JP4578814B2 - 標的対象物の自動探索回収装置 - Google Patents
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Description
を有する標的対象物細胞の回収方法が提供される。
第2の濃度レベル画像を取得するステップと、前記第1の濃度レベル画像と前記第2の濃度レベル画像との減算処理を行い第3の濃度レベル画像を取得するステップと、前記第3の濃度レベル画像に基づいて第1の濃度ヒストグラムを作成し、第1の2値画像(差分画像)を作成し、該第1の2値画像の連結成分ラベリングを行うステップと、ラベルの連結成分に面積がノズル領域の基準値より大きい場合に、ノズル領域の中心座標を取得するステップと、
画像中心座標までの距離(Δx、Δy)を算出するステップと、顕微鏡視野中心座標までの距離(ΔX、ΔY)を算出するステップと、前記(Δx、Δy)に基づいて前記(ΔX、ΔY)を補正することによりノズル先端位置を補正するステップとを有する標的対象物細胞の回収方法が提供される。
まず、標的細胞探索、回収手順例について図3、図4を参照して説明する。ステップS1に示すように、多数のスライドグラス(例えば50枚)23をストッカ(カセットホルダ)41内に収納する。ストッカ41をエレベータ(図示せず)に取り付ける(ステップS2)。高精度モニタディスプレイ55上においてステップS3に示すように標的の探索条件を入力し、搬送装置31を用いて自動的にスライドグラス23を、光学顕微鏡1上の試料台(XYステージ)17上にローディングする(ステップS4)。自動焦点機能によりスライドグラス23上の試料に焦点を合わせる(ステップS5)。光学顕微鏡1より得られるデジタル画像を取り込み(ステップS6)、画像処理により標的細胞を探索する(ステップS7)。標的細胞の特徴となる形状、色、サイズ等により画像処理を行い、標的細胞と他の細胞を選別する。ステップS7で、標的細胞検索ができた場合にはステップS9に進み、探索した標的細胞の画像と位置座標に関する情報を記憶装置(データベース)51c(図2)に記録する。
まず、CCDカメラ7を用いて回収前画像(図22)を取得する(ステップS201)。次いで、回収前画像に基づいて、濃度レベル画像1(L1=(R+G+B)/3)を作成する(ステップS202)。ノズルを顕微鏡視野の原点(顕微鏡視野の中心座標)に合わせる(ステップS203)。CCDカメラ7からノズル画像(図23)を取得する(ステップS204)。次いで、ノズル画像から濃度レベル画像2(L2=(R+G+B)/3)を作成する(ステップS205)。ステップS206において、上記濃度レベル画像1と上記濃度レベル画像2とに基づいて、減算処理を行い(L3=L1-L2)、濃度レベル画像3(図24)を作成する。ステップS207において、濃度レベル画像3から濃度ヒストグラム1を作成し、濃度ヒストグラム1から濃度基準値1を決定する。
Claims (7)
- 対象物を検査する対物レンズを備えるとともに、撮像装置と関連付けされる顕微鏡と、
前記顕微鏡における検査可能領域内に配置された試料台であって、XY移動機構を有し、標的対象物を含む試料を載せた試料板を前記顕微鏡により観察できる位置に置くことができるように形成された試料台と、
前記試料板を挟んで前記対物レンズと略対向する位置に配置され、前記試料から探索された前記標的対象物を回収するノズルと、
前記撮像装置により取得した前記標的対象物及び前記ノズルの画像データを解析する解析部と、探索済みの前記標的対象物及びノズルに関する画像データ及びその位置を記憶する記憶部と、を有する画像処理ユニットと、
前記対物レンズによる前記探索済みの標的対象物と前記ノズルに対する焦点合わせと、前記試料板と前記ノズルとのXY面内における相対位置を制御する制御ユニットと
を含む標的対象物の自動探索回収装置であって、
前記試料台には、前記ノズル側の内径が前記対物レンズ側の内径よりも大きい開口部が形成されており、
さらに、前記顕微鏡は、前記焦点合わせ用のオートフォーカス機構を備えており、
前記試料板表面と前記ノズル先端との位置を前記オートフォーカス機構により検出することにより、前記対物レンズから前記試料板表面までの法線方向の距離Z1と前記対物レンズから前記ノズル先端までの前記法線方向の距離Z2とを求め、前記試料板表面と前記ノズル先端との間の前記法線方向の距離Z3をZ2−Z1より算出することを特徴とする標的対象物の自動探索回収装置。 - さらに、前記ノズルを前記試料板に対して該試料板の面内方向に固定するとともに、前記試料板の前記法線方向に移動可能とする移動機構を有し、前記ノズルの先端を前記顕微鏡により観察することにより前記ノズルの前記面内方向のずれを補正する面内方向位置補正機能を備え、
前記面内方向位置補正機能は、
回収前画像を取得し、前記ノズルを顕微鏡視野の中心座標に合わせ、ノズル画像を取得し、回収前画像とノズル画像の差分画像を作成し、前記差分画像によりノズル領域を取得し、前記ノズル領域の中心座標を取得し、前記ノズル領域の中心座標から画像中心座標までの距離(Δx、Δy)を算出し、前記距離(Δx、Δy)に基づいて、前記ノズル領域の中心座標から顕微鏡視野中心座標までの距離(ΔX、ΔY)を算出し、前記(ΔX、ΔY)に基づいてノズル先端位置を補正する制御を行うことを特徴とする請求項1に記載の標的対象物の自動探索回収装置。 - 前記ノズルは、前記試料板から対象試料を剥離するための適量の剥離液を溜めるとともに、前記標的対象物に対して吐出し、前記標的対象物を前記剥離液とともに吸引する連通口を有していることを特徴とする請求項1又は2に記載の標的細胞の自動探索回収装置。
- さらに、前記試料台上に前記試料板を多数枚収容できる収容部が設けられ、前記試料板を前記試料台に設置して検査可能な状態にしたり、前記ストッカの収容部内に収容したりする動作を行うための作動アームを備えた搬送装置を有することを特徴とする請求項1から3までのいずれか1項に記載の標的細胞の自動探索回収装置。
- 請求項1から4までのいずれか1項に記載の自動探索回収装置を用いた標的対象物細胞の回収方法であって、
前記ノズルの先端部分を前記標的対象物に位置合わせを行った後に、前記ノズルから剥離液を前記スライドグラス上の標的対象物に滴下するステップと、
該剥離液とともに前記標的対象物を前記ノズルにより回収するステップと、
回収した前記標的対象物を、前記剥離液とともにマイクロウェルプレート又はバイオチップ上に移送するステップと
を有する標的対象物細胞の回収方法。 - 請求項5に記載の方法をコンピュータに実行させるためのプログラム。
- 前記標的対象物が妊婦血液中に含まれる胎児由来の有核赤血球であることを特徴とする請求項1から4までのいずれか1項に記載の標的細胞の自動探索回収装置。
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