 (ja) | 中皮腫診断キット | |
JP6312302B2 (ja) | 脳梗塞の診断マーカー | |
JP2007071849A (ja) | 中皮腫診断剤および中皮腫診断キット | |
US20230266331A1 (en) | Use of antigen combination for detecting autoantibodies in lung cancer | |
WO2023168534A1 (en) | Diagnosis of congenital heart block | |
CN106459166B (zh) | 检测肉瘤转移的方法和生物标记物 | |
GB2600701A (en) | Antibody assay | |
EP4314834A1 (en) | Diagnosis of alzheimer's disease by detecting auto-antibodies against y-box binding protein-1 (yb-1) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070425 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100323 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100519 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20100519 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100810 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100916 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20101207 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110118 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110208 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110210 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140218 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees | ||
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |