JP4437218B2

JP4437218B2 - Ｒｎａ−プロタミン複合体、その製造方法およびそれを含む健康食品

Info

Publication number: JP4437218B2
Application number: JP2002342290A
Authority: JP
Inventors: 則雄西; 向東劉; 政司松永
Original assignee: 日生バイオ株式会社
Priority date: 2002-11-26
Filing date: 2002-11-26
Publication date: 2010-03-24
Anticipated expiration: 2022-11-26
Also published as: JP2004173555A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＲＮＡとプロタミンとからなるＲＮＡ−プロタミン複合体、該ＲＮＡ−プロタミン複合体の製造方法、ならびに該ＲＮＡ−プロタミン複合体を含む健康食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、酵母より抽出された核酸、特にＲＮＡや、魚類の精巣等から得られるプロタミンは、ガン予防や若返り効果が期待できる材料として、近年注目を浴びている。そしてこれらは、健康食品の他、化粧品や医薬品等の材料として、様々な分野で使用されている。その場合、これらはそれぞれ単独で用いられる場合もあるが、より効能を高める観点から、これら両者の併用も試みられている。ＲＮＡと、プロタミンとを含む健康食品等は、一般に原料となる精製酵母ＲＮＡと精製プロタミンとを別々に製造し、製造されたそれらを所定の配合比で混合することにより製造されている。即ち、上記の健康食品等の製造にあっては、ＲＮＡとプロタミンの各々独立した製造及び精製過程を経る必要があり、製造工程数が多く、生産費を上げる要因の一つとなっていた。
また、従来酵母からＲＮＡを単離し、それを最終用途となる健康食品等に材料として提供するため、酵母から抽出されるＲＮＡはできるだけ精製されていることが必要であった。
【０００３】
通常、酵母には、ＲＮＡが２〜４重量％含まれており、これを利用するためのＲＮＡの抽出精製作業は一般に、食塩水溶液を用いて行い（例えば、特許文献１）、その後、抽出溶液の食塩分を除く工程を経て行われている。しかし、この食塩分の除去には複雑な工程が必要であり、多大なコストがかかるため、従来の酵母ＲＮＡ製品には、完全に塩分除去されない１０重量％以上のかなりの塩分を含む製品として製造されているものも知られている。このような製品を健康食品等の原料として使用する場合には、脱塩等の前処理を要することもある。
【０００４】
また、他にも酵母からのＲＮＡ抽出法として、酸やアルカリ、ドデシル硫酸ソーダ（ＳＤＳ）等の界面活性剤や、フェノール等の抽出剤を使用する方法、その他リゾチームを使用する生化学的方法、超音波、ガラスビーズ、ボールミル、高圧噴射衝撃、等を使用する方法が知られている。例えば特許文献２には、酵母菌体を含有する懸濁液を破砕処理することにより得られた酵母スラリーに塩類を添加し、さらにアルカリ性（ｐＨ９〜９．５）で９０℃〜１１０℃で１５ないし６０分加熱抽出し、それをｐＨ２以下の硫酸酸性下で沈殿させ分離することによる高純度のリボ核酸を製造する方法が開示されている。
上述のような酵母からのＲＮＡ抽出方法では、脱塩や抽出後、さらなるＲＮＡ精製が必要となる。また、使用する抽出剤には食品製造に適しない抽出剤も多い。
【０００５】
【特許文献１】
特開昭５０−１３５２７４号公報（第１〜２頁）
【特許文献２】
特開平１０−１１７７９４号公報（第２〜４頁）
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明はかかる事情の下なされたもので、ＲＮＡとプロタミンの双方の性能特性を満足に発揮するものであって、かつ、これらの混合物を用いた場合と比較してより経済的に、しかも高品質に製造されうるところの新規ＲＮＡ−プロタミン複合体を提供することを課題とするものである。また、本発明はかかる新規ＲＮＡ−プロタミン複合体を利用した従来に無い健康食品の提供をも課題とするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは酵母ＲＮＡと魚類の白子由来のプロタミンに関し、様々な研究を重ねていたところ、酵母菌体を含有する懸濁液を破砕処理して得られたスラリーに塩類を添加しプロタミンと共存させた酸性懸濁液中で、酵母ＲＮＡとプロタミンとが水難溶性の新規な複合体を形成することを見出した。そこで本発明者らはこの知見に基づいて鋭意検討し、酵母由来のＲＮＡと魚類の白子由来のプロタミンの作用を併せ持つことが期待できる、ＲＮＡ−プロタミン複合体であって、健康食品等のための材料として利用可能な本発明を完成させた。
従って、本発明は特に酵母由来のＲＮＡとプロタミンとから、これら両者の活性が消失することなく複合形成されてなるＲＮＡ−プロタミン複合体、ならびに酵母菌体を含有する懸濁液を破砕処理して得られたスラリーに塩類を添加し、それに酸を加えて酸性にした懸濁液に、プロタミンを加えることにより、ＲＮＡ−プロタミン複合体を得る、ＲＮＡ−プロタミン複合体の製造方法に関する。また、本発明は酵母ＲＮＡ抽出物の酸性溶液にプロタミンを加えることによる、ＲＮＡ−プロタミン複合体の製造方法にも関する。
前述のように健康食品の材料として、酵母由来のＲＮＡと白子由来のプロタミンとを配合したものは既に知られているが、本発明のようなＲＮＡ−プロタミン複合体は知られていない。
【０００８】
本発明における酵母は食品として利用できる種類のものであれば、特に制限されることはないが、代表的にはビール酵母、パン酵母、乳酵母として知られるSaccharomyces 属やKluyveromyces属の他、場合によってPichia属、Hansenula属およびCandida属等の酵母等も挙げられる。特にビール酵母（Saccharomyces cervisiae）が好ましい。
本発明における複合体のＲＮＡ源としては、酵母菌体を直接破砕処理して得られたスラリーに塩類を添加することにより得た懸濁液やそれから菌体を除去したＲＮＡ抽出物を使用することもできるが、市販の酵母ＲＮＡエキスを使用でき、乾燥粉末では水に溶解したものを同様に利用することができる。さらに、都合の良いことには例えば、塩化ナトリウムを約１０〜１５重量％で使用することによって得られた高濃度の塩分を含む酵母由来のＲＮＡ抽出物を原料として使用しても、得られた本発明の複合体中の元素分析によるＣｌの検出はほとんどみられず、塩分濃度は非常に低いことが見いだされた。即ち、本発明は一般的に使用されている塩化ナトリウムを用いたＲＮＡ抽出法により得られた、塩分濃度は高いが、核酸ＲＮＡの含有率の高い抽出物を材料に使用しても塩化ナトリウム含有量が低濃度のＲＮＡ−プロタミン複合体を得ることができる。
なお、酵母菌体を含有する懸濁液を破砕処理して得られたスラリー等に添加する塩類は、上述のような塩化ナトリウムの他、塩化カリウム、塩化リチウム、過塩素酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、硫酸アンモニウム等がある。
【０００９】
また、本発明で使用するプロタミンは、魚類、例えばサケ、マス、ニシン、タラ等の精巣由来のものが使用されるが、入手容易性や、コスト等を考慮すると、特にサケとニシンの白子由来のものが好ましい。
【００１０】
なお、本発明のＲＮＡ−プロタミン複合体は、ポリアニオン性天然高分子であるＲＮＡに対し、ポリカチオン性高分子であるプロタミンを加えることにより形成されるものと考えられる。
従って、本発明のＲＮＡと複合体を形成するプロタミンはポリカチオン性高分子であるが、本発明に関連して、ＲＮＡとの複合体はプロタミン以外にも他のポリカチオン性の天然高分子または合成高分子が使用できる。これらの例としては、キトサン等の天然多糖及びその誘導体、リシンやアルギニンなどの塩基性アミノ酸を多く含むタンパク質、例えばコラーゲン、その変性誘導タンパク質即ち、ゼラチン等また、ポリエチレンアミンなどの合成高分子も使用できる。
【００１１】
ＲＮＡ−プロタミン複合体形成は、酵母菌体を含有する懸濁液を破砕処理して得られたスラリーに塩類を添加したもの、または市販等の酵母ＲＮＡ抽出物と、プロタミンとを水性媒体中で懸濁溶解し、反応を促進するために酸を添加して、ｐＨ１〜６．５、好ましくはｐＨ３〜４の酸性条件下で行う。ｐＨが１より低い場合には、ＲＮＡの加水分解が起こるために好ましくなく、また、ｐＨ６．５以上では反応促進効果が無くなる。これらのｐＨ調整のための酸は塩酸、硫酸、酢酸、クエン酸、酒石酸などが適当である。
また、反応温度は１０〜９０℃が適当であり、室温でも十分進行可能である。
上記条件下で、反応を２０〜３０分ないし４〜５時間おこなうことにより目的の複合体が得られる。
【００１２】
本発明のＲＮＡ−プロタミン複合体は、形成後は水洗のみでさらなる脱塩等の工程を必要とすることなく、健康食品等にそのまま利用できる。本発明のＲＮＡ−プロタミン複合体は水難溶性で、水溶液中で沈殿するのでろ過、遠心分離等により、容易に溶液から分離できる。分離後、乾燥し、粉末状、顆粒状、固形状または懸濁溶液状の健康食品や他の可能な用途、例えば化粧品等の材料として使用することができ、ＲＮＡとプロタミンの両方の効力が期待できる健康食品用の材料とすることができる。
従って、本発明はさらに上記ＲＮＡ−プロタミン複合体を含む健康食品にも関する。これらは例えば、錠剤、タブレット、機能性食品、各種飲料等の原料として使用できる。
【００１３】
【実施例】
以下、本発明を限定することを目的としない実施例によって、本発明をより詳細に説明する。
実施例１
固形分１５％ビール酵母懸濁水溶液を高圧噴射衝撃式ホモジナイザーを用いて、１０００ｋｇｆ／ｃｍ²の圧力で1回破砕処理した。この酵母懸濁液１５０ｍｌに水５０〜２００ｍｌおよび食塩５〜２０ｇ加え十分に混合した後、１００℃のオートクレーブに１時間かけ、室温まで水冷して懸濁スラリーを得た。これとは別にプロタミン（和光純薬製サケ由来）１ｇを１００ｍｌの水に溶解し２４時間振とうさせて１重量％プロタミン水溶液を調製した。室温下、前記懸濁スラリー２０ｍｌに、酢酸（和光純薬製）を滴下してｐＨを約３に調整後、前記１重量％プロタミン水溶液６ｍｌを滴下した。得られた混合液を室温で４時間振とうさせた。得られたサンプルを３０００ｒｐｍで３０分遠心分離した後、沈殿物を１０ｍｌの蒸留水で３回洗浄し、４０℃で真空乾燥させた。
約０．０９ｇ（例えば、食塩２０ｇ使用の場合）の黄色い固体が得られたが、この複合体にはそのまま実際の食品に使用しても支障のない程度の塩分が含まれるにすぎなかった。
また、この複合体の赤外分光分析（装置：ＨＯＲＩＢＡＦＴ−２１０、（株）堀場製作所製、条件：ＫＢｒ法）を行ったところ、下記、図１のビール酵母由来のＲＮＡが示した波数１５３５ｃｍ^-1、１４７３ｃｍ^-1、１２３５ｃｍ^-1、１０５０ｃｍ^-1の位置と同じ位置にピークがみられることから、この沈殿物はビール酵母由来のＲＮＡの特徴を示すことが判る。
【００１４】
実施例２
ビール酵母より抽出したＲＮＡ〔商品名：酵母ＲＮＡ、北京燕京中科生物技術有限公司製、中国、北京、塩化ナトリウム１２重量％含有、赤外分光スペクトル（装置：ＨＯＲＩＢＡＦＴ−２１０、（株）堀場製作所製、条件：ＫＢｒ法）を図１に示す。）〕０．５ｇを９９．５ｍｌの水に溶かし２４時間振とうさせて（ラボシェーカー、井内盛栄堂（株）製を使用）、０．５重量％ＲＮＡ水溶液を調製した。同様にプロタミン（和光純薬製サケ由来サルシン）１ｇを１００ｍｌの水に溶解し２４時間振とうさせて１重量％プロタミン水溶液を調製した。室温下、前記０．５重量％ＲＮＡ水溶液１０ｍｌに酢酸（和光純薬製）０．５ｍｌを滴下した後、前記１重量％プロタミン水溶液６ｍｌを滴下した。得られた混合液を室温で４時間振とうさせた。得られたサンプルを３０００ｒｐｍで３０分遠心分離した後、沈殿物を２ｍｌの蒸留水で洗浄し、４０℃で真空乾燥させた。
０．０９３２ｇの黄色い固体が得られ、塩素の元素分析（フラスコ燃焼法）では塩素は検出されなかった。従って、この複合体には実質的に塩化ナトリウムが含まれないと考えることができる。
さらに、この複合体の赤外分光分析（装置：ＨＯＲＩＢＡＦＴ−２１０、（株）堀場製作所製、条件：ＫＢｒ法）を行ったところ、図２に示すスペクトルが得られ、図１のビール酵母由来のＲＮＡが示した波数１５３５ｃｍ^-1、１４７３ｃｍ^-1、１２３５ｃｍ^-1、１０５０ｃｍ^-1の位置と同じ位置にピークがみられることから、この沈殿物はビール酵母由来のＲＮＡの特徴を示すことが判る。
【００１５】
実施例３：
より高濃度の酵母ＲＮＡ抽出物を使用するＲＮＡ−プロタミン複合体の製造を以下のように行った。
ビール酵母より抽出したＲＮＡ（商品名：酵母ＲＮＡ、北京燕京中科生物技術有限公司製、中国、北京、塩化ナトリウム１２重量％含有）４．０ｇを２０．０ｍｌになるよう水に溶解し、４８時間振とうし、ＲＮＡ水溶液を得た。水溶液中の不溶物を吸引ろ過により除去し、茶色の溶液を得た。この溶液はｐＨ２．０であったため、酢酸を加えずに、該溶液に直接プロタミン（日生バイオ (株)製、プロザーブLotNo.020712）の１０重量％水溶液５ｍｌを攪拌しながら滴下した。２０分攪拌した後、混合系中でガム状で、粘性を持つ沈殿物塊が得られた。この沈殿物を真空下で５０℃にて乾燥させ、実施例１と同様の条件で塩素についての元素分析を行った。
塩素の元素分析をした結果は０．８重量％であり、これは即ち塩化ナトリウムとして約１．３重量％の極めて低い塩分濃度に相当する。
得られた、より多量の塩分を包含している２０重量％の高濃度ＲＮＡ抽出物を材料としたＲＮＡ−プロタミン複合体であっても、その塩分含量は極めて低いことが示された。
【００１６】
【発明の効果】
本発明では、従来、健康食品等において精製酵母ＲＮＡと精製プロタミンをそれぞれ加える場合に比べ、２つの機能を併せ持つＲＮＡ−プロタミン複合体を精製酵母ＲＮＡの製造過程で高純度で製造することができるので健康食品等の製造工程数をより少なくすることができる。また、本発明のＲＮＡ−プロタミン複合体は、酸性下で酵母懸濁液に直接プロタミンを加えるという簡素な方法で形成でき、しかも水難溶性のため分離が容易である。さらに例え、従来から知られた塩化ナトリウムにより抽出された酵母ＲＮＡ抽出物を使用しても、本発明の方法により得られたＲＮＡ−プロタミン複合体は殆ど塩分を含まないので、そのまま脱塩処理を要せずに、健康食品用の材料として利用できる。
従って本発明により、健康食品をより経済的に、効率良く提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例２で使用した酵母由来のＲＮＡの赤外分光スペクトルを示す。
【図２】実施例２で得られた酵母由来のＲＮＡ−プロタミン複合体の赤外分光スペクトルを示す。

Claims

酵母菌体を含有する懸濁液を破砕処理して得られたスラリーに塩類を添加し、さらに酸性にした後、プロタミンを加えることにより、複合形成されてなる、ＲＮＡ−プロタミン複合体。
酵母菌体を直接破砕処理して得られたスラリーに塩類を添加することにより得た懸濁液から菌体を除去したＲＮＡ抽出物の酸性溶液にプロタミンを加えることにより複合形成されてなる、ＲＮＡ−プロタミン複合体。
ＲＮＡがビール酵母、パン酵母または乳酵母由来のものである請求項１または２記載のＲＮＡ−プロタミン複合体。
プロタミンが魚類の白子由来のプロタミンである請求項１または２記載のＲＮＡ−プロタミン複合体。
請求項１ないし４のいずれか１項に記載のＲＮＡ−プロタミン複合体を含む健康食品。
酵母菌体を含有する懸濁液を破砕処理して得られたスラリーに塩類を添加し、さらに酸性にした後、プロタミンを加えることにより得られるＲＮＡ−プロタミン複合体の製造方法。
酵母菌体を直接破砕処理して得られたスラリーに塩類を添加することにより得た懸濁液から菌体を除去したＲＮＡ抽出物の酸性溶液にプロタミンを加えることにより得られるＲＮＡ−プロタミン複合体の製造方法。