JP4485799B2 - メイタンシノイド産生を増加する突然変異アクチノシネマ・プレチオスム（Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａｐｒｅｔｉｏｓｕｍ）株 - Google Patents
メイタンシノイド産生を増加する突然変異アクチノシネマ・プレチオスム（Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａｐｒｅｔｉｏｓｕｍ）株 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4485799B2 JP4485799B2 JP2003564206A JP2003564206A JP4485799B2 JP 4485799 B2 JP4485799 B2 JP 4485799B2 JP 2003564206 A JP2003564206 A JP 2003564206A JP 2003564206 A JP2003564206 A JP 2003564206A JP 4485799 B2 JP4485799 B2 JP 4485799B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- strain
- ansamitocin
- plethiosum
- actinocinema
- atcc
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 25
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 8
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 claims description 10
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 claims description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims 1
- OPQNCARIZFLNLF-UHFFFAOYSA-N ansamitocin P-3 Natural products CN1C(=O)CC(OC(=O)C(C)C)C2(C)OC2C(C)C(OC(=O)N2)CC2(O)C(OC)C=CC=C(C)CC2=CC(OC)=C(Cl)C1=C2 OPQNCARIZFLNLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 23
- OPQNCARIZFLNLF-JBHFWYGFSA-N ansamitocin P3 Chemical compound CO[C@@H]([C@@]1(O)C[C@H](OC(=O)N1)[C@@H](C)[C@@H]1O[C@@]1(C)[C@@H](OC(=O)C(C)C)CC(=O)N1C)\C=C\C=C(C)\CC2=CC(OC)=C(Cl)C1=C2 OPQNCARIZFLNLF-JBHFWYGFSA-N 0.000 abstract description 23
- 241000143227 Actinosynnema pretiosum Species 0.000 abstract description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 2
- PVNFMCBFDPTNQI-UIBOPQHZSA-N [(1S,2R,5S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-chloro-21-hydroxy-12,20-dimethoxy-2,5,9,16-tetramethyl-8,23-dioxo-4,24-dioxa-9,22-diazatetracyclo[19.3.1.110,14.03,5]hexacosa-10,12,14(26),16,18-pentaen-6-yl] acetate [(1S,2R,5S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-chloro-21-hydroxy-12,20-dimethoxy-2,5,9,16-tetramethyl-8,23-dioxo-4,24-dioxa-9,22-diazatetracyclo[19.3.1.110,14.03,5]hexacosa-10,12,14(26),16,18-pentaen-6-yl] 3-methylbutanoate [(1S,2R,5S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-chloro-21-hydroxy-12,20-dimethoxy-2,5,9,16-tetramethyl-8,23-dioxo-4,24-dioxa-9,22-diazatetracyclo[19.3.1.110,14.03,5]hexacosa-10,12,14(26),16,18-pentaen-6-yl] 2-methylpropanoate [(1S,2R,5S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-chloro-21-hydroxy-12,20-dimethoxy-2,5,9,16-tetramethyl-8,23-dioxo-4,24-dioxa-9,22-diazatetracyclo[19.3.1.110,14.03,5]hexacosa-10,12,14(26),16,18-pentaen-6-yl] propanoate Chemical compound CO[C@@H]1\C=C\C=C(C)\Cc2cc(OC)c(Cl)c(c2)N(C)C(=O)C[C@H](OC(C)=O)[C@]2(C)OC2[C@H](C)[C@@H]2C[C@@]1(O)NC(=O)O2.CCC(=O)O[C@H]1CC(=O)N(C)c2cc(C\C(C)=C\C=C\[C@@H](OC)[C@@]3(O)C[C@H](OC(=O)N3)[C@@H](C)C3O[C@@]13C)cc(OC)c2Cl.CO[C@@H]1\C=C\C=C(C)\Cc2cc(OC)c(Cl)c(c2)N(C)C(=O)C[C@H](OC(=O)C(C)C)[C@]2(C)OC2[C@H](C)[C@@H]2C[C@@]1(O)NC(=O)O2.CO[C@@H]1\C=C\C=C(C)\Cc2cc(OC)c(Cl)c(c2)N(C)C(=O)C[C@H](OC(=O)CC(C)C)[C@]2(C)OC2[C@H](C)[C@@H]2C[C@@]1(O)NC(=O)O2 PVNFMCBFDPTNQI-UIBOPQHZSA-N 0.000 description 23
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 18
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 14
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 14
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 13
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 13
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 10
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- -1 isobutyryl Chemical group 0.000 description 9
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 7
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- QWPXBEHQFHACTK-KZVYIGENSA-N (10e,12e)-86-chloro-12,14,4-trihydroxy-85,14-dimethoxy-33,2,7,10-tetramethyl-15,16-dihydro-14h-7-aza-1(6,4)-oxazina-3(2,3)-oxirana-8(1,3)-benzenacyclotetradecaphane-10,12-dien-6-one Chemical compound CN1C(=O)CC(O)C2(C)OC2C(C)C(OC(=O)N2)CC2(O)C(OC)\C=C\C=C(C)\CC2=CC(OC)=C(Cl)C1=C2 QWPXBEHQFHACTK-KZVYIGENSA-N 0.000 description 5
- KXRMREPJUITWDU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dimethyl-3-oxophenoxazine-1,9-dicarboxylic acid Chemical compound N1=C2C(C(O)=O)=C(N)C(=O)C(C)=C2OC2=C1C(C(O)=O)=CC=C2C KXRMREPJUITWDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QWPXBEHQFHACTK-UHFFFAOYSA-N Maytansinol Natural products CN1C(=O)CC(O)C2(C)OC2C(C)C(OC(=O)N2)CC2(O)C(OC)C=CC=C(C)CC2=CC(OC)=C(Cl)C1=C2 QWPXBEHQFHACTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 4
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 125000004063 butyryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 4
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000187681 Nocardia sp. Species 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 241000143231 Actinosynnema pretiosum subsp. auranticum Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000234646 Cyperaceae Species 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AMIMRNSIRUDHCM-UHFFFAOYSA-N Isopropylaldehyde Chemical compound CC(C)C=O AMIMRNSIRUDHCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 229940035429 isobutyl alcohol Drugs 0.000 description 2
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N (2R,6R)-form-2.6-Diaminoheptanedioic acid Natural products OC(=O)C(N)CCCC(N)C(O)=O GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000123663 Actinosynnema Species 0.000 description 1
- 210000003771 C cell Anatomy 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000549168 Maytenus Species 0.000 description 1
- BOYNDXJJKZMFBK-PRWXLFGZSA-N N-Demethylansamitocin P-3 Chemical compound CO[C@@H]([C@@]1(O)C[C@H](OC(=O)N1)[C@@H](C)[C@@H]1O[C@@]1(C)[C@@H](OC(=O)C(C)C)CC(=O)N1)\C=C\C=C(C)\CC2=CC1=C(Cl)C(OC)=C2 BOYNDXJJKZMFBK-PRWXLFGZSA-N 0.000 description 1
- GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N N-methyl-L-alanine Chemical class C[NH2+][C@@H](C)C([O-])=O GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 241000604373 Ovatus Species 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L calcium chloride dihydrate Chemical compound O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940052299 calcium chloride dihydrate Drugs 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000012262 fermentative production Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N meso-2,6-diaminopimelic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- BFBPISPWJZMWJN-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[(7-hydroxy-3,7-dimethyloctylidene)amino]benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1N=CCC(C)CCCC(C)(C)O BFBPISPWJZMWJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035040 seed growth Effects 0.000 description 1
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- POSZUTFLHGNLHX-KSBRXOFISA-N tris maleate Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)\C=C/C(O)=O POSZUTFLHGNLHX-KSBRXOFISA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
発明の分野
本発明は、アクチノシネマ・プレチオスム（Actinosynnema pretiosum）種の突然変異細菌株でPF4-4（ATCC PTA-3921）株と名付けられた微生物であって、従来知られる株と比較して改良された収率でアンサマイトシン（ansamitocin）P-3などのメイタンシノイド・アンサマイトシン（maytansinoid ansamitocin）を産生することができる上記微生物、ならびに上記株PF4-4からメイタンシノイド・アンサマイトシンを産生する方法に関する。
本発明は、アクチノシネマ・プレチオスム（Actinosynnema pretiosum）種の突然変異細菌株でPF4-4（ATCC PTA-3921）株と名付けられた微生物であって、従来知られる株と比較して改良された収率でアンサマイトシン（ansamitocin）P-3などのメイタンシノイド・アンサマイトシン（maytansinoid ansamitocin）を産生することができる上記微生物、ならびに上記株PF4-4からメイタンシノイド・アンサマイトシンを産生する方法に関する。
発明の背景
アクチノシネマ・プレチオスム種の細菌は細胞障害性メイタンシノイド抗生物質を産生する（Higashideら, Nature 270, 721-722, 1977）。この種の細菌は元来、ノカルジア（Nocardia）種として分類されかつ寄託されていた。しかし、その後の特性決定により、ミコール酸の不在、III/C型細胞壁（メソ-ジアミノピメリン酸および診断上重要でない炭水化物）、胞子嚢の欠如、および運動性エレメントの形成が実証されて、これらの株がアクチノシネマ（Actinosynnema）属のメンバーであることが示された（Hasegawaら, 「運動性放線菌類：アクチノシネマ・プレチオスム・プレチオスム亜種.新種.新亜種、およびアクチノシネマ・プレチオスム・アウランチクム亜種．新亜種（Motile Actinomycetes: Actinosynnema pretiosum subsp. pretiosum sp nov., subsp. nov., and Actinosynnema pretiosum subsp. auranticum subsp. nov.）」, Int. J. System. Bacteriol. 33(2):314-320, 1983）。
アクチノシネマ・プレチオスム種の細菌は細胞障害性メイタンシノイド抗生物質を産生する（Higashideら, Nature 270, 721-722, 1977）。この種の細菌は元来、ノカルジア（Nocardia）種として分類されかつ寄託されていた。しかし、その後の特性決定により、ミコール酸の不在、III/C型細胞壁（メソ-ジアミノピメリン酸および診断上重要でない炭水化物）、胞子嚢の欠如、および運動性エレメントの形成が実証されて、これらの株がアクチノシネマ（Actinosynnema）属のメンバーであることが示された（Hasegawaら, 「運動性放線菌類：アクチノシネマ・プレチオスム・プレチオスム亜種.新種.新亜種、およびアクチノシネマ・プレチオスム・アウランチクム亜種．新亜種（Motile Actinomycetes: Actinosynnema pretiosum subsp. pretiosum sp nov., subsp. nov., and Actinosynnema pretiosum subsp. auranticum subsp. nov.）」, Int. J. System. Bacteriol. 33(2):314-320, 1983）。
細菌により産生されたメイタンシノイド類（maytansinoids）はアンサマイトシン類（ansamitocins）と呼ばれ、式（I）の、置換基RおよびR1により示されるC-3およびC-14位置の置換基によりお互いに区別される抗腫瘍ベンゼノイドアンサマイトシン抗生物質の１グループを含む。
アクチノシネマの複数株、例えばATCC 315651、アクチノシネマ・プレチオスム・アウランチクム亜種（Actinosynnema pretiosum subsp. auranticum）が寄託されている。ATCC 31565の代謝、生理学およびメイタンシノイド産生の諸特性は、それぞれ1982年5月25日、1984年5月22日に発行されたHasegawaらに対する米国特許第4,331,598号および第4,450,234号に記載されている。ATCC 31565はグラム陽性菌であり、広範囲の炭素源で成長することができ、主にメイタンシノイドとC-14-ヒドロキシメチル置換メイタンシノイドとの混合物を産生し、それらを増殖培地から低収率で収穫することができる。
元をただせば、メイタンシノイドはアフリカの植物から単離された（Kupchanら, J. Amer. Chem. Soc. 94, 5294-5295, 1972）。かかる植物供給源からのメイタンシノイドの産生は、メイタンシノイドが非常に少量しか存在しないため困難なことであった。その後、メイタンシノイドを産生する微生物がカヤツリグサ科草本の葉から単離されて、ノカルジア属ノカルジア種の新株、C-15003（N-1）株として分類された。この株はATCC 31281として寄託され、1979年1月30日に発行されたHashimotoらに対する米国特許第4,137,230号、および1979年7月31日に発行されたHigashideらに対する米国特許第4,162,940号に開示された。この細菌からのメイタンシノイドの精製は植物供給源からの精製と比較して、より少ないステップ数しか必要でなく収率の増加が得られる。
第２のメイタンシノイド産生株がカヤツリグサ科草本の葉から単離され、ノカルジア種（Nocardia sp）、C-14482 (N-1001)株と名付けられ、ATCC 31309として寄託された。この株は、1981年9月29日に発行されたHigashideらに対する米国特許第4,292,309号に開示された。
第３の株は、C-14482と名付けられたATCC 31309から、突然変異プロセスにより誘導された。この第３の株は、ノカルジア種N-1231株と名付けられ、ATCC 31565として寄託された。1982年5月25日に発行されたHasegawaらに対する米国特許第4,331,598号、および1984年5月22日に発行されたHasegawaらに対する米国特許第4,450,234号はATCC 31565を開示する。
上記ノカルジア種株の３種は全て、小量のアンサマイトシンと呼ばれるメイタンシノイドを産生する。従って、ノカルジア種C-15003株を用いてアンサマイトシンP-3を産生する方法が開示されている（例えば、1982年10月26日に発行されたHatanoらに対する米国特許第4,356,265号；およびHatanoら, 「アンサマイトシンP-2、P-3およびP-4の選択的蓄積、およびそれらのアシル部分の生合成起源（Selective accumulation of ansamitocins P-2, P-3 and P-4, and biosynthetic origins of their acyl moieties）」, Agric. Biol. Chem. 48, 1721-1729, 1984を参照）。これらの方法によれば、比較的少量の所望の産物、アンサマイトシンP-3が、ほぼ100mg/L醗酵ブロスの収率で得られる。
メイタンシノイドは強力な細胞傷害活性を有し、細胞結合薬との複合体で送達すると強い抗腫瘍活性を実証している。例えば、1993年5月4日に発行されたChariらに対する米国特許第5,208,020号は、細胞を標的とする抗体のような作用薬と連結した１以上のメイタンシノイドを含む細胞傷害薬であって、メイタンシノイドがこの特異的細胞結合薬を介して選択した細胞集団の死滅に関わる上記細胞傷害薬を開示している。同様に、1995年5月16日に発行された同じくChariらに対する米国特許第5,416,064号は、切断しうるジスルフィド結合を介して細胞結合薬と結合したメイタンシノイドであって、これによりメイタンシノイドが細胞内で放出される新しいメイタンシノイドを開示している。これらの複合体は様々な癌を治療する医薬的効能を有する。
メイタンシノイドは多数の治療用途を有するので、例えば、上記および米国特許第5,208,020号および第5,416,064号に開示された抗癌薬の商業的開発を容易にするため、改良された収率と十分な量でアンサマイトシンを産生できる新しい細菌株に対するニーズが存在する。本発明はこのニーズ以上のことを満たすものであり、当業者が以下の開示と実施例を読めばそれは明らかになるであろう。
発明の概要
本発明は、ATCC PTA-3921として寄託されかつ本明細書では「PF4-4」と呼ばれる、メイタンシノイドの産生量を増加する細菌株を提供する。PF4-4は、親株N-1231（ATCC 31565）から、紫外光（UV光）、1-メチル-3-ニトロ-1-ニトロソ-グアニジン（MNNG）を用いた突然変異およびメイタンシノイド産生の増加に対する選択により取得した。
本発明は、ATCC PTA-3921として寄託されかつ本明細書では「PF4-4」と呼ばれる、メイタンシノイドの産生量を増加する細菌株を提供する。PF4-4は、親株N-1231（ATCC 31565）から、紫外光（UV光）、1-メチル-3-ニトロ-1-ニトロソ-グアニジン（MNNG）を用いた突然変異およびメイタンシノイド産生の増加に対する選択により取得した。
従って、第一の実施形態においては、本発明は、親株より遥かに高い量のアンサマイトシンを産生するアクチノシネマ・プレチオスム種の突然変異細菌株（PF4-4）を含むものである。
本発明のこの実施形態は、親株と比較して5〜10倍の収率改良となる500mg/L以上のアンサマイトシンP-3を産生することができる。
この実施形態はさらに他のアンサマイトシン種、例えばアンサマイトシンP-2およびP-4の実質的な量を産生することができる。さらに、本発明の実施形態により産生される特定のアンサマイトシン種の相対量は、増殖を支持するために用いる炭素源の選択を介して合理的に操作することができる。
この実施形態は多様な炭素源により増殖することができ、メイタンシノイドの産生量を増加する能力を除くと、その形態学、物理および代謝特性は親株（ATCC 31565）と実質的に類似している。
従って、本発明の１つの目的は、メイタンシノイドの産生を増強することができる細菌株であって、かかるメイタンシノイドが高度に細胞傷害性でありかつ癌を含む多数の疾患の治療において、例えば細胞特異的成分との複合体の形態で、治療薬として利用することができる上記細菌株を提供することである。
本発明の第２の目的は、商業的開発を容易にするのに十分な量のアンサマイトシンを産生しうるように、メイタンシノイドの産生を増強することができる新しい細菌株を提供することである。
第３の目的は、PF4-4株を適当な炭素源を含む増殖培地中で培養することにより、上記株から複数種のメイタンシノイド・アンサマイトシンを産生する方法を提供することである。この方法により産生される複数種のメイタンシノイド・アンサマイトシンの比率は炭素源の選択により予め決定することができる。
発明の詳細な説明
本発明は、PF4-4（ATCC PTA-3921）と名付けたアクチノシネマ・プレチオスム（Actinosynnema pretiosum）種の突然変異細菌株である微生物であって、親株（ATCC 31565）を含む従来公知の株と比較して改良された収率で、アンサマイトシンP-3および他のアンサマイトシンなどのアンサマイトシンを含むメイタンシノイドを産生することができる上記微生物を含むものである。
本発明は、PF4-4（ATCC PTA-3921）と名付けたアクチノシネマ・プレチオスム（Actinosynnema pretiosum）種の突然変異細菌株である微生物であって、親株（ATCC 31565）を含む従来公知の株と比較して改良された収率で、アンサマイトシンP-3および他のアンサマイトシンなどのアンサマイトシンを含むメイタンシノイドを産生することができる上記微生物を含むものである。
本発明の細菌株PF4-4は、親株ATCC 31565からUV光、1-メチル-3-ニトロ-1-ニトロソ-グアニジン（MNNG）および選択を用いて、親株より実質的に高い量のメイタンシノイドを産生する遺伝子的に改変された細菌株を誘導する突然変異により作製した。従って、PF4-4は醗酵増殖において、500mg/L以上のアンサマイトシンP-3を産生することができ、この量は、同じ条件下で親株が産生する量の5-10倍以上である。
本発明のアクチノシネマ・プレチオスム株（本明細書ではPF4-4）は、ブダペスト条約に関する条項のもとで2001年12月11日にAmerican Type Culture Collection（Rockville Maryland）に寄託し、受託番号ATCC PTA-3921が与えられた。
本発明のアクチノシネマ・プレチオスム株PF4-4は、突然変異によりATCC 31565から誘導したが、親株ATCC 31565それ自身は、1981年9月29日に発行されたHigashideらに対する米国特許第4,292,309号に開示されたアクチノシネマ・プレチオスム株ATCC 31309から誘導したものである。上記のごとく、この種の細菌は、最初にノカルジア種として分類されかつ寄託されたが、その後の特性決定により、これらの株がアクチノシネマ属のメンバーであることを示された（Hasegawa, T.ら, 「運動性放線菌類：アクチノシネマ・プレチオスム・プレチオスム亜種．新種.新亜種、およびアクチノシネマ・プレチオスム・アウランチクム亜種．新亜種（Motile Actinomycetes: Actinosynnema pretiosum subsp. pretiosum sp nov., subsp. nov., and Actinosynnema pretiosum subsp. auranticum subsp. nov.）」, Int. J. System. Bacteriol. 33(2):314-320, 1983）。
本発明の文脈において、用語「メイタンシノイド（maytansinoid）」は、最初にアフリカ低木メイテヌス・オバツス（Maytenus ovatus）から単離された高度に細胞傷害性薬物のクラスを意味するとともに、さらにメイタンシノール（maytansinol）および天然のメイタンシノールのC-3エステル（米国特許第4,151,042号）；合成のメイタンシノールのC-3エステル類似体（Kupchanら, J. Med. Chem. 21:31-37, 1978；Higashideら, Nature 270:721-722, 1977；Kawaiら, Chem. Farm. Bull. 32:3441-3451；および米国特許第5,416,064号）；単純なカルボン酸のC-3エステル（米国特許第4,248,870号；第4,265,814号；第4,308,268号；第4,308,269号；第4,309,428号；第4,317,821号；第4,322,348号；および第4,331,598号）；およびN-メチル-L-アラニンの誘導体とのC-3エステル（米国特許第4,137,230号；第4,260,608号；およびKawaiら, Chem. Pharm Bull. 12:3441, 1984）を含む。
本発明の文脈において、用語「アンサマイトシン（ansamitocin）」は次の一般式(Ｉ)：
［式中、Rは、例えば水素、アセチル、プロピオニル、イソブチリル、ブチリル、イソバレリルなどを表し、かつR1は、例えばメチル、ヒドロキシメチルなどを表す］で表されるアンサマイトシン抗生物質の様々な誘導体（Hasegawa, T.ら, 「運動性放線菌類：アクチノシネマ・プレチオスム・プレチオスム亜種．新種.新亜種、およびアクチノシネマ・プレチオスム・アウランチクム亜種．新亜種（Motile Actinomycetes: Actinosynnema pretiosum subsp. pretiosum sp nov., subsp. nov., and Actinosynnema pretiosum subsp. auranticum subsp. nov.）」, Int. J. System. Bacteriol. 33(2):314-320, 1983；Tanidaら, 「ノカルジアの突然変異株由来のアンサマイトシン類似体 Ｉ 突然変異体の単離、醗酵および抗微生物特性（Ansamitocin analogs from a mutant strain of nocardia. I. Isolation of the mutant, fermentation and antimicrobial properties）」, J. Antibiotics 34: 489-495, 1981）を意味する。
アンサマイトシンの３つの大きなクラスは環構造における異なる置換基により区別される：すなわち、式ＩのR1（C-14）にメチル基をもつアンサマイトシンP化合物；式ＩのR1（C-14）にヒドロキシメチル基をもつアンサマイトシンPHM化合物；およびN-デスメチル環構造および式ＩのR1位置にメチル基をもつアンサマイトシンPDN化合物である。それぞれのクラスには、異なる式Ｉの置換基R（C-3）により区別される複数のメンバーがある。元来、C-14にメチル基をもつアンサマイトシンは、米国特許第4,162,940号に記載の株ATCC 31281から単離された。
具体的には、本明細書において特定のアンサマイトシンは次の略号により記述される：すなわち、
P-0は、R＝水素およびR1＝メチル（メイタンシノールとも呼ばれる）を有し；
P-1は、R＝アセチルおよびR1＝メチルを有し；
P-2は、R＝プロピオニルおよびR1＝メチルを有し；
P-3は、R＝イソブチリルおよびR1＝メチルを有し；
P-3’は、R＝ブチリルおよびR1＝メチルを有し；
P-4は、R＝イソバレリルおよびR1＝メチルを有し；
PHM-0は、R＝水素およびR1＝ヒドロキシメチルを有し；
PHM-1は、R＝アセチルおよびR1＝ヒドロキシメチルを有し；
PHM-2は、R＝プロピオニルおよびR1＝ヒドロキシメチルを有し；
PHM-3は、R＝イソブチリルおよびR1＝ヒドロキシメチルを有し；
PHM-3’は、R＝ブチリルおよびR1＝ヒドロキシメチルを有し；
PHM-4は、R＝イソバレリルおよびR1＝ヒドロキシメチルを有し；
PND-0は、N-デスメチル、R＝水素およびR1＝メチルを有し；
PND-1は、N-デスメチル、R＝アセチルおよびR1＝メチルを有し；
PND-2は、N-デスメチル、R＝プロピオニルおよびR1＝メチルを有し；
PND-3は、N-デスメチル、R＝イソブチリルおよびR1＝メチルを有し；
PND-3’は、N-デスメチル、R＝ブチリルおよびR1＝メチルを有し；そして
PND-4は、N-デスメチル、R＝イソバレリルおよびR1＝メチルを有する。
P-0は、R＝水素およびR1＝メチル（メイタンシノールとも呼ばれる）を有し；
P-1は、R＝アセチルおよびR1＝メチルを有し；
P-2は、R＝プロピオニルおよびR1＝メチルを有し；
P-3は、R＝イソブチリルおよびR1＝メチルを有し；
P-3’は、R＝ブチリルおよびR1＝メチルを有し；
P-4は、R＝イソバレリルおよびR1＝メチルを有し；
PHM-0は、R＝水素およびR1＝ヒドロキシメチルを有し；
PHM-1は、R＝アセチルおよびR1＝ヒドロキシメチルを有し；
PHM-2は、R＝プロピオニルおよびR1＝ヒドロキシメチルを有し；
PHM-3は、R＝イソブチリルおよびR1＝ヒドロキシメチルを有し；
PHM-3’は、R＝ブチリルおよびR1＝ヒドロキシメチルを有し；
PHM-4は、R＝イソバレリルおよびR1＝ヒドロキシメチルを有し；
PND-0は、N-デスメチル、R＝水素およびR1＝メチルを有し；
PND-1は、N-デスメチル、R＝アセチルおよびR1＝メチルを有し；
PND-2は、N-デスメチル、R＝プロピオニルおよびR1＝メチルを有し；
PND-3は、N-デスメチル、R＝イソブチリルおよびR1＝メチルを有し；
PND-3’は、N-デスメチル、R＝ブチリルおよびR1＝メチルを有し；そして
PND-4は、N-デスメチル、R＝イソバレリルおよびR1＝メチルを有する。
用語「アンサマイトシン（ansamitocin）」はさらにその異性体を包含し、C-3、C-4、C-9およびC-10位置に存在する異性体を含む。
(a) アクチノシネマ・プレチオスム突然変異株PF4-4の生物学的特性
本発明の株PF4-4の形態学および代謝特性は、株PF4-4がメイタンシノイド産生の増強を示すことを除くと、親株ATCC 31565のそれと類似している。親株の形態学的および代謝的特性は1984年5月22日に発行されたHasegawaらに対する米国特許第4,450,234号に開示されていて、これらの上記特性を記載する、限定されるものでないが、カラム3-7を含む部分は本明細書にその全文が参照により組み入れられる。
本発明の株PF4-4の形態学および代謝特性は、株PF4-4がメイタンシノイド産生の増強を示すことを除くと、親株ATCC 31565のそれと類似している。親株の形態学的および代謝的特性は1984年5月22日に発行されたHasegawaらに対する米国特許第4,450,234号に開示されていて、これらの上記特性を記載する、限定されるものでないが、カラム3-7を含む部分は本明細書にその全文が参照により組み入れられる。
(b) アクチノシネマ・プレチオスム突然変異株PF4-4の作製
PF4-4株は親株N-1231、ATCC 31565から次の方法によって取得した。FM4-1培地中のN-1231によるアンサマイトシンP-3の産生は、表１に示すように、約60mg/L（n＝400実験の平均）であるが、この表は、個々にスクリーニングした400コロニーの平均およびFM4-1培地で最高のアンサマイトシンP-3産生を有する株N-1231、ATCC 31565からの３つの単離コロニーの、アンサマイトシンP-3産生（mg/L）を示す。このように、最初のスクリーニングにおいて、株N-1231、ATCC 31565は60mg/LのアンサマイトシンP-3の平均産生を示し、221mg/Lを超える産生を示すコロニーはない。
PF4-4株は親株N-1231、ATCC 31565から次の方法によって取得した。FM4-1培地中のN-1231によるアンサマイトシンP-3の産生は、表１に示すように、約60mg/L（n＝400実験の平均）であるが、この表は、個々にスクリーニングした400コロニーの平均およびFM4-1培地で最高のアンサマイトシンP-3産生を有する株N-1231、ATCC 31565からの３つの単離コロニーの、アンサマイトシンP-3産生（mg/L）を示す。このように、最初のスクリーニングにおいて、株N-1231、ATCC 31565は60mg/LのアンサマイトシンP-3の平均産生を示し、221mg/Lを超える産生を示すコロニーはない。
株PF4-4は、ATCC 31565から７つの逐次ステップで作製するのが好ましい。これらの７つのステップは、再単離；第１ラウンドの突然変異誘発；再単離、好ましくは３回；UV突然変異誘発、およびMNNG突然変異誘発である。
これらのステップは当業者に知られる標準方法により実施し、その方法は、例えばJeffrey Miller, 1992: 「細菌遺伝学の短期コース：大腸菌および関係細菌の研究室マニュアルとハンドブック（A Short Course in Bacterial Genetics: A Laboratory Manual and Handbook for Escherichia coli and Related Bacteria）」, Cold Spring Laboratory Press, Woodbury, N.Y.に記載されている。
再単離については、株N-1231、ATCC 31565をCM4-1培地中の寒天プレート上で増殖し、２つの形態学的表現型：すなわち黄色コロニーと白色コロニーを観察し、両方の型の400コロニーを再単離してそれらのアンサマイトシンP-3産生をアッセイする。400コロニーのアンサマイトシンP-3力価分布を図１に示す。白色コロニーは一貫して、黄色コロニーより高いAP-3力価を与える。株N-1231、ATCC 31565と最高力価をもつ３コロニーとの力価比較を表１に示す。コロニー番号15-55が最高力価（221mg/L）を示すので、これを次のステップに用いる。
UV突然変異は、実施例１（下記）において詳細に記載する。要約すると、コロニー番号15-55の８日目の傾斜培養から得た胞子を水中に採集し、ボルテックス混合で細かく砕く。コロニー形成ユニット数（cfu）を確認し、典型的には約2 x 109であることがわかる。次いで連続希釈して様々な数のcfu数を含有するサンプルを寒天プレート上にまいて、色々な長さの時間、殺菌灯からのUV光に露光した。かかる光への40秒露光に対する典型的な殺菌率は99.9％である。様々な長さの時間にわたり処理したプレートを、28℃にて5-7日間インキュベートし、次いでコロニーを、アンサマイトシンP-3産生について選択し分析する。最高のアンサマイトシンP-3産生を有するコロニーを選択して、次のステップで使用する。
MNNG突然変異誘発は実施例２（下記）において詳細に記載する。要約すると、細かく砕いた胞子を上記のように調製し、遠心分離により採集し、そして100μg/mLのMNNGを含有するバッファー中に再懸濁する。好ましくは、約30分後に過剰チオ硫酸ナトリウムを添加して突然変異誘発反応を停止し、次いで遠心分離により細菌を採集し、洗浄し、そして寒天プレート上にまいて生存率の確認およびさらなる分析を行う。
表２は、株PF4-4の系統学および中間単離物による、HPLCで定量したアンサマイトシンP-3の産生（mg/L）を示す（実施例６）。表２に用いた培地を表３Aに掲げる。表２において、記入項目「d/n」は日（d）で表した醗酵時間および試験した培養数（n）を表す。
(c) アクチノシネマ・プレチオスム株PF4-4からのメイタンシノイドの産生
細菌株PF4-4の増殖は制御した条件のもとで実施するが、広範囲の培地と条件を利用することができる。例えば、PF4-4は、発行された米国特許第4,137,230号；第4,162,940号；第4,331,598号；第4,356,265号；および第4,450,234号のATCC 31565またはATCC 31281に対して記載されたおよびHatanoら, Agric. Biol. Chem. 48, 1721-1729, 1984に記載されたのと類似の条件のもとでおよび類似の培地を用いて増殖することができる。このように株PF4-4は、メイタンシノイドの醗酵産生も支持する広範囲の炭素源に耐性がある。例示の増殖培地を表３Aおよび6Bに記載する。表３AはPF4-4の増殖を支持しかつ表２において利用した培地を示す。表３BはPF4-4の繁殖および／または増殖に適したさらなる培地を示す。
細菌株PF4-4の増殖は制御した条件のもとで実施するが、広範囲の培地と条件を利用することができる。例えば、PF4-4は、発行された米国特許第4,137,230号；第4,162,940号；第4,331,598号；第4,356,265号；および第4,450,234号のATCC 31565またはATCC 31281に対して記載されたおよびHatanoら, Agric. Biol. Chem. 48, 1721-1729, 1984に記載されたのと類似の条件のもとでおよび類似の培地を用いて増殖することができる。このように株PF4-4は、メイタンシノイドの醗酵産生も支持する広範囲の炭素源に耐性がある。例示の増殖培地を表３Aおよび6Bに記載する。表３AはPF4-4の増殖を支持しかつ表２において利用した培地を示す。表３BはPF4-4の繁殖および／または増殖に適したさらなる培地を示す。
メイタンシノイドをPF4-4株から醗酵産生するための好ましい一方法を図２のフローチャートに示しかつさらに実施例３（下記）に記載する。
アンサマイトシンの分析
米国特許第4,331,598号および第4,450,234号において、親株ATCC 31565はC-14（式Ｉ参照）におけるメチルまたはヒドロキシメチル基の存在により区別される２つのクラスのアンサマイトシンを産生することが開示されている。両方のクラスに対して、C-3ヒドロキシル基と結合したそれぞれのアシル側鎖においておよびC-14がメチルまたはヒドロキシメチル基（または、その後の研究では、N-デスメチル）を運ぶかどうかについて異なる、複数の色々なアンサマイトシンが産生される。本明細書に使用される命名法は、式(Ｉ)を参照して色々な順序の化合物を上記のように定義する。
米国特許第4,331,598号および第4,450,234号において、親株ATCC 31565はC-14（式Ｉ参照）におけるメチルまたはヒドロキシメチル基の存在により区別される２つのクラスのアンサマイトシンを産生することが開示されている。両方のクラスに対して、C-3ヒドロキシル基と結合したそれぞれのアシル側鎖においておよびC-14がメチルまたはヒドロキシメチル基（または、その後の研究では、N-デスメチル）を運ぶかどうかについて異なる、複数の色々なアンサマイトシンが産生される。本明細書に使用される命名法は、式(Ｉ)を参照して色々な順序の化合物を上記のように定義する。
アンサマイトシンP-3は、ある一定の増殖条件のもとで、PF4-4および親株ATCC 31565の主産物である。もし細菌をバリンもしくはイソ酪酸（米国特許第4,228,239号を参照）またはイソブチルアルコールもしくはイソブチルアルデヒド（米国特許第4,356,265号を参照）の存在のもとで増殖すれば、他のアンサマイトシン化合物は少量しか存在しない。
PF4-4株を、全てイソブチルアルコールを含有する様々な醗酵培地（表６でFMと記した）中で増殖すると、アンサマイトシンP-3が主な産生されるアンサマイトシンである。醗酵ブロスをエタノールまたはアセトニトリルにより希釈し、ボルテックス攪拌し、次いで遠心分離し、そして上清をアンサマイトシンP-3含量についてアッセイする。
アンサマイトシンは、逆相高速液体クロマトグラフィ（hplc）により分画して分析するのが好ましいが、いずれの適当な技術、例えばMALDI-TOFまたは薄層クロマトグラフィなどを利用してもよい。HPLCを利用する一方法においては、醗酵ブロスを、酢酸エチル、塩化メチレンまたはクロロホルムなどの有機溶媒を用いて抽出し、有機溶媒中のP-3の含量を実施例６に記載のように逆相hplcにより定量する。
本発明を、以後、限定されるものでない実施例を参照して説明する。
実施例１
UV突然変異誘発
コロニー番号15-55の８日目の傾斜培養調製物から得た胞子を、傾斜培養[傾斜培養サイズ：16-18mLのCM4-1寒天を満たした2.3 x 18cm試験管（組成は表３Bを参照）]を10mLの水により洗浄して採集した。懸濁胞子を含む水5mLを、直径2.0mmの10個のガラスビーズを含有するスクリューキャップ管（サイズ：1.1 x 11cm）中に移して細かく砕いた。その管を５分間ボルテックス攪拌し、細かく砕いた胞子懸濁物を次いで連続的に0.1％ Tween 60の水溶液中に103、104、および105倍希釈した。（典型的な細かく砕いた懸濁液は2 x 109cfuを含有する。）それぞれの希釈液からの0.1mLの懸濁液をCM4-1寒天プレート（9.5cm直径）上にまいて、それを適当な殺菌UV光源に露光した：すなわち、開放した寒天プレートを15W殺菌灯のもとで約20cmの距離に置いて20-40秒間、UV光に露光した。（40秒露光の死滅率は約99.9％であった。）露光したプレートを28℃にて5-7日間培養し、次いで単一コロニーを他のCM4-1寒天プレートへ移し、そしてプレート１枚当たり16コロニーの格子で増殖した。次いでコロニーを選択してさらに評価した。
UV突然変異誘発
コロニー番号15-55の８日目の傾斜培養調製物から得た胞子を、傾斜培養[傾斜培養サイズ：16-18mLのCM4-1寒天を満たした2.3 x 18cm試験管（組成は表３Bを参照）]を10mLの水により洗浄して採集した。懸濁胞子を含む水5mLを、直径2.0mmの10個のガラスビーズを含有するスクリューキャップ管（サイズ：1.1 x 11cm）中に移して細かく砕いた。その管を５分間ボルテックス攪拌し、細かく砕いた胞子懸濁物を次いで連続的に0.1％ Tween 60の水溶液中に103、104、および105倍希釈した。（典型的な細かく砕いた懸濁液は2 x 109cfuを含有する。）それぞれの希釈液からの0.1mLの懸濁液をCM4-1寒天プレート（9.5cm直径）上にまいて、それを適当な殺菌UV光源に露光した：すなわち、開放した寒天プレートを15W殺菌灯のもとで約20cmの距離に置いて20-40秒間、UV光に露光した。（40秒露光の死滅率は約99.9％であった。）露光したプレートを28℃にて5-7日間培養し、次いで単一コロニーを他のCM4-1寒天プレートへ移し、そしてプレート１枚当たり16コロニーの格子で増殖した。次いでコロニーを選択してさらに評価した。
実施例２
MNNG突然変異誘発
８日目の傾斜培養調製物からの胞子を、傾斜培養（傾斜培養サイズ：16-18mLのCM4-1寒天を満たした2.3 x 18cm試験管）を10mLの水により洗浄して採集した。懸濁胞子を含む水5mLを、直径2.0mmの10個のガラスビーズを含有するスクリューキャップ管（サイズ：1.1 x 11cm）中に移して細かく砕いた。その管を５分間ボルテックス攪拌し、胞子を2100 x gにて15分間遠心分離して採集した。上清を捨てて、ペレットを、(w/v)で0.1％硫酸アンモニウム、0.01％硫酸マグネシウム七水和物、0.005％塩化カルシウム二水和物、0.00025％硫酸第一鉄七水和物、および100μg/mL MNNGを含有する無菌0.05Mトリスマレイン酸バッファー、pH8.0の4mL中に再懸濁した。懸濁液を30分間ボルテックス攪拌し、次いで飽和チオ硫酸ナトリウム溶液3mLを加えて反応を停止した。胞子を遠心分離により採集し、次いで5mLの水中に再懸濁した。この懸濁液を選択に用い、適当な希釈物をCM4-1寒天プレート上に少し塗って（smear）生存率を決定した。
MNNG突然変異誘発
８日目の傾斜培養調製物からの胞子を、傾斜培養（傾斜培養サイズ：16-18mLのCM4-1寒天を満たした2.3 x 18cm試験管）を10mLの水により洗浄して採集した。懸濁胞子を含む水5mLを、直径2.0mmの10個のガラスビーズを含有するスクリューキャップ管（サイズ：1.1 x 11cm）中に移して細かく砕いた。その管を５分間ボルテックス攪拌し、胞子を2100 x gにて15分間遠心分離して採集した。上清を捨てて、ペレットを、(w/v)で0.1％硫酸アンモニウム、0.01％硫酸マグネシウム七水和物、0.005％塩化カルシウム二水和物、0.00025％硫酸第一鉄七水和物、および100μg/mL MNNGを含有する無菌0.05Mトリスマレイン酸バッファー、pH8.0の4mL中に再懸濁した。懸濁液を30分間ボルテックス攪拌し、次いで飽和チオ硫酸ナトリウム溶液3mLを加えて反応を停止した。胞子を遠心分離により採集し、次いで5mLの水中に再懸濁した。この懸濁液を選択に用い、適当な希釈物をCM4-1寒天プレート上に少し塗って（smear）生存率を決定した。
実施例３
PF4-4からアンサマイトシンを産生するための振とうフラスコ醗酵
保存したPF4-4培養物、例えば凍結乾燥したか、または凍結した培養物をCM4-1寒天プレート上で28℃にて5-7日間増殖した。次いで単一コロニーを第２の格子を刻んだCM4-1寒天プレートに移し（典型的には16コロニーを9.5cm直径のプレートに移し）、そしてプレートを28℃にて7日間インキュベートすると、その間に直径6-15mmのコロニーが増殖した。次いで単一コロニーを、10分間、10個の2-mm直径ガラスビーズと水2mLを含有する密閉管内でボルテックス攪拌することにより細かく砕いた。次いでコロニー懸濁液の一部分（0.5mL）を、種培地VM4-1（組成は表３Bを参照）30mLを含有する250mL培養フラスコに移した。種フラスコを回転振とう機（220rpm、振とう行程70mm）上で28℃にて48時間インキュベートし、その後、この種増殖懸濁液の1mLを、20mLの醗酵培地FM4-4を含有する250mL培養フラスコ中に移した。醗酵フラスコを、種フラスコと同じ条件のもとで6日間インキュベートし、その後、アンサマイトシン産生を実施例６に記載のとおりアッセイして268mg/Lであることを見出した。
PF4-4からアンサマイトシンを産生するための振とうフラスコ醗酵
保存したPF4-4培養物、例えば凍結乾燥したか、または凍結した培養物をCM4-1寒天プレート上で28℃にて5-7日間増殖した。次いで単一コロニーを第２の格子を刻んだCM4-1寒天プレートに移し（典型的には16コロニーを9.5cm直径のプレートに移し）、そしてプレートを28℃にて7日間インキュベートすると、その間に直径6-15mmのコロニーが増殖した。次いで単一コロニーを、10分間、10個の2-mm直径ガラスビーズと水2mLを含有する密閉管内でボルテックス攪拌することにより細かく砕いた。次いでコロニー懸濁液の一部分（0.5mL）を、種培地VM4-1（組成は表３Bを参照）30mLを含有する250mL培養フラスコに移した。種フラスコを回転振とう機（220rpm、振とう行程70mm）上で28℃にて48時間インキュベートし、その後、この種増殖懸濁液の1mLを、20mLの醗酵培地FM4-4を含有する250mL培養フラスコ中に移した。醗酵フラスコを、種フラスコと同じ条件のもとで6日間インキュベートし、その後、アンサマイトシン産生を実施例６に記載のとおりアッセイして268mg/Lであることを見出した。
様々な醗酵ブロスを使用することができる。好ましいブロスの例および得られたアンサマイトシンP3産生の対応するレベルを表２に掲げかつブロス組成を表３Aに示した。
実施例４
長期間保存用の凍結したPF4-4培養物の調製
水2mL中の細かく砕いたコロニー懸濁液を実施例３に記載のとおり調製し、次いで懸濁液の0.2mLを傾斜培養（傾斜培養サイズ：16-18mLのCM4-1寒天を満たした2.3 x 18cm試験管）上に接種し、28℃で7日間インキュベートした。傾斜培養物をクライオゲン溶液（10％グリコールおよび5％ラクトースの水溶液）10mLを用いて洗浄し、次いで上記の解離操作にかけた。細かく砕いた懸濁液のアリコート（1.5mL）をクライオバイアル中に採取し、-75℃にてまたは液体窒素中で凍結した。
長期間保存用の凍結したPF4-4培養物の調製
水2mL中の細かく砕いたコロニー懸濁液を実施例３に記載のとおり調製し、次いで懸濁液の0.2mLを傾斜培養（傾斜培養サイズ：16-18mLのCM4-1寒天を満たした2.3 x 18cm試験管）上に接種し、28℃で7日間インキュベートした。傾斜培養物をクライオゲン溶液（10％グリコールおよび5％ラクトースの水溶液）10mLを用いて洗浄し、次いで上記の解離操作にかけた。細かく砕いた懸濁液のアリコート（1.5mL）をクライオバイアル中に採取し、-75℃にてまたは液体窒素中で凍結した。
実施例５
長期間保存用の凍結乾燥したPF4-4菌の調製
８日目の傾斜培養物（傾斜培養サイズ：CM4-1寒天の16-18mLを満たした2.3 x 18cm試験管）をスキムミルク水溶液（水中5％(w/v)スキムミルク粉末）3mL中に掻き出した。次いで懸濁液を、10個の2mm直径ガラスビーズを含有する密閉管に入れて5分間ボルテックス攪拌することにより細かく砕いた。0.5mLのアリコートをバイアルに取分けて凍結乾燥した。好ましくはそれぞれのバイアルは約1.2 x 108cfuを含有した。
長期間保存用の凍結乾燥したPF4-4菌の調製
８日目の傾斜培養物（傾斜培養サイズ：CM4-1寒天の16-18mLを満たした2.3 x 18cm試験管）をスキムミルク水溶液（水中5％(w/v)スキムミルク粉末）3mL中に掻き出した。次いで懸濁液を、10個の2mm直径ガラスビーズを含有する密閉管に入れて5分間ボルテックス攪拌することにより細かく砕いた。0.5mLのアリコートをバイアルに取分けて凍結乾燥した。好ましくはそれぞれのバイアルは約1.2 x 108cfuを含有した。
実施例６
醗酵ブロス中のアンサマイトシンP-3の分析
醗酵ブロス（0.25mL）を、エタノールを含有するスクリューキャップ管に移した（4.75mL）（交互に全醗酵ブロス0.25mLをエタノール2.25mLと混合した）。溶液を10分間ボルテックス攪拌にかけ、次いで10分間2100 x gにて遠心分離した。上清を取出して、逆相hplc分析にかけた。好ましくは、Symmetry Shield(登録商標)C8カラム（3.6 x 150 mm）を用いた。移動相は好ましくは水／アセトニトリル／メタノールの比が55／35／10でありかつ好ましくは流速1.0mL/minで使用した。クロマトグラフィは252nmのUV吸収を測定することによりモニターした。典型的なブロス抽出物のhplcトレースを図３に示すが、ここでアンサマイトシンP-3は注入後約12.2分に溶出する。
醗酵ブロス中のアンサマイトシンP-3の分析
醗酵ブロス（0.25mL）を、エタノールを含有するスクリューキャップ管に移した（4.75mL）（交互に全醗酵ブロス0.25mLをエタノール2.25mLと混合した）。溶液を10分間ボルテックス攪拌にかけ、次いで10分間2100 x gにて遠心分離した。上清を取出して、逆相hplc分析にかけた。好ましくは、Symmetry Shield(登録商標)C8カラム（3.6 x 150 mm）を用いた。移動相は好ましくは水／アセトニトリル／メタノールの比が55／35／10でありかつ好ましくは流速1.0mL/minで使用した。クロマトグラフィは252nmのUV吸収を測定することによりモニターした。典型的なブロス抽出物のhplcトレースを図３に示すが、ここでアンサマイトシンP-3は注入後約12.2分に溶出する。
ある特定の特許および印刷出版物を以上の開示に引用しているが、これらのそれぞれの全文は本明細書に参照により組み入れられる。
本発明を詳細にかつその特定の実施形態を参照して記載したが、当業者には、本発明の精神と範囲から逸脱することなく様々な改変と修飾をなしうることが明らかであろう。従って、本発明は添付せる請求の範囲によってのみ制限されることを意図するものである。
Claims (5)
- ATCC受託番号315651のアクチノシネマ・プレチオスム株N-1231のメイタンシノイド産生に比べメイタンシノイド産生が増強された、ATCC受託番号PTA-3921のPF-4-4であるアクチノシネマ・プレチオスム株、またはその変異体。
- ATCC受託番号PTA-3921のアクチノシネマ・プレチオスム株PF4-4である、請求項１記載のアクチノシネマ・プレチオスム株。
- アクチノシネマ・プレチオスム株N-1231を変異させ、アクチノシネマ・プレチオスム株N-1231のメイタンシノイド産生に比べメイタンシノイド産生が増強されたアクチノシネマ・プレチオスム株を提供する方法であって、変異にUV光または1-メチル-3-ニトロ-1-ニトロソ-グアニジンが用いられ、増強されたメイタンシノイド産生を選択し、再単離；第１ラウンドの突然変異誘発；再単離；UV突然変異誘発；およびMNNG突然変異誘発を含み、それによりアクチノシネマ・プレチオスム株PF4-4が提供される、方法。
- 複数の再単離および突然変異誘発ステップを含む、請求項３記載の方法。
- 再単離がCM4-1培地上での細菌または変異細菌株の増殖を含む、請求項３または４に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US10/057,561 US6790954B2 (en) | 2002-01-29 | 2002-01-29 | Mutant Actinosynnema pretiosum strain with increased maytansinoid production |
| PCT/US2003/000026 WO2003064610A2 (en) | 2002-01-29 | 2003-01-15 | Mutant actinosynnema pretiosum strain with increased maytansinoid production |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2009291891A Division JP2010110328A (ja) | 2002-01-29 | 2009-12-24 | メイタンシノイド産生を増加する突然変異アクチノシネマ・プレチオスム（Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａｐｒｅｔｉｏｓｕｍ）株 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2005519594A JP2005519594A (ja) | 2005-07-07 |
| JP4485799B2 true JP4485799B2 (ja) | 2010-06-23 |
Family
ID=27658220
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2003564206A Expired - Lifetime JP4485799B2 (ja) | 2002-01-29 | 2003-01-15 | メイタンシノイド産生を増加する突然変異アクチノシネマ・プレチオスム（Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａｐｒｅｔｉｏｓｕｍ）株 |
| JP2009291891A Pending JP2010110328A (ja) | 2002-01-29 | 2009-12-24 | メイタンシノイド産生を増加する突然変異アクチノシネマ・プレチオスム（Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａｐｒｅｔｉｏｓｕｍ）株 |
| JP2013155694A Expired - Lifetime JP5840656B2 (ja) | 2002-01-29 | 2013-07-26 | メイタンシノイド産生を増加する突然変異アクチノシネマ・プレチオスム（Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａｐｒｅｔｉｏｓｕｍ）株 |
Family Applications After (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2009291891A Pending JP2010110328A (ja) | 2002-01-29 | 2009-12-24 | メイタンシノイド産生を増加する突然変異アクチノシネマ・プレチオスム（Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａｐｒｅｔｉｏｓｕｍ）株 |
| JP2013155694A Expired - Lifetime JP5840656B2 (ja) | 2002-01-29 | 2013-07-26 | メイタンシノイド産生を増加する突然変異アクチノシネマ・プレチオスム（Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａｐｒｅｔｉｏｓｕｍ）株 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6790954B2 (ja) |
| EP (1) | EP1468077B1 (ja) |
| JP (3) | JP4485799B2 (ja) |
| AT (1) | ATE474043T1 (ja) |
| AU (1) | AU2003238752B2 (ja) |
| CA (1) | CA2474639C (ja) |
| CY (1) | CY1111210T1 (ja) |
| DE (1) | DE60333340D1 (ja) |
| DK (1) | DK1468077T3 (ja) |
| ES (1) | ES2348865T3 (ja) |
| NZ (1) | NZ532831A (ja) |
| PT (1) | PT1468077E (ja) |
| SI (1) | SI1468077T1 (ja) |
| WO (1) | WO2003064610A2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013230163A (ja) * | 2002-01-29 | 2013-11-14 | Immunogen Inc | メイタンシノイド産生を増加する突然変異アクチノシネマ・プレチオスム（Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａｐｒｅｔｉｏｓｕｍ）株 |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100056762A1 (en) | 2001-05-11 | 2010-03-04 | Old Lloyd J | Specific binding proteins and uses thereof |
| US7589180B2 (en) | 2001-05-11 | 2009-09-15 | Abbott Laboratories Inc. | Specific binding proteins and uses thereof |
| US7432088B2 (en) * | 2003-05-08 | 2008-10-07 | Immunogen Inc. | Methods for the production of ansamitocins |
| US9090693B2 (en) | 2007-01-25 | 2015-07-28 | Dana-Farber Cancer Institute | Use of anti-EGFR antibodies in treatment of EGFR mutant mediated disease |
| JP5618549B2 (ja) | 2007-03-15 | 2014-11-05 | ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサーリサーチ リミテッド | Ｅｇｆｒ抗体及びｓｒｃ阻害剤を用いる治療方法及び関連製剤 |
| US20090011060A1 (en) * | 2007-07-06 | 2009-01-08 | Peter Koepke | Campsiandra angustifolia extract and methods of extracting and using such extract |
| US20090017140A1 (en) * | 2007-07-09 | 2009-01-15 | Peter Koepke | Maytenus abenfolia extract and methods of extracting and using such extract |
| US20090035395A1 (en) * | 2007-08-01 | 2009-02-05 | Peter Koepke | Spondias mombin l. extract and methods of extracting and using such extract |
| JP5532486B2 (ja) | 2007-08-14 | 2014-06-25 | ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサー リサーチ | Ｅｇｆ受容体を標的とするモノクローナル抗体１７５ならびにその誘導体および用途 |
| US7879369B2 (en) * | 2007-09-18 | 2011-02-01 | Selvamedica, Llc | Combretum laurifolium Mart. extract and methods of extracting and using such extract |
| EP2644204B1 (en) | 2008-03-18 | 2017-04-19 | Genentech, Inc. | Combinations of an Anti-HER2 antibody-drug conjugate and pertuzumab |
| US20110076232A1 (en) * | 2009-09-29 | 2011-03-31 | Ludwig Institute For Cancer Research | Specific binding proteins and uses thereof |
| TW201129380A (en) | 2009-12-04 | 2011-09-01 | Genentech Inc | Methods of treating metastatic breast cancer with trastuzumab-MCC-DM1 |
| TW201129384A (en) | 2010-02-10 | 2011-09-01 | Immunogen Inc | CD20 antibodies and uses thereof |
| ES2544608T3 (es) | 2010-11-17 | 2015-09-02 | Genentech, Inc. | Conjugados de anticuerpo y de alaninil-maitansinol |
| CN113607945A (zh) | 2015-07-07 | 2021-11-05 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 抗HER2抗体-药物缀合物和Bcl-2抑制剂的组合疗法 |
| CN108330113B (zh) * | 2018-03-08 | 2019-05-28 | 山东省医药生物技术研究中心（山东省病毒研究所） | 一株高底物专一性酰基转移酶的珍贵束丝放线菌及其应用 |
| PT3956332T (pt) | 2019-04-18 | 2023-04-24 | Indena Spa | Processo diasterosselectivo para a preparação de ésteres de maitansinoides contendo tiol ou dissulfeto e seus intermediários |
| CN115322918B (zh) * | 2021-05-11 | 2024-03-29 | 浙江珲达生物科技有限公司 | 一种高产安丝菌素p-3的菌株及其应用 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6016236B2 (ja) * | 1977-11-18 | 1985-04-24 | 武田薬品工業株式会社 | 抗生物質ｃ―１５００３ ｐ―３の製造法 |
| JPS5645483A (en) * | 1979-09-19 | 1981-04-25 | Takeda Chem Ind Ltd | C-15003phm and its preparation |
| JPS56102793A (en) * | 1979-12-28 | 1981-08-17 | Takeda Chem Ind Ltd | Preparation of antibiotic c-15003 p-3 |
| JPS626673A (ja) * | 1985-07-04 | 1987-01-13 | Zenkoku Nogyo Kyodo Kumiai Rengokai | パスツレラ・ムルトシダ変異株、生菌ワクチン及びその菌株の取得法 |
| US5250435A (en) | 1991-06-04 | 1993-10-05 | Merck & Co., Inc. | Mutant strains of Aspergillus terreus for producing 7-[1,2,6,7,8,8a(R)-hexa-hydro-2(S),6(R)-dimethyl-8(S)-hydroxy-1(S)-naphthyl]-3(R),5(R)-dihydroxyheptanoic acid (triol acid),I) |
| JP3202018B2 (ja) | 1991-12-17 | 2001-08-27 | ギスト ブロカデス ナムローゼ フェンノートシャップ | 高濃度のアスタキサンチンと低濃度の３−ヒドロキシ−３’、４’−ジデヒドロ−β、Ψ−カロテン−４−オン（ＨＤＣＯ）を含むパフィア ロドツィマの新規株 |
| JPH07274978A (ja) * | 1994-04-13 | 1995-10-24 | Bio Kosumosu:Kk | 紅麹色素の製造方法 |
| JP3376859B2 (ja) * | 1996-11-27 | 2003-02-10 | 三菱化学株式会社 | リビトールの製造方法 |
| US6949356B1 (en) | 1999-10-20 | 2005-09-27 | Microbia, Inc. | Methods for improving secondary metabolite production in fungi |
| US6573074B2 (en) * | 2000-04-12 | 2003-06-03 | Smithkline Beecham Plc | Methods for ansamitocin production |
| US6790954B2 (en) * | 2002-01-29 | 2004-09-14 | Immunogen, Inc. | Mutant Actinosynnema pretiosum strain with increased maytansinoid production |
-
2002
- 2002-01-29 US US10/057,561 patent/US6790954B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-01-15 NZ NZ532831A patent/NZ532831A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-01-15 DK DK03734944.6T patent/DK1468077T3/da active
- 2003-01-15 AU AU2003238752A patent/AU2003238752B2/en not_active Expired
- 2003-01-15 CA CA2474639A patent/CA2474639C/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-15 ES ES03734944T patent/ES2348865T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-15 JP JP2003564206A patent/JP4485799B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-15 DE DE60333340T patent/DE60333340D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-15 SI SI200331875T patent/SI1468077T1/sl unknown
- 2003-01-15 WO PCT/US2003/000026 patent/WO2003064610A2/en active Application Filing
- 2003-01-15 AT AT03734944T patent/ATE474043T1/de active
- 2003-01-15 EP EP03734944A patent/EP1468077B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-15 PT PT03734944T patent/PT1468077E/pt unknown
-
2004
- 2004-07-26 US US10/898,169 patent/US7192750B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-12-24 JP JP2009291891A patent/JP2010110328A/ja active Pending
-
2010
- 2010-09-30 CY CY20101100876T patent/CY1111210T1/el unknown
-
2013
- 2013-07-26 JP JP2013155694A patent/JP5840656B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013230163A (ja) * | 2002-01-29 | 2013-11-14 | Immunogen Inc | メイタンシノイド産生を増加する突然変異アクチノシネマ・プレチオスム（Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａｐｒｅｔｉｏｓｕｍ）株 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2003064610A2 (en) | 2003-08-07 |
| EP1468077A2 (en) | 2004-10-20 |
| PT1468077E (pt) | 2010-10-12 |
| EP1468077B1 (en) | 2010-07-14 |
| JP2010110328A (ja) | 2010-05-20 |
| DK1468077T3 (da) | 2010-10-25 |
| US20030157694A1 (en) | 2003-08-21 |
| JP5840656B2 (ja) | 2016-01-06 |
| DE60333340D1 (de) | 2010-08-26 |
| ATE474043T1 (de) | 2010-07-15 |
| JP2005519594A (ja) | 2005-07-07 |
| US7192750B2 (en) | 2007-03-20 |
| US6790954B2 (en) | 2004-09-14 |
| CA2474639C (en) | 2015-08-04 |
| JP2013230163A (ja) | 2013-11-14 |
| NZ532831A (en) | 2009-05-31 |
| AU2003238752B2 (en) | 2008-05-29 |
| SI1468077T1 (sl) | 2010-11-30 |
| CY1111210T1 (el) | 2015-06-11 |
| CA2474639A1 (en) | 2003-08-07 |
| EP1468077A4 (en) | 2006-06-07 |
| ES2348865T3 (es) | 2010-12-16 |
| WO2003064610A3 (en) | 2004-01-22 |
| US20050003513A1 (en) | 2005-01-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5840656B2 (ja) | メイタンシノイド産生を増加する突然変異アクチノシネマ・プレチオスム（Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａｐｒｅｔｉｏｓｕｍ）株 | |
| JP5729919B2 (ja) | チアクマイシン生産 | |
| AU2003238752A1 (en) | Mutant actinosynnema pretiosum strain with increased maytansinoid production | |
| Schatzmayr et al. | Investigation of different yeast strains for the detoxification of ochratoxin A | |
| JPH11507907A (ja) | 大環状ラクトン化合物及びその製法 | |
| EP1751272B1 (en) | Production of tacrolimus (fk-506) using new streptomyces species | |
| GB2220657A (en) | Antifungal fermentation product | |
| JP5283927B2 (ja) | 新規化合物アミコラマイシン、その製造方法及びその用途 | |
| WO2010122669A1 (ja) | 新規化合物アミコラマイシン、その製造方法及びその用途 | |
| WO2007127218A2 (en) | Streptomyces-derived antimicrobial compound and method of using same against antibiotic-resistant bacteria | |
| RU2420568C2 (ru) | Штамм и способ получения антибиотика митомицина с путем биосинтеза | |
| JP3199748B2 (ja) | Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ Ｃａｒｂｏｎａｃｅａ由来の新規オルトソマイシン | |
| AU631666B2 (en) | Antibiotics plusbacin | |
| RU2495937C1 (ru) | Способ получения такролимуса методом микробиологического синтеза | |
| JP2018121532A (ja) | ファルネシル酸及びファルネシル酸産生用酵母の製造方法、並びに、新規酵母、ファルネシル酸産生用組成物及びその利用 | |
| KR100750810B1 (ko) | 스트렙토마이세스 히그로스코피쿠스 ａｔｃｃ １４８９１변이주 및 이를 이용한 타크로리무스 생산 방법 | |
| JP3564566B2 (ja) | 新規ｒｋ−７５物質、その製造方法及び用途 | |
| JP5636179B2 (ja) | 新規化合物ウォークマイシン、その製造方法、及びその用途 | |
| JPWO2006095444A1 (ja) | ステンフォン（ｓｔｅｍｐｈｏｎｅ）類およびそれらの製造方法 | |
| WO2005112951A1 (ja) | 抗腫瘍剤、抗腫瘍剤の製造方法、抗腫瘍剤を含む医薬組成物、及び抗腫瘍剤産生菌 | |
| JPH09221493A (ja) | 新規化合物ｋ４６１０１７８ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20051130 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20081216 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090310 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090317 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090616 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20090901 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20091224 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20100127 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20100219 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100316 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100325 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4485799 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130402 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130402 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140402 Year of fee payment: 4 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |