JP4458253B2 - 検体試料用マイクロチップ - Google Patents
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Description
本実施の形態の検体試料用マイクロチップは、外形が円形又は正方形であり、その中心部に検体試料を注入する入力ポートS1から連続する円周状の流路Crと分注用チャンネルCeを持つチャンネルパターンが連続するように形成されるとともに、この円周状の分注用チャンネルCeの外周に連続して検体試料を検査する部分となる検出用チャンバT1,T2が形成されている(図1)。検出用チャンバT1,T2は、円周状の分注用チャンネルCeから外周に向かう流路p1を介して放射状に形成されるとともに、外周に向かう流路p1よりも広く形成されている。
まず、PCR(Polymerase Chain Reaction)反応とは、ポリメラーゼ連鎖反応とも呼ばれ、特定の遺伝子の配列をもとにその遺伝子を短時間に100万倍に複製する技術である。生物工学的な分野での利用以外にも、最近では血液及び髄液などから遺伝的な疾患やウイルス・病原菌などを診断・検出するために利用される。この生成過程を解析する事により、そのDNAの含有量そのものを定量する事が可能であり、PCR反応の手順としては、次の(1)〜(6)などの手順により行われる。(1)DNAを抽出(2)二重螺旋の形態をとるDNAを加熱し、1本鎖の状態にする。(3)4つの塩基により構成されている遺伝子は特定の塩基と結合する。(4)この塩基の配列が遺伝子配列であり、標的とする遺伝子を対象とする配列をもとに作成し、これと対となる遺伝子の断片(プライマー)を加える。(5)プライマーは、目的とする遺伝子配列と結合する。(6)熱耐性酵素(Taq酵素)は、プライマーが1本鎖遺伝子と結合している場合、その結合部位から、もとの2重螺旋DNAを再生する。
8μl、Amplitaq Gold DNA polymerase : 1μl、TaqMan primer:5μl、Forward primer:5μl、Reverse primer:5μl、H2O:10μl、2.5% PVP: 5μl、Human Male DNA: 1μl)を作製し、回転を与えることで検体試料用マイクロチップのチャンバに配置した。次にマイクロチップをサーマルサイクラに置き、温度条件 95℃:5分の加熱後、95℃: 15秒−60℃: 60秒の加熱を45サイクル行い、DNAを増幅させた。その後、蛍光顕微鏡を用いて、各チャンバの蛍光強度変化(ex460-490、em510-550)を測定したところ、ヒトゲノムDNAを含むチャンバの蛍光強度は、含まないチャンバの蛍光強度に比べ、平均で1.84倍上昇していた。この結果から、検体試料用マイクロチップを用いて標的とする遺伝子の検出が可能であることが分かった。
次に、検体試料用マイクロチップ1Fを図3に示すように設定して、これを上記回転駆動装置にかけて回転させた。検体試料用マイクロチップ1Fは、第1の検出用チャンバT1の幅H1と第2の検出用チャンバT2の幅H2と分注用チャンバCeの幅H3とは同じ幅であり、2000μmである。第1の流路p1の幅p1hは、500μm、第2の流路p2の幅p2hは、750μm、円周状の流路Crの幅Crhは、100μmに設定されている。そして、第2の検出用チャンバT2と第2の流路p2にミネラルオイルOが配させているが(図4(a))、入力ポートS1から色素Rを円周状の流路Crを注入し(図4(b))、そして回転駆動させると、所定数の回転により、オイルOと色素溶液Rの比重の違いから2液が置換され、分注用チャンバCeにはエア(空気)A、第1の検出用チャンバT1にはオイルO、第2の検出用チャンバT2には色素Rの順に配置(分注)できることが確認できた(図4(c))。ここで、円周状の流路Crの幅Crhが100μm程度で、分注用チャンバCeの幅H3が上記2000μm程度であるとすると、分注用チャンバCeのPCR反応溶液である検体試料は、細幅の円周状の流路Crに注されている検体試料を無視して、分注用チャンネルCeに注入された検体試料のみが検出用チャンバT1に予め決められた量を送り込まれることとなる。
本実施の形態の検体試料用マイクロチップは、図5に示すように、チップの中心部の流路Crが円弧状の流路として形成され、これが2組合わさって両方で円周状を形成している。すなわち、円弧状の流路Crのチャンネルパターンが2つ設けられており、それぞれに検体試料を注入する入力ポートS1と、円弧状の流路Cr上であってこの流路Crよりも広幅に形成された分注用チャンネルCeと、分注用チャンネルCeとこれよりも狭い連結用の流路p1,p2を介して連続する検出用チャンバT1,T2とを備える。そして、二組みのそれぞれの入力ポートS1,S1に異なる検体試料を注入し、検出用チャンバT1,T2に検体試料を切り離すように分けて注入することで2種の検体を同時に検査する。本実施の形態においても、外形は円形又は正方形であり、検出用チャンバT1,T2が二個配置されている点等は第1の実施の形態と同様である。なお、本実施の形態では円弧状の流路Crのチャンネルパターンが2つであるが、2個以上に同じように形成することも可能である。
Cr 円周状又は円弧状の流路、
Ce 分注用チャンネル、
p1,p2 外周に向かう流路、p1h,p2h 流路の幅、
R 検体試料(色素溶液)、
S1 入力ポート、
S2 空気穴、
T1,T2, 検出用のチャンバ、
H1 第1の検出用のチャンバの幅、
H2 第2の検出用のチャンバの幅、
H3 分注用チャンバの幅、
Claims (3)
- 回転駆動装置により、液状の検体試料の流路となるチャンネルパターンが形成された検体試料用マイクロチップを回転させて使用する検体試料用マイクロチップにおいて、
チャンネルパターンは、このチップの中心部に検体試料を注入する入力ポートから連続する円周状又は円弧状の流路と、この円周状又は円弧状の流路上であってこの流路よりも広幅に形成された分注用チャンネルと、この分注用チャンネルとこれよりも狭い連結用の流路を介して連続して検体試料を検査する部分となる検出用チャンバとを備え、上記分注用チャンネルは、検出用チャンバに検体試料を切り離すように分けて注入するときにその分注量を定量化するものであり、前記検出用チャンバは、前記分注用チャンネルの外周側に放射状に位置するように同心円上に配置され、上記各チャンネルは、その両端部のチャンネルの間隔以外は等間隔で形成され、両端部には、入力ポートと空気穴が形成され、前記分注用チャンネルは、検出用チャンバとほぼ同じ大きさであり、
前記円周状又は円弧状の流路と分注用チャンネルに液状の検体試料を注入した後に、これを回転駆動装置に搭載させて回転させることを特徴とする検体試料用マイクロチップ。 - 前記円周状の流路であるチャンネルパターンは、円弧状の流路のチャンネルパターンが2つ以上設けられて円周状となるもので、それぞれに検体試料を注入する入力ポートと、前記少なくとも2つの円弧状の流路上であってこの流路よりも広幅に形成された分注用チャンネルと、この分注用チャンネルとこれよりも狭い連結用の流路を介して連続して検体試料を検査する部分となる検出用チャンバと、前記少なくとも2つの円弧状の流路の最終位置に外部と連結する空気穴を備え、それぞれの入力ポートに異なる検体試料を注入し、検出用チャンバに検体試料を切り離すように分けて注入する分注により少なくとも2種の検体を同時に検査することを特徴とする請求項1記載の検体試料用マイクロチップ。
- 前記検出用チャンバは、各分注用チャンネルの外周側に第1の検出用チャンバが同じ数形成され、第1の検出用チャンバの外側の同心円上に第2の検出用チャンバが同じ数形成されていることを特徴とする請求項1又は2記載の検体試料用マイクロチップ。
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