JP3929890B2 - ジグリセリドの製造方法 - Google Patents
ジグリセリドの製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP3929890B2 JP3929890B2 JP2002380214A JP2002380214A JP3929890B2 JP 3929890 B2 JP3929890 B2 JP 3929890B2 JP 2002380214 A JP2002380214 A JP 2002380214A JP 2002380214 A JP2002380214 A JP 2002380214A JP 3929890 B2 JP3929890 B2 JP 3929890B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reaction
- diglyceride
- fatty acid
- weight
- pufa
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 63
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 46
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 42
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 42
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 42
- 150000004665 fatty acids Chemical group 0.000 claims description 38
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 claims description 36
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 26
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 26
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 26
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 26
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 23
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 claims description 18
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 claims description 8
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 claims description 6
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 4
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 17
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 description 17
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N all-cis-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 description 16
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 13
- -1 alcohol ester Chemical class 0.000 description 10
- 235000020669 docosahexaenoic acid Nutrition 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 229940090949 docosahexaenoic acid Drugs 0.000 description 8
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 8
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 6
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 6
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000005398 Monoacylglycerol Lipase Human genes 0.000 description 3
- 108020002334 Monoacylglycerol lipase Proteins 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 3
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229960005135 eicosapentaenoic acid Drugs 0.000 description 3
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 3
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 3
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 3
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WBHHMMIMDMUBKC-XLNAKTSKSA-N ricinelaidic acid Chemical compound CCCCCC[C@@H](O)C\C=C\CCCCCCCC(O)=O WBHHMMIMDMUBKC-XLNAKTSKSA-N 0.000 description 3
- 229960003656 ricinoleic acid Drugs 0.000 description 3
- FEUQNCSVHBHROZ-UHFFFAOYSA-N ricinoleic acid Natural products CCCCCCC(O[Si](C)(C)C)CC=CCCCCCCCC(=O)OC FEUQNCSVHBHROZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DVSZKTAMJJTWFG-SKCDLICFSA-N (2e,4e,6e,8e,10e,12e)-docosa-2,4,6,8,10,12-hexaenoic acid Chemical compound CCCCCCCCC\C=C\C=C\C=C\C=C\C=C\C=C\C(O)=O DVSZKTAMJJTWFG-SKCDLICFSA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XDOFQFKRPWOURC-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecanoic acid Chemical compound CC(C)CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O XDOFQFKRPWOURC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GZJLLYHBALOKEX-UHFFFAOYSA-N 6-Ketone, O18-Me-Ussuriedine Natural products CC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O GZJLLYHBALOKEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KAUVQQXNCKESLC-UHFFFAOYSA-N docosahexaenoic acid (DHA) Natural products COC(=O)C(C)NOCC1=CC=CC=C1 KAUVQQXNCKESLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229920001568 phenolic resin Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXGFMDJXCMQABM-UHFFFAOYSA-N 2-methoxy-6-methylphenol Chemical compound [CH]OC1=CC=CC([CH])=C1O KXGFMDJXCMQABM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 241000555825 Clupeidae Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- 102000017055 Lipoprotein Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108010013563 Lipoprotein Lipase Proteins 0.000 description 1
- 108010048733 Lipozyme Proteins 0.000 description 1
- VCUFZILGIRCDQQ-KRWDZBQOSA-N N-[[(5S)-2-oxo-3-(2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-yl)-1,3-oxazolidin-5-yl]methyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C1O[C@H](CN1C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1)CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F VCUFZILGIRCDQQ-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001507683 Penicillium aurantiogriseum Species 0.000 description 1
- 241000228147 Penicillium camemberti Species 0.000 description 1
- 235000002245 Penicillium camembertii Nutrition 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 1
- 241000269821 Scombridae Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 1
- SLGWESQGEUXWJQ-UHFFFAOYSA-N formaldehyde;phenol Chemical compound O=C.OC1=CC=CC=C1 SLGWESQGEUXWJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYPPCCJJKNISFK-UHFFFAOYSA-J kaolinite Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3].[Al+3].[O-][Si](=O)O[Si]([O-])=O CYPPCCJJKNISFK-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229910052622 kaolinite Inorganic materials 0.000 description 1
- FCCDDURTIIUXBY-UHFFFAOYSA-N lipoamide Chemical compound NC(=O)CCCCC1CCSS1 FCCDDURTIIUXBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 1
- 235000020640 mackerel Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000000199 molecular distillation Methods 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 235000019512 sardine Nutrition 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 235000003441 saturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
Description
【発明の属する技術分野】
本発明は、高度不飽和脂肪酸含有ジグリセリドを高濃度に、かつ効率良く製造する方法に関する。
【0002】
【従来の技術】
ジグリセリドは、油脂の可塑性改良用添加剤、食品、医薬品、化粧品等の分野に利用され、最近、ジグリセリドの優れた生理活性に着目した食品が注目されている。一方、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸(DHA)等の高度不飽和脂肪酸(PUFA)の生理活性も注目されており、特にDHAは、血小板凝集抑制作用、血中中性脂肪低下作用、血中コレステロール低下作用、制癌作用、脳機能向上効果等を有することが知られている。このため、高濃度にPUFAを含有する油脂の製造法が精力的に研究開発されている。
【0003】
一般的にPUFAは天然界においてはトリグリセリドの形で存在しているが、その含有量が低い。PUFAを分離・精製する方法としては、クロマトグラフィー法、尿素付加法、ウインタリング法、分子蒸留法、液液分配法、二重結合への付加物による方法、超臨界抽出法、及びこれらを組合わせた方法が知られている。しかしながら、これらの方法においては、いずれも工程が煩雑で効率が悪く、高コストとなってしまう。
【0004】
そこで簡便かつ高効率に、直接トリグリセリドの形でPUFA画分を濃縮する方法として酵素法がある。一般にリパーゼはPUFAに対する作用が弱いため、この特性を利用し、トリグリセリド中のPUFA以外の構成脂肪酸のエステル結合を選択的に加水分解し、除去することでPUFA含有トリグリセリドを濃縮できる。例えば、Candida属由来のリパーゼを用いて濃縮する方法が知られている(特許文献1)。このように、PUFA含有トリグリセリドを濃縮する方法は多数研究されている。
【0005】
一方、PUFA含有ジグリセリドの製造法についての例は僅かである。PUFA含有グリセリドの製造法としては、PUFA又はその低級アルコールエステルとグリセリンとを耐熱性リパーゼを用いて反応させる方法が一例であるが(特許文献2)、この方法では、反応温度が50〜70℃と酵素反応としてはやや高く、特殊な酵素を使用しており、かつ高濃度にジグリセリドを得ることはできない。また、リパーゼの存在下、PUFA又はそのアルコールエステルに対して過剰量のグリセリンを添加して反応を行うことにより、モノグリセリドとジグリセリドの合計がトリグリセリドより多いPUFA含有油脂を製造する方法も知られているが(特許文献3)、この方法では、未反応のグリセリンが大量に残存するため除去工程が必要であり、かつ高濃度にジグリセリドを得ることはできない。
【0006】
また、エステル化反応によりジグリセリドを合成する場合、原料である脂肪酸又はそのエステルとグリセリンとの仕込み比、反応温度、酵素濃度等によって、高い反応率で高いジグリセリド純度を得るための最適な反応終了点は異なる。特に、反応速度向上のため、グリセリンに対する脂肪酸又はそのエステルの比率を高めた場合、反応時間を長くして反応率を上げるとトリグリセリドが生成してジグリセリド純度が低下するという問題がある。
【0007】
【特許文献1】
特開昭58-165796号公報
【特許文献2】
特開昭62-91188号公報
【特許文献3】
特開平10-265795号公報
【0008】
【発明が解決しようとする課題】
したがって、本発明の目的は、高濃度のPUFA含有ジグリセリドを効率良く製造する方法を提供することにある。
【0009】
更に、本発明の他の目的は、様々な脂肪酸/グリセリン比、反応温度、酵素濃度の場合に対応でき、特に高い脂肪酸/グリセリン比の場合にも、高い反応率で高濃度のPUFA含有ジグリセリドを製造する方法を提供することにある。
【0010】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、エステル化反応に用いるリパーゼとして、特許文献1〜3のいずれにおいても対象とされていない部分グリセリドリパーゼを採用し、かつこれを固定化し、反応時に生成する水を反応系外に除去させながらPUFA含有脂肪酸又はその低級アルキルエステルとグリセリンを反応させることにより、飛躍的にジグリセリド生成率が高くなり、高濃度のPUFA含有ジグリセリドが効率良く得られることを見出した。また本発明者は、反応液の酸価が、原料であるPUFA含有脂肪酸又はその低級アルキルエステルとグリセリンとの比率との関係で一定の範囲内となったときに、反応を終了させることにより、できるだけ高い反応率で、高濃度のジグリセリドを製造することが可能となることを見いだした。
【0011】
すなわち本発明は、PUFA又はその低級アルキルエステルとグリセリンとを、反応モル比R〔R=脂肪酸又はその低級アルキルエステル( mol )/グリセリン( mol )〕が 1.5 〜 2.6 となる範囲で固定化部分グリセリドリパーゼの存在下に、30℃以上50℃未満の反応温度で、反応生成水を反応系外に除去しながら反応させ、ジグリセリド純度〔ジグリセリド/(ジグリセリド+トリグリセリド)× 100 〕が 80 重量%以上であるジグリセリドを、 60 重量%以上の反応率(反応液中のジグリセリドとトリグリセリドの合計重量百分率)で得る高度不飽和脂肪酸含有ジグリセリドの製造方法を提供するものである。
【0012】
【発明の実施の形態】
本発明において、高度不飽和脂肪酸(PUFA)とは、二重結合を3個以上有する炭素数20以上の脂肪酸を意味する。具体的には、ドコサヘキサエン酸(DHA)、エイコサペンタエン酸(EPA)、アラキドン酸(AA)等が好ましいものとして挙げられる。また、イワシ、サバ、マグロなどの魚油や藻類、菌類など天然油脂由来のPUFAを利用することもできる。またPUFAとエステルを形成する低級アルコールとしては、炭素数1〜6の低級アルコール類が好ましい。炭素数1〜6の低級アルコールとしては、例えばメタノール、エタノール、1-プロパノール、2-プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノールなどが挙げられる。これらのPUFA又はその低級アルキルエステルは、2種以上を併用することもできる。
【0013】
本発明で使用する部分グリセリドリパーゼは、モノグリセリド及びジグリセリドの部分グリセリドを加水分解するが、トリグリセリドを加水分解しないリパーゼである。部分グリセリドリパーゼとしては、ラット小腸、ブタ脂肪組織などの動物臓器由来のモノグリセリドリパーゼ又はジグリセリドリパーゼ;バチルス・スピーシーズ(Bacillus sp.)H-257由来モノグリセリドリパーゼ(J. Biochem., 127, 419-425, 2000)、シュードモナス・スピーシーズ(Pseudomonas sp.)LP7315由来モノグリセリドリパーゼ(Journal of Bioscience and Bioengineering, 91(1), 27-32, 2001)、ペニシリウム・サイクロピウム由来リパーゼ(J. Biochem, 87(1), 205-211, 1980)、ペニシリウム・カメンベルティ(Penicillium camembertii)U-150由来リパーゼ(J. Fermentation and Bioengineering, 72(3), 162-167, 1991)等が挙げられる。なかでも、至適温度を30℃以上50℃未満、特に30〜45℃に有するものが好ましい。
【0014】
本発明で使用する固定化部分グリセリドリパーゼは、上記部分グリセリドリパーゼが、セライト、ケイソウ土、カオリナイト、シリカゲル、モレキュラーシーブス、多孔質ガラス、活性炭、炭酸カルシウム、セラミックス等の無機担体;セルロースパウダー、ポリビニルアルコール、ポリプロピレン、キトサン、イオン交換樹脂、疎水吸着樹脂、キレート樹脂、合成吸着樹脂等の有機高分子等の固定化担体に固定されたものであるが、特にイオン交換樹脂に固定化されたものが好ましい。
【0015】
イオン交換樹脂としては、多孔性の陰イオン交換樹脂が好ましい。樹脂の粒子径は100〜1000μmが望ましく、細孔径は100〜1500Åが望ましい。この細孔が酵素吸着に大きな表面積を与え、より大きな吸着量を得ることができる。樹脂の材質としては、フェノールホルムアルデヒド系、ポリスチレン系、アクリルアミド系、ジビニルベンゼン系等が挙げられる。特にフェノールホルムアルデヒド系樹脂(商品名Duolite A-568)が望ましい。
【0016】
部分グリセリドリパーゼの固定化温度は、酵素の失活の起きない温度であればよく、0〜60℃、特に5〜45℃が好ましい。また固定化に用いる酵素水溶液のpHは、酵素の変性が起きないような範囲であればよく、pH3〜9が好ましい。特に至適pHが酸性とされているリパーゼを用いる場合に最大の活性を得るには、pH4〜6とするのがよい。また酵素水溶液に用いる緩衝液としては、一般的な酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液等を用いることができる。酵素水溶液中の部分グリセリドリパーゼの濃度は、固定化効率の点から、該酵素の溶解度以下で、かつ十分な濃度であることが望ましい。また必要に応じて不溶部を遠心分離により除去し、上清を使用してもよい。また部分グリセリドリパーゼと固定化担体の使用割合は、固定化担体1重量部に対して、部分グリセリドリパーゼ0.05〜10重量部、特に0.1〜5重量部が好ましい。
【0017】
本発明では、高活性を発現するような吸着状態にするため、固定化の前処理として、固定化担体を脂溶性脂肪酸又はその誘導体で処理することが好ましい。またこれらは単一で用いてもよいが、2種以上を組み合わせることで一層の効果が発揮される。これらの脂溶性脂肪酸又はその誘導体と固定化担体の接触法としては、水又は有機溶剤中にこれらをそのまま加えてもよいが、分散性を良くするため、有機溶剤に脂溶性脂肪酸又はその誘導体を一旦分散・溶解させた後、水に分散させた固定化担体に加えてもよい。この有機溶剤としては、クロロホルム、ヘキサン、エタノール等が挙げられる。脂溶性脂肪酸又はその誘導体と固定化担体の比率は、固定化担体1重量部(乾燥重量)に対し、脂溶性脂肪酸又はその誘導体0.01〜5重量部、特に0.1〜2重量部が好ましい。接触温度は、0〜100℃、特に20〜60℃が好ましい。接触時間は、5分〜5時間程度でよい。本処理後濾過して固定化担体を回収するが、この時乾燥してもよい。乾燥温度は室温〜100℃が良く、減圧乾燥を行ってもよい。
【0018】
この固定化担体処理に用いられる脂溶性脂肪酸としては、炭素数4〜24の直鎖又は分岐鎖の、飽和又は不飽和の、水酸基が置換していてもよい脂肪酸が挙げられる。好ましい脂溶性脂肪酸としては、炭素数8〜18の脂肪酸、例えば、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸等の直鎖飽和脂肪酸、オレイン酸、リノール酸等の不飽和脂肪酸、リシノール酸等のヒドロキシ脂肪酸、イソステアリン酸等の分岐脂肪酸が挙げられる。脂溶性脂肪酸誘導体としては、炭素数8〜18の脂肪酸と水酸基を有する化合物とのエステルが挙げられ、1価アルコールエステル、多価アルコールエステル、リン脂質、あるいはこれらのエステルに更にエチレンオキサイドを付加した誘導体等が例示される。1価アルコールエステルとしては、メチルエステル、エチルエステル等が、多価アルコールエステルとしては、モノグリセリド、ジグリセリド、及びそれらの誘導体、あるいはポリグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、蔗糖脂肪酸エステル等が挙げられる。これらの脂肪酸及びその誘導体は、いずれも常温で液状であることが工程上望ましい。これらの脂溶性脂肪酸又はその誘導体としては、上記脂肪酸の混合物、例えば大豆脂肪酸などの天然由来の脂肪酸を用いることもできる。
【0019】
上記固定化部分グリセリドリパーゼの存在下でのPUFA又はその低級アルキルエステルとグリセリンとの反応において、両者の反応モル比R〔R=PUFA又はその低級アルキルエステル(mol)/グリセリン(mol)〕は、1.5〜2.6が好ましく、特に1.7〜2.4であるのが好ましい。
【0020】
本反応は、反応生成水を反応系外に除去しながら行われる。すなわちリパーゼ製剤に含まれる水分を除き、実質的に無水条件下で行われ、エステル化反応により生成した反応生成水は、減圧;ゼオライト、モレキュラーシーブス等の吸収剤の利用;反応槽中への乾燥した不活性ガスの通気等の方法により、系外に除去される。
【0021】
エステル化反応の反応温度は、原料及び生成物の融点、酵素の熱安定性により変化するが、30℃以上50℃未満、特に30〜45℃が反応性及びPUFAの安定性の点で好ましい。
【0022】
本発明方法によれば、ジグリセリド純度〔ジグリセリド/(ジグリセリド+トリグリセリド)×100〕が80重量%以上、更には85重量%以上、特に90重量%以上のジグリセリドを、60重量%以上、好ましくは65重量%以上、更に好ましくは70重量%以上の高い反応率(反応液中のジグリセリドとトリグリセリドの合計重量百分率)で製造することができる。
【0023】
得られるジグリセリドのジグリセリド純度をより高めるために、反応は、反応液の酸価(AV)を経時的に測定しながら行い、反応率60重量%以上、ジグリセリドの濃度80重量%以上を達成するためには、酸価が、50R−55>AV>70R−150(ただし、AV>0)を満たす範囲内で、反応を終了させることが好ましい。更には、反応率70重量%以上、ジグリセリド純度85重量%以上を達成するためには、50R−70>AV>70R−145(ただし、AV>0)、特に反応率80重量%以上、ジグリセリドの濃度90重量%以上を達成するためには、50R−80>AV>70R−140(ただし、AV>0)を満たす範囲内で、反応を終了させることが好ましい。
【0024】
本条件に従うことにより、原料仕込み比、反応温度、酵素濃度等の条件が変わった場合にも、当該変更に影響なく、できるだけ高い反応率で、高濃度のジグリセリドを製造することができる。すなわち、酸価が上記範囲より高い時点で反応を終了させた場合には、ジグリセリド純度は高いが、反応率が低いために生産性が低く、また酸価が上記範囲より低くなってから反応を終了させた場合には、反応液中のトリグリセリドの比率が高くなり、十分なジグリセリド純度が得られないため、いずれも好ましくない。
【0025】
【実施例】
実施例1
Duolite A-568(Rohm & Hass社,平均粒径480μm)10gを0.1mol/Lの水酸化ナトリウム水溶液100mL中で1時間攪拌した。攪拌した後500mMの酢酸緩衝液(pH5)100mLで2時間pHの平衡化を行った。その後50mMの酢酸緩衝液(pH5)100mLで2時間ずつ2回、pHの平衡化を行った。この後濾過を行い担体を回収した後、エタノール50mLでエタノール置換を30分間行った。濾過した後、リシノール酸を10g含むエタノール50mLを加え30分間、リシノール酸を担体に吸着させた。この後濾過し、担体を回収した後、50mMの酢酸緩衝液(pH5)50mLで4回洗浄し、エタノールを除去し、濾過して担体を回収した。その後市販の部分グリセリドリパーゼ(リパーゼG「アマノ」50,天野エンザイム社)20gを50mMの酢酸緩衝液(pH5)180mLに溶解した酵素液と2時間接触させ、固定化を行った。濾過し、固定化酵素を回収して、50mMの酢酸緩衝液(pH5)50mLで洗浄を行い、固定化していない酵素や蛋白を除去した。以上の操作はいずれも20℃で行った。固定化後の酵素液の残存活性と固定化前の酵素液の活性差より固定化率を求めたところ、95%であった。その後、実際に反応を行う基質である大豆脂肪酸40gを加え、40℃下で減圧脱水を行った。その後、濾過して大豆脂肪酸と分離し、固定化酵素とした。
こうして得られた固定化酵素を実際に反応を行う基質であるPUFA含有脂肪酸(DHA含有率44重量%)で洗浄した。洗浄した固定化酵素20g(乾燥重量8g)を200mL容の四つ口フラスコに秤量した。そこへPUFA含有脂肪酸(DHA含有率44重量%)とグリセリン80g(モル比で脂肪酸/グリセリン=2.30)を添加し、40℃、減圧下で、反応液の酸価を経時的に測定しながら、エステル化反応を45時間行った。このときの反応液の酸価は27.8であった。反応液をHPLCで分析し、グリセリド組成及び未反応物の分析を行った。また反応液をTLCプレートに展開(展開溶媒:クロロホルム/アセトン/メタノール=93.5/4.5/2.0容量%)して各グリセリドに分画、酢酸エチルで溶離させ、脱溶剤後、GCで脂肪酸組成分析を行った。結果を表1に示す。反応率は74.2重量%であり、DG濃度は85.3重量%と高濃度であった。また、DG中のDHA含有率も44重量%と高かった。
【0026】
実施例2
実施例1で得られた洗浄済みの固定化酵素20g(乾燥重量8g)を200mL容の四つ口フラスコに秤量した。そこへPUFA含有脂肪酸(DHA含有率44重量%)とグリセリン80g(モル比で脂肪酸/グリセリン=1.87)を添加し、40℃、減圧下で、反応液の酸価を経時的に測定しながら、エステル化反応を165時間行った。このときの反応液の酸価は3.6であった。反応液の分析を実施例1と同様に行った結果、反応率は83.8重量%、DG濃度は88.3重量%と高濃度であった。また、DG中のDHA含有率も37重量%と高かった。
【0027】
比較例1
市販の固定化酵素である1,3位選択性リパーゼ:Lipozyme RM IM(Novozymes社製)4gを200mL容の四つ口フラスコに秤量した。そこへPUFA含有脂肪酸(DHA含有率44重量%)とグリセリン80g(モル比で脂肪酸/グリセリン=2.36)を添加し、50℃、減圧下で、反応液の酸価を経時的に測定しながら、エステル化反応を48時間行った。このときの反応液の酸価は45.2であった。反応液の分析を実施例1と同様に行った結果、反応率は57.1重量%、DG濃度は65.8重量%と低く、高濃度にDGを製造できなかった。
【0028】
比較例2
実施例1で得られた洗浄済みの固定化酵素20g(乾燥重量8g)を200mL容の四つ口フラスコに秤量した。そこへPUFA含有脂肪酸(DHA含有率44重量%)とグリセリン80g(モル比で脂肪酸/グリセリン=2.66)を添加し、40℃、減圧下で、反応液の酸価を経時的に測定しながら、エステル化反応を18時間行った。このときの反応液の酸価は30.6であった。反応液の分析を実施例1と同様に行った結果、反応率は77.2重量%、DG濃度は66.2重量%と低く、高濃度にDGを製造できなかった。
【0029】
【表1】
【0030】
【発明の効果】
本発明の製造方法によれば、高濃度のPUFA含有ジグリセリドが効率良く得られる。
Claims (3)
- 高度不飽和脂肪酸又はその低級アルキルエステルとグリセリンとを、反応モル比R〔R=脂肪酸又はその低級アルキルエステル( mol )/グリセリン( mol )〕が 1.5 〜 2.6 となる範囲で固定化部分グリセリドリパーゼの存在下に、30℃以上50℃未満の反応温度で、反応生成水を反応系外に除去しながら反応させ、ジグリセリド純度〔ジグリセリド/(ジグリセリド+トリグリセリド)× 100 〕が 80 重量%以上であるジグリセリドを、 60 重量%以上の反応率(反応液中のジグリセリドとトリグリセリドの合計重量百分率)で得る高度不飽和脂肪酸含有ジグリセリドの製造方法。
- 部分グリセリドリパーゼが、至適温度を30℃以上50℃未満に有するものである請求項1記載の高度不飽和脂肪酸含有ジグリセリドの製造方法。
- 固定化部分グリセリドリパーゼが、脂溶性脂肪酸又はその誘導体で前処理された固定化担体に部分グリセリドリパーゼを固定化したものである請求項1又は2記載の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2002380214A JP3929890B2 (ja) | 2002-12-27 | 2002-12-27 | ジグリセリドの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2002380214A JP3929890B2 (ja) | 2002-12-27 | 2002-12-27 | ジグリセリドの製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2004208539A JP2004208539A (ja) | 2004-07-29 |
JP3929890B2 true JP3929890B2 (ja) | 2007-06-13 |
Family
ID=32816508
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002380214A Expired - Fee Related JP3929890B2 (ja) | 2002-12-27 | 2002-12-27 | ジグリセリドの製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3929890B2 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7092460B2 (ja) * | 2016-11-25 | 2022-06-28 | 花王株式会社 | 構造油脂の製造方法 |
CA3102464C (en) | 2018-06-05 | 2023-09-05 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for the production of diglycerides |
CN112266940A (zh) * | 2020-11-07 | 2021-01-26 | 润科生物工程(福建)有限公司 | 一种高dha单、双甘酯含量油脂的生产工艺 |
WO2022211017A1 (ja) * | 2021-04-01 | 2022-10-06 | 花王株式会社 | 油脂組成物 |
BR102022016424A2 (pt) * | 2022-08-18 | 2024-02-27 | Brasil Bio Fuels S.A | Processo de produção de aditivo renovável para uso em diesel maritimo contendo glicerideos parciais e produto assim obtido |
-
2002
- 2002-12-27 JP JP2002380214A patent/JP3929890B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2004208539A (ja) | 2004-07-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP1466002B1 (en) | Process for the production of diglycerides | |
JP2749587B2 (ja) | 固定化酵素の製造方法 | |
JP6715586B2 (ja) | 高度不飽和脂肪酸の製造方法 | |
JP5242230B2 (ja) | 固定化酵素の製造方法 | |
JP3929890B2 (ja) | ジグリセリドの製造方法 | |
JP3813585B2 (ja) | ジグリセリドの製造方法 | |
JP5586855B2 (ja) | モノアシルグリセロール高含有油脂の製造方法 | |
JP3813584B2 (ja) | ジグリセリドの製造方法 | |
JP3893107B2 (ja) | 脂肪酸の製造方法 | |
JP6645804B2 (ja) | 構造油脂の製造方法 | |
JP4220957B2 (ja) | 固定化酵素の製造方法 | |
JP2012034622A (ja) | ジアシルグリセロール高含有油脂の製造方法 | |
JP4012117B2 (ja) | 固定化酵素の製造方法 | |
JP2021073951A (ja) | ジアシルグリセロール高含有油脂の製造方法 | |
JP3893106B2 (ja) | ジグリセリドの製造方法 | |
JP5527983B2 (ja) | ドコサヘキサエン酸高含有油脂の製造方法 | |
JP7092460B2 (ja) | 構造油脂の製造方法 | |
JP2019054738A (ja) | 脂肪酸類の製造方法 | |
JP3847729B2 (ja) | ドコサヘキサエン酸高含有油脂の製法 | |
JP6990019B2 (ja) | 脂肪酸類の製造方法 | |
JP3720205B2 (ja) | 部分グリセライドの製造方法 | |
JPH04258291A (ja) | 固定化酵素およびその製造方法 | |
JP4616755B2 (ja) | 固定化酵素の製造方法 | |
JP4971018B2 (ja) | 分岐脂肪酸を有するジアシルグリセロール含有油脂の製造方法 | |
JPH01153091A (ja) | 脂質分解酵素および該酵素を用いたエステル合成、交換反応方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060627 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060828 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20061128 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070129 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20070306 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20070307 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100316 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110316 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110316 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120316 Year of fee payment: 5 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120316 Year of fee payment: 5 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130316 Year of fee payment: 6 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130316 Year of fee payment: 6 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140316 Year of fee payment: 7 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |