DD149574A1

DD149574A1 - Anordnung fuer serienmaessige fluoreszenzmessung

Info

Publication number: DD149574A1
Application number: DD21988580A
Authority: DD
Inventors: Uwe Karsten
Original assignee: Uwe Karsten
Priority date: 1980-03-25
Filing date: 1980-03-25
Publication date: 1981-07-15

Abstract

Die Erfindung beinhaltet eine Anordnung, die es ermoeglicht, Fluoreszenztests im Mikroliterbereich, die serienmaeszig in Mikrotestplatten aus Polystyrol angesetzt werden, direkt in diesen Platten objektiv zu messen, ohne sie in spezielle Meszkuevetten eines Fluorometers umfuellen zu muessen. Die erfindungsgemaesze Loesung besteht in einer Auflicht-Fluoreszenz-Meszeinrichtung, einer besonderen Filteranordnung zur Beherrschung der Streulichtprobleme und in einer Vorrichtung zur mechanischen Fuehrung der Testplatten.

Description

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Uwe Karsten

Anordnung für serienmäßige Fluoreszenzmessung Anwendungsgebiet der Erfindung

Die Erfindung bezieht sich auf eine Anordnung, die es gestattet, fluorometrisch^ Messungen direkt in Polystyrol-Testplatten vorzunehmen. 1.Iit der erfindungsgemäßen Anordnung sind " Pluoreozenzraessungen im Mikroliterbereich sowohl an Lösungen als auch an Suspensionen von Zellen oder anderen sedimentierenden Partikeln möglich. Hauptanwendungsgebiete sind Fluoreszenztests und serienmäßige Konzentrationebestimmungen in der medizinisch-biologischen Forschung (Krebsforschung, Immunbiologie, Zellbiologie) und in der medizinischen Diagnostik,

Charakteristik der bekennten technischen Lösungen Geräte zur quantitativen Liessung fluoreszierender oder fluoreszenzmarkierter Substanzen (Fluorometer, Spektralfluorometer) sind in verschiedenen Ausführungen bekannt« Dabei v/erden flüssige I.Ießproben immer in Ueßküvetten aus Quarz bzw. UV-durchlässigem Spezialglas umgefüllt« Das ist arbeitsaufwendig und erfordert Spülvorgänge, Die Messung von kleinen Volumina (< 1 ml) erfordert besondere optische Anpassungen und Spezialküvetten, wodurch der Probenwechsel noch aufwendiger wird. Partikel- oder Zellsuspensionen lassen sich infolge der Sedimentation nur bedingt messen.

Ziel der Erfindung

Das Ziel der Erfindung ist es, die Messungen schneller und mit weniger Arbeitsaufwand durchführen zu können.

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!Darlegung des Wesens der Erfindung

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine Anordnung zu entwickeln, die es gestattet, fluoroinetrische Meßproben im Mikroliterbereich in Testplatten, in denen sie serienmäßig angesetzt werden, direkt zu messen, ohne sie in Meßküvetten umzufüllen.

Die Aufgabe wird mit einer Anordnung für serienmäßige Fluoreszenzmessung im Mikroliterbereich in einer Auflicht-Fluoreszenz-Meßeinrichtung erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß eine Testplatte in einer Führung über einem Meßspalt der Auflicht-Fluoreszenz-Meßeinrichtung horizontal beweglich angeordnet ist. Zur Beherrschung der durch die optischen Eigenschaften der Testplatte verursachten Streulichteffekte ist im Strahlengang des Anregungsteil3 mit Lichtquelle, Gittermonochromator und Umlenkspiegel ein Sperrfilter zwischen Gittermonochromator und Ließspalt angebracht. Dieses Sperrfilter ist undurchlässig für second-order-licht des Gittermonochromators. Zur Eliminierung des von der Probe ausgehenden Tyndall-, Rayleigh~ und Raman-Streulichtes ict im Strahlengang der im Winkel von < 90° zum Anregungslicht angeordneten Analysatoroptik ein weiteres Sperrfilter zwischen I.Ießspalt und .Analysator-IvI onochr oma tor vorgesehen.

Als Testplatten v/erden vorteilhafterweise Polystyrol-Testplatten verwendet.

Die erfindungsgemäße Anordnung erlaubt,die Messung vieler Proben im Mikroliterbereich mit geringem Arbeitsaufwand, da das Umfüllen der Proben in Meßküvetten und deren Reinigung

zwischen den Messungen entfällt. Außerdem können Suspensionen von Zellen oder sedimentierenden Partikeln gemessen wer— ' den. . .

Ausführungsbeispiel

Pig, 1 zeigt ein Ausführungsbeispiel der erfindungsgemäßen Anordnung im Schema.

Eine Polystyrol-Testplatte 1, in deren Vertiefungen sich die zu. messenden Proben befinden, ist in einer Halterung und Füh~

rung 2 über dem Meßspalt 3 in einem lichtdichten Gehäuse angebracht. Als Testplatten eignen sich handelsübliche Einweg-Polystyrol -Testplatten 3 χ 13 cm mit 8x12 Vertiefungen (Flachboden oder U-Form). Sie sind für Anregungsv/ellenlängen = 300 mn geeignet. Der mechanische Vorschub erfolgt kontinuierlich oder schrittweise« Bei schrittweisem Vorschub können die Meßwerte - anstatt auf einem Schreiber - nach elektronischer Verarbeitung des Signals auch digital ausgedruckt werden. Aus dem Licht einer Xenon-Lampe 4 wird mittels eines Gittermonochromators 5 die gewünschte /inregungswellenlänge selektioniert. Ein Umlenkspiegel 6 lenkt das Anregungslicht auf den Meßspalt 3· Der Ließspalt 3 ist in seiner Dimensionierung der Größe der Vertiefungen in der Testplatte angepaßt. Mittels eines Sperrfilters 7, da3 im Strahlengang des Anregungsteiles zwischen Umlenkspiegel 6 und I.Ießspalt 3 angeordnet ist, wird längerwelliges Licht, vor allem die "secondorder"-Strahlung des Gittermonochromators 5» . eliminiert. Im Winkel von < 90° zum Anregungclicht ist die Analysatoroptik angeordnet, wobei im Strahlengang zwischen Meßspalt 3 und Umlenkspiegel 6 ein Sperrfilter 8 zur Eliminierung von Tyndall-, Rayleigh- und Raman-3treulicht (durchlässig für die Fluoreszenzwellenlänge) angebracht ist. Es folgen Analysator-Monochromator 9 und Sekundärelektronenvervielfacher 10. Daran, schließen sich Verstärker 11 und Schreiber 12 an.

Claims

-if- if

Iurfindu.iiftsanspru.ch

1. Anordnung für serienmäßige Fluoreszenzmessungen im Mikroliterbereich mittels einer Auflicht-Fluoreszenz-Meßein-

. richtung, dadurch gekennzeichnet, daß eine Testplatte (1) in einer Führung (2) über einen LIeß3palt (3) der Fluoreszenzeinrichtung, bestehend aus einem Anregungsteil mit Lichtquelle (4), Anregungs-LIonochromator (5)» Umlenkspiegel (6) und Sperrfilter (7), sowie einer im Winkel von <90° zum Anregungslicht angeordneten Analysatoroptik mit Sperrfilter (8), Analysator-Lionochromator (9), Sekundärelektronenvervielfacher (10), Verstärker (11) und Schreiber (12), horizontal beweglich angebracht ist.
2. Anordnung nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Testplatte (1) eine tlikrotestplatte vorgesehen ist.
3. Anordnung nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Sperrfilter (7) undurchlässig für das second-order-Licht des Anregungs-LIonochromators (5) ausgebildet ist.
4. Anordnung nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Sperrfilter (8) als undurchlässig für das von Probe und Testplatte. (1) ausgehende Streulicht ausgeführt ist.

1SdHq Zeichnung