JP3990387B2 - ヒソップ抽出物の血液流動性改善剤、血流改善剤およびその利用 - Google Patents
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Description
この血液循環は、体内組織に酸素や栄養素を供給するばかりでなく、免疫系を主とした生体機能の維持に重要な役割を担い、酸化ストレス、血行不良、肩こり、腰痛、冷え性、低血圧などの引き金となる。
すなわち、健康を維持するには血液の流動性を改善し、円滑な血液循環の維持を図ることが重要、かつ必須である。
直径約7μmの赤血球は、その円盤状の形を変形させながら直径約3〜5μmの毛細血管の中を自由に流動する。この毛細血管や直径100μm以下の細動脈などは、微小循環と呼ばれ、生体機能維持に重要な役割を果たしており、循環器系疾患などの生活習慣病と密接な関係がある。
赤血球の変形能は、赤血球が毛細血管内に詰まることなく、また、赤血球以外の血液成分が毛細血管内を滞りなく流動するためにも重要である。
例えば、直径約7〜25μmの白血球は血管内皮上を横転しながら流動するが、血液粘度の悪化時などには血管内皮の壁面に容易に付着する。また、直径約2μm前後の血小板も容易に凝集塊を形成して壁面に付着する。
すなわち、赤血球変形能を向上させることや、これら個々の要因を正常化させることは、微小循環を向上させ、末梢部位における冷え、肩こりあるいは腰痛などを改善するばかりではなく、高脂血症、糖尿病、肥満、さらには動脈硬化症、脳梗塞や脳出血後遺症などの緩和など、多くの生活習慣病に対して有効であると考えられている。
また、赤血球変形能改善作用を有する薬剤として、ヘキストジャパン株式会社からベントキシフィリン(商品名トレンタール)、東京田辺製薬株式会社からサルボグレラート(商品名アンブラーグ)などが市販され、臨床応用されている。また、ビンボセチン、ニセルゴリン、マレイン酸シネバジド、トラビジル、塩酸フルナリジン、シンナリジンなども赤血球変形能を有することが知られている。
しかしながら、これらは、使用に際しては注意が必要であり、医師の処方が必要であり、副作用等の問題も指摘されている。そこで、より安全性が高く、改良された医薬品、医薬部外品、食品、飲料等の開発が望まれている。
このような状況から、活性酸素等が原因となる白血球や血小板の粘着能・凝集能を抑制する、いわゆる抗酸化作用を有する血液流動性改善剤及び血流改善剤を、より安全、かつ容易に摂取するための、天然物、特に、食品の原料となる天然植物等に由来する成分の探索・開発が試みられているが、生体内で十分機能する物質は未だ見出されていない。
本発明者らは、ヒソップの抽出物を健常者に飲用させたところ、飲用前後にて血液の通過時間の著しい改善が観察されたことから、該抽出物に血液流動性改善作用を有することを見出した。
そして、ヒソップの抽出物を冷え性の女性に飲用させたところ、手足の指先及び甲において、飲用前後にて皮膚表面温度の顕著な上昇が観察されると共に、血流量が増大することを見出した。
これらの知見に基き、ヒソップの抽出物は血液流動性改善剤や血流改善剤として有効であることを見出し、本発明に到達した。
尚、本発明者らの一人が先に発明した新規化合物、プロパン−1,2,3−トリオール誘導体(特願2003−050400号明細書参照)は、ヒソップに含まれているが、該化合物にはα−グルコシダーゼ活性を阻害することが知られているに過ぎず、それ以外の機能、特に血液流動性や血流に対する影響については、全く知られていない。
請求項2記載の本発明は、シソ科植物ヒソップの抽出物を含有することを特徴とする血流改善剤である。
請求項3記載の本発明は、請求項1記載の血液流動性改善剤を添加したことを特徴とする血液流動性改善用医薬品または医薬部外品である。
請求項4記載の本発明は、請求項2記載の血流改善剤を添加したことを特徴とする血流改善用医薬品または医薬部外品である。
また、本発明の血液流動性改善剤及び血流改善剤は、天然物であるヒソップ由来のヒソップの抽出物を含有することから、安全、かつ安心した摂取が可能であり、様々な食品、飲料の他、医薬品、医薬部外品等に広く応用され、生活習慣病等の予防や国民の健康の維持・増進により国民生活の向上に資することが期待できる。
ヒソップとは、シソ科の植物で半常緑小低木に分類されており、古くから薬用ハーブとして利用されている。ヒソップの効用の一つとして、苦味成分「マルビイン」は風邪、気管支炎など呼吸器系の疾患に効果があり、該効能が民間医療などに用いられてきた経緯があるが、血液流動性改善機能や血流改善機能については、従来知られていなかった。
原料であるヒソップの植物体としては、葉、茎、芽、花などの地上部が好ましく、葉が特に好ましい。また、ヒソップの植物体の水分量についても特に限定はなく、いわゆる生の状態、湿潤状態、および乾燥状態(例えば、乾燥葉)のいずれであっても用いることが可能である。
まず、ヒソップの植物体を、水(熱水を含む)、親水性有機溶媒(エタノール、メタノール、ブタノール、アセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフランなど)、これらの混合溶媒等を用いて抽出し、濾紙で残渣を分離して、濾液をエバポレーター等で減圧濃縮し、粗抽出物(黒色のシロップ)を得ることができる。
ここまでの抽出温度は4〜100℃、好ましくは20〜35℃、抽出時間は1日から10日ほど、好ましくは3〜9日を例示できるが、これに限ったものではない。
ここで、抗酸化活性の測定は、一般的な方法で行うことができるが、例えば、1,1−ジフェニル−2−ピクリルヒドラジル(DPPH)ラジカルの消去能を指標にした方法(Yamaguchi,T.,Takamura,H.,Matoba,T.and Terao,J.,HPLC method for evaluation of the free-radical scavenging activity of foods by using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl.Biosci.Biotechnol.Biochem.62,1201-1204,1998)で行うことができる。
また、この精製抽出物は、特願2003−50400号明細書に示すように、α−グルコシダーゼ阻害活性も有することが明らかであるから、該酵素阻害活性を指標としても良い。ここで、α−グルコシダーゼ阻害活性の測定は、一般的な方法で行うことができるが、例えば、ラット腸アセトンパウダーによりα−グルコシダーゼ活性を指標とした方法(Nishioka,T.,Kawabata,J.and Aoyama,Y.Baicalein,an β-glucosidase inhibitor from Scutellaria baicalensis.J.Nat.Prod.61,1413-1415,1989.;Toda,M.,Kawabata,J.and Kasai,T.Inhibitory effects of ellagi- and gallotannins on rat intestinal α-glucosidase complexes.Biocsci.Biotechnol.Biochem.65,542-547,2001.)で行うことができる。
また、該誘導体に加えて、ロスマリン酸、コーヒー酸のほか、タンニンなどのポリフェノール等、上記誘導体以外の抗酸化物質も、1種類、或いは2種類以上の合計で1〜80%、好ましくは5〜80%含有することが好ましい。ヒソップの抽出物が発揮する高い血液流動性改善作用や血流改善作用は、プロパン−1,2,3−トリオール誘導体の他、上記抗酸化物質の存在に起因するものと考えられる。
尚、上記の例示した抽出方法により得られる抽出物が、下記の化学構造式(A)および(B)で表されるプロパン−1,2,3−トリオール誘導体を含むことは、上記方法が特願2003−050400号明細書に記載されている製造方法に従っていることから明らかである。さらに、該抽出物について各種クロマトグラフィー等を利用して更に精製を進めた後、NMR、IR、赤外線スペクトルの測定などを行うことにより確認することができる。
また、抗酸化物質を含んでいることについても、該抽出物について各種クロマトグラフィー等を利用して更に精製を進めた後、NMR、IR、赤外線スペクトルの測定などを行うことにより確認することができる。
すなわち、上記と同様にして得た粗抽出物(黒色のシロップ)について、エタノール等の有機溶媒を用いて抽出し、抽出液と残渣を濾紙やガラスフィルター等で分離し、濾液を濃縮して、得られた濃縮液を水可溶部と有機溶媒可溶部に分配する。水溶媒可溶部と有機可溶部の双方ともα−グルコシダーゼ阻害活性を有している点で共通するが、水可溶部には上記構造式(A)で表されるプロパン−1,2,3−トリオール誘導体が、有機溶媒可溶部には上記構造式(B)で表されるプロパン−1,2,3−トリオール誘導体が含まれている。
上記構造式(A)で表される誘導体の抽出第一段階として、水可溶部を濃縮し、適当な有機溶媒濃度になるように調製する。得られた濃縮液を、−25℃程度で2日間静置する。沈殿が生じた場合は、濾紙やガラスフィルター等を用いて除去する。
上記構造式(A)で表される誘導体の抽出第二段階として、濃縮液を活性炭やダイヤイオンHP−20(三菱化成工業)を担体に用いた吸着カラムクロマトグラフィーに供する。吸着物質を含水有機溶剤、例えば、含水メタノール溶液を用いて溶出する。α−グルコシダーゼ阻害活性を有する溶出区を濃縮する。
上記構造式(A)で表される誘導体の抽出第三段階として、この分画をゲル濾過クロマトグラフィー、例えば、Sephadex LH-20(Amersham Biosciences社)に供して、含水有機溶媒を用いて溶出し、α−グルコシダーゼ阻害活性の高い分画を得る。
上記構造式(A)で表される誘導体の抽出第四段階として、この分画を、逆相系中圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。カラムは,例えばLpbar LiChroprep RP-18 (Merck社)等を使用することができる。含水有機溶媒、例えば、メタノール:水:酢酸混液等を用いて溶出して、α−グルコシダーゼ阻害活性の高い分画を得る。
さらに、上記構造式(A)で表される誘導体の抽出第五段階として、この分画を濃縮し、逆相高圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。カラムは、例えばInertsil ODS カラム(GL Science社)等を使用することができる。移動層としては、含水有機溶媒、例えば、メタノール:水:酢酸混液を用いて、α−グルコシダーゼ阻害活性の高い溶出区を得る。これを濃縮し上記構造式(A)で表されるプロパン−1,2,3−トリオール誘導体をシラップ状にて得る。
例えば、構造式(B)で表される誘導体の抽出第一段階として、有機溶媒可溶部を濃縮し、これを活性炭、ダイヤイオンHP−20(三菱化成工業)等を担体に用いた吸着カラムクロマトグラフィーに供し、水、含水メタノール溶液、メタノール等を用いて溶出し、阻害活性を有する含水メタノール溶液溶出区を濃縮する。これをシリカゲル(例えば、Wakogel C−200(和光純薬工業製)など)を用いたシリカゲル担体カラムクロマトグラフィーに供し、有機溶媒混合液、例えば、CHCl3:MeOH:CHCl3の混合液で溶出する。ここで、α−グルコシダーゼ阻害活性の確認される溶出区を減圧し、濃縮する。
上記構造式(B)で表される誘導体の抽出第二段階として、この分画をゲル濾過クロマトグラフィー、例えばセファデックスLH-20(Amersham Pharmacia Biotech社)に供して、有機溶媒を用いて溶出し、α−グルコシダーゼ阻害活性の高い溶出区を濃縮する。
上記構造式(B)で表される誘導体の抽出第三段階として、この分画を逆相中圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。カラムは、例えばLpbar LiChroprep RP-18(Merck社)等を使用することができる。含水有機溶媒、例えば、メタノール:水:酢酸混液を用いて溶出し、α−グルコシダーゼ阻害活性の高い溶出区を濃縮する。
さらに、上記構造式(B)で表される誘導体の第四段階として、この分画を逆相高圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。カラムは、例えば、YMC-Pack ODS-AMカラム(YMC社)等を使用することができる。移動層としては、含水有機溶媒、例えば、メタノール:水:酢酸混液を用いて、α−グルコシダーゼ阻害活性の高い溶出区を得る。これを濃縮し、上記構造式(B)で表されるプロパン−1,2,3−トリオール誘導体をシラップ状にて得る。
このようなヒソップの抽出物の性質を利用した血液流動性改善剤および血流改善剤を提供するものが、請求項1および2に係る本発明である。
すなわち、請求項1に係る本発明は、シソ科植物ヒソップの抽出物を含有することを特徴とする血液流動性改善剤を提供するものであり、請求項2に係る本発明は、シソ科植物ヒソップの抽出物を含有することを特徴とする血流改善剤を提供するものである。
請求項1に係る本発明の血液流動性改善剤、および請求項2に係る本発明の血流改善剤において、上記ヒソップの抽出物の有効成分としての含有量は、使用目的や抽出の程度によって異なるが、天然物に由来する成分であるため、副作用の心配はなく、厳しく定める必要はない。ここで、上記の抽出例における精製抽出物を用いる場合には、0.1〜100重量%とすることができる。
また、ヒソップの植物体としてのヒソップ乾燥葉を熱水抽出していわゆるお茶などの形態とし、これを他のお茶(ハーブ茶など)とブレンドして飲料とすることもできる。この場合、ヒソップの抽出物の熱水に対する添加量は0.1〜100質量%の範囲で適宜定めることができる。
すなわち、請求項3に係る本発明は、請求項1記載の血液流動性改善剤を添加したことを特徴とする血液流動性改善用医薬品または医薬部外品を提供するものであり、請求項4に係る本発明は、請求項2記載の血流改善剤を添加したことを特徴とする血流改善用医薬品または医薬部外品を提供するものである。
ヒソップの葉から、特願2003−050400号明細書に記載されている製造方法に従って、プロパン−1,2,3−トリオール誘導体を含む抽出物を製造した。
すなわち、ヒソップ乾燥葉3.4kgを80%エタノールを用いて、室温で1週間抽出し、抽出液と残渣を濾紙で分離し、濾液はエバポレーター(R200、SHIBATA製)で減圧濃縮し、得られた濃縮液を酢酸エチルと蒸留水で液液分配し、プロパン−1,2,3−トリオール誘導体を約10%含む抽出物155.2gを製造し、実施例に供した。
なお、得られた抽出物について、抗酸化活性を次の操作により確認を行った。すなわち、得られた抽出物をエバポレーター等を用いて減圧濃縮後、シリカゲル(Wakogel C-200、和光純薬製)を担体に用いたカラムクロマトグラフィーに供して得られた140gについて、溶剤混合により15画分に分画した。このうち、抗酸化活性を指標として、活性の高い8つの溶出区を減圧・濃縮した。抗酸化活性の測定は、1,1−ジフェニル−2−ピクリルヒドラジル(DPPH)ラジカルの消去能を指標にした方法(Yamaguchi,T.,Takamura,H.,Matoba,T.and Terao,J.,HPLC method for evaluation of the free-radical scavenging activity of foods by using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl.Biosci.Biotechnol.Biochem.62,1201-1204,1998)で行った。
また、得られた上記精製物について、特願2003−050400号明細書に例示のとおり、α−グルコシダーゼ活性を次の操作により確認を行い、プロパン−1,2,3−トリオール誘導体が含有することを確認した。すなわち、得られた抽出物をダイアイオンHP-20(三菱化学(株)製)を担体としたカラムクロマトグラフィーに供し、水、含水メタノール溶液(メタノール:水=1:1および7:3)およびメタノールを用いて溶出し、得られた溶出区を減圧・濃縮した。なお、α−グルコシダーゼ阻害活性の測定は、ラット腸アセトンパウダーによりα−グルコシダーゼ活性を指標とした方法(Nishioka,T.,Kawabata,J.and Aoyama,Y.Baicalein,an β-glucosidase inhibitor from Scutellaria baicalensis.J.Nat.Prod.61,1413-1415,1989.;Toda,M.,Kawabata,J.and Kasai,T.Inhibitory effects of ellagi- and gallotannins on rat intestinal α-glucosidase complexes.Biocsci.Biotechnol.Biochem.65,542-547,2001.)で行った。
製造例に示すヒソップの抽出物の血液流動性改善作用について、毛細血管モデルであるマイクロチャンネルアレイ・フローアナライザー(血液流動性測定装置、MC−FAN、室町製作所製)を用いて、ヒソップの抽出物飲用前後の血液通過時間を測定した。マイクロチャンネルの流路幅は7μmとし、100μlのヘパリン採血血液が通過する時間を測定することで血液流動性の評価を行った。
実験は、まず、座位安静状態にて肘正中皮静脈より真空採血管を用いてヘパリン採血を行い、上記の血液流動性測定装置を用いて、飲用前の血液について血液流動性を測定した。その後、上記製造例にて製造したヒソップの抽出物を含む飲料水100mlを約1分かけて飲用し、抽出物飲用の30分後に同様に、飲用前と同様にしてヘパリン採血を行い、血液流動性を測定した。
なお、対照として、ヒソップの抽出物の代わりに市販ミネラルウォータを同量飲用し、同様に飲用前後の血液流動性を測定した。
ヒソップの抽出物飲用前後、並びに対照であるミネラルウォータ飲用前後の血液流動性は、表1に示すとおりである。なお、表中の*印は統計学的有意差(P<0.05)を表している。
実施例1の結果から、ヒソップの抽出物を摂取することにより血液流動性の亢進あるいは改善作用が示されること、すなわち、いわゆる血液サラサラ状態を実現することが可能であることが明らかとなった。
製造例に示すヒソップの抽出物の皮膚温度改善効果について、デジタル式放射温度計(DP−5000,ホリバ)を用いて、ヒソップの抽出物飲用前後の皮膚表面温度を経時的に測定することで評価を行った。
実験は、最初に30分間の座位安静状態にて緊張感や悪寒等のないことを確認した上で、被験者各1名づつ、上記製造例にて製造したヒソップの抽出物を含む飲料水100mlを約1分かけて飲用し、飲用前、飲用から10分後、30分後および60分後、安静状態で上記のデジタル式放射温度計を用いて経時的に測定した。皮膚表面温度の測定部位は、手に関しては指先(左手中指第一から第二関節部)および手の甲、足に関しては足の甲とした。
対照として、ヒソップの抽出物の代わりにミネラルウォータを同量飲用し、同様に皮膚表面温度を測定した。
まず、ヒソップの抽出物並びに対照であるミネラルウォータ飲用前、飲用後10分、30分、60分の各時点における冷え性自覚被験者の手の指先の皮膚表面温度を、表2および図1に示す。
次に、ヒソップの抽出物並びに対照であるミネラルウォータ飲用前、飲用後10分、30分、60分の各時点における健常被験者の手の指先の皮膚表面温度を、表3および図2に示す。
次に、ヒソップの抽出物並びに対照であるミネラルウォータ飲用前、飲用後10分、30分、60分の各時点における冷え性自覚被験者の手の甲の皮膚表面温度を、表4および図3に示す。
次に、ヒソップの抽出物並びに対照であるミネラルウォータ飲用前、飲用後10分、30分、60分の各時点における冷え性自覚被験者の足の甲の皮膚表面温度を、表5および図4に示す。
製造例に示すヒソップの抽出物の血流改善作用について、デジタルレーザー血流計(CyberMed CDF-2000、オー・エイ・エス株式会社製)を用いて、ヒソップの抽出物飲用前後の手足の血流量を経時的に測定することで評価を行った。
実験は、最初に30分間の座位安静状態にて緊張感や悪寒等のないことを確認した上で、被験者各1名づつ、上記製造例にて製造したヒソップの抽出物を含む飲料水100mlを約1分かけて飲用し、飲用前、飲用から10分後、30分後および60分後、安静状態で上記のデジタル式放射温度計を用いて経時的に測定した。皮膚表面温度の測定部位は、手に関しては指先(左手中指第一から第二関節部)、足に関しては足の甲とした。
対照として、ヒソップの抽出物の代わりにミネラルウォータを同量飲用し、同様に皮膚表面温度を測定した。
まず、ヒソップの抽出物並びに対照であるミネラルウォータ飲用前、飲用後10分、30分、60分の各時点における冷え性自覚被験者の手の指先の血流量を、表6および図5に示す。
次に、ヒソップの抽出物並びに対照であるミネラルウォータ飲用前、飲用後10分、30分、60分の各時点における健常被験者の手の指先の血流量を、表7および図6に示す。
次に、ヒソップの抽出物並びに対照であるミネラルウォータ飲用前、飲用後10分、30分、60分の各時点における冷え性自覚被験者の足の甲の血流量を、表8および図7に示す。
従って、係るヒソップの抽出物を含有する本発明の血液流動性改善剤は、血液流動性改善剤として微小血管や動脈硬化、心筋梗塞、脳梗塞等における血管の障害時、あるいはこれら生活習慣病の予防および治療に有効であることが証明された。また、係るヒソップの抽出物を含有する本発明の血流改善剤は、抽出物をさらに血流改善剤として冷え性をはじめ、血行不良等が引き金となって現れる肩こりや腰痛などの諸症状に対する改善効果を有することが証明された。
また、本発明の血液流動性改善剤および血流改善剤は、天然物であるヒソップ由来のヒソップの抽出物を含有することから、安全、かつ安心した摂取が可能であり、様々な食品、飲料の他、医薬品、医薬部外品等に広く応用され、生活習慣病等の予防や国民の健康の維持・増進により国民生活の向上に資することが期待できる。
Claims (4)
- シソ科植物ヒソップの抽出物を含有することを特徴とする血液流動性改善剤。
- シソ科植物ヒソップの抽出物を含有することを特徴とする血流改善剤。
- 請求項1記載の血液流動性改善剤を添加したことを特徴とする血液流動性改善用医薬品または医薬部外品。
- 請求項2記載の血流改善剤を添加したことを特徴とする血流改善用医薬品または医薬部外品。
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