JP4262289B2 - 生体試料の解析法及び疾患マーカーの検索法 - Google Patents
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Description
また、Brown, C. W, et al., Analytical Chemistry, Vol. 54, No. 9, pp. 1472 (1982)や飯田康夫ら, BUNSEKI KAGAKU, Vol. 32, pp. 401(1983)には、吸光光度法に関する定量方法が記載されている。
一般に中性糖鎖などの中性分子はポジティブイオンが安定であるため、MS/MS解析には[M+Na]+や[M+H]+をプリカーサーイオンとして解析を行う。しかし、例えば疾患マーカーとして注目されているフコース含有糖鎖をポジティブモードで解析すると、フコースが優先的に脱落したイオンが多く生成する。そして、同じ組成を有する構造異性体間では、同じ組成の(すなわち同じ質量数の)プロダクトイオンがイオン強度のみを異にして生成するために、それらプロダクトイオンを識別することが困難である。このため、正確な構造の同定や、疾患マーカーの検索を行うことができない。
本発明者らは、糖鎖を標識することによって、マトリクスに酸性物質を添加せずに、容易にネガティブイオンを生成、安定化させ、質量分析装置による測定の感度を向上させることを見いだした。さらに、このようにして生じたネガティブイオンが、MSn解析によって再現性よく構造特異的なイオンを生成させることも見いだし、高感度で、簡便、迅速に構造情報を得る方法を完成させた。
<1>〜<15>の発明は、糖鎖の解析方法に関する。
<1>
中性糖鎖を含む試料を用意し、
前記中性糖鎖を標識し、中性の標識糖鎖を得るか、
又は、
酸性糖鎖を含む試料を用意し、
前記酸性糖鎖を、中性化及び標識し、中性の標識糖鎖を得て、
前記中性の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定することによって、前記糖鎖の解析を行うことを含む、糖鎖の質量分析方法。
互いに構造異性体の関係にある中性糖鎖(A、B、C、…)を含む試料を用意し、
前記中性糖鎖(A、B、C、…)を標識し、中性の標識糖鎖(A´、B´、C´、…)を得るか、
又は、
互いに構造異性体の関係にある、酸性糖鎖(A、B、C、…)を含む試料を用意し、
前記酸性糖鎖(A、B、C、…)を中性化及び標識し、中性の標識糖鎖(A´、B´、C´、…)を得て、
前記中性の標識糖鎖(A´、B´、C´、…)を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定することによって、前記中性の標識糖鎖(A´、B´、C´、…)からそれぞれ特異的に生じるイオン(a、b、c、…)を検出することによって、前記糖鎖(A、B、C、…)を互いに識別することを含む、糖鎖の質量分析方法。
ここで、イオンa、イオンb、イオンc、…はそれぞれ、対応する標識糖鎖から1種又は複数種生じうる。
前記イオン(a、b、c、…)についてそれぞれ構造解析を行うことによって、前記糖鎖(A、B、C、…)の全体構造又は部分構造をそれぞれ同定する、<2>に記載の質量分析方法。
複数種の中性糖鎖の構造異性体がそれぞれ既知混合比で含まれる試料を用意し、
前記複数種の中性糖鎖の構造異性体を標識し、複数種の中性且つ標識された構造異性体を得るか、
又は、
複数種の酸性糖鎖の構造異性体がそれぞれ既知混合比で含まれる試料を用意し、
前記複数種の酸性糖鎖の構造異性体を、中性化及び標識し、複数種の中性且つ標識された構造異性体を得て、
前記複数種の中性且つ標識された構造異性体を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定し、前記複数種の中性且つ標識された構造異性体それぞれから特異的に生じるイオンを検出することによって、前記複数種の糖鎖の構造異性体の解析を行うことを含む、糖鎖の質量分析方法。
前記検出された特異的に生じるイオンについて構造解析を行うことによって、前記複数の糖鎖の構造異性体それぞれの全体構造又は部分構造を同定し、及び/又は、
前記検出された特異的に生じるイオンを、前記複数種の構造異性体の定量のためのイオンとして決定し、前記決定されたイオンのイオン強度と前記既知混合比との関係を見出す、<4>に記載の糖鎖の質量分析方法。
前記複数種の中性糖鎖の構造異性体が未知混合比で含まれる試料を用意し、
前記複数の中性糖鎖の構造異性体を標識し、複数種の中性且つ標識された構造異性体を得るか、
又は、
複数種の酸性糖鎖の構造異性体が未知混合比で含まれる試料を用意し、
前記複数の酸性糖鎖の構造異性体を、中性化及び標識し、複数種の中性且つ標識された構造異性体を得て、
前記複数種の中性且つ標識された構造異性体を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定し、前記複数種の中性且つ標識された構造異性体それぞれから特異的に生じるイオンを検出することによって、前記複数種の糖鎖の構造異性体の解析を行うことを含み、
前記検出された特異的に生じるイオンについて構造解析を行うことによって、前記複数の糖鎖の構造異性体それぞれの全体構造又は部分構造を同定し、及び/又は、
<5>に記載の方法によって見出された関係に基づいて、前記未知混合比を算出する、糖鎖の質量分析方法。
(1)構造未知の1種又は複数種の中性糖鎖を含む試料を用意し、
前記構造未知の中性糖鎖を標識し、構造未知の中性の標識糖鎖を得て、
前記構造未知の中性の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定し、
(2)別途、構造既知の1種又は複数種の中性糖鎖を含む試料を用意し、
前記構造既知の中性糖鎖を標識し、構造既知の中性の標識糖鎖を得て、
前記構造既知の中性の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定するか、
又は、
(1)構造未知の1種又は複数種の酸性糖鎖を含む試料を用意し、
前記構造未知の酸性糖鎖を、中性化及び標識し、構造未知の中性の標識糖鎖を得て、
前記構造未知の中性の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定し、
(2)別途、構造既知の1種又は複数種の酸性糖鎖を含む試料を用意し、
前記構造既知の酸性糖鎖を、中性化及び標識し、構造既知の中性の標識糖鎖を得て、
前記構造既知の中性の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定し、
(3)前記(1)で得られた、前記構造未知の中性の標識糖鎖のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報と、前記(2)で得られた、前記構造既知の中性の標識糖鎖のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報との比較を行うことによって、前記構造未知の糖鎖の解析を行うことを含む、糖鎖の質量分析方法。
前記(3)において、前記構造未知の中性の標識糖鎖のマススペクトルのピーク全体及び/又は前記マススペクトルから得られる情報の全体と、前記構造既知の中性の標識糖鎖のマススペクトルのピーク全体及び/又は前記マススペクトルから得られる情報の全体とが一致することを確認することにより、前記構造未知の糖鎖は、前記構造既知の糖鎖と同じ構造を有すると決定する、<7>に記載の糖鎖の質量分析方法。
前記(3)において、前記構造未知の中性の標識糖鎖のマススペクトルの特定のピーク及び/又は前記マススペクトルから得られる特定の情報と、前記構造既知の中性の標識糖鎖のマススペクトルの特定のピーク及び/又は前記マススペクトルから得られる特定の情報とが一致することを確認することにより、前記構造未知の糖鎖は、前記構造既知の糖鎖と同じ構造を部分構造として有すると決定する、<7>に記載の糖鎖の質量分析方法。
前記標識を行うために用いられる標識化合物が、芳香族の基本骨格を有する化合物である、<1>〜<9>のいずれかに記載の糖鎖の質量分析方法。
前記芳香族が、ピレン、ベンゼン、及びピリジンからなる群から選ばれる、<10>に記載の糖鎖の質量分析方法。
前記標識を行うために用いられる標識化合物が、芳香族アミン及び芳香族カルボン酸ヒドラジドからなる群から選ばれる、<1>〜<11>のいずれかに記載の糖鎖の質量分析方法。
前記標識化合物が、ピレンブタン酸ヒドラジド、アミノピレン、2−アミノピリジン、2−アミノベンゼン、アミノ安息香酸、及びアミノ安息香酸エステルからなる群から選ばれる、<1>〜<12>のいずれかに記載の糖鎖の質量分析方法。
前記糖鎖が、フコースを有する糖鎖である、<1>〜<13>のいずれかに記載の糖鎖の質量分析方法。
前記酸性糖鎖が、シアル酸、硫酸基含有糖、及びリン酸基含有糖からなる群から選ばれる酸性糖を有する糖鎖である、<1>〜<14>のいずれかに記載の糖鎖の質量分析方法。
以下の<16>〜<23>は、疾患マーカーの検索法に関する。
(1)特定の疾患の罹患者に由来する、解析すべき中性糖鎖を有する生体分子Xを含む試料を用意し、
前記生体分子Xを標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子X´を得て、 前記中性の標識糖鎖を有する生体分子X´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
(2)別途、前記特定の疾患の非罹患者に由来する、解析すべき中性糖鎖を有する生体分子Yを含む試料を用意し、
前記生体分子Yを標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´を得て、 前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定するか、
又は、
(1)特定の疾患の罹患者に由来する、解析すべき酸性糖鎖を有する生体分子Xを含む試料を用意し、
前記生体分子Xを、中性化及び標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子X´を得て、
前記中性の標識糖鎖を有する生体分子X´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
(2)別途、特定の疾患の非罹患者に由来する、解析すべき酸性糖鎖を有する生体分子Yを含む試料を用意し、
前記生体分子Yを、中性化及び標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´を得て、
前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
(3)前記(1)で得られた前記中性の標識糖鎖を有する生体分子X´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報と、前記(2)で得られた前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報とを比較し、互いに異なるマススペクトルピーク及び/又は情報を見出すことによって、前記特定の疾患の発現に関わる構造の存在を確認する、疾患マーカーの検索法。
前記見出された異なるマススペクトルピーク又は情報のうち、
質量/電荷において異なり、且つ、前記中性の標識糖鎖を有する生体分子X´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報に含まれて、前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報には含まれないもの、又は、
同一の質量/電荷であってイオン強度において異なり、且つ、前記中性の標識糖鎖を有する生体分子X´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報に、前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報よりも強いイオン強度で検出されているものから、前記特定の疾患の発現に関わる構造を解析し、
前記特定の疾患の発現に関わる構造又は前記生体分子Xの構造を疾患マーカーの構造として決定する、<16>に記載の疾患マーカーの検索法。
前記生体分子が糖鎖である、<16>又は<17>に記載の疾患マーカーの検索法。
前記特定の疾患が癌であり、前記生体分子がフコース及び/又はシアル酸含有糖鎖又は血液型抗原である、<16>〜<18>のいずれかに記載の疾患マーカーの検索法。
前記特定の疾患が自己免疫疾患に起因し且つ血液型と相関を示す疾患であり、前記生体分子がフコース及び/又はシアル酸含有糖鎖又は血液型抗原である、<16>〜<19>のいずれかに記載の疾患マーカーの検索法。
前記特の疾患が心臓疾患又は高コレステロール血症であり、前記生体分子がフコース及び/又はシアル酸含有糖鎖又は血液型抗原である、<16>〜<19>のいずれかに記載の疾患マーカーの検索法。
前記標識を行うために用いられる標識化合物が、ピレン誘導体、ベンゼン誘導体、及びピリジン誘導体からなる群から選ばれる、<16>〜<21>のいずれかに記載の疾患マーカーの検索法。
前記標識を行うために用いられる標識化合物が、ピレンブタン酸ヒドラジド、アミノピレン、2−アミノピリジン、2−アミノベンゼン、アミノ安息香酸、及びアミノ安息香酸エステルからなる群から選ばれる、<16>〜<22>のいずれかに記載の疾患マーカーの検索法。
このうち、<24>及び<25>は、質量分析を用いた試料の解析法に関する。
被験者に由来する、解析すべき中性糖鎖を有する生体分子Zを含む試料を用意し、
前記生体分子Zを標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´を得るか、
又は、
被験者に由来する、解析すべき酸性糖鎖を有する生体分子Zを含む試料を用意し、
前記生体分子Zを、中性化及び標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´を得て、
前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
疾患マーカーのマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報を指標として、得られた前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報から、前記被験者における特定の疾患の発現の有無又は前記発現の程度を判断する、生体分子を含む試料の解析法。
(1)被験者に由来する、解析すべき中性糖鎖を有する生体分子Zを含む試料を用意し、
前記生体分子Zを標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´を得て、
前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
(2)別途、解析すべき中性糖鎖を有する疾患マーカーを用意し、
前記疾患マーカーを標識し、中性の標識糖鎖を有する疾患マーカーを得て、
前記中性の標識糖鎖を有する疾患マーカーをMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定するか、
又は、
(1)被験者に由来する、解析すべき酸性糖鎖を有する生体分子Zを含む試料を用意し、
前記生体分子Zを、中性化及び標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´を得て、
前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
(2)別途、解析すべき酸性糖鎖を有する疾患マーカーを用意し、
前記疾患マーカーを、中性化及び標識し、中性の標識糖鎖を有する疾患マーカーを得て、
前記中性の標識糖鎖を有する疾患マーカーをMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
(3)前記(1)で得られた前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報と、前記(2)で得られた中性の標識糖鎖を有する疾患マーカーのマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報とを比較し、前記被験者における特定の疾患の発現の有無又は前記発現の程度を判断する、生体分子を含む試料の解析法。
被験者に由来する、生体分子を含む試料を用意し、<16>〜<23>のいずれかに記載の方法によって見出された疾患マーカーを用いて、前記被験者における特定の疾患の発現の有無又は前記発現の程度を判断する、生体分子を含む試料の解析法。
<16>〜<23>のいずれかに記載の方法によって見出された疾患マーカーであって、フコース及び/又はシアル酸を含む糖鎖構造を有するマーカー。
<16>〜<23>のいずれかに記載の方法によって見出された疾患マーカーであって、血液型抗原糖鎖構造を有する疾患マーカー。
まず、上記<1>〜<15>の本発明について、以下に説明する。
本発明では、糖鎖を含む試料を用意し、糖鎖を標識化合物で標識し、標識糖鎖を質量分析によりネガティブイオン測定する。より詳しくは、本発明では、中性糖鎖を標識して標識糖鎖を得て、標識糖鎖を質量分析装置でネガティブイオン測定する場合;酸性糖鎖を中性化処理して得た中性糖鎖を用意し、中性糖鎖を標識して標識糖鎖を得て、標識糖鎖をネガティブイオン測定する場合;及び、酸性糖鎖を標識し、その後、糖鎖中の酸性糖を中性化処理して標識糖鎖を得て、標識糖鎖をネガティブイオン測定する場合を含む。
以下、本発明について詳述する。
本発明において糖鎖と記載するときは、主として糖鎖(オリゴ糖、多糖)をいうが、便宜上、単糖も含めた糖類全般をいうものとする。また、中性糖鎖とは、電荷を持たない糖鎖をいう。
特に、本発明の実用的な例においては、特定の疾患に関連する糖鎖が解析対象となる。
本発明において「標識化合物」とは、自身が糖鎖に結合することによって、質量分析測定において糖鎖からネガティブイオンを発生させることができる化合物である。標識化合物は、糖鎖と共有結合できる反応基と、光を吸収あるいは蛍光を発する分子骨格とを有する。
還元剤を用いる場合は、前記中和を行った後、還元剤溶液を加え、室温〜40℃で10〜60分程度反応させることができる。この場合、新たに還元剤溶液を加え、同様に反応を行うとより好ましい。
以上のようにして、標識糖鎖を得る。
得られた標識糖鎖をマトリクス支援レーザー脱離イオン化(MALDI)質量分析装置によりネガティブモードで測定する。
マトリクスとしては、α−シアノ−4−ヒドロキシケイヒ酸、ノルハルマン、2,5−ジヒドロキシ安息香酸(DHBA)などが使用される。
本発明においては、好ましくは、マトリクスとしてDHBAを使用し、四重極イオントラップ(QIT)及び飛行時間型(TOF)を組み合わせたMALDI-QIT-TOF型質量分析装置を用いて測定が行われる。
前述と同様に、前記の標識化合物を用いて標識を行うことによって、糖鎖(A、B、C、…)から標識糖鎖(A´、B´、C´、…)をそれぞれ得る。
前述と同様に、質量分析装置でネガティブイオンを測定する。
このようなプロダクトイオンを検出することによって、構造異性体(A、B、C、…)は互いに識別が可能になる。
前述と同様に、前記の標識化合物を用いて標識を行うことによって、糖鎖Aからは標識された糖鎖A´を、糖鎖Bからは標識された糖鎖B´を得る。
前述と同様に、質量分析装置でネガティブイオンを測定する。
多くの場合、生体試料は多様な糖鎖の混合物である。試料中に含まれている複数の糖鎖が、互いに分子量が異なる糖鎖である場合は、容易に解析を行うことが可能である。たとえば、複数種のフコース含有糖鎖が試料中に含まれている場合で、ある糖鎖にはフコースが1残基結合しており、他の糖鎖にはフコースが2残基結合しているとする。このように、フコース結合数が互いに異なる糖鎖は、分子量が互いに異なるため、質量分析により容易に識別、同定及び定量することが可能である。
前述と同様に、複数数の糖鎖を、前記の標識化合物を用いて標識を行い、複数種の標識された構造異性体を得る。
前述と同様に、質量分析装置でネガティブイオンを測定する。
前述と同様に、複数の構造異性体を、標識化合物を用いて標識を行い、複数種の標識された構造異性体を得る。
前述と同様に、質量分析装置でネガティブイオンを測定する。
以上のようにして、複数の糖鎖の構造異性体について定量を行うことができる。
前記構造未知の糖鎖を、標識化合物を用いて標識し、構造未知の標識糖鎖を得る。
前記構造未知の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブモードで測定する。
(2)別途、構造既知の糖鎖を含む試料を用意する。
前記構造既知の糖鎖を、標識化合物を用いて標識し、構造既知の標識糖鎖を得る。
前記構造既知の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブモードで測定する。
(3)前記(1)で得られた、前記構造未知の標識糖鎖のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報と、前記(2)で得られた、前記構造既知の標識糖鎖のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報との比較を行う。
本発明の方法によって得られたマススペクトル(すなわち、糖鎖を標識し、得られた標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定することによって得られたマススペクトル)からは、糖鎖に関する重要な情報が得られる。たとえば、構造異性体から特異的に生じるプロダクトイオンを含むプロダクトイオンの構造情報、そのプロダクトイオンを生じるフラグメンテーションが起こったプリカーサーイオン上の位置、遊離した中性分子に関する推定情報、これらの情報の組み合わせにより導き出される構造情報・定量的情報などである。このような重要な情報を含むマススペクトルは、糖鎖に関するデータとして活用することができる。
まず、質量分析において、ネガティブイオンの安定な発生が可能になるため、多段階MS測定が可能となる程度に十分な量のプリカーサーイオンの発生と、感度の高い質量分析とが可能になる。さらに、標識糖鎖のネガティブイオンでは、フコースや中性化後のシアル酸などのαグリコシド結合が安定であるため、これらの糖鎖が脱離したプロダクトイオンの生成量が相対的に少なくなることによって、これらの結合位置に関する情報を得ることができる。
次に、上記<16>〜<28>に記載の本発明について、以下に説明する。
本発明は、生体分子を含む試料を用意し、前記生体分子を標識化合物で標識し、得られた標識生体分子を質量分析により測定するという基本工程を含む。例えば、生体分子が糖鎖である場合、糖鎖を含む試料を用意し、糖鎖を標識化合物で標識し、標識糖鎖を質量分析によりネガティブイオン測定する。より詳しくは、中性糖鎖を標識して標識糖鎖を得て、標識糖鎖を質量分析装置でネガティブイオン測定する場合;酸性糖鎖を中性化処理して得た中性糖鎖を用意し、中性糖鎖を標識して標識糖鎖を得て、標識糖鎖をネガティブイオン測定する場合;及び、酸性糖鎖を標識し、その後、糖鎖中の酸性糖を中性化処理して標識糖鎖を得て、標識糖鎖をネガティブイオン測定する場合を含む。
まず、本発明の基本工程について、以下に詳述する。
本発明において「生体分子」とは、糖鎖、タンパク質・ペプチド、糖鎖などの修飾を有するタンパク質・ペプチド、核酸、糖脂質などをいう。これら生体分子は、天然に存在するものでも、化学的或いは酵素学的手法により調製されたものでも良く、その構造については既知及び未知を問わない。従って、「生体分子を含有する試料」の具体例としては、生体由来試料(例えば細胞、組織、分泌液、体液など)から生体分子が含まれる画分を調製した試料や、化学合成や酵素合成などによって得られた構造既知の標品を含有する試料などが挙げられる。
<標識化合物を用いた生体分子の標識>
本発明において「標識化合物」とは、自身が生体分子に結合することによって、質量分析測定において生体分子からネガティブイオンを発生させることができる化合物である。標識化合物は、生体分子と共有結合できる反応基と、光を吸収あるいは蛍光を発する分子骨格とを有する。
例えば、生体分子が糖鎖である場合、標識化合物及び標識法については、上記<1>〜<15>の発明を説明した[糖鎖の解析方法、及び当該方法によって得られるデータ]の<標識化合物を用いた糖鎖の標識>に述べたとおりである。
得られた標識生体分子をマトリクス支援レーザー脱離イオン化(MALDI)質量分析装置によりネガティブモードで測定する。
マトリクスとしては、α−シアノ−4−ヒドロキシケイヒ酸、ノルハルマン、2,5−ジヒドロキシ安息香酸(DHBA)などが使用される。
本発明においては、好ましくは、マトリクスとしてDHBAを使用し、四重極イオントラップ(QIT)及び飛行時間型(TOF)を組み合わせたMALDI-QIT-TOF型質量分析装置を用いて測定が行われる。
生体分子の解析は、測定されたマススペクトルのネガティブイオンの質量数及び相対強度に基づいて行う。本基本工程において、生体分子の解析には、構造解析及び定量解析を含む。構造解析を行うことにより、例えば特定疾患に関わる生体分子の構造を知ることができるため、疾患マーカーの検索が可能になる。また、定量解析を行うことにより、例えば特定疾患に関わる生体分子の存在量を知ることができるため、特定の疾患の発現の有無又は発現の程度、すなわち特定の疾患の有無、進行度、特定の疾患に対する治療成果の程度などを診断することが可能になる。
前述と同様に、前記の標識化合物を用いて標識を行うことによって、糖鎖(A、B、C、…)から標識糖鎖(A´、B´、C´、…)をそれぞれ得る。
前述と同様に、質量分析装置でネガティブイオンを測定する。
このようなプロダクトイオンを検出することによって、構造異性体(A、B、C、…)は互いに識別が可能になる
前述と同様に、前記の標識化合物を用いて標識を行うことによって、糖鎖Aからは標識された糖鎖A´を、糖鎖Bからは標識された糖鎖B´を得る。
前述と同様に、質量分析装置でネガティブイオンを測定する。
多くの場合、生体試料は多様な糖鎖の混合物である。試料中に含まれている複数の糖鎖が、互いに分子量が異なる糖鎖である場合は、容易に解析を行うことが可能である。たとえば、複数種のフコース含有糖鎖が試料中に含まれている場合で、ある糖鎖にはフコースが1残基結合しており、他の糖鎖にはフコースが2残基結合しているとする。このように、フコース結合数が互いに異なる糖鎖は、分子量が互いに異なるため、質量分析により容易に識別、同定及び定量することが可能である。
前述と同様に、複数数の糖鎖を、前記の標識化合物を用いて標識を行い、複数種の標識された構造異性体を得る。
前述と同様に、質量分析装置でネガティブイオンを測定する。
なお、上述したように、本基本工程においてMSn解析を用いる場合は、通常、MS2解析によって特異的なイオンを検出することができるが、場合により、MS3解析或いはさらなるMSn解析を行うことによって、より多くの特異的なイオンを検出してより詳細な情報を得ることも好ましい。
前述と同様に、複数の構造異性体を、標識化合物を用いて標識を行い、複数種の標識された構造異性体を得る。
前述と同様に、質量分析装置でネガティブイオンを測定する。
以上のようにして、複数の糖鎖の構造異性体について定量を行うことができる。
前記構造未知の糖鎖を、標識化合物を用いて標識し、構造未知の標識糖鎖を得る。
前記構造未知の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブモードで測定する。
(2)別途、構造既知の糖鎖を含む試料を用意する。
前記構造既知の糖鎖を、標識化合物を用いて標識し、構造既知の標識糖鎖を得る。
前記構造既知の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブモードで測定する。
(3)前記(1)で得られた、前記構造未知の標識糖鎖のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報と、前記(2)で得られた、前記構造既知の標識糖鎖のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報との比較を行う。
本基本工程によって得られたマススペクトル(例えば、糖鎖を標識し、得られた標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定することによって得られたマススペクトル)からは、糖鎖に関する重要な情報が得られる。例えば、構造異性体から特異的に生じるプロダクトイオンを含むプロダクトイオンの構造情報、そのプロダクトイオンを生じるフラグメンテーションが起こったプリカーサーイオン上の位置、遊離した中性分子に関する推定情報、これらの情報の組み合わせにより導き出される構造情報・定量的情報などである。このような重要な情報を含むマススペクトルは、糖鎖に関するデータとして活用することができる。
まず、質量分析において、ネガティブイオンの安定な発生が可能になるため、多段階MS測定が可能となる程度に十分な量のプリカーサーイオンの発生と、感度の高い質量分析とが可能にする。さらに、標識糖鎖のネガティブイオンでは、フコースや中性化後のシアル酸などのαグリコシド結合が安定であるため、これらの糖鎖が脱離したプロダクトイオンの生成量が相対的に少なくなることによって、これらの結合位置に関する情報を得ることができる。
(1)特定の疾患の罹患者に由来する、生体分子Xを含む試料を用意する。このとき、前記罹患者から採取した生体試料をそのまま用いても良いし、すでに基本工程で述べたように、そのような生体試料から、化学的又は酵素学的手法を用いて生体分子Xを得るための適当な処理を行うことにより調製した試料を用いても良い。また、ここでは、特定の疾患の罹患者に由来する生体分子を生体分子Xと記載しており、生体分子Xには、前記罹患者に由来する複数の生体分子を含んでいる場合もある。
標識された生体分子X´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオンを測定する。測定に用いる装置及びマトリックス、及び測定法については、すでに基本工程で述べたとおりである。
前記標識された生体分子Y´を、生体分子X´の場合と同様にMALDI質量分析装置によりネガティブイオンを測定する。
マススペクトルから得られる情報には、すでに基本工程で述べたとおり、プロダクトイオンそのものの構造情報、そのプロダクトイオンを生じるフラグメンテーションが起こったプリカーサーイオン上の位置、及び遊離した中性分子に関する推定情報、これらの情報の組み合わせにより導き出される情報などが含まれる。
生体分子Zを、標識化合物を用いて標識を行い、標識された生体分子Z´を得る。
標識された生体分子Z´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオンを測定する。
特定疾患の発現の有無又は程度を判断する際、すでに取得された疾患マーカーについてのマススペクトル及び/又はそれから得られる情報を用い、それに基づいて判断しても良いし、以下のように、被験者由来の試料に対する標識・測定の操作と平行して疾患マーカーに対しても標識・測定を行い、得られたマススペクトル及び/又はそれから得られる情報を比較することにより判断しても良い。以下に示した方法において、各工程の詳細はすでに述べたとおりである。
生体分子Zを、標識化合物を用いて標識を行い、標識された生体分子Z´を得る。
標識された生体分子Z´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオンを測定する。
(2)別途、疾患マーカーを用意する。
疾患マーカーを、標識化合物を用いて標識を行い、標識された疾患マーカーを得る。
標識された生体分子Z´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオンを測定する。
(3)前記(1)で得られた前記標識された生体分子Z´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報と、前記(2)で得られた疾患マーカーのマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報とを比較し、前記被験者における前記特定の疾患の発現の有無又は前記発現の程度を判断する。
本実施例1では、lacto-N-fucopentaose IIIについて質量分析を行った。
(糖鎖の標識)
中性糖であるlacto-N-fucopentaose III(式(i))の標識を行った。標識には、D. SUGAHARA, J. AMANO, and T. IRIMURA, ANALYTICAL SCIENCE, 19, 167-169 (2003)の方法を改良した以下の方法を用いた。
測定試料として、得られたピレン標識糖を、1 pmol/microLになるように純水に溶解した。
別途、もう1つの測定試料として市販アミノピリジン標識糖(タカラバイオ)を用意した。このアミノピリジン標識糖も、同様に1 pmol/microLになるように純水に溶解した。
ピレン標識糖溶液0.4 microL(ピレン標識糖400 fmol)と、アミノピリジン標識糖溶液0.4 microL(アミノピリジン標識糖400 fmol)とをそれぞれMALDIターゲットプレートに塗布した。
このとき得られたマススペクトルを図1に示す。図1(a)は、ピレン標識糖のMSスペクトル、図1(b)は、アミノピリジン標識糖のMSスペクトルを示す。両スペクトルとも、横軸に(質量/電荷)(m/z)、縦軸にイオンの相対強度を表す(以下、本明細書で説明する全てのマススペクトルにおいて同じ。)また図1においては、ピレン標識糖の分子イオン[M-H]-のイオン強度を100として、全てのピークが表わされている。
また、市販の濃縮プレートを使用することによって、さらに10〜20倍感度が向上するので、微量な生体試料の解析に十分応用できるといえる。
本実施例2では、monofucosyl lacto-N-hexaose の構造異性体3種について、質量分析を行った。
MS測定で検出されたイオンm/z 1503をプリカーサーイオンとして行った、MS/MS測定によって得られたマススペクトルを、図2に示す。図2(a)はピレン標識MFLNH-IのMS/MSスペクトル、図2(b)はピレン標識MFLNH-IIのMS/MSスペクトル、図2(c)はピレン標識MFLNH-IIIのMS/MSスペクトルを示す。
このように、ネガティブイオンの測定を行うと、それぞれの異性体に特有のイオン種が観察されることから、ネガティブイオンを測定すれば異性体構造が容易に判別・同定できることが判明した。
例えば、表1が示すように、ピレン標識MFLNH-I及びピレン標識MFLNH-IIからプロダクトイオンm/z 424が、ピレン標識MFLNH-IIIからプロダクトイオンm/z 570が生じた。これらのプロダクトイオンは、ガラクトースの6位に側鎖が結合した際に生じるものであることを確認した。
本比較例1では、ポジティブイオンでMS測定及びMS/MS測定を行った以外は、実施例2と同様の操作を行った。
MS測定で検出されたイオンm/z 1528をプリカーサーイオンとして行った、MS/MS測定によって得られたマススペクトルを、図3に示す。図3(a)はピレン標識MFLNH-IのMS/MSスペクトル、図3(b)はピレン標識MFLNH-IIのMS/MSスペクトル、図3(c)はピレン標識MFLNH-IIIのMS/MSスペクトルを示す。
本実施例3では、monofucosyl lacto-N-hexaose の構造異性体2種について、さらに詳細な質量分析を行った。
実施例4では、下記のシアル酸含有糖鎖(v)について質量分析を行った。
比較例2では、シアル酸含有糖鎖(v)について、中性化処理を行わなかったことを除いては実施例4と同様の操作を行った。MS測定の結果、[M-H]-イオンとして、m/z 2507.9が検出された。さらに、m/z 2507.9をプリカーサイオンとして選択し、MS/MS測定を行うと、図5の(b)に示すように、シアル酸が一分子遊離したイオンが主に生成したのみで、有用な構造情報を得るようなマススペクトルは観察されなかった。
本実施例5では、monofucosyl lacto-N-hexaose の構造異性体2種(MFLNH-I及びMFLNH-III)のうち少なくとも一方を含む混合物の質量分析を行った。
MFLNH-Iは、血液型H抗原構造を有し、癌細胞由来の前立腺癌抗原PSAのフコース結合を含む。MFLNH-IIIは、ルイスX抗原構造を有し、卵巣癌患者由来糖タンパク質であるハプトグロビンやCA125に発現しているフコース結合を含む。
従って、図6及び7においてピレン標識MFLNH-IIIの存在比が増加するに従ってイオン強度が上昇したイオンは、ピレン標識MFLNH-IIIから生じたものであり、ピレン標識MFLNH-Iの存在比が減少するに従ってイオン強度が減少したイオンは、ピレン標識MFLNH-Iから生じたものであることが確認できる。
また、特定疾患の罹患状態について不明な被験者について、同様の標識及びネガティブイオン測定を行っても、疾患マーカーの情報を元に、上述の分離定量などを行うことによって、疾患の情報(疾患の罹患又は非罹患、疾患の進行程度、或いは治療成果の程度などに関する情報)が得られることがわかる。
Claims (28)
- 中性糖鎖を含む試料を用意し、
前記中性糖鎖を標識し、中性の標識糖鎖を得るか、
又は、
酸性糖鎖を含む試料を用意し、
前記酸性糖鎖を、中性化及び標識し、中性の標識糖鎖を得て、
前記中性の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定することによって、前記糖鎖の解析を行うことを含む、糖鎖の質量分析方法。 - 互いに構造異性体の関係にある中性糖鎖(A、B、C、…)を含む試料を用意し、
前記中性糖鎖(A、B、C、…)を標識し、中性の標識糖鎖(A´、B´、C´、…)を得るか、
又は、
互いに構造異性体の関係にある、酸性糖鎖(A、B、C、…)を含む試料を用意し、
前記酸性糖鎖(A、B、C、…)を中性化及び標識し、中性の標識糖鎖(A´、B´、C´、…)を得て、
前記中性の標識糖鎖(A´、B´、C´、…)を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定することによって、前記中性の標識糖鎖(A´、B´、C´、…)からそれぞれ特異的に生じるイオン(a、b、c、…)を検出することによって、前記糖鎖(A、B、C、…)を互いに識別することを含む、糖鎖の質量分析方法。 - 前記イオン(a、b、c、…)についてそれぞれ構造解析を行うことによって、前記糖鎖(A、B、C、…)の全体構造又は部分構造をそれぞれ同定する、請求項2に記載の質量分析方法。
- 複数種の中性糖鎖の構造異性体がそれぞれ既知混合比で含まれる試料を用意し、
前記複数種の中性糖鎖の構造異性体を標識し、複数種の中性且つ標識された構造異性体を得るか、
又は、
複数種の酸性糖鎖の構造異性体がそれぞれ既知混合比で含まれる試料を用意し、
前記複数種の酸性糖鎖の構造異性体を、中性化及び標識し、複数種の中性且つ標識された構造異性体を得て、
前記複数種の中性且つ標識された構造異性体を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定し、前記複数種の中性且つ標識された構造異性体それぞれから特異的に生じるイオンを検出することによって、前記複数種の糖鎖の構造異性体の解析を行うことを含む、糖鎖の質量分析方法。 - 前記検出された特異的に生じるイオンについて構造解析を行うことによって、前記複数の糖鎖の構造異性体それぞれの全体構造又は部分構造を同定し、及び/又は、
前記検出された特異的に生じるイオンを、前記複数種の構造異性体の定量のためのイオンとして決定し、前記決定されたイオンのイオン強度と前記既知混合比との関係を見出す、請求項4に記載の糖鎖の質量分析方法。 - 前記複数種の中性糖鎖の構造異性体が未知混合比で含まれる試料を用意し、
前記複数の中性糖鎖の構造異性体を標識し、複数種の中性且つ標識された構造異性体を得るか、
又は、
複数種の酸性糖鎖の構造異性体が未知混合比で含まれる試料を用意し、
前記複数の酸性糖鎖の構造異性体を、中性化及び標識し、複数種の中性且つ標識された構造異性体を得て、
前記複数種の中性且つ標識された構造異性体を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定し、前記複数種の中性且つ標識された構造異性体それぞれから特異的に生じるイオンを検出することによって、前記複数種の糖鎖の構造異性体の解析を行うことを含み、
前記検出された特異的に生じるイオンについて構造解析を行うことによって、前記複数の糖鎖の構造異性体それぞれの全体構造又は部分構造を同定し、及び/又は、
前記検出された特異的に生じるイオンのイオン強度から、請求項5に記載の方法によって見出された関係に基づいて、前記未知混合比を算出する、糖鎖の質量分析方法。 - (1)構造未知の1種又は複数種の中性糖鎖を含む試料を用意し、
前記構造未知の中性糖鎖を標識し、構造未知の中性の標識糖鎖を得て、
前記構造未知の中性の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定し、
(2)別途、構造既知の1種又は複数種の中性糖鎖を含む試料を用意し、
前記構造既知の中性糖鎖を標識し、構造既知の中性の標識糖鎖を得て、
前記構造既知の中性の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定するか、
又は、
(1)構造未知の1種又は複数種の酸性糖鎖を含む試料を用意し、
前記構造未知の酸性糖鎖を、中性化及び標識し、構造未知の中性の標識糖鎖を得て、
前記構造未知の中性の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定し、
(2)別途、構造既知の1種又は複数種の酸性糖鎖を含む試料を用意し、
前記構造既知の酸性糖鎖を、中性化及び標識し、構造既知の中性の標識糖鎖を得て、
前記構造既知の中性の標識糖鎖を、MALDI質量分析装置を用いてネガティブイオンを測定し、
(3)前記(1)で得られた、前記構造未知の中性の標識糖鎖のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報と、前記(2)で得られた、前記構造既知の中性の標識糖鎖のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報との比較を行うことによって、前記構造未知の糖鎖の解析を行うことを含む、糖鎖の質量分析方法。 - 前記(3)において、前記構造未知の中性の標識糖鎖のマススペクトルのピーク全体及び/又は前記マススペクトルから得られる情報の全体と、前記構造既知の中性の標識糖鎖のマススペクトルのピーク全体及び/又は前記マススペクトルから得られる情報の全体とが一致することを確認することにより、前記構造未知の糖鎖は、前記構造既知の糖鎖と同じ構造を有すると決定する、請求項7に記載の糖鎖の質量分析方法。
- 前記(3)において、前記構造未知の中性の標識糖鎖のマススペクトルの特定のピーク及び/又は前記マススペクトルから得られる特定の情報と、前記構造既知の中性の標識糖鎖のマススペクトルの特定のピーク及び/又は前記マススペクトルから得られる特定の情報とが一致することを確認することにより、前記構造未知の糖鎖は、前記構造既知の糖鎖と同じ構造を部分構造として有すると決定する、請求項7に記載の糖鎖の質量分析方法。
- 前記標識を行うために用いられる標識化合物が、芳香族の基本骨格を有する化合物である、請求項1に記載の糖鎖の質量分析方法。
- 前記芳香族が、ピレン、ベンゼン、及びピリジンからなる群から選ばれる、請求項10に記載の糖鎖の質量分析方法。
- 前記標識を行うために用いられる標識化合物が、芳香族アミン及び芳香族カルボン酸ヒドラジドからなる群から選ばれる、請求項1に記載の糖鎖の質量分析方法。
- 前記標識を行うために用いられる標識化合物が、ピレンブタン酸ヒドラジド、アミノピレン、2−アミノピリジン、2−アミノベンゼン、アミノ安息香酸、及びアミノ安息香酸エステルからなる群から選ばれる、請求項1に記載の糖鎖の質量分析方法。
- 前記糖鎖が、フコースを有する糖鎖である、請求項1に記載の糖鎖の質量分析方法。
- 前記酸性糖鎖が、シアル酸、硫酸基含有糖、及びリン酸基含有糖からなる群から選ばれる酸性糖を有する糖鎖である、請求項1に記載の糖鎖の質量分析方法。
- (1)特定の疾患の罹患者に由来する、解析すべき中性糖鎖を有する生体分子Xを含む試料を用意し、
前記生体分子Xを標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子X´を得て、 前記中性の標識糖鎖を有する生体分子X´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
(2)別途、前記特定の疾患の非罹患者に由来する、解析すべき中性糖鎖を有する生体分子Yを含む試料を用意し、
前記生体分子Yを標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´を得て、 前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定するか、
又は、
(1)特定の疾患の罹患者に由来する、解析すべき酸性糖鎖を有する生体分子Xを含む試料を用意し、
前記生体分子Xを、中性化及び標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子X´を得て、
前記中性の標識糖鎖を有する生体分子X´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
(2)別途、特定の疾患の非罹患者に由来する、解析すべき酸性糖鎖を有する生体分子Yを含む試料を用意し、
前記生体分子Yを、中性化及び標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´を得て、
前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
(3)前記(1)で得られた前記中性の標識糖鎖を有する生体分子X´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報と、前記(2)で得られた前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報とを比較し、互いに異なるマススペクトルピーク及び/又は情報を見出すことによって、前記特定の疾患の発現に関わる構造の存在を確認する、疾患マーカーの検索法。 - 前記見出された異なるマススペクトルピーク又は情報のうち、
質量/電荷において異なり、且つ、前記中性の標識糖鎖を有する生体分子X´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報に含まれて、前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報には含まれないもの、又は、
同一の質量/電荷であってイオン強度において異なり、且つ、前記中性の標識糖鎖を有する生体分子X´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報に、前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Y´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報よりも強いイオン強度で検出されているものから、前記特定の疾患の発現に関わる構造を解析し、
前記特定の疾患の発現に関わる構造又は前記生体分子Xの構造を疾患マーカーの構造として決定する、請求項16に記載の疾患マーカーの検索法。 - 前記生体分子が糖鎖である、請求項16に記載の疾患マーカーの検索法。
- 前記特定の疾患が癌であり、前記生体分子がフコース及び/又はシアル酸含有糖鎖又は血液型抗原である、請求項16に記載の疾患マーカーの検索法。
- 前記特定の疾患が自己免疫疾患に起因し且つ血液型と相関を示す疾患であり、前記生体分子がフコース及び/又はシアル酸含有糖鎖又は血液型抗原である、請求項16に記載の疾患マーカーの検索法。
- 前記特定の疾患が心臓疾患又は高コレステロール血症であり、前記生体分子がフコース及び/又はシアル酸含有糖鎖又は血液型抗原である、請求項16に記載の疾患マーカーの検索法。
- 前記標識を行うために用いられる標識化合物が、ピレン誘導体、ベンゼン誘導体、及びピリジン誘導体からなる群から選ばれる、請求項16に記載の疾患マーカーの検索法。
- 前記標識を行うために用いられる標識化合物が、ピレンブタン酸ヒドラジド、アミノピレン、2−アミノピリジン、2−アミノベンゼン、アミノ安息香酸、及びアミノ安息香酸エステルからなる群から選ばれる、請求項16に記載の疾患マーカーの検索法。
- 被験者に由来する、解析すべき中性糖鎖を有する生体分子Zを含む試料を用意し、
前記生体分子Zを標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´を得るか、
又は、
被験者に由来する、解析すべき酸性糖鎖を有する生体分子Zを含む試料を用意し、
前記生体分子Zを、中性化及び標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´を得て、
前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
疾患マーカーのマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報を指標として、得られた前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報から、前記被験者における特定の疾患の発現の有無又は前記発現の程度を判断する、生体分子を含む試料の解析法。 - (1)被験者に由来する、解析すべき中性糖鎖を有する生体分子Zを含む試料を用意し、
前記生体分子Zを標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´を得て、
前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
(2)別途、解析すべき中性糖鎖を有する疾患マーカーを用意し、
前記疾患マーカーを標識し、中性の標識糖鎖を有する疾患マーカーを得て、
前記中性の標識糖鎖を有する疾患マーカーをMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定するか、
又は、
(1)被験者に由来する、解析すべき酸性糖鎖を有する生体分子Zを含む試料を用意し、
前記生体分子Zを、中性化及び標識し、中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´を得て、
前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´をMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
(2)別途、解析すべき酸性糖鎖を有する疾患マーカーを用意し、
前記疾患マーカーを、中性化及び標識し、中性の標識糖鎖を有する疾患マーカーを得て、
前記中性の標識糖鎖を有する疾患マーカーをMALDI質量分析装置によりネガティブイオン測定し、
(3)前記(1)で得られた前記中性の標識糖鎖を有する生体分子Z´のマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報と、前記(2)で得られた中性の標識糖鎖を有する疾患マーカーのマススペクトル及び/又は前記マススペクトルから得られる情報とを比較し、前記被験者における特定の疾患の発現の有無又は前記発現の程度を判断する、生体分子を含む試料の解析法。 - 被験者に由来する、生体分子を含む試料を用意し、請求項16〜23項のいずれか1項に記載の方法によって見出された疾患マーカーを用いて、前記被験者における特定の疾患の発現の有無又は前記発現の程度を判断する、生体分子を含む試料の解析法。
- 請求項16〜23項のいずれか1項に記載の方法によって見出された疾患マーカーであって、フコース及び/又はシアル酸を含む糖鎖構造を有するマーカー。
- 請求項16〜23項のいずれか1項に記載の方法によって見出された疾患マーカーであって、血液型抗原糖鎖構造を有する疾患マーカー。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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