JP3932309B2 - 神経細胞死抑制剤とその利用法 - Google Patents
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[1]リゾホスファチジルエタノールアミンを含有することを特徴とする神経細胞死抑制剤。
[2]神経細胞の分化誘導作用、神経細胞の神経突起伸長作用、さらには脳神経細胞の外傷性障害、代謝性要因による障害、β−アミロイド蛋白質による障害または脳虚血性障害を予防あるいは治癒する作用を有する[1]に記載の神経細胞死抑制剤。
[3]シグナル伝達系タンパク質であるAktのリン酸化を促進する作用を有する請求項1〜2に記載の神経細胞死抑制剤。
[4]シグナル伝達系タンパク質であるマイトジェン活性化キナーゼのリン酸化を促進する作用を有する[1]〜[2]に記載の神経細胞死抑制剤。
[5]リゾホスファチジルエタノールアミンを有効成分とする神経細胞死抑制用医薬組成物。
また、動植物中にもっとも多く見いだされるホスファチジルコリンを出発物質としてホスフォリパーゼDを用いた塩基交換反応でホスファチジルエタノールアミンとし、次にホスフォリパーゼA2によりリゾホスファチジルエタノールアミンを調製することができる。本発明に用いるリゾホスファチジルエタノールアミンは上記の天然物中に含まれるものやホスフォリパーゼA2を使用して調製したものを単独または適宜組み合わせたものである。
大豆リン脂質(ツルーレシチン製、ホスファチジルコリン75%、ホスファチジルエタノールアミン14%、その他11%)80gを80mLのアセトンに溶かした。シリカゲル(Merck、70−230mesh)450gを1,000mLのアセトンに加えた後、70mm×700mmのガラスカラムに充填した。このカラムに、上記で溶解したリン脂質溶液を投入した後、アセトン500mL、アセトン:エタノール混合溶液(95:5)1000mL、アセトン:エタノール混合溶液(90:10)1,500mL、アセトン:エタノール混合溶液(85:15)2,000mLで溶出しながら、溶出されるリゾホスファチジルエタノールアミンを薄層クロマトグラフィーで調べた。ホスファチジルエタノールアミンが溶出される分画だけを集めて、ロータリーエバポレータで濃縮した。得られたホスファチジルエタノールアミンをHPLC(カラム:シリカゲル60 野村化学製、溶離液 クロロホルム:メタノール=90:10)で分析した結果、純度60%のホスファチジルエタノールアミン(ホスファチジルコリン22%含有)20gが得られた。
Nordisk社)を添加し、30℃で13時間激しく攪拌しながら反応した。溶液を静置させた後、上澄み液を除去した。すなわち、溶媒及び生成された脂肪酸を除去した。沈殿部分を常温で200mLのヘキサン:エタノール:水(1:1:0.3)の混合溶液で抽出した。下部の水層を除去し、ここに50mLのエタノールを添加して、常温でろ過した。ろ過物にさらにヘキサン:エタノール(1:1)溶液を100mL処理し、ろ過し、乾燥した。得られた乾燥物について液体クロマトグラフィーでリゾホスファチジルエタノールアミンを定量した結果、純度は90%、収量は5gであった。
乾燥全卵(キューピー製)1kgを攪拌槽に仕込み、そこにエタノール2Lと水0.4Lを加え、常温で5時間撹拌した。その後、濾過により抽出液と残渣を分離した。抽出液をエバポレーターにより濃縮し、茶褐色の粗抽出物250gを得た。粗抽出物中のリゾホスファチジルエタノールアミン含量は11%であった。
上記の粗抽出物10gを、分取用高速液体クロマトグラフィー(ギルソン社製、モデル303)で分画した。カラムとしてデベロシル60−10 φ50mm×500mm(野村化学製)を用い、検出波長は210nm、溶媒はクロロホルム:メタノール=90:10、溶媒流量を50mL/分とした。分画に際し、5分ごとに溶離液を分取し、分取物に含まれる溶媒をロータリーエバポレーターで乾燥して、乾固した分画物を得た。画分各物中のリゾホスファチジルエタノールアミン含量を上記の方法で測定し、最も含量が高かった分画物すなわち90%品を神経細胞死抑制剤とした。
スタート時のOD562−所定時間培養時のOD562(染色度)を求めて、生細胞数の指標とした。結果を図1に示した。
Claims (5)
- リゾホスファチジルエタノールアミンを含有することを特徴とする神経細胞死抑制剤。
- 神経細胞の分化誘導作用、神経細胞の神経突起伸長作用、さらには脳神経細胞の外傷性障害、代謝性要因による障害、β−アミロイド蛋白質による障害または脳虚血性障害を予防あるいは治癒する作用を有する請求項1に記載の神経細胞死抑制剤。
- シグナル伝達系タンパク質であるAktのリン酸化を促進する作用を有する請求項1〜2に記載の神経細胞死抑制剤。
- シグナル伝達系タンパク質であるマイトジェン活性化キナーゼのリン酸化を促進する作用を有する請求項1〜2に記載の神経細胞死抑制剤。
- リゾホスファチジルエタノールアミンを有効成分とする神経細胞死抑制用医薬組成物。
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