JP4643182B2

JP4643182B2 - 全反射顕微鏡

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Publication number: JP4643182B2
Application number: JP2004188010A
Authority: JP
Inventors: 剛望月
Original assignee: Olympus Corp
Current assignee: Olympus Corp
Priority date: 2004-06-25
Filing date: 2004-06-25
Publication date: 2011-03-02
Anticipated expiration: 2024-06-25
Also published as: JP2006011045A

Description

本発明は、全反射照明により発生するエバネッセント光を用いて蛍光観察を行なうための全反射顕微鏡に関する。

近年、生物顕微鏡の蛍光観察方法として、全反射蛍光顕鏡法（ＴＩＲＦＭ：Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy）と呼ばれる顕鏡法が注目されている。これは、カバーガラスと標本の境界面で照明光を全反射させたときに、標本側に数１００ｎｍ程度のわずかな範囲に浸み出すエバネッセント光と呼ばれる光を用いて蛍光物質を励起する方法であり、カバーガラス近傍のわずかな範囲の蛍光物質だけが照明されるので、バックグラウンドが非常に暗く、コントラストの高い蛍光観察や微弱な蛍光の観察が可能である。

全反射蛍光顕微鏡用の光源には、一般に、十分な強度の単色光を発するレーザー光源が用いられる。実際の装置では、通常操作のレボルバーの転換や、その他の誤操作により、カバーガラスと標本の境界面で全反射しなくなり、直接の屈折光や散乱光が外部に漏れる可能性がある。

このため、ユーザーの安全を考慮して、ユーザー操作に伴い起こりえる各部のあらゆる状態で、直接の屈折光や散乱光が外部に漏れないように、ステージ全体をおおうようにステージカバーによるユーザーインターロック部が設けられている。標本の交換やオイルの点着時には、このステージカバーのフタが開くと、レーザー光路中にシャッターが入り、標本へのレーザー光の導入が遮断される。一方、ステージカバーのフタを閉じると、レーザー光路中にシャッターが開放され、標本へレーザー光が導入される。

特開平１１−３２６７７４号公報は、顕微鏡用光源心出し装置を開示している。この装置では、底面にスクリーンを設けた透明なプラスチックでできた筒状体をレボルバーに装着することにより、スクリーン面の光源像を観察することができる。

特開平１０−８３０６０号公報は暗箱用明視装置を開示している。この装置では、作業空間である暗箱内部に赤外線照明器とＣＣＤカメラとを設けており、外部に配置したモニターで暗箱内部の様子を確認することができる。
特開平１１−３２６７７４号公報特開平１０−８３０６０号公報

しかし従来技術には以下のような不具合がある。

標本へレーザー光を導入する全反射蛍光観察中はステージをステージカバーで覆っているため、ステージカバー内の様子が分からない。この状態で、ステージを操作して対物レンズと標本との位置関係を大きく変更すると、標本やステージ中座と、対物レンズやコンデンサーレンズの先球とが接触する恐れがある。

特開平１１−３２６７７４号公報の装置では、レボルバーに装着した筒状体のみであり、ステージ上面全体を覆っていない。

特開平１０−８３０６０号公報の装置では、暗箱内部に専用のＣＣＤカメラと、外部に専用のモニターとが必要であり、システムが高価になってしまう。

本発明は、このような実状を考慮して成されたものであり、その目的は、全反射蛍光観察時にステージカバーの内部の様子を目視することが可能な全反射顕微鏡を提供することである。

本発明の全反射顕微鏡は、標本を載置するためのステージを有する顕微鏡と、標本を全反射照明するための全反射照明光学系と、顕微鏡のステージをおおうように設けられたステージカバーと、ステージカバーの内部を単色波長の光で照明する補助照明光源部とを備えている。顕微鏡は標本を観察するための観察光学系を有し、観察光学系は対物レンズと吸収フィルターとを含んでいる。ステージカバーは固定カバーと着脱カバーとからなる。補助照明光源部は少なくとも一部が固定カバーに固定されている。着脱カバーは観察者がステージカバーの内部の様子を目視することを可能にするバンドパスフィルターを有し、バンドパスフィルターは、補助照明光源部が発する単色波長の光を透過するが、全反射照明光学系の光を透過せず、バンドパスフィルターの透過域は観察光学系内の吸収フィルターの透過域と重複していない。

本発明によれば、全反射蛍光観察時にステージカバーの内部の様子を目視することが可能な全反射顕微鏡が提供される。

以下、図面を参照しながら本発明の実施形態について説明する。

［第一実施形態］
図１は、本発明の第一実施形態による倒立型の全反射蛍光顕微鏡の縦断面図である。

本実施形態の倒立型の全反射蛍光顕微鏡は、倒立顕微鏡と、標本を全反射照明するための全反射照明光学系と、インターロック部と、補助照明部とを備えている。

倒立顕微鏡は、標本１１２を入れたディッシュ１１３を載置するためのステージと、ステージに載置されるディッシュ１１３の下方に位置する対物レンズ１１０と、対物レンズ１１０を含む標本１１２を観察するための観察光学系と、対物レンズ１１０を保持するためのレボルバー１１１と、レボルバー１１１を対物レンズ１１０の光軸Ｔに沿って移動させるための準焦機構（図示せず）とを備えている。

対物レンズ１１０は、レボルバー１１１に取り付けられている。レボルバー１１１は、準焦機構によって対物レンズ１１０の光軸Ｔに沿って移動可能である。

ステージは、上ステージ１１７と下ステージ１１８とステージ固定部１１９とから構成されている。上ステージ１１７は、ボールガイド機構（図示せず）などを介して下ステージ１１８に連結されている。下ステージ１１８は、ボールガイド機構（図示せず）などを介してステージ固定部１１９に連結されている。下ステージ１１８は、対物レンズの光軸Ｔと垂直な平面内で、紙面の垂直方向に移動可能である。上ステージ１１７は、対物レンズの光軸Ｔと垂直な平面内で、紙面の横の方向に移動可能である。

上ステージ１１７の中央部の開口に中座１１６が設けられている。従って、中座１１６は、対物レンズ１１０の光軸Ｔと垂直な平面内で移動可能である。中座１１６の上に標本１１２を入れたディッシュ１１３が載置される。ディッシュ１１３は、透明なプラスチック製で、底面をくりぬいてできた開口をふさいでいるカバーガラス１１４を有している。標本１１２は、カバーガラス１１４の上面に培養されている。ディッシュ１１３の内部は、培養液１１５で浸されている。対物レンズ１１０の先端とカバーガラス１１４の間にはオイル１２０が浸されている。

観察光学系は、対物レンズ１１０と吸収フィルター１２１と結像レンズ１２２とＣＣＤカメラ１２３とを備えている。吸収フィルター１２１と結像レンズ１２２とＣＣＤカメラ１２３は、対物レンズ１１０の光軸Ｔ上に、対物レンズ１１０から順に配置されている。

全反射照明光学系は、レーザーヘッド１０１と、レーザー投光管１０７と、観察光学系内の対物レンズ１１０とから構成されている。またインターロック部は、固定カバー１２４と着脱カバー１２５とからなるステージカバーと、インターロックボックス１０２とを有している。

レーザーヘッド１０１にはインターロックボックス１０２がビス（図示せず）などで固定され、インターロックボックス１０２にはファイバー固定部１０３がビス（図示せず）で固定されている。ファイバー固定部１０３にはファイバー１０５の導入部１０４が装着されており、ファイバー１０５の他端の射出部１０６はレーザー投光管１０７にビス（図示せず）などで固定されている。レーザー投光管１０７は、内部に、集光レンズ１０８と反射ミラー１０９とを備えている。集光レンズ１０８は、ファイバー１０５からの射出光を対物レンズ１１０の後側焦点位置に集光する焦点距離を有している。レーザー投光管１０７の光軸Ｍは対物レンズ１１０の光軸Ｔに直交している。反射ミラー１０９は、レーザー投光管１０７の光軸Ｍに対して４５度の角度をなしており、レーザー投光管１０７に導入された光を対物レンズ１１０の外周部に向けて反射するように配置されている。反射ミラー１０９は、直動機構（図示せず）とバネ（図示せず）などにより、レーザー投光管１０７の光軸Ｍ方向に対物レンズ１１０の外周部あたりで移動可能である。

上ステージ１１７には、アルミなどの金属製の固定カバー１２４が上ステージ１１７の上面のほぼ全体をおおうようにビス（図示せず）などで固定されている。固定カバー１２４は上部に開口部を有している。固定カバー１２４の上には、アルミなどの金属製の着脱カバー１２５が装着される。着脱カバー１２５は固定カバー１２４に対して着脱可能である。着脱カバー１２５は上部に開口部を有し、この開口部にはバンドパスフィルター１２６が接着などによって固定されている。着脱カバー１２５を固定カバー１２４に装着した状態では、着脱カバー１２５と固定カバー１２４が一体となって箱型形状となる。固定カバー１２４の内側面には、スイッチ１２７がビス（図示せず）などで固定されている。スイッチ１２７はＯＮ／ＯＦＦ切り換えのためのレバー１２８を有している。着脱カバー１２５の裏面にはピン１２９がビス（図示せず）で固定されている。ピン１２９は、着脱カバー１２５が固定カバー１２４に装着されたときに、スイッチ１２７のレバー１２８を押す。スイッチ１２７には、ＯＮ／ＯＦＦ信号を送信するためのケーブル１３０が接続されている。スイッチ１２７からのＯＮ／ＯＦＦ信号は、ケーブル１３０を通して、インターロックボックス１０２の内部の回路（図示せず）に送られて、内部のモーター（図示せず）などで駆動されるシャッター１３１を開閉させる。

補助照明部は、小型なＬＥＤ光源であるＬＥＤヘッド１３２と、ケーブル１３３を介してＬＥＤヘッド１３２に接続されているハンドスイッチ１３４とから構成されている。ＬＥＤヘッド１３２は、固定カバー１２４の後側の内側面に設けられている。ＬＥＤヘッド１３２から発せられる照明光は、単色波長の光であり、ステージカバー（固定カバー１２４と着脱カバー１２５）の内部を照明する。具体的にはディッシュ１１３と中座１１６と対物レンズ１１０の先端を照明する。ＬＥＤヘッド１３２はケーブル１３３を介して接続されているハンドスイッチ１３４によってＯＮ／ＯＦＦ制御が可能である。

全反射照明光学系内のレーザーヘッド１０１からの単色光の波長をλＬ、ＬＥＤヘッド１３２からの単色光の波長をλ０、吸収フィルター１２１の透過域をλ１〜λ２、バンドパスフィルター１２６の透過域をλ３〜λ４とする。観察光学系内の吸収フィルター１２１の透過域λ１〜λ２とバンドパスフィルター１２６の透過域λ３〜λ４は重複していない。バンドパスフィルター１２６は、ＬＥＤヘッド１３２からの単色光を透過する。つまり、λ３＜λ０＜λ４である。さらにバンドパスフィルター１２６は、レーザーヘッド１０１からの単色光を透過しない。つまり、λＬ＜λ３またはλ４＜λＬである。

次に本実施形態の作用について述べる。

着脱カバー１２５を固定カバー１２４に装着すると、ピン１２９がスイッチ１２７のレバー１２８を押してスイッチ１２７からＯＮ信号が出力される。ＯＮ信号はケーブル１３０を通してインターロックボックス１０２の内部の回路に送られて、シャッター１３１を開く。レーザーヘッド１０１からのレーザービームはファイバー１０５に導入され、レーザー投光管１０７の集光レンズ１０８で集光され、反射ミラー１０９で反射されたのち、全反射状態で標本１１２を照明する。全反射照明により境界面近くにエバネッセント光が生じ、生じたエバネッセント光が標本１１２を励起する。エバネッセント光により励起された標本１１２は蛍光を発する。標本１１２からの蛍光は、対物レンズ１１０で集光されたのち、不要な光が吸収フィルター１２１でカットされ、結像レンズ１２２によりＣＣＤ１２３の受光面に結像される。

このような全反射蛍光照明観察状態で、ハンドスイッチ１３４をＯＮにしてＬＥＤヘッド１３２で照明する。これにより、バンドパスフィルター１２６を通して観察者１３５がステージカバー（固定カバー１２４と着脱カバー１２５）の内部の様子を目視観察できるようになる。具体的には対物レンズ１１０とディッシュ１１３と中座１１６の位置関係を観察者１３５が把握できるようになる。従って、中座１１６や準焦部を動かした際に、対物レンズ１１０の先端の外周部との中座１１６の中央開口部の内壁面との位置関係、対物レンズ１１０がディッシュ１１３底面を持ち上げているかどうかを認識することができる。

以上に述べたように、本実施形態では、倒立型の全反射蛍光顕微鏡において、対物レンズの先端周辺部を目視することができるため、対物レンズの先端とディッシュ底面、対物レンズ先端の側面と中座の内壁面との接触を避けることができる。また、ステージの移動やピント合わせを迅速に行なえるため、作業性の向上につながる。

［第二実施形態］
図２は、本発明の第二実施形態による正立型の全反射蛍光顕微鏡の縦断面図である。図２において、図１に示された部材と同一の参照符号で指示された部材は同様の部材であり、その詳しい説明は省略する。

本実施形態の正立型の全反射蛍光顕微鏡は、ステージ固定式正立顕微鏡と、標本を全反射照明するための全反射照明光学系と、インターロック部と、補助照明部とを備えている。

正立顕微鏡は、標本１１２を入れたディッシュ１１３を載置するためのステージと、ステージに載置されるディッシュ１１３の上方に位置する対物レンズ１１０と、対物レンズ１１０を含む標本１１２を観察するための観察光学系と、対物レンズ１１０を光軸Ｔに沿って移動させるための準焦機構（図示せず）とを備えている。

ステージの構成は、第一実施形態と同様である。観察光学系の構成は、全反射照明光学系と標本を挟んで上方向に、第一実施形態と同様に、対物レンズ１１０から、吸収フィルター１２１、結像レンズ１２２、ＣＣＤカメラ１２３が順に配置されている。

全反射照明光学系は、レーザーヘッド１０１と、レーザー投光管１０７と、コンデンサーレンズ１３６とから構成されている。またインターロック部は、固定カバー１３７と着脱カバー１３８とからなるステージカバーと、インターロックボックス１０２とを有している。

レーザーヘッド１０１の構成とインターロックボックス１０２の構成は第一実施形態と同様である。

コンデンサーレンズ１３６は、ステージに載置されるディッシュ１１３の下方に位置し、コンデンサーベース１４１に固定されている。コンデンサーベース１４１は、コンデンサーレンズ１３６の光軸Ｔ方向にラックアンドピニオン方式などによって移動可能で、ステージ固定式正立顕微鏡に固定されている。コンデンサーレンズ１３６の先端とカバーガラス１１４の間にはオイル１２０が浸されている。

レーザー投光管１０７内の集光レンズ１０８は、ファイバー１０５からの射出光をコンデンサーレンズ１３６の後側焦点位置に集光する焦点距離を有している。レーザー投光管１０７の光軸Ｍはコンデンサーレンズ１３６の光軸Ｔに直交している。反射ミラー１０９は、レーザー投光管１０７の光軸Ｍに対して４５度の角度をなしており、レーザー投光管１０７に導入された光をコンデンサーレンズ１３６の外周部に向けて反射するように配置されている。反射ミラー１０９は、直動機構（図示せず）とバネ（図示せず）などにより、レーザー投光管１０７の光軸Ｍ方向にコンデンサーレンズ１３６の外周部あたりで移動可能である。

上ステージ１１７には、アルミなどの金属製の固定カバー１３７が上ステージ１１７の上面後部をおおうようにビス（図示せず）などで固定されている。アルミなどの金属製の着脱カバー１３８は、固定カバー１３７に対して着脱可能である。着脱カバー１３８は観察者側に開口部を有し、この開口部にはバンドパスフィルター１４０が接着（図示せず）などよって固定されている。着脱カバー１３８を固定カバー１３７に装着させると、着脱カバー１３８と固定カバー１３７が一体となって、上ステージ１１７の上面のほぼ全体と対物レンズ１１０をおおう箱型形状となる。固定カバー１３７にはスイッチ１２７が固定されている。スイッチ１２７はＯＮ／ＯＦＦ切り換えのためのレバー１２８を有している。着脱カバー１３８にはピン１２９がビス（図示せず）などで固定されている。ピン１２９は、着脱カバー１３８が固定カバー１３７に装着されたときに、スイッチ１２７のレバー１２８を押す。スイッチ１２７からのＯＮ／ＯＦＦ信号は、ケーブル１３０を通して、インターロックボックス１０２の内部の回路（図示せず）に送られて、内部のモーター（図示せず）などで駆動されるシャッター１３１を開閉させる。

補助照明部は、小型なＬＥＤ光源であるＬＥＤヘッド１３２と、ケーブル１３３を介してＬＥＤヘッド１３２に接続されているハンドスイッチ１３４とから構成されている。ＬＥＤヘッド１３２は、固定カバー１３７の後側の内側面に設けられている。ＬＥＤヘッド１３２から発せられる照明光は、単色波長の光であり、ステージカバー（固定カバー１３７と着脱カバー１３８）の内部を照明する。具体的にはディッシュ１１３と中座１１６と対物レンズ１１０の先端を照明する。ＬＥＤヘッド１３２はケーブル１３３を介して接続されているハンドスイッチ１３４によってＯＮ／ＯＦＦ制御が可能である。

次に本実施形態の作用について述べる。

着脱カバー１３８を固定カバー１３７に装着すると、ピン１２９がスイッチ１２７のレバー１２８を押してスイッチ１２７からＯＮ信号が出力される。ＯＮ信号はケーブル１３０を通してインターロックボックス１０２の内部の回路に送られて、シャッター１３１を開く。レーザーヘッド１０１からのレーザービームはファイバー１０５に導入され、レーザー投光管１０７の集光レンズ１０８で集光され、反射ミラー１０９で反射されたのち、全反射状態で標本１１２を照明する。全反射照明により境界面近くにエバネッセント光が生じ、生じたエバネッセント光が標本１１２を励起する。エバネッセント光により励起された標本１１２は蛍光を発する。標本１１２からの蛍光は、対物レンズ１１０で集光されたのち、不要な光が吸収フィルター１２１でカットされ、結像レンズ１２２によりＣＣＤ１２３の受光面に結像される。

このような全反射蛍光照明観察状態で、ハンドスイッチ１３４をＯＮにしてＬＥＤヘッド１３２で照明する。これにより、バンドパスフィルター１４０を通して観察者１３５がステージカバー（固定カバー１３７と着脱カバー１３８）の内部の様子を目視観察できるようになる。具体的には対物レンズ１１０とディッシュ１１３と中座１１６の位置関係を観察者１３５が把握できるようになる。従って、中座１１６や準焦部を動かした際に、対物レンズ１１０先端の外周部との中座１１６の中央開口の内壁面との位置関係、対物レンズ１１０と標本１１２と位置を認識することができる。

以上に述べたように、本実施形態では、正立型の全反射蛍光顕微鏡において、対物レンズの先端周辺部を目視することができるため、対物レンズの先端とディッシュ底面、対物レンズ先端の側面と中座の内壁面との接触を避けることができる。また、ステージの移動やピント合わせを迅速に行なえるため、作業性の向上につながる。

［第三実施形態］
図３は、本発明の第三実施形態による倒立型の全反射蛍光顕微鏡の縦断面図である。図３において、図１に示された部材と同一の参照符号で指示された部材は同様の部材であり、その詳しい説明は省略する。

本実施形態は、補助照明部の構成が第一実施形態と相違している。

固定カバー１２４の後側の内側面に、ＬＥＤヘッド１３２が設けられている。ＬＥＤヘッド１３２から発せられる照明光は、ディッシュ１１３と中座１１６と対物レンズ１１０先端を照明する。ＬＥＤヘッド１３２はケーブル１４２通してインターロックボックス１０２の回路（図示せず）に接続されている。インターロックボックス１０２の内部の回路はケーブル１４２を通してＬＥＤヘッド１３２に、シャッター１３１が閉じた状態のときにＯＦＦ信号を送り、シャッター１３１が開いた状態のときにＯＮ信号を送る。

次に本実施形態の作用について述べる。

着脱カバー１２５の固定カバーへ１２４の着脱に連動して、ＬＥＤヘッド１３２がＯＮ／ＯＦＦされる。

以上から分かるように、本実施形態は、第一実施形態の利点に加えて、ＬＥＤヘッド１３２のＯＮ／ＯＦＦの手間が省けるという利点を有している。これにより、全反射蛍光観察をよりいっそう迅速に行なえる。

本実施形態は、倒立型の全反射蛍光顕微鏡に適用されている例であるが、第二実施形態で述べた正立型の全反射蛍光顕微鏡に適用されてもよい。

［第四実施形態］
図４は、本発明の第四実施形態による倒立型の全反射蛍光顕微鏡の縦断面図である。図４において、図１に示された部材と同一の参照符号で指示された部材は同様の部材であり、その詳しい説明は省略する。

固定カバー１２４の後側面にはバンドパスフィルター１４５が設けられている。このバンドパスフィルター１４５は、着脱カバー１２５のバンドパスフィルター１２６と同様な透過域を有している。つまり、バンドパスフィルター１４５の透過域はλ３〜λ４である。また、連続波長の光を発するハロゲン光源１４４がビーム射出側をバンドパスフィルター１４５側に向けて配置されている。ハロゲン光源１４４はアダプター１４３を介して固定カバー１２４の外側側面にビス（図示せず）などで固定されている。

次に本実施形態の作用について述べる。

ハロゲン光源１４４からの射出光はバンドパスフィルター１４５を通過して、λ３〜λ４の波長成分だけの光になり、ディッシュ１１３と中座１１６と対物レンズ１１０の先端を照明する。このため、バンドパスフィルター１２６を通してディッシュ１１３と中座１１６と対物レンズ１１０の先端の位置関係を観察者が把握することができるようになる。

以上に述べたように、本実施形態では、連続波長の光を発する通常のハロゲン光源を用いてステージカバー（固定カバー１２４と着脱カバー１２５）の内部の様子を目視することができる。

［変形例］
変形例では、バンドパスフィルター１４５に代えて別のバンドパスフィルターが、観察者１３５側の固定カバー１２４の側面に設けられている。バンドパスフィルターはバンドパスフィルター１４５同様な透過域を有している。さらに、ハロゲン光源１４４などの専用の補助照明光源は配置せずに、懐中電灯などでバンドパスフィルターを通してステージカバーの内部を照明する。

本変形例では、専用の補助照明光源を必要とせずに、ステージカバーの内部の様子を目視観察することができる。

これまで、図面を参照しながら本発明の実施形態を述べたが、本発明は、これらの実施形態に限定されるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において様々な変形や変更が施されてもよい。

本発明の第一実施形態による倒立型の全反射蛍光顕微鏡の縦断面図である。本発明の第二実施形態による正立型の全反射蛍光顕微鏡の縦断面図である。本発明の第三実施形態による倒立型の全反射蛍光顕微鏡の縦断面図である。本発明の第四実施形態による倒立型の全反射蛍光顕微鏡の縦断面図である。

符号の説明

１０１…レーザーヘッド、１０２…インターロックボックス、１０３…ファイバー固定部、１０４…導入部、１０５…ファイバー、１０６…射出部、１０７…レーザー投光管、１０８…集光レンズ、１０９…反射ミラー、１１０…対物レンズ、１１１…レボルバー、１１２…標本、１１３…ディッシュ、１１４…カバーガラス、１１５…培養液、１１６…中座、１１７…上ステージ、１１８…下ステージ、１１９…ステージ固定部、１２０…オイル、１２１…吸収フィルター、１２２…結像レンズ、１２３…ＣＣＤカメラ、１２４…固定カバー、１２５…着脱カバー、１２６…バンドパスフィルター、１２７…スイッチ、１２８…レバー、１２９…ピン、１３０…ケーブル、１３１…シャッター、１３２…ＬＥＤヘッド、１３３…ケーブル、１３４…ハンドスイッチ、１３５…観察者、１３６…コンデンサーレンズ、１３７…固定カバー、１３８…着脱カバー、１４０…バンドパスフィルター、１４１…コンデンサーベース、１４２…ケーブル、１４３…アダプター、１４４…ハロゲン光源、１４５…バンドパスフィルター。

Claims

標本を載置するためのステージを有する顕微鏡と、
標本を全反射照明するための全反射照明光学系と、
顕微鏡のステージをおおうように設けられたステージカバーと、
ステージカバーの内部を単色波長の光で照明する補助照明光源部とを備えており、
顕微鏡は標本を観察するための観察光学系を有し、観察光学系は対物レンズと吸収フィルターとを含んでおり、ステージカバーは固定カバーと着脱カバーとからなり、補助照明光源部は少なくとも一部が固定カバーに固定されており、着脱カバーは観察者がステージカバーの内部の様子を目視することを可能にするバンドパスフィルターを有し、バンドパスフィルターは、補助照明光源部が発する単色波長の光を透過するが、全反射照明光学系の光を透過せず、バンドパスフィルターの透過域は観察光学系内の吸収フィルターの透過域と重複していない、全反射顕微鏡。
請求項１において、顕微鏡が倒立顕微鏡であり、倒立顕微鏡はステージに載置された標本の下方に位置する対物レンズを有し、全反射照明光学系は対物レンズを含んでいる、全反射顕微鏡。
請求項１において、顕微鏡が正立顕微鏡であり、正立顕微鏡はステージに載置された標本の下方に位置するコンデンサーレンズを有し、全反射照明光学系はコンデンサーレンズを含んでいる、全反射顕微鏡。
請求項１において、補助照明光源部がＬＥＤ光源からなり、ＬＥＤ光源が固定カバーに固定されている、全反射顕微鏡。
請求項４において、固定カバーに対する着脱カバーの着脱に連動してＬＥＤ光源が点灯・消灯する、全反射顕微鏡。
請求項１において、補助照明光源部は、固定カバーに固定されたバンドパスフィルターと、連続波長の光を発する連続波長光源とを備えており、固定カバーのバンドパスフィルターは、着脱カバーのバンドパスフィルターと同様な透過域を有しており、連続波長光源から発せられた連続波長の光は固定カバーに設けられたバンドパスフィルターを通してステージカバーの内部を照明する、全反射顕微鏡。