JP4583505B1

JP4583505B1 - β−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースの製造方法

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Publication number: JP4583505B1
Application number: JP2010121793A
Authority: JP
Inventors: 昭山森; 秀紀岡田; 直樹川添; 徳夫塩見; 秀一小野寺; 敬司上野
Original assignee: 大高酵素株式会社
Priority date: 2010-05-27
Filing date: 2010-05-27
Publication date: 2010-11-17
Anticipated expiration: 2030-05-27
Also published as: JP2011246401A

Abstract

【課題】酵素法によらない新規な製造方法でβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを製造する方法を提供する。
【解決手段】糖質材料としてＤ−グルコース及びＤ−フルクトースを用い、酵素が存在しない条件下で、加熱して反応させてβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（β−Ｆｆ２−６Ｇ）および／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（α−Ｆｆ２−６Ｇ）を生成させ、反応物中からβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇを取得する。具体的には、加熱反応時に水を添加しないで加熱して反応させてβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇを製造することができる。
【選択図】なし

Description

β−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースの製造方法に関する。さらに詳しくは、本発明は、Ｄ−グルコースとＤ−フルクトースの共存下において、加熱条件下で酵素反応を利用することなく反応させてβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを製造する方法に関する。

β−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース( 以下「β−Ｆｆ２−６Ｇ」と略す場合もある) および／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（以下「α−Ｆｆ２−６Ｇ」と略す場合もある) を製造する方法に関して、非特許文献１には酵素を利用してβ−Ｆｆ２−６Ｇを製造する方法が報告されている。しかしながら、β−Ｆｆ２−６Ｇを酵素反応を利用せずに製造する方法、即ち、酵素を用いずに、或いは微生物を用いずに製造する方法は知られていない。さらには、糖質材料として単糖のみを使用し、単糖類のみからβ−Ｆｆ２−６Ｇを製造する方法は知られていない。

一方、α−Ｆｆ２−６Ｇ自体については、過去に報告が無く新規化合物であるため、当然にその製造方法は知られていない。

Journal of Chromatography A, 920 (2001) 299-308.

本発明は、酵素法によらない新規な製造方法でβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを製造する方法を提供することを目的とする。

上記した課題を解決するための主たる本発明のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（即ち、β−Ｆｆ２−６Ｇ）および／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（即ち、α−Ｆｆ２−６Ｇ）を製造する方法は、糖質材料としてＤ−グルコースおよびＤ−フルクトースを用い、酵素が存在しない条件下で、加熱して反応させてβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇを生成させ、反応物中からβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇを取得することを特徴とする。

さらに一つの具体的な本発明のβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇの製造方法は、加熱反応時に水を使用しない方法であり、前記主たる本発明のβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇの製造方法において、Ｄ−グルコースおよびＤ−フルクトースの混合物に対して水を添加することなく固相で加熱して反応させ、次いで反応物に水を添加し、溶解させてβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを含有する水溶液とし、該水溶液中からβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを取得することを特徴とする。

本発明のβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇの製造方法において加熱反応させる際の温度条件は、１００℃以上２００℃以下となる条件が好ましい。

β−Ｆｆ２−６Ｇは前記したように公知化合物であるが、α−Ｆｆ２−６Ｇは新規化合物である。α−Ｆｆ２−６Ｇの構造式を次式にて示す。

対比のため、公知化合物であるβ−Ｆｆ２−６Ｇの構造式を次式にて示す。

本発明のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（即ち、β−Ｆｆ２−６Ｇ）および／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（即ち、α−Ｆｆ２−６Ｇ）を製造する方法は、新規な製造方法を提供する点において有用であり、また、安価に製造することができ、製造時間も比較的短いため、製造効率が良い。

β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品についてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ分析チャートを示す図である。 β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品について１次元ＮＭＲとして¹Ｈ−ＮＭＲ分析のチャートを示す図である。 β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品について１次元ＮＭＲとして¹³Ｃ−ＮＭＲ分析のチャートを示す図である。 β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品について２次元ＮＭＲとしてＣＯＳＹの結果のチャートを示す図である。 β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品について２次元ＮＭＲとしてＥ−ＨＳＱＣの結果のチャートを示す図である。 β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品について２次元ＮＭＲとしてＨＳＱＣ−ＴＯＣＳＹの結果のチャートを示す図である。 β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品について２次元ＮＭＲとしてＨＭＢＣの結果のチャートを示す図である。水を添加することなく反応させてβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを製造した場合にβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを含む合成糖溶液（糖サンプル溶液）のＨＰＬＣ（ＯＤＳ−８０Ｔｓ×２本）分析チャートを示す図である。水を添加することなく反応させてβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを製造し活性炭カラム水溶出後、回収画分３のＨＰＬＣ分析チャート、ならびにβ−Ｆｆ２−６Ｇの標準品のＨＰＬＣ（分取用ＯＤＳ−８０Ｔｓ）分析チャートを示した図である。 β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品と糖１について１次元ＮＭＲとして¹Ｈ−ＮＭＲを比較したチャートを示す図である。水を添加することなく反応させてβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを製造した場合のα−Ｆｆ２−６Ｇの回収画分のＨＰＬＣ分析チャートを示す図である。糖２についてＨＰＡＥＣ分析チャートを示す図である。糖２についてＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ分析チャートを示す図である。糖２について１次元ＮＭＲとして¹Ｈ−ＮＭＲ分析のチャートを示す図である。糖２について１次元ＮＭＲとして¹³Ｃ−ＮＭＲ分析のチャートを示す図である。糖２について２次元ＮＭＲとしてＣＯＳＹの結果のチャートを示す図である。糖２について２次元ＮＭＲとしてＥ−ＨＳＱＣの結果のチャートを示す図である。糖２について２次元ＮＭＲとしてＨＳＱＣ−ＴＯＣＳＹの結果のチャートを示す図である。糖２について２次元ＮＭＲとしてＨＭＢＣの結果のチャートを示す図である。Ｄ−グルコースおよびＤ−フルクトースから合成したβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの温度の影響を、横軸を温度、縦軸をβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの相対合成量（％）をとったグラフを示す図である。Ｄ−グルコースおよびＤ−フルクトースから合成したβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの経時変化を、横軸を時間（分)、縦軸をβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの相対合成量（％）をとったグラフを示す図である。

本発明のβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇの製造に用いるＤ−グルコースには、 β−Ｄ−グルコース、無水のＤ−グルコース、 1 水和物のＤ−グルコース、アノマー混合のＤ−グルコースの何れでもよい。Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトースには市販のものが好適に利用できる。また、本発明で利用可能なＤ−グルコース、Ｄ−フルクトースの形態は、粉末状或いは顆粒の状態でもよい。

本発明において使用する水には、反応条件を厳密にする目的で精製水を用いることが好ましい。精製水には、ミリＱ水、蒸留水或いはイオン交換水を用いることができる。

β−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇを含有する水溶液の製造の好ましい実施の態様として、次の方法を示す。

（本発明のオリゴ糖を含有する水溶液の製造方法)
粉末状または顆粒状のＤ−グルコースとＤ−フルクトースを三角フラスコにとり混合し、水を添加しない状態で、１００℃以上２００℃以下、好ましくは１１０℃以上１８０℃以下、最も好ましくは１２０℃以上１５０℃以下に加熱する。加熱反応時の温度が１００℃未満であるとβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの十分な製造はされず、また２００℃を超えるとカラメル化は進み、 β−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの製造効率が落ちるため好ましくない。

加熱時間は好ましくは１０分から９０分間、さらに好ましくは１５分から４５分間加熱処理し、精製水を添加後溶解し、濾過してβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを生成した糖溶液を得ることができる。濾過は、ディスポーサブル０．４５μｍあるいは０．２２μｍフィルター（例えば、孔径０．４５μｍあるいは０．２２μｍのＤＩＳＭＩＣ−２５ｃｓＣｅｌｌｕｌｏｓｅＡｃｅｔａｔｅ）で濾過してβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを含有する水溶液とすることができる。このβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇを含有する水溶液は、 −４℃以下（好ましくは−８０℃以下）のフリーザーで凍結させることにより保存できる。

（β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品の調製)
β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品は以下のようにして調製した。

特許第３８７１２２２号公報の実施例１に記載されている方法により製造した植物エキス発酵液を用意した。該植物エキス発酵液を活性炭セライトカラムクロマトグラフィー（４．５ｃｍ×３５ｃｍ）に添加し、水により溶出させ、水で溶出した画分をさらにＡｍｉｄｅ−８０（商品名、東ソー株式会社製、カラムサイズ：７．８ｍｍ×３０ｃｍ、溶出：８０％アセトニトリル、カラム温度：８０℃、流速：２ｍＬ／ｍｉｎ、検出：示差屈折計) に供し、２７〜２８分に検出されたピークを分取した。以後この分析条件を「ＨＰＬＣ条件−Ａ」とする。得られた画分は濃縮し、凍結乾燥させた。

ただし、得られた画分について単一になっていない場合はＨＰＬＣ条件−Ａを繰り返し行い精製を行った。

前記工程で得られた凍結乾燥品について次のようにして化学構造を決定した。

該凍結乾燥物をＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させて以下の定性試験に用いた。

ＨＰＬＣ条件−Ａで得られたピークの分子量を確認するためにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ析を行った結果、得られたピークは３６５の（Ｍ＋Ｎａ）イオンピークを与えた。図１にＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ分析チャートを示す。

さらに、ＨＰＬＣ条件−Ａで得られたピークの構造を明らかにするため１次元ＮＭＲ分析および２次元ＮＭＲ分析を行った。それらのチャートを図２−図７に示す。また、得られたピークのケミカルシフトを表１に示す。

以上の結果から、ＨＰＬＣ条件−Ａで得られたピークは公知物質と同一のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（略語：β−Ｆｆ２−６Ｇ）であると認められた。

前記工程による、ＨＰＬＣ分析、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ分析およびＮＭＲ分析により単一にしたβ−Ｆｆ２−６Ｇを標準品として以後使用した。

（加熱処理によるβ−Ｆｆ２−６Ｇの合成）
Ｄ−グルコース（シグマ社製、純度９９％）３０ｇおよびＤ−フルクトース（シグマ社製、純度９９％）３０ｇを三角フラスコに測りとり、混合し、アルミホイルで蓋をし、予め１５０℃に温めておいた電気炉で６０分加熱した。加熱後、総量が３００ｍＬとなるようにＭｉｌｌｉ−Ｑ水を加えて溶解させることによりβ−Ｆｆ２−６Ｇ含有水溶液を得た。得られたβ−Ｆｆ２−６Ｇ含有水溶液を「糖サンプル溶液」とした。

前記工程で得られた糖サンプル溶液を以下の条件でＨＰＬＣ分析を行った。

ＨＰＬＣ装置（デュアルポンプ；ＤＰ−８０２０：商品名、東ソー株式会社製、検出器; ＲＩ−８０２０：商品名、東ソー株式会社製）、インテグレータ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｃｏｒｄｅｒ２１：商品名、東ソー株式会社製）、カラム（ＯＤＳ−８０Ｔｓｃｏｌｕｍｎ：商品名、４．６ｍｍ×２５ｃｍ、×２本、東ソー株式会社製）、溶出（Ｈ₂Ｏ、０．４ｍＬ／ｍｉｎ）、カラム温度（室温）、注入量（１０μＬ）。以後この分析条件を「ＨＰＬＣ条件−Ｂ」とする。

糖サンプル溶液のＨＰＬＣ分析のチャートを図８に示す。その結果、様々な物質が生成されていることが確認できる。

次に、前記工程で得られた糖サンプル溶液を活性炭セライトカラムクロマトグラフィー（４．８ｃｍ×３５ｃｍ）に添加し、画分１（約６００ｍＬ）、画分２（約７５０ｍＬ）、画分３（約２２５０ｍＬ）の総量３６００ｍＬの水で溶出させ、溶出させたサンプルは、それぞれ減圧濃縮装置を用いて濃縮した。

それぞれ濃縮したサンプルについて、分取用ＨＰＬＣ装置（デュアルポンプ；ＤＰ−８０２０：商品名、東ソー株式会社製、検出器; ＲＩ−８０２０：商品名、東ソー株式会社製）、インテグレータ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｃｏｒｄｅｒ２１：商品名、東ソー株式会社製）、カラム（ＯＤＳ−８０Ｔｓｃｏｌｕｍｎ：商品名、２０ｍｍ×２５ｃｍ、東ソー株式会社製）、溶出（Ｈ₂Ｏ、３．０ｍＬ／ｍｉｎ）、カラム温度（３５℃）、注入量（２００ｍＬ）を行った。以後この分析条件を「ＨＰＬＣ条件−Ｃ」とする。

その結果、水で溶出させた画分３の中に、 β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品と同溶出時間（２７ｍｉｎ頃）にピークが認められた。図９にクロマトグラフィーのチャートを示す。図９によると標準品であるβ−Ｆｆ２−６Ｇと同溶出時間にピークが検出されていることが確認できる。この目的のピークを糖１とした。

目的のピーク糖１について、ＨＰＬＣ条件−Ｃを行い４０回分取した。ただし、得られた画分について単一になっていない場合はＨＰＬＣ条件−Ｂを行い精製を行った。

得られた分取液を凍結濃縮乾燥し、糖１; １７８ｍｇの凍結乾燥物を得た。得られた凍結乾燥物をＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させて以下の定性試験に用いた。

ＨＰＬＣ条件−Ｃで得られたピークの分子量を確認するためにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ分析を行った結果、得られたピーク糖１は、３６５の（Ｍ＋Ｎａ）イオンピークを与えた。

次に、糖１の構造を確認するためＮＭＲ分析を行った結果、 β−Ｆｆ２−６Ｇの標準品との１次元ＮＭＲ分析の比較により、糖１はβ−Ｆｆ２−６Ｇと同一のチャートであることが認められた。それらのチャートを図1 0 に示す。

以上を総合して、糖１は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ分析、１次元ＮＭＲ分析の結果、公知物質のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（略語：β−Ｆｆ２−６Ｇ）と同一物質であると判定した。

（加熱処理によるα−Ｆｆ２−６Ｇの合成）
Ｄ−グルコース（シグマ社製、純度９９％）３０ｇおよびＤ−フルクトース（シグマ社製、純度９９％）３０ｇを三角フラスコに測りとり、混合し、アルミホイルで蓋をし、予め１５０℃に温めておいた電気炉で６０分加熱した。加熱後、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水を加えて総量が３００ｍＬになるように溶解させることにより糖サンプル溶液を得た。

前記加熱処理工程で得られた糖サンプル溶液を活性炭セライトカラムクロマトグラフィー（４．８ｃｍ×３５ｃｍ）に添加し、画分１（約６００ｍＬ）、画分２（約７５０ｍＬ）、画分３（約２２５０ｍＬ）の総量３６００ｍＬの水で溶出させ、溶出させたサンプルは、それぞれ減圧濃縮装置を用いて濃縮した。

それぞれ濃縮したサンプルについて、ＨＰＬＣ条件−Ｃを行った。その結果、水で溶出させた画分３の中に、未同定のピーク（２９ｍｉｎ頃）が検出されていることが認められたため、この目的のピークを糖２とした。それらのチャートを図１１に示す。

目的のピーク糖２について、ＨＰＬＣ条件−Ｃを行い４０回分取した。ただし、得られた画分について単一になっていない場合はＨＰＬＣ条件−Ｂを行い精製を行った。

得られた分取液を凍結濃縮乾燥し、糖２; ２３４ｍｇの凍結乾燥物を得た。得られた凍結乾燥物をＭｉｌｌｉ−Ｑ水に溶解させて以下の定性試験に用いた。

前記ＨＰＬＣ条件−Ｃにより得られた分取物（ＯＤＳ−８０Ｔｓ分取画分）のピークが単一の物質であることを確認するために、分取物について以下の条件でＨＰＡＥＣ分析を行った。

カラム（Ｄｉｏｎｅｘ，ＣａｒｂｏＰａｃＰＡｌ：商品名、４．０ｍｍＩＤ×２５０ｍｍ、ダイオネックス株式会社製）、ガードカラム（Ｄｉｏｎｅｘ，ＣａｒｂｏＰａｃ：商品名、ダイオネックス株式会社製）、移動層Ａ（１５０ｍＭＮａＯＨ）、移動層Ｂ（５００ｍＭｓｏｄｉｕｍａｃｅｔａｔｅｉｎ１５０ｍＭＮａＯＨ）、グラジエント条件（０→１分：２５ｍＭ、１→２分：２５−５０ｍＭ、２→２０分：５０−２０００ｍＭ、２０−２２分：５００ｍＭ、２２−３０分：２５ｍＭ）、カラム温度（室温）、注入量（２５μＬ）、測定電位（（Ｅｌ）：０．１Ｖ（５００ｍｓ））、酸化電位（（Ｅ２）：０．６Ｖ（１００ｍｓ））、還元電位（（Ｅ３）：−０．６Ｖ（５０ｍｓ））。以後この分析条件を「ＨＰＬＣ条件−Ｄ」とする。

得られた分析結果を分取画分のＨＰＡＥＣ分析のチャートとして図１２に示す。図１２によれば、溶出時間９．８分頃に単一のピークが検出されていることが確認できる。

また、ショ糖の相対保持時間を１．０とした時の分取したピークの相対保持時間は１．７７であり、既知の物質の相対保持時間の中に該当するものはなかった。

（化学構造の決定）
ＨＰＬＣ条件−Ｃで得られたピークの分子量を確認するためにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ分析を行った。糖２のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳの結果のチャートを図１３に示す。図１３によれば、得られたピーク糖２は、３６５の（Ｍ＋Ｎａ）イオンピークを与えた。

次に、糖２の構造を確認するため１次元ＮＭＲ分析および２次元ＮＭＲ分析を行った。それらのチャートを図１４−図１９に示す。また、糖２のケミカルシフトを表２に示す。

以上を総合して、ＨＰＬＣ条件−Ｄ、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳおよびＮＭＲ分析により、ＨＰＬＣ条件−Ａで得られたピークは新規化合物であるα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノース（略語：α−Ｆｆ２−６Ｇ）であると決定した。

（各温度における加熱処理によるβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの合成）
Ｄ−グルコース（シグマ社製、純度９９％）１００ｍｇおよびＤ−フルクトース（シグマ社製、純度９９％）１００ｍｇをガラス試験管に測りとり、混合し、アルミホイルで蓋をし、反応温度を１１０℃から１８０℃までの１０℃刻みに１１０℃、１２０℃、１３０℃、１４０℃、１５０℃、１６０℃、１７０℃、１８０℃に温めておいたサーモバスヒーターでそれぞれ６０分間加熱し、加熱後、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水を１ｍＬ加え、溶解させることによりβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇ含有水溶液を得た。得られたβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇ含有水溶液を「糖サンプル溶液」とした。

前記工程で得られた糖サンプル溶液について、前記実施例１のＨＰＬＣ条件−Ｂを行った。 β−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの最も多く製造される温度を１００％とし、各温度におけるβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの濃度のグラフ（相対合成量％）のグラフを図２０に示す。

図２０によれば、 β−Ｆｆ２−６Ｇの合成温度は、１１０℃以上１８０℃以下が好ましく、さらに好ましくは１１０℃以上１５０℃以下、最も好ましくは１２０℃以上１４０℃以下、最大合成量（１００％）が１３０℃であることが分かる。また、 α−Ｆｆ２−６Ｇの合成温度は、１１０℃以上１８０℃以下が好ましく、さらに好ましくは１１０℃以上１５０℃以下、最も好ましくは１２０℃以上１４０℃以下、最大合成量（１００％）が１３０℃であることが分かる。

（各反応時間における加熱処理によるβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの合成）
前記実施例３の加熱処理によるβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの合成において、１４０℃での加熱時の反応時間を０、１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１８０分間とした以外は前記実施例３と同様に行い、 β−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇ含有水溶液を得た。得られたβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇ含有水溶液を「糖サンプル溶液」とした。

前記工程で得られた糖サンプル溶液について、前記実施例１のＨＰＬＣ条件−ＡでＨＰＬＣを行った。 β−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇが最も多く製造される温度を１００％とし、各反応時間におけるβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの濃度のグラフ（相対合成量％）のグラフを図２１に示す。図２１によれば、 β−Ｆｆ２−６Ｇの合成時の加熱時間は好ましくは１５分〜９０分、さらに好ましくは１５分〜６０分間であることが分かる。また、 α−Ｆｆ２−６Ｇの合成時の加熱時間は好ましくは１５分〜９０分、さらに好ましくは１５分〜６０分間であることが分かる。

（グルコースとフルクトースの比率による合成量の違い)
前記加熱処理によるβ−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの合成方法において、Ｄ−グルコースとＤ−フルクトースの比率をそれぞれ、Ｄ−グルコース：Ｄ−フルクトース＝１：０、１：１、１：２、２：１、０：１と変えて、 β−Ｆｆ２−６Ｇおよびα−Ｆｆ２−６Ｇの製造量を確認した。その結果を表３にて示す。

表３によれば、β−Ｆｆ２−６Ｇは、Ｄ−グルコース：Ｄ−フルクトースが１：１、１：２、２：１の時にβ−Ｆｆ２−６Ｇが製造されることが分かる。Ｄ−グルコース：Ｄ−フルクトース＝１〜２：２〜１が好ましく、さらに好ましくはＤ−グルコース：Ｄ−フルクトース＝１：２であることが分かる。また、 α−Ｆｆ２−６Ｇは、Ｄ−グルコース：Ｄ−フルクトースが１：１、１：２、２：１の時にα−Ｆｆ２−６Ｇが製造されることが分かる。Ｄ−グルコース：Ｄ−フルクトース＝１〜２：２〜１が好ましく、さらに好ましくはＤ−グルコース：Ｄ−フルクトース＝２：１であることが分かる。

本発明はβ−Ｆｆ２−６Ｇおよび／またはα−Ｆｆ２−６Ｇの効率のよい製造方法を提供できる。

Claims

糖質材料としてＤ−グルコースおよびＤ−フルクトースを用い、酵素が存在しない条件下で、加熱して反応させてβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを生成させ、反応物中からβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを取得することを特徴とする、β−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースの製造方法。
請求項１に記載のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースの製造方法において、
Ｄ−グルコースおよびＤ−フルクトースの混合物に対して水を添加することなく固相で加熱して反応させ、次いで反応物に水を添加し溶解させて、 β−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを含有する水溶液とし、該水溶液中からβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースを取得することを特徴とする、β−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースの製造方法。
前記加熱する際の温度条件は、１００℃以上２００℃以下となる条件である請求項１又は２に記載のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースの製造方法。
前記Ｄ−グルコースおよびＤ−フルクトースが粉末状または顆粒状である請求項１乃至３のいずれか１項に記載のβ−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースおよび／またはα−Ｄ−フルクトフラノシル−（２→６）−Ｄ−グルコピラノースの製造方法。