JP4179753B2 - 蛍光による検出反応の分析装置および分析方法 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、オートフォーカス・システムおよび空調された試料チャンバーを有する逆式自動単一筒型蛍光顕微鏡装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
画像は、ＣＣＤカメラによって形成され、引き続いて画像分析用ソフトウエアにより分析される。試料は、マイクロ滴定プレート（ＭＴＰ）の底部における細胞（溶液中）である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
ＭＴＰは自動または手動で供給され、かつオート・フォーカス・システムによって、溶液とＭＴＢの底部との境界面に焦点が結ばれる。合焦し、かつ励起フィルターが選択された後、ＸＢＯまたはＨＢＯランプによって試料内の色素が励起される。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
試料が発する蛍光は、その時選択される放射光フィルターを透過し、その試料は、ＣＣＤカメラ上に結像される。撮像後、必要な場合には励起光フィルターおよび放射光フィルターは置き換えられ、新たな画像が撮像される。これに引き続いて、前記画像は分析され、Ｘ−Ｙ走査テーブルは、次の画像分野、または次のＭＴＰポットへ移動し、自動焦点機能が再び機能し、同じプロセスが新たに繰り返される。
【０００５】
【発明の実施の形態】
図１には、移動可能（試料注入のため）、かつ（試料供与のため）降下可能なピペッターが描かれており、これはＭＴＰの個々の試料容器にピペットで試料を移すために用いられるものである。
この目的のために、ＭＴＰは、その供給システム、例えば、あらかじめ備えられた注入口を有するターンテーブルによって顕微鏡内に導入された後、Ｘ−Ｙテーブルによって対物レンズ（Ｏ）の上方で、かつピペッター（ＰＩ）の下方へ移動される。
チャンバー（ＫＡ）に挿入されたＭＴＰの上方には、注入スロット（ＤＳ）を備えた移動可能なカバー（ＤＬ）が配設されている。
【０００６】
前記ＭＴＰは、前記チャンバー（ＫＡ）およびカバー（ＤＬ）とともに、Ｘ−Ｙテーブル上に移動可能に配設されている。
概略図には、カバー（ＤＬ）のパーキング位置Ｐが点線で示されており、その位置では注入スロット（ＤＳ）はＭＴＰの開口部上には位置せず、したがってその開口部を通してチャンバー内の空調条件が影響を被ることがないようにしてある。
【０００７】
時間的な順序は次の通りである；
前記ＭＴＰは、例えば、ターンテーブルを介して供給される（図示せず、公知技術）。
閉鎖フラップ弁（ＶＫ）は、図３では矢印により暗に示されているだけで隠されているが、矢印で示されるように開いて、プレートが誘導され、カバーが閉じられる。
Ｘ−Ｙテーブルは、対物レンズ上のピペット計量位置へＭＴＰを駆動する。
ここで、２種類の異なる有利な別の実施例が可能である。
１．一列に並べられた複数のＭＴＰのピペット計量試料の入ったポットが、前記対物レンズ上方に誘導され、逐次分析される。
２．常に一つのポットについてのみピペット計量および即時分析がされ、引き続いて次のポットがピペット計量および分析される。これは迅速反応経過（より高速な運動による反応）にはきわめて重要である。
【０００８】
カバー内とＭＴＰの裏面側には、加熱素子（Ｈ）（図２参照）が備えられ、またテーブル（Ｘ／Ｙ）下方の温度調節機能付き槽（Ｗ）内には、安定した気候条件を調節するための温風送入換気装置（Ｖ）が装備されており、これは、たとえば生きた細胞を計測する場合に有効である。
この温風は、対物レンズ（Ｏ）の光学的開口部を経由してマイクロ滴定プレート（ＭＴＰ）の周囲にも達する。
ピペット計量には、スロット（ＤＳ）がピペット計量の行われるべきＭＴＰのポット列上の位置に来るように、カバーを移動する。
（あらかじめ採取された）液体を保持するピペッターは、スロット内へ沈み、その液体を移し、上方へ移動すると、カバーは直ちに閉じられる。
【０００９】
有利な効果としては、該カバーの小開口部とそれの急速開閉により、ヒーターと空調換気装置の機能と相まって、熱平衡が、試料注入中持続できる。
読取り器内で直接ピペット計量ができることにより、マイクロ滴定プレートを前後に駆動する必要がなくなるので、非常に早い経過の把握が可能である。
【００１０】
結果として、分析試料毎に、ＭＴＰと、ヒーターと、カバーを含む容器からなり、かつ光学的分析軸へ移動可能な空調チャンバーを読取り器上に構成することができる。とくに、生きた細胞に関する評価分析には、これによって温度とＣＯ_２の条件が制御でき、かつ再現可能に維持することができる。
図３には、歯形ベルト（ＺＲ）と駆動歯車（ＭＮ）により駆動されるカバー機構が、斜視図で示されている。
Ｍは、歯形ベルト機構を駆動するモータである。
【図面の簡単な説明】
【図１】本装置全体を示す概略図
【図２】空調システム
【図３】カバー駆動装置の斜視図
【符号の説明】
ＰＩ ピペッター
ＭＴＰ マイクロ滴定プレート
ＤＬ カバー
ＤＳ 注入スロット
Ｘ／Ｙ テーブル
ＨＳ 温度制御加熱要素
ＶＫ 閉鎖フラップ弁
ＺＲ 歯形ベルト
ＭＮ 駆動歯車
Ｍ 駆動モータ
ＫＡ チャンバー
Ｗ 温度調節機能付き槽

Claims (4)

1. 透明な試料容器を有するマイクロ滴定プレートにおける蛍光に基づく検出反応の分析装置において、該試料容器の上部を水平移動によって閉鎖することができ、試料注入のために少なくとも一つの開口部を有し、その注入開口部が試料注入プロセス時のみマイクロ滴定プレートの開口部上方にあり、そうでない場合はそれが試料容器の上方に来ずにパーキング位置に来るカバーが設置されていて、カバー内とマイクロ滴定プレートの裏面側には加熱素子が備えられており、さらにその下方に温度制御をする温風送入換気手段が装備されていて、この温風が、オートフォーカスシステムの対物レンズ用の光学的開口部を経由してマイクロ滴定プレートの周囲に達するようになっていて、容器底を通して蛍光が励起および結像され、また試料が上部より注入される前記蛍光に基づく検出反応の分析装置。
2. ピペット計量装置の降下先、カバーの開口部および光学的励起／分析軸が、注入位置において実質上合一化している請求項１に記載の蛍光に基づく検出反応の分析装置。
3. 請求項１または２に記載の装置を作動させるための方法において、一列に配列された、複数のピペット計量試料の入った試料容器が、カバーの閉鎖後、対物レンズ上へ誘導されて順次分析される蛍光に基づく検出反応の分析方法。
4. 請求項１または２に記載の装置を作動させるための方法において、常に一つの試料容器についてのみピペット計量およびカバー閉鎖直後における分析が行われ、それに引き続いて次のポット、即ち次の試料容器についてピペット計量が行われる蛍光に基づく検出反応の分析方法。