JP4413387B2

JP4413387B2 - Collagen production promoter, elastase activity inhibitor, collagenase activity inhibitor and skin cosmetic

Info

Publication number: JP4413387B2
Application number: JP2000210931A
Authority: JP
Inventors: ゆう子秦; 善仁川嶋; 直子岸田
Original assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2000-07-12
Filing date: 2000-07-12
Publication date: 2010-02-10
Anticipated expiration: 2020-07-12
Also published as: JP2002029923A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はコラーゲン産生促進剤、エラスターゼ活性阻害剤、コラゲナーゼ活性阻害剤及び皮膚化粧料に関する。具体的には、人の皮膚の線維芽細胞におけるコラーゲンの産生を活発化して皮膚の老化を防止するのに有用なコラーゲン産生促進剤、エラスターゼ活性阻害剤、コラゲナーゼ活性阻害剤及びこれらを利用した皮膚の老化予防に有用な新規皮膚化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
老化して弾力性を失い、シワ・タルミができた皮膚の組織レベルの変化としては、真皮層におけるコラーゲンの減少が最も顕著である。すなわち、健康で若い人の皮膚真皮層では繊維状のコラーゲンとそれに絡み付くようにして存在するコイル状の硬タンパク質、エラスチンによって皮膚のハリや弾力性が良い状態に保たれており、これら皮膚の弾力保持に寄与するコラーゲンもエラスチンも線維芽細胞で逐次産生されて補給され、新陳代謝を繰り返している。ところが、加齢に伴い新たなコラーゲンやエラスチンの補給量が減少したり、紫外線刺激によってエラスチンの分解が促進されたりすると、これら皮膚の弾力保持に関わっている構造の維持が困難になり、皮膚は老化した状態となる。
【０００３】
これまで、シワ・タルミを予防する方法として、紫外線からの防御、抗酸化剤、活性酸素の消去が有用であると考えられ、これらの機能を有する種々の物質の開発が試みられて来たが、今だ十分なものはなく、近年ではコラーゲンの産生促進などに直接関与する調節因子についての研究が盛んになって来ている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、皮膚の弾力維持に関与するコラーゲンやエラスチンの調整因子に関し、老化した皮膚を若返らせる作用物質として、線維芽細胞によるコラーゲンの産生を促進するコラーゲン産生促進剤や産成されたコラーゲンの分解を促すコラゲナーゼの活性を阻害するコラゲナーゼ活性阻害剤、さらには、エラスチンの分解を促すエラスターゼの活性を阻害するエラスターゼ活性阻害剤を見出し、皮膚の老化防止に有用な新規皮膚化粧料を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明に係るコラーゲン産生促進剤及びコラゲナーゼ活性阻害剤並びにエラスターゼ活性阻害剤は、それぞれセイロンマツリの抽出物からなることを特徴としている。
【０００６】
また、本発明に係る皮膚化粧料は、本発明に係るコラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ活性阻害剤及びエラスターゼ活性阻害剤のうちの少なくとも１種を含有することを特徴としている。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明についてさらに詳細に説明すると、本発明に係るコラーゲン産生促進剤及びコラゲナーゼ活性阻害剤並びにエラスターゼ活性阻害剤は、それぞれセイロンマツリ（Plumbago zeylanicum L.）、ハマスゲ（Cyperus rotundus L.）の何れか１種若しくは２種を用いた抽出物からなるものであって、コラーゲン産生促進物質及びコラゲナーゼ活性阻害物質並びにエラスターゼ活性阻害物質を有効成分として含有するものである。
【０００８】
これらの植物は、通例乾燥した状態で使用され、その使用部位も限定されるものではないが、抽出効率の観点から、次に述べるごとく各植物に属した部位が好ましく用いられる。さらに具体的に説明すると、セイロンマツリは、ルリマツリ科イソマツ属に属するつる性、低木状の多年草であって、主に根部が好適に使用される。また、ハマスゲは、カヤツリグサ科カヤツリグサ属に属する多年草であり、細長い地下茎を伸ばして繁殖し、その先端に塊茎を作るが、本発明においてはこの塊茎が好適に使用される。
【０００９】
セイロンマツリ特にその根部、ハマスゲ特にその塊茎が含有するコラーゲン産生促進作用及びコラゲナーゼ活性阻害作用並びにエラスターゼ活性阻害作用を有する物質の詳細については不明であるが、これらの物質は、水やメタノール、エタノール、イソプロパノールなどの各種脂肪族低級アルコール、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール、グリセリンなどの親水性有機溶媒、これら親水性有機溶媒の混合物及びこれらの親水性有機溶媒と水との混液などの各種水系溶媒を用いて抽出することによって容易に得られるものである。特に好ましい抽出溶媒は、これらの親水性有機溶媒と水との混液であって、当該抽出溶媒からの抽出物は高い活性を示し、しかも、取扱いが容易で、抽出作業が比較的容易に行なえる。
【００１０】
これらの抽出対象植物は、一般的には各部位を乾燥した後、中切、細切したり、あるいは粉砕して用いられる。また、ハマスゲの塊茎の場合には、そのまま生で用いることもできる。抽出方法や抽出条件等も特に限定されるものではないが、好適には重量比で用いる植物量の５〜１５倍量の前記抽出溶媒に浸漬し、常温ないし９０℃程度の加熱・加温下で、ゆるやかに撹拌しながら可溶性成分を溶出させる。この後、当該抽出液をろ過又は遠心分離し、液固分離して目的となる抽出物を得る。
【００１１】
こうして得られた抽出液はそのまま、本発明に係るコラーゲン産生促進剤及びコラゲナーゼ活性阻害剤並びにエラスターゼ活性阻害剤として用いることもできるが、活性が低い場合もあるため、適宜濃縮したエキス状物、あるいは、例えばスプレードライなどの方法を用いてさらに乾固させ、乾燥エキスとして用いることも可能である。また、必要に応じて、これらの作用の減退を大きく招かない範囲で、活性炭処理や吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等による簡単な精製処理を施してもよい。さらには、上記エキス状物や乾燥エキスもそのまま用いたり、あるいは任意の助剤、例えばデンプンや乳糖などの各種賦形剤を添加する、また、エタノールなどの溶剤等と混合して用いることができるのは言うまでもない。
【００１２】
また、本発明においては、上記のごとく得られた抽出物を単独であるいは２種を混合して用いてもよく、あるいは、抽出時において、セイロンマツリ及びハマスゲの２つの植物を混合して抽出してもよいのはもちろんである。
【００１３】
これらのコラーゲン産生促進剤及びコラゲナーゼ活性阻害剤並びにエラスターゼ活性阻害剤は、これらの作用を最も効果的に発揮させるために、各種の皮膚化粧料に配合される。配合対象は皮膚に適用可能なものであればよいが、適当な皮膚化粧料として、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、入浴剤等が挙げられる。この場合の配合量として、各抽出固形分としてそれぞれ概ね０．００５〜１５重量％、原料であるセイロンマツリ、ハマスゲの各乾燥物換算として、概ね０．０４〜４０％になるように添加するのが適当である。もちろん、本発明の効果を達成する限りにおいては、その上限量、下限量は問われるものではない。なお、本発明に係る皮膚化粧料には、これらのコラーゲン産生促進作用、コラゲナーゼ活性阻害作用あるいはエラスターゼ活性阻害作用のいずれかを妨げない限り、皮膚化粧料の製造に通常用いられる各種の原材料を用いることができるのは言うまでもない。
【００１４】
本発明によるコラーゲン産生促進剤及びコラゲナーゼ活性阻害剤並びにエラスターゼ活性阻害剤は、繊維状コラーゲンからなる皮膚張力保持構造を極めて良好な状態に保ち、それにより、老化した皮膚はハリや弾力性を取り戻し、健康な肌も常に良好な状態に保たれる。加えて、それによる二次的な効果として、皮膚の保湿力が向上し、肌荒れが改善される。従って、本発明によるコラーゲン産生促進剤、エラスターゼ活性阻害剤、コラゲナーゼ活性阻害剤を配合した皮膚化粧料は、若々しい肌を維持するのに極めて有効なものとなる。
【００１５】
【実施例】
次に、本発明の実施例であるコラーゲン産生促進剤、エラスターゼ活性阻害剤並びにコラゲナーゼ活性阻害剤及び本発明の製剤例である各種皮膚化粧料を示し、さらに本発明について詳細に説明する。
【００１６】
（実施例１）
乾燥したセイロンマツリの根部粗砕物、ハマスゲの塊茎粗砕物各々５０ｇに、水を各々５００ｍｌを加え、還流抽出器で３時間加熱抽出した。その後、ろ過して得られた抽出液を減圧下に濃縮し、さらに凍結乾燥して、粉末状抽出物を得た。その収量を表１に示す。
【００１７】
【表１】

【００１８】
（実施例２）
乾燥したセイロンマツリの根部粗砕物、ハマスゲの塊茎粗砕物各々５０ｇに、８０ｖ／ｖ％エタノール水溶液を各々５００ｍｌを加え、還流抽出器で３時間加熱抽出した。その後、ろ過して得られた抽出液を減圧下に濃縮し、さらに凍結乾燥して、粉末状抽出物を得た。その収量を表２に示す。
【００１９】
【表２】

【００２０】
（実施例３）
乾燥したセイロンマツリの根部粗砕物、ハマスゲの塊茎粗砕物各々５０ｇに、エタノールを各々５００ｍｌを加え、還流抽出器で３時間加熱抽出した。その後、ろ過して得られた抽出液を減圧下に濃縮し、さらに凍結乾燥して、粉末状抽出物を得た。その収量を表３に示す。
【００２１】
【表３】

【００２２】
（実施例４）
乾燥したセイロンマツリの根部粗砕物、ハマスゲの塊茎粗砕物各々５０ｇに、５０ｖ／ｖ％１，３−ブチレングリコール水溶液を各々５００ｍｌを加え、９５℃で３時間加熱抽出した。その後、ろ過して得られた抽出液を５℃に５日間静置し、生じたオリや沈澱をケイソウ土を用いてろ過して澄明な抽出液を得た後、さらに５０ｖ／ｖ％１，３−ブチレングリコール水溶液を加え、液状の抽出物５００ｍｌを得た。なお、固形分濃度は、当該抽出物の少量を取り、蒸発乾固して求めた（実施例５においても同じ）。
【００２３】
【表４】

【００２４】
（実施例５）
乾燥したセイロンマツリの根部粗砕物、ハマスゲの塊茎粗砕物各々５０ｇに、１，３−ブチレングリコールを各々５００ｍｌを加え、９５℃で３時間加熱抽出した。その後、ろ過して得られた抽出液を５℃に５日間静置し、生じたオリや沈澱をケイソウ土を用いてろ過し、澄明な抽出液を得た後、さらに１，３−ブチレングリコールを加え、液状の抽出物５００ｍｌを得た。当該抽出物の固形分濃度（ｗ／ｖ％）を表５に示す。
【００２５】
【表５】

【００２６】
次に、上記実施例１から実施例５で得た各種コラーゲン産生促進剤やエラスターゼ活性阻害剤並びにコラゲナーゼ活性阻害剤を用いて、本発明に係る皮膚化粧料を各種製造したところ、いずれの製剤例においても、良好な製剤を得ることができた。なお、以下の製剤例においては、各処方ごとに２種の抽出物についてそれぞれ製剤例を作製した。
【００２７】
（製剤例１）
〔乳液１００ｍｌ中〕
植物８０v/v％エタノール抽出物（実施例２）２．０ｇ
ホホバオイル４．０ｇ
オリーブオイル２．０ｇ
スクワラン２．０ｇ
セタノール２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０E.O.）２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０E.O.）２．０ｇ
１，３−ブチレングリコール３．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル０．１５ｇ
香料０．０５ｇ
精製水残量
上記成分分量を取り、常法に従って本発明に係る皮膚化粧料である乳液を作製した。
【００２８】
（製剤例２）
〔化粧水１００ｍｌ中〕
植物水抽出物（実施例１）１．０ｇ
グリセリン３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール３．０ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム０．３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０E.O.）０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル０．１５ｇ
クエン酸０．５ｇ
クエン酸ナトリウム１．０ｇ
アスコルビン酸リン酸マグネシウム０．１ｇ
黄杞エキス０．５ｇ
オウゴンエキス０．５ｇ
プラセンタエキス３．０ｇ
オウレンエキス０．５ｇ
フェノキシエタノール０．５ｇ
香料０．０５ｇ
精製水残量
上記成分分量を取り、常法に従って本発明に係る皮膚化粧料である化粧水を作製した。
【００２９】
（製剤例３）
〔クリーム１００ｇ中〕
植物エタノール抽出物（実施例３）１．０ｇ
流動パラフィン５．０ｇ
サラシミツロウ４．０ｇ
セタノール３．０ｇ
スクワラン１０．０ｇ
ラノリン２．０ｇ
ステアリン酸１．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０E.O.）１．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル１．５ｇ
油溶性甘草エキス０．５ｇ
紫米エキス０．５ｇ
ジユ抽出物０．３ｇ
酵母抽出物０．２ｇ
香料０．１ｇ
精製水残量
上記成分分量を取り、常法に従って本発明に係る皮膚化粧料であるＷ／Ｏ型のクリームを作製した。
【００３０】
（製剤例４）

上記成分分量を取り、常法に従って本発明に係る皮膚化粧料であるパックを作製した。
【００３１】
（効果試験）
〔コラーゲン産生促進作用〕
上記実施例１〜５で得た各抽出物について、Websterらの方法（Anal.Biochem.,Vol96,220,1979）に従って、各抽出物を添加した培地で培養した線維芽細胞によって産生されたコラーゲン量を測定した。一方、各抽出物を添加しない培地で産生された放射活性を測定し、このコラーゲン量を１００とした場合のコラーゲン産生量割合を求めた。以下に具体的な試験方法を示し、その結果を表６及び表７に示す。
試験法：ヒトの線維芽細胞をプレートに播種し、３７℃、５％二酸化炭素下、２種類の試料添加培地（試料濃度：２００ｐｐｍ及び５０ｐｐｍ）で数日間培養した後、β−アミノプロピオニトリルと［³Ｈ］−プロリンとを添加し、更に２４時間培養した。当該培養液全体にペプシン／酢酸溶液を加えて４℃下で１６時間消化し、次いでこの消化液にキャリアーを加えて、０．７Ｍ食塩水で沈殿させ、さらに中性条件下で再溶解させて、４．２Ｍ食塩水で再沈殿させた。得られた沈殿物を２０ｖ／ｖ％エタノールで洗浄した後、その沈殿物の放射活性を測定した。
【００３２】
【表６】

【００３３】
【表７】

【００３４】
〔エラスターゼ活性阻害作用〕
上記実施例１〜５で得た各種抽出物について、下記のエラスターゼ活性阻害試験を行い、その結果を表８に示す。
【００３５】
９６穴マイクロプレートを用意し、１穴に対して試料溶液（溶媒：ＤＭＳＯ＋水当量混合液）５０μｌ及びエラスターゼ溶液５０μｌを添加し、さらに基質溶液１００μｌを添加して混合する。２５℃で５０分間反応させた後、波長４１５ｎｍにおける吸光度Ａｓ1を測定する。次に、エラスターゼ溶液の代わりに当該溶液に用いた溶媒を用いて同様の反応を行い、吸光度Ａｓ0を測定する。また、ブランク試験として、試料溶液の代わりに試料溶液と等量の溶媒を用いて同様の試験を行い、それぞれエラスターゼ溶液を添加した場合の吸光度Ａｂ1及び添加しなかった場合の吸光度Ａｂ0を測定し、次式により、エラスターゼ活性阻害率（％）を求めた。
エラスターゼ活性阻害率（％）
＝｛１−（Ａｓ1−Ａｓ0）／（Ａｂ1−Ａｂ0）｝×１００
試料溶液の濃度を種々変更して上記阻害率の測定を行い、エラスターゼの活性を５０％阻害する試料溶液濃度を内挿法により求めた。
【００３６】
なお、エラスターゼ溶液は、シグマ社製エラスターゼType３５ｍｇを、ｐＨ８の０．２Ｍトリス塩酸緩衝液１ｍｌに溶解し、使用時に同トリス塩酸緩衝液にて２５０倍に希釈したものを用いた。また、基質溶液には、シグマ社製のＮ−SUCCINYL-ALA-ALA-ALA-p-NITROANILIDEをＤＭＳＯに溶解した濃度４５．１４ｍｇ／ｍｌの溶液をｐＨ８の０．２Ｍトリス塩酸緩衝液で１００倍に希釈したものを用いた。
【００３７】
【表８】

【００３８】
〔コラゲナーゼ活性阻害作用〕
上記実施例１〜５で得た各種抽出物について、下記のコラゲナーゼ活性阻害試験を行い、その結果を表９に示す。
【００３９】
試料溶液(溶媒：ｐＨ７．１の０．１Ｍトリス塩酸緩衝液）５０μｌ、コラゲナーゼ溶液５０μｌ及び基質溶液４００μｌを混合し、３７℃で３０分間インキュベーションする。次いで、２５ｍＭクエン酸溶液１ｍｌを加えて反応を停止し、酢酸エチル５ｍｌを用いて抽出する。得られた抽出液について、波長３２０ｎｍの吸光度Ａｓ1（対照液：酢酸エチル）を測定する。また、コラゲナーゼ溶液の代わりに蒸留水を用いて同様の測定を行い吸光度Ａｓ0を測定する。次いで、試料溶液の代わりに蒸留水を用いて同様の試験を行い、コラゲナーゼ溶液を添加した場合の吸光度Ａｂ1及び添加しなかった場合の吸光度Ａｂ0を測定し、次式により、コラゲナーゼ活性阻害率（％）を求めた。
コラゲナーゼ活性阻害率（％）
＝｛１−（Ａｓ1−Ａｓ0）／（Ａｂ1−Ａｂ0）｝×１００
試料溶液の濃度を種々変更して上記阻害率の測定を行い、コラゲナーゼの活性を５０％阻害する試料溶液濃度を内挿法により求めた。
【００４０】
なお、コラゲナーゼ溶液は、シグマ社製コラゲナーゼType４５ｍｇを蒸留水１ｍｌに溶解し、使用時に蒸留水で５０倍に希釈したものを用いた。また、基質溶液には、２０ｍＭの塩化カルシウムを含有するｐＨ７．１の０．１Ｍトリス塩酸緩衝液に、Bachem Fenichemkalien AG社 Pz−ペプチドを濃度が０．５Ｍになるように溶解したものを使用した。
【００４１】
【表９】

【００４２】
（評価結果）
表６から表９に示すように、水やエタノール、１，３−ブチレングリコール、これらの有機溶媒と水の混液など各種水系溶媒を用いたセイロンマツリ抽出物、ハマスゲ抽出物には、それぞれ良好なコラーゲン産生促進作用、コラゲナーゼ活性阻害作用並びにエラスターゼ活性阻害作用が認められた。
【００４３】
〔シワ改善効果及び肌荒れ改善効果〕
次に上記製剤例１に示す乳液について、下記の評価試験を行った。なお、比較例として、セイロンマツリ抽出物、ハマスゲ抽出物を含まない乳液を作製し、これを用いた。
・被験者：顔面皮膚角質層の剥離が多く、皮溝や皮丘が明らかでない（いわゆる肌荒れの状態）年齢３５〜４５歳の女性８名に、顔の右半分に製剤例１に示す乳液を、左半分には比較例である乳液を、朝夕各１回、その適量を２ヶ月間塗布してもらった。その後、被験者の目尻のシワの状態を肉眼観察により評価し、その結果を表１０及び表１１に示した。
【００４４】
【表１０】

【００４５】
【表１１】

【００４６】
また、上記塗布期間途中である塗布開始２０日経過時点で、顔面皮膚の状態を、ミリスチン樹脂を用いたレプリカ法を用いて、顔のレプリカを採り、倍率２０倍の光学顕微鏡で皮紋の状態及び角層剥離状態を観察し、下記の評価基準に従って肌の状態を判定した。その判定結果を表１２及び表１３に示す。
判定基準
１：角層の剥離が非常に多い。皮溝、皮丘が消失している。
２：角質の剥離が非常に多い。皮溝、皮丘が明瞭でない。
３：角質が若干剥離している。皮溝、皮丘は認められるが平坦である。
４：角質の剥離がわずかに認められる。
５：角質の剥離がほとんどなく、皮溝、皮丘が明瞭で整っている。
【００４７】
【表１２】

【００４８】
【表１３】

【００４９】
表１０〜表１３から分かるように、本発明の製剤例である乳液を塗布した領域においては、比較例である乳液を塗布した場合に比べ、シワを少なくすると共に、顕著に肌荒れが改善され、若々しい皮膚になることが確認された。
【００５０】
【発明の効果】
本発明によれば、古くから使用され安全性が確保されている植物から、効果に優れた新規なコラーゲン産生促進剤、新規なコラゲナーゼ活性阻害剤、新規なエラスターゼ活性阻害剤を提供できる。これらを皮膚化粧料に適用することにより、皮膚の老化を効果的に防止し、皮膚のハリの維持に大きく貢献でき、若々しい皮膚の保持が期待できる皮膚化粧料を提供できる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a collagen production promoter, an elastase activity inhibitor, a collagenase activity inhibitor, and a skin cosmetic. Specifically, collagen production promoters, elastase activity inhibitors, collagenase activity inhibitors useful for activating collagen production in human skin fibroblasts to prevent skin aging, and skin using these The present invention relates to a novel skin cosmetic useful for the prevention of aging.
[0002]
[Prior art]
As a change in the tissue level of the skin that has lost its elasticity due to aging and wrinkles and tarmi, the decrease in collagen in the dermis layer is the most remarkable. In other words, the skin dermis layer of healthy young people is kept in good skin elasticity and elasticity with fibrous collagen and coiled hard protein, elastin that is entangled with the collagen. Collagen and elastin that contribute to retention are successively produced and supplemented by fibroblasts, and metabolism is repeated. However, if the amount of new collagen or elastin supplemented with age decreases or the degradation of elastin is accelerated by UV stimulation, it becomes difficult to maintain the structure involved in maintaining the elasticity of the skin. Aged.
[0003]
Up to now, as a method for preventing wrinkles and tarmi, protection from ultraviolet rays, antioxidants and elimination of active oxygen have been considered useful, and development of various substances having these functions has been attempted. However, there is still not enough, and in recent years, research on regulatory factors directly involved in the promotion of collagen production has been actively conducted.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
The present invention relates to a regulator of collagen and elastin involved in maintaining skin elasticity, and as an agent that rejuvenates aged skin, a collagen production promoter that promotes the production of collagen by fibroblasts and the produced collagen To find a collagenase activity inhibitor that inhibits the activity of collagenase that promotes degradation, as well as an elastase activity inhibitor that inhibits the activity of elastase that promotes degradation of elastin, and to provide a novel skin cosmetic useful for preventing skin aging It is in.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
The collagen production promoter, collagenase activity inhibitor and elastase activity inhibitor according to the present invention are each characterized by comprising an extract of Ceylon pine.
[0006]
The skin cosmetic according to the present invention is characterized by containing at least one of the collagen production promoter , collagenase activity inhibitor and elastase activity inhibitor according to the present invention.
[0007]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Hereinafter, the present invention will be described in more detail. Collagen production promoter, collagenase activity inhibitor and elastase activity inhibitor according to the present invention may be any one of Ceylon pine (Plumbago zeylanicum L.) and Hamasuge (Cyperus rotundus L.). It consists of an extract using one or two kinds, and contains a collagen production promoting substance, a collagenase activity inhibiting substance and an elastase activity inhibiting substance as active ingredients.
[0008]
These plants are usually used in a dry state, and the use site is not limited, but from the viewpoint of extraction efficiency, sites belonging to each plant are preferably used as described below. More specifically, the Ceylon pine is a perennial, low-tree-like perennial belonging to the genus Isomatsu, which is mainly used at its root. Further, the humus is a perennial belonging to the genus Cyperaceae, and grows by extending an elongated underground stem and makes a tuber at its tip. This tuber is preferably used in the present invention.
[0009]
Ceylon pine, in particular its roots, mussels, especially tuber tubers, collagen production promoting action and collagenase activity inhibitory action and elastase activity inhibitory substance details are unknown, but these substances are water, methanol, ethanol, Various aqueous systems such as various aliphatic lower alcohols such as isopropanol, hydrophilic organic solvents such as 1,3-butylene glycol, ethylene glycol and glycerin, mixtures of these hydrophilic organic solvents, and mixtures of these hydrophilic organic solvents and water It can be easily obtained by extraction using a solvent. A particularly preferred extraction solvent is a mixture of these hydrophilic organic solvents and water, and the extract from the extraction solvent exhibits high activity, and is easy to handle and can be extracted relatively easily. .
[0010]
These extraction target plants are generally used after each part is dried and then chopped, chopped, or pulverized. In addition, in the case of a tuber of hamasge, it can be used as it is. The extraction method and extraction conditions are not particularly limited, but are preferably immersed in the extraction solvent in an amount 5 to 15 times the amount of the plant used in a weight ratio, and heated and heated at room temperature to about 90 ° C. And elute soluble components with gentle agitation. Thereafter, the extract is filtered or centrifuged, and liquid-solid separated to obtain the target extract.
[0011]
The extract thus obtained can be used as it is as a collagen production promoter, collagenase activity inhibitor and elastase activity inhibitor according to the present invention. However, since the activity may be low, Further, for example, it is possible to further dry it by using a method such as spray drying and use it as a dry extract. In addition, if necessary, simple purification treatment by activated carbon treatment, adsorption resin treatment, ion exchange resin treatment, or the like may be performed within a range that does not greatly reduce these effects. Furthermore, the above extract and dried extract can be used as they are, or any auxiliary agent, for example, various excipients such as starch and lactose can be added, and mixed with a solvent such as ethanol. Needless to say.
[0012]
In the present invention, the extract obtained as described above may be used alone or in combination of two kinds, or, at the time of extraction, two plants, Ceylon pine and Hamasge are mixed and extracted. Of course.
[0013]
These collagen production promoters, collagenase activity inhibitors, and elastase activity inhibitors are blended in various skin cosmetics in order to exhibit these effects most effectively. The blending target may be anything that can be applied to the skin, but examples of suitable skin cosmetics include ointments, creams, emulsions, lotions, packs, bathing agents, and the like. As a blending amount in this case, it is added so that each extracted solid content is approximately 0.005 to 15% by weight, and approximately 0.04 to 40% in terms of each dry matter of Ceylon pine and Hamasuge as raw materials. Is appropriate. Of course, as long as the effect of the present invention is achieved, the upper limit amount and the lower limit amount are not questioned. The skin cosmetic according to the present invention uses various raw materials that are usually used in the manufacture of skin cosmetics unless they interfere with any of the collagen production promoting action, collagenase activity inhibiting action, or elastase activity inhibiting action. Needless to say, you can.
[0014]
Collagen production promoter and collagenase activity inhibitor and elastase activity inhibitor according to the present invention keeps the skin tension retaining structure composed of fibrous collagen in a very good state, whereby the aged skin regains its elasticity and elasticity, Healthy skin is always in good condition. In addition, as a secondary effect, the skin moisturizing power is improved and rough skin is improved. Therefore, the skin cosmetics containing the collagen production promoter, elastase activity inhibitor, and collagenase activity inhibitor according to the present invention are extremely effective for maintaining youthful skin.
[0015]
【Example】
Next, collagen production promoters, elastase activity inhibitors and collagenase activity inhibitors that are examples of the present invention, and various skin cosmetics that are formulation examples of the present invention will be shown, and the present invention will be described in detail.
[0016]
Example 1
500 ml of water was added to 50 g of each of the dried root of Ceylon pine and crushed potato tuber, and the mixture was heated and extracted with a reflux extractor for 3 hours. Thereafter, the extract obtained by filtration was concentrated under reduced pressure and further freeze-dried to obtain a powdery extract. The yield is shown in Table 1.
[0017]
[Table 1]

[0018]
(Example 2)
To 50 g of each dried root of Ceylon pine and crushed tuber of Hamasuge, 500 ml of an 80 v / v% aqueous ethanol solution was added, and the mixture was heated and extracted with a reflux extractor for 3 hours. Thereafter, the extract obtained by filtration was concentrated under reduced pressure and further freeze-dried to obtain a powdery extract. The yield is shown in Table 2.
[0019]
[Table 2]

[0020]
(Example 3)
500 ml of ethanol was added to 50 g of each of the dried crushed root of Ceylon pine and the crushed potato tuber, and the mixture was heated and extracted with a reflux extractor for 3 hours. Thereafter, the extract obtained by filtration was concentrated under reduced pressure and further freeze-dried to obtain a powdery extract. The yield is shown in Table 3.
[0021]
[Table 3]

[0022]
Example 4
To 50 g of each of the dried crushed root of Ceylon pine and the crushed potato tuber, 500 ml each of 50 v / v% 1,3-butylene glycol aqueous solution was added, and the mixture was heated and extracted at 95 ° C. for 3 hours. Thereafter, the extract obtained by filtration was allowed to stand at 5 ° C. for 5 days, and the resulting sediment and precipitate were filtered using diatomaceous earth to obtain a clear extract, and then 50 v / v% 1, A 3-butylene glycol aqueous solution was added to obtain 500 ml of a liquid extract. The solid content concentration was determined by taking a small amount of the extract and evaporating to dryness (the same applies to Example 5).
[0023]
[Table 4]

[0024]
(Example 5)
500 ml of 1,3-butylene glycol was added to 50 g of each dried root of Ceylon pine and crushed tuber of Hamasuge, and extracted by heating at 95 ° C. for 3 hours. Thereafter, the extract obtained by filtration was allowed to stand at 5 ° C. for 5 days, and the resulting sediment and precipitate were filtered using diatomaceous earth to obtain a clear extract, and further 1,3-butylene glycol. Was added to obtain 500 ml of a liquid extract. Table 5 shows the solid content concentration (w / v%) of the extract.
[0025]
[Table 5]

[0026]
Next, various skin cosmetics according to the present invention were produced using the various collagen production promoters, elastase activity inhibitors and collagenase activity inhibitors obtained in Examples 1 to 5 above. Also, a good formulation could be obtained. In the following formulation examples, formulation examples were prepared for two types of extracts for each formulation.
[0027]
(Formulation example 1)
[In 100ml of emulsion]
Plant 80v / v% ethanol extract (Example 2) 2.0g
Jojoba oil 4.0g
Olive oil 2.0g
Squalane 2.0g
Cetanol 2.0g
Polyoxyethylene cetyl ether (20E.O.) 2.5g
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.O.) 2.0g
1,3-butylene glycol 3.0 g
Methyl paraoxybenzoate 0.15g
Fragrance 0.05g
Purified water residual amount The above component amount was taken, and a milky lotion, which is a skin cosmetic according to the present invention, was prepared according to a conventional method.
[0028]
(Formulation example 2)
[In 100ml lotion]
Plant water extract (Example 1) 1.0 g
Glycerin 3.0g
1,3-butylene glycol 3.0 g
Dipotassium glycyrrhizinate 0.3g
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.O.) 0.5g
Methyl paraoxybenzoate 0.15g
Citric acid 0.5g
Sodium citrate 1.0g
Ascorbic acid magnesium phosphate 0.1g
Twilight extract 0.5g
Ogon Extract 0.5g
Placenta extract 3.0g
Ouren extract 0.5g
Phenoxyethanol 0.5g
Fragrance 0.05g
Purified water residual amount The above component amounts were taken, and a skin lotion, which is a skin cosmetic according to the present invention, was prepared according to a conventional method.
[0029]
(Formulation example 3)
[In 100g of cream]
Plant ethanol extract (Example 3) 1.0 g
Liquid paraffin 5.0g
Salami beeswax 4.0g
Cetanol 3.0g
Squalane 10.0g
Lanolin 2.0g
Stearic acid 1.0g
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.O.) 1.5g
3.0 g glyceryl monostearate
1,3-butylene glycol 6.0 g
1.5 g of methyl paraoxybenzoate
Oil soluble licorice extract 0.5g
Purple rice extract 0.5g
Jiuyu extract 0.3g
Yeast extract 0.2g
Fragrance 0.1g
Purified water remaining amount The above component amount was taken, and a W / O type cream, which is a skin cosmetic according to the present invention, was prepared according to a conventional method.
[0030]
(Formulation example 4)

The amount of the above components was taken, and a pack which is a skin cosmetic according to the present invention was prepared according to a conventional method.
[0031]
(Effectiveness test)
[Promoting collagen production]
For each of the extracts obtained in Examples 1 to 5, collagen produced by fibroblasts cultured in a medium supplemented with each extract according to the method of Webster et al. (Anal. Biochem., Vol 96, 220, 1979). The amount was measured. On the other hand, the radioactivity produced in the medium without the addition of each extract was measured, and the collagen production rate when this collagen content was taken as 100 was determined. Specific test methods are shown below, and the results are shown in Tables 6 and 7.
Test method: Human fibroblasts are seeded on a plate, cultured at 37 ° C. and 5% carbon dioxide in two types of sample-added media (sample concentrations: 200 ppm and 50 ppm) for several days, and then β-aminopropionitrile. And [ ³ H] -proline were added, and further cultured for 24 hours. A pepsin / acetic acid solution is added to the whole culture solution, digested at 4 ° C. for 16 hours, then a carrier is added to the digested solution, precipitated with 0.7 M saline, and redissolved under neutral conditions. Re-precipitated with 4.2M saline. The obtained precipitate was washed with 20 v / v% ethanol, and then the radioactivity of the precipitate was measured.
[0032]
[Table 6]

[0033]
[Table 7]

[0034]
[Elastase activity inhibitory action]
The various elastase activity inhibition tests described below were performed on the various extracts obtained in Examples 1 to 5, and the results are shown in Table 8.
[0035]
A 96-well microplate is prepared, and 50 μl of sample solution (solvent: DMSO + water equivalent mixture) and 50 μl of elastase solution are added to each well, and 100 μl of substrate solution is further added and mixed. After reacting at 25 ° C. for 50 minutes, the absorbance As1 at a wavelength of 415 nm is measured. Next, the same reaction is performed using the solvent used in the solution instead of the elastase solution, and the absorbance As0 is measured. Also, as a blank test, the same test was performed using a solvent equivalent to the sample solution instead of the sample solution, and the absorbance Ab1 when the elastase solution was added and the absorbance Ab0 when the elastase solution was not added were measured, The elastase activity inhibition rate (%) was determined by the following formula.
Elastase activity inhibition rate (%)
= {1- (As1-As0) / (Ab1-Ab0)} * 100
The inhibition rate was measured by changing the concentration of the sample solution in various ways, and the concentration of the sample solution that inhibits the elastase activity by 50% was determined by interpolation.
[0036]
The elastase solution was prepared by dissolving 5 mg of elastase Type 3 manufactured by Sigma in 1 ml of 0.2 M Tris-HCl buffer solution having a pH of 8, and diluting 250 times with the same Tris-HCl buffer solution at the time of use. As the substrate solution, N-SUCCINYL-ALA-ALA-ALA-p-NITROANILIDE manufactured by Sigma was dissolved in DMSO at a concentration of 45.14 mg / ml with 0.2 M Tris-HCl buffer at pH 8. The diluted one was used.
[0037]
[Table 8]

[0038]
[Inhibition of collagenase activity]
The various collagenase activity inhibition tests described below were performed on the various extracts obtained in Examples 1 to 5, and the results are shown in Table 9.
[0039]
Mix 50 μl of sample solution (solvent: 0.1 M Tris-HCl buffer with pH 7.1), 50 μl of collagenase solution and 400 μl of substrate solution, and incubate at 37 ° C. for 30 minutes. The reaction is then stopped by adding 1 ml of 25 mM citric acid solution and extracted with 5 ml of ethyl acetate. The absorbance As1 (control solution: ethyl acetate) having a wavelength of 320 nm is measured for the obtained extract. Further, the same measurement is performed using distilled water instead of the collagenase solution, and the absorbance As0 is measured. Next, the same test was performed using distilled water instead of the sample solution, and the absorbance Ab1 when the collagenase solution was added and the absorbance Ab0 when the collagenase solution was not added were measured. )
Collagenase activity inhibition rate (%)
= {1- (As1-As0) / (Ab1-Ab0)} * 100
The inhibition rate was measured by variously changing the concentration of the sample solution, and the concentration of the sample solution that inhibits collagenase activity by 50% was determined by interpolation.
[0040]
In addition, the collagenase solution used what melt | dissolved 5 mg of collagenase Type4 by Sigma in 1 ml of distilled water, and diluted 50 times with distilled water at the time of use. The substrate solution used was a Bachem Fenichemkalien AG Pz-peptide dissolved in a 0.1 M Tris-HCl buffer solution of pH 7.1 containing 20 mM calcium chloride to a concentration of 0.5 M. .
[0041]
[Table 9]

[0042]
(Evaluation results)
As shown in Table 6 to Table 9, water, ethanol, 1,3-butylene glycol, a Ceylon pine extract using various aqueous solvents such as a mixture of these organic solvents and water, and a hamage extract are each good. Collagen production promoting action, collagenase activity inhibiting action and elastase activity inhibiting action were observed.
[0043]
[Wrinkle improvement effect and rough skin improvement effect]
Next, the following evaluation test was conducted on the emulsion shown in Formulation Example 1. In addition, as a comparative example, an emulsion containing no Ceylon pine extract or humus extract was prepared and used.
Test subject: Many skin stratum corneum exfoliation and skin grooves and hills are not obvious (so-called rough skin condition) 8 women aged 35 to 45 years old, the emulsion shown in Formulation Example 1 on the right half of the face, On the left half, a milky lotion as a comparative example was applied once each morning and evening for an appropriate amount for 2 months. Thereafter, the condition of wrinkles in the corners of the subject's eyes was evaluated by visual observation, and the results are shown in Tables 10 and 11.
[0044]
[Table 10]

[0045]
[Table 11]

[0046]
In addition, when the application period is 20 days after the application period, the facial skin state is taken using a replica method using myristic resin, and a facial replica is taken. And the stratum corneum peeling state was observed, and the skin state was determined according to the following evaluation criteria. The determination results are shown in Tables 12 and 13.
Criteria 1: Exfoliation of stratum corneum is very large. The crevice and hides have disappeared.
2: Exfoliation of keratin is very much. The skin groove and hill are not clear.
3: The keratin is slightly peeled off. Skin grooves and hills are visible but flat.
4: Exfoliation of keratin is slightly recognized.
5: There is almost no exfoliation of the keratin, and the skin groove and the cuticle are clear and well-equipped.
[0047]
[Table 12]

[0048]
[Table 13]

[0049]
As can be seen from Tables 10 to 13, in the area where the emulsion which is the formulation example of the present invention is applied, compared with the case where the emulsion which is the comparative example is applied, the wrinkles are reduced and the rough skin is remarkably improved. It was confirmed that the skin became youthful.
[0050]
【The invention's effect】
ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the novel collagen production promoter excellent in the effect, the novel collagenase activity inhibitor, and the novel elastase activity inhibitor can be provided from the plant used from old times and the safety | security ensured. By applying these to skin cosmetics, it is possible to provide skin cosmetics that can effectively prevent skin aging, greatly contribute to the maintenance of skin firmness, and can be expected to retain youthful skin.

Claims

A collagen production promoter comprising an extract of Ceylon pine.

An elastase activity inhibitor comprising an extract of Ceylon pine.

A collagenase activity inhibitor comprising an extract of Ceylon pine.

A skin cosmetic comprising at least one of the collagen production promoter according to claim 1, the elastase activity inhibitor according to claim 2, and the collagenase activity inhibitor according to claim 3.