JP3847729B2 - ドコサヘキサエン酸高含有油脂の製法 - Google Patents
ドコサヘキサエン酸高含有油脂の製法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP3847729B2 JP3847729B2 JP2003138073A JP2003138073A JP3847729B2 JP 3847729 B2 JP3847729 B2 JP 3847729B2 JP 2003138073 A JP2003138073 A JP 2003138073A JP 2003138073 A JP2003138073 A JP 2003138073A JP 3847729 B2 JP3847729 B2 JP 3847729B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- dha
- oil
- enzyme
- fat
- producing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N all-cis-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 title claims description 114
- 235000020669 docosahexaenoic acid Nutrition 0.000 title claims description 59
- 229940090949 docosahexaenoic acid Drugs 0.000 title claims description 57
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 18
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 69
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 claims description 48
- 239000003925 fat Substances 0.000 claims description 38
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 claims description 38
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 29
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 29
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 claims description 27
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 25
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 25
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 25
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 22
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 claims description 17
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 17
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 13
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 10
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 10
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 10
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 9
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 3
- DVSZKTAMJJTWFG-SKCDLICFSA-N (2e,4e,6e,8e,10e,12e)-docosa-2,4,6,8,10,12-hexaenoic acid Chemical compound CCCCCCCCC\C=C\C=C\C=C\C=C\C=C\C=C\C(O)=O DVSZKTAMJJTWFG-SKCDLICFSA-N 0.000 claims description 2
- GZJLLYHBALOKEX-UHFFFAOYSA-N 6-Ketone, O18-Me-Ussuriedine Natural products CC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O GZJLLYHBALOKEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KAUVQQXNCKESLC-UHFFFAOYSA-N docosahexaenoic acid (DHA) Natural products COC(=O)C(C)NOCC1=CC=CC=C1 KAUVQQXNCKESLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 61
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 9
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 9
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 7
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- -1 and the like Chemical compound 0.000 description 4
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 4
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XDOFQFKRPWOURC-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecanoic acid Chemical compound CC(C)CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O XDOFQFKRPWOURC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000222175 Diutina rugosa Species 0.000 description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000269851 Sarda sarda Species 0.000 description 2
- 241001125048 Sardina Species 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 description 2
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 2
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005135 eicosapentaenoic acid Drugs 0.000 description 2
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001568 phenolic resin Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- WBHHMMIMDMUBKC-XLNAKTSKSA-N ricinelaidic acid Chemical compound CCCCCC[C@@H](O)C\C=C\CCCCCCCC(O)=O WBHHMMIMDMUBKC-XLNAKTSKSA-N 0.000 description 2
- 229960003656 ricinoleic acid Drugs 0.000 description 2
- FEUQNCSVHBHROZ-UHFFFAOYSA-N ricinoleic acid Natural products CCCCCCC(O[Si](C)(C)C)CC=CCCCCCCCC(=O)OC FEUQNCSVHBHROZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019512 sardine Nutrition 0.000 description 2
- 239000010698 whale oil Substances 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical class OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXGFMDJXCMQABM-UHFFFAOYSA-N 2-methoxy-6-methylphenol Chemical compound [CH]OC1=CC=CC([CH])=C1O KXGFMDJXCMQABM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 229940008309 acetone / ethanol Drugs 0.000 description 1
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003965 capillary gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 229940013317 fish oils Drugs 0.000 description 1
- SLGWESQGEUXWJQ-UHFFFAOYSA-N formaldehyde;phenol Chemical compound O=C.OC1=CC=CC=C1 SLGWESQGEUXWJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 229960002969 oleic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 150000003445 sucroses Chemical class 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000012610 weak anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 239000002349 well water Substances 0.000 description 1
- 235000020681 well water Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Fats And Perfumes (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の属する技術分野】
本発明は、固定化酵素を使用したドコサヘキサエン酸(DHA)高含有油脂の製法に関し、更に詳細には、一般的にDHAを濃縮するために行われる前処理工程(ウィンタリング等)を必要とすることなく、高いDHA含有率の油脂を製造する方法に関する。
【0002】
【従来の技術】
近年、PUFA(高度不飽和脂肪酸)の生理活性が注目され、特にDHAは、血小板凝集抑制作用、血中中性脂肪低下作用、血中コレステロール低下作用、制癌作用、脳機能向上効果等を有することが知られている。このため、PUFA含有油脂のPUFA濃縮法が精力的に研究開発されている。PUFAは熱的安定性に乏しいため、非加熱処理による濃縮法が主に開発されており、代表的処理方法として酵素法がある。特に、リパーゼの脂肪酸選択性を利用してPUFAを濃縮する方法として、加水分解法、エステル交換法、エステル化法が多数報告されている。
【0003】
キャンディダ(Candida)属由来のリパーゼを利用して魚油を加水分解し、DHA、EPA(エイコサペンタエン酸)等の高度不飽和脂肪酸をグリセライド中に濃縮する方法は、この分野の草分け的な技術として挙げられる(特許文献1参照)。しかし、この文献には、高価な酵素の回収再利用についての記述はない。
【0004】
酵素の回収再利用を行う方法として、固定化酵素の利用が考えられ、セライト担体に固定化したキャンディダ属由来のリパーゼ利用による加水分解法でのDHA濃縮油脂の製造方法が報告されている(特許文献2参照)。しかし、この固定化酵素の調製法のように、真空乾燥を行ってリパーゼを固定化した場合、酵素が失活し十分な活性を発現しないことがあり、安定的な製造を行うことが難しいという問題がある。
【0005】
一方、酵素の特性により(活性の高さとは無関係に)油脂のDHA濃縮率は一定であるため、魚油等の原料油を直接酵素分解した場合、その酵素の活性を如何に高めようとも、1段の加水分解でDHA含有率を十分に高めることは難しい。そこで、DHA高含有油脂を製造する際には、酵素による分解の前に、原料油にウィンタリング等の物理的処理を施し、あらかじめDHA含有量を高めたうえで酵素分解に付しているのが現状である。しかし、このウィンタリングを行うことにより、収率の低下を招き、また極低温冷凍機等の高価な設備が必要となり、その結果、製造コスト増につながっているのが現状である。
【0006】
【特許文献1】
特開昭58-165796号公報
【特許文献1】
特開平3-19693号公報
【0007】
【発明が解決しようとする課題】
したがって、本発明は、原料油脂の前処理(ウィンタリング等)を必要とすることなく、安価にDHA高含有油脂を製造する方法を提供することを目的とする。
【0008】
【課題を解決する手段】
本発明者は、酵素分解を利用してDHA高含有油脂を製造する際に、酵素固定化後に乾燥することなく、油脂類と接触させることによって過剰水を除去した固定化酵素を用いたところ、驚くべきことに、従来の非固定化酵素では到達し得なかった分解率が得られることを見出した。そして、これにより、ウィンタリング等の前処理を必要とすることなく、DHAを高濃度に含む油脂を製造することに成功した。
【0009】
すなわち本発明は、DHAを構成脂肪酸の一部とする油脂(以下、「DHA含有油脂」という)に酵素を作用させ加水分解してDHA高含有油脂を製造するに際し、当該酵素として、油脂分解用酵素を固定化用担体に吸着させた後、乾燥せずに、脂肪酸トリグリセライド又は脂肪酸部分グリセライドに接触させることにより生起する加水分解反応で残存水分を消費させて酵素水分量を低減した固定化酵素を使用するDHA高含有油脂の製法を提供するものである。
【0010】
【発明の実施の形態】
本発明で使用する固定化用担体は、陰イオン交換樹脂、特に多孔質弱アニオン交換樹脂が好ましい。このような多孔質担体は、大きな表面積を有するため、酵素のより大きな吸着量を得ることができる。樹脂の粒子径は200〜1000μmが好ましく、細孔径は10〜150nmが好ましい。材質としては、フェノールホルムアルデヒド系、ポリスチレン系、アクリルアミド系、ジビニルベンゼン系等が挙げられ、特にフェノールホルムアルデヒド系樹脂(例えば、Rohm and Haas社製Duolite A-568)が好ましい。
【0011】
本発明で使用する油脂分解用酵素としては、リパーゼが好ましく、特にキャンディダ属の起源のものが好ましい。また用いる酵素量は、担体重量に対して5〜200%、特に10〜100%が望ましい。固定化の際、リパーゼは溶液状態にするが、緩衝液でpH5〜7に調整して使用することが望ましい。また、固定化時の温度は0〜60℃、特に5〜40℃が好ましい。
【0012】
酵素の固定化後、乾燥せずに、脂肪酸トリグリセライド又は脂肪酸部分グリセライドと接触させる。なお、ここでいう「乾燥せずに」とは、「減圧、真空又は加熱による乾燥に付することなく」という意味である。固定化酵素と接触させる脂肪酸トリグリセライド及び脂肪酸部分グリセライドとしては、菜種油、大豆油、ひまわり油等の植物性の液状油脂、イワシ油、マグロ油、カツオ油等の魚油、鯨油等の海獣油、これらから誘導されるモノグリセライド及びジグリセライド、更にはこれらの混合物、またこれらの油脂から得られるエステル交換油脂等も使用できる。これらは、2種以上併用してもよい。使用される脂肪酸グリセライドの量は、固定化酵素との接触を十分なものとし、かつ過剰量の使用による無駄を回避する観点から、担体重量に対して100〜3000%、特に250〜2000%が好ましい。接触方法は、浸漬、攪拌、固定化酵素を充填したカラムにポンプ等で通液する等いずれの方法でもよい。接触温度は5〜40℃、接触時間は2〜48時間が好ましい。この接触が終わったところで濾過し、固定化酵素を回収する。このような処理により、脂肪酸グリセライドの加水分解が起こるため固定化酵素中の残存水分が消費され、酵素水分量を低減させることができる。これにより酵素の構造を維持しうる水分を保持したまま、過剰水分を除去し、酵素近傍が反応に適した状態になるものと考えられる。上記処理は、濾過・回収後の固定化酵素の水分量は、担体重量に対して20〜100%、特に40〜70%の範囲となるように行うのが好ましい。
【0013】
また、固定化酵素の活性を高めるために、酵素の固定化前にあらかじめ脂溶性脂肪酸又はその誘導体を担体に吸着させる処理を施してもよい。使用する脂溶性脂肪酸としては、炭素数8〜18の飽和又は不飽和の、直鎖又は分岐鎖の、水酸基が置換していてもよい脂肪酸が挙げられる。具体的には、カプリン酸、ラウリン酸、ミスチリン酸、オレイン酸、リノール酸、α-リノレン酸、リシノール酸、イソステアリン酸等が挙げられる。またその誘導体としては、これらの脂肪酸と一価又は多価アルコールとのエステル、リン脂質、及びこれらのエステルにエチレンオキサイドを付加した誘導体が挙げられる。具体的には、上記脂肪酸のメチルエステル、エチルエステル、モノグリセライド、ジグリセライド、それらのエチレンオキサイド付加体、ポリグリセリンエステル、ソルビタンエステル、ショ糖エステル等が挙げられる。これらの脂溶性脂肪酸又はその誘導体は、2種以上を併用してもよい。
【0014】
これらの脂溶性脂肪酸又はその誘導体と担体の接触法としては、水又は有機溶剤中にこれらを直接加えてもよいが、分散性を良くするため、有機溶剤に脂溶性脂肪酸又はその誘導体を一旦分散、溶解させた後、水に分散させた担体に加えてもよい。この有機溶剤としては、クロロホルム、ヘキサン、エタノール等が挙げられる。脂溶性脂肪酸又はその誘導体の使用量は、担体重量に対して1〜100%、特に5〜50%が好ましい。接触温度は0〜100℃、特に20〜60℃が好ましく、接触時間は5分〜5時間程度が好ましい。この処理を終えた担体は、乾燥してもよい。乾燥温度は室温〜100℃が好ましく、減圧乾燥を行ってもよい。
【0015】
本発明においては、DHA含有油脂に前記固定化酵素を作用させて加水分解することにより、DHA高含有油脂を製造する。反応の具体的態様としては、DHA含有油脂に固定化酵素を添加し、更に水を添加して、一定温度で攪拌しながら加水分解反応を行う方法、固定化酵素をカラム(固定床)に充填し、そこへDHA含有油脂と水の混合液を通液循環させる方法等がある。
【0016】
酵素分解に使用するDHA含有油脂としては、DHAを構成脂肪酸の一部に含んだトリグリセライド、ジグリセライド、モノグリセライド及びこれらの混合物のいずれでもよい。一般的にはイワシ油、マグロ油、カツオ油等の魚油、鯨油等の海獣油が挙げられる。また市販されているDHA含有油脂を用いてもよい。
【0017】
反応に用いる固定化酵素量は、固定化酵素の活性を考慮して適宜決定することができるが、分解する油脂重量に対して1〜30%、特に5〜15%が好ましい。また水の量は、分解する油脂重量に対して、10〜200%、特に20〜100%が好ましい。水は、蒸留水、イオン交換水、水道水、井戸水等いずれのものでも構わない。必要に応じて、酵素の安定性が維持できるようにpH5〜7の緩衝液を用いてもよい。
【0018】
反応温度は、固定化酵素が失活せず、分解により生じた遊離脂肪酸が結晶とならない温度である20〜60℃、特に30〜45℃が好ましい。また反応は、空気との接触が出来るだけ回避されるように、不活性ガス存在下で行うことが望ましい。
【0019】
加水分解反応は、以下の式(1)で示される分解率によって管理し、所定の分解率に到達した時点で終了すればよい。分解率の上昇と共に、反応油中のジグリセライド、トリグリセライド中に蓄積されるDHAの含有率が増大する。
【0020】
式(1): 分解率(%)=反応油の酸価(AV)/原料油のケン化価(SV)×100
【0021】
なお、前記固定化酵素を使用した場合、固定化していない当該油脂分解用酵素を使用した場合では不可能であった高い分解率まで加水分解を行うことが可能であり、この非固定化酵素による到達分解率を超える分解率まで加水分解反応を行うのが好ましい。具体的には、分解率が60%以上となるまで、更には65%以上、特に70%以上となるまで加水分解を行うのが好ましい。
【0022】
以上の分解反応で得られた反応油は、遊離脂肪酸、モノグリセライド、ジグリセライド及びトリグリセライドを含んでいる。これらの混合物から遊離脂肪酸とモノグリセライドを除去することで、DHA高含有油脂を製造することができる。
【0023】
前記固定化酵素は、減圧、真空又は加熱による乾燥を経る通常の調製法により得られた固定化酵素と異なり、酵素の失活を招くこともなく、高い活性を有するものである。しかし、油脂の到達分解率の高さは、酵素活性の高さとは無関係であり、酵素を高活性化することで油脂分解速度は高まるが、到達分解率はほとんど変わらないものとされていた。また、上記通常の調製法で得られた固定化酵素では、固定化していない酵素よりDHA含有油脂の分解率を高めることもできない。これに対し本発明では、減圧、真空又は加熱による乾燥を経ることなく、グリセライドの接触で水分量を低減させた固定化酵素を使用することによって、DHA含有油脂の分解率を驚異的に高めることができるのである。これにより、魚油自体のようにDHA含有率が低い油脂を原料にした場合であっても、あらかじめウィンタリング等によってある程度DHA含有率を高めるといった、従来事実上の必須工程とされていた前処理を行わなくても、直接加水分解に付することで、反応油中のジグリセライド及びトリグリセライド中に蓄積されるDHAの含有率を、従来不可能であった程度まで高めることができる。
【0024】
【実施例】
以下の実施例及び比較例において、グリセライド組成の分析は、液体クロマトグラフィー〔GPCカラム;KF-801、KF-802(Shodex製),キャリア溶媒;THF〕を使用して行った。またDHA含有率は、サンプルをメチルエステル化し、キャピラリーガスクロマトグラフィー〔カラム;CP-Sil88(CHROMPACK製)〕で分析した。
【0025】
固定化酵素製造例1
Duolite A-568(Rohm and Hass社製)100gをN/10のNaOH溶液1L中で1時間攪拌した。濾過後、1Lの蒸留水で洗浄し、500mMの酢酸緩衝液(pH5)1LでpHを平衡化した。その後50mMの酢酸緩衝液(pH5)1Lで2時間ずつ2回平衡化を行った。濾過して担体を回収した後、エタノール500mLで置換を30分行った。濾過後、リシノール酸を100g含むエタノール溶液500mLと担体を30分間接触させた。濾過後、50mMの酢酸緩衝液(pH5)500mLで0.5時間ずつ4回緩衝液置換を行った。濾過後、10%濃度のCandida rugosa由来のリパーゼAYアマノ30G(天野エンザイム社製)溶液1000mLと室温で4時間接触させ、酵素の吸着を行った。吸着後、濾過を行い、50mMのリン酸緩衝液(pH7)500mLで0.5時間洗浄した。洗浄後濾過によって固定化酵素を回収した。この時の固定化酵素の残存水分量は、吸着担体重量に対して168%であった。
この固定化酵素に400gの菜種油を添加し、40℃、2時間攪拌した後、濾過して固定化酵素を回収した。固定化酵素の残存水分量は吸着担体重量に対して30%であった。
【0026】
固定化酵素製造例2
固定化酵素製造例1と同様にして得られた、菜種油に接触する前の固定化酵素(残存水分量168%対吸着担体重量)を、そのまま減圧乾燥した。この固定化酵素の残存水分量は、吸着担体重量に対して14%以下であった。
【0027】
実施例1
固定化酵素製造例1で得られた固定化酵素を、マグロ精製油(日本水産社製DDオイルタイプ3G;SV=180.4,DHA含有率22%)で洗浄した。
洗浄した固定化酵素10g(乾燥重量;乾燥することなく使用するが、乾燥した場合の重量をいう。この乾燥は、固定化酵素に対しアセトンによる洗浄・濾過、ヘキサンによる洗浄・濾過を3回繰り返した後、室温下ドラフトにて溶剤を揮発乾燥させることにより行う。以下同じ。)に対して、マグロ精製油を100g添加し、さらに蒸留水を60g添加した。窒素気流下で蒸発水を還流させながら反応温度40℃で攪拌し、反応を行った。
反応開始78時間後、式(1)で計算した分解率が73%に到達したところで、固定化酵素と反応液を遠心分離(6000rpm×30min)し、油層を得た。得られた油層を分子蒸留し、留分と主留(DHA高含有グリセライド)に分離した。留分は遊離脂肪酸とモノグリセライドを含み、主留はジグリセライドとトリグリセライドを含んでいた。原料油、反応終了油、留分及び主留のグリセライド組成及びDHA含有率を表1に示す。
【0028】
実施例2
実施例1において、DDオイルタイプ3Gに代え、ウィンタリング後精製したマグロ精製油(日本水産社製DHA-27;SV=182.4,DHA含有率27%)を用いる以外は同様にして、固定化酵素の洗浄及び加水分解を行った。
反応開始94時間後、式(1)で計算した分解率が71%に到達したところで、固定化酵素と反応液を遠心分離(6000rpm×30min)し、油層を得た。得られた油層のグリセライド組成を分析すると共に、TLCプレート展開(展開溶液;クロロホルム/アセトン/エタノール=95/4.5/0.5vol%)し、各画分を掻き取り、酢酸エチルで溶離し、脱溶剤したサンプルの脂肪酸組成を分析した。原料油、反応終了油及びジグリセライド、トリグリセライド画分中のグリセライド組成及びDHA含有率を表1に示す。
【0029】
実施例3
実施例1において、DDオイルタイプ3Gに代え、DHA含有油脂をウィンタリング後酵素分解し精製したDHA精製油(日本水産社製DHA-45;SV=182.4,DHA含有率45%)を用いる以外は同様にして、固定化酵素の洗浄及び加水分解を行った。
反応開始343時間後、分解率が65%に到達したところで、実施例2と同様にして遠心分離、TLCプレート展開して、グリセライド組成及びDHA含有率を分析した結果を表1に示す。
【0030】
比較例1
マグロ精製油(DDオイルタイプ3G)100gにCandida rugosa由来のリパーゼAYアマノ30Gを5g仕込み、蒸留水60gを添加し、窒素気流下で蒸発水を還流させながら40℃で攪拌し、反応を行った。
反応開始78時間後、式(1)で計算した分解率が59%になった。その後、24時間反応を継続したが、分解率の上昇はほとんどなかった。この反応液を遠心分離(6000rpm×30min)し、得られた油層を分子蒸留し、実施例1と同様にして、グリセライド組成及びDHA含有率を分析した結果を表1に示す。
【0031】
比較例2
比較例1において、原料油としてDHA-27を用いる以外は同様にして加水分解を行った。
反応開始94時間後、式(1)で計算した分解率が55%になった。その後、24時間反応を継続したが、分解率の上昇はほとんどなかった。この反応液を実施例2と同様にして遠心分離、TLCプレート展開して、グリセライド組成及びDHA含有率を分析した結果を表1に示す。
【0032】
比較例3
比較例1において、原料油としてDHA-45を用いる以外は同様にして加水分解を行った。
反応開始343時間後、式(1)で計算した分解率が56%になった。その後、24時間反応を継続したが、分解率の上昇はほとんどなかった。この反応液を実施例2と同様にして遠心分離、TLCプレート展開して、グリセライド組成及びDHA含有率を分析した結果を表1に示す。
【0033】
比較例4
固定化酵素製造例2で得られた固定化酵素10gに対して、DHA-45を100g添加し、さらに蒸留水を60g添加した。窒素気流下で蒸発水を還流させながら反応温度40℃で攪拌し、反応を行った。
反応開始343時間後、式(1)で計算した分解率が26%になった。この反応液を実施例2と同様にして遠心分離、TLCプレート展開して、グリセライド組成及びDHA含有率を分析した結果を表1に示す。
【0034】
【表1】
【0035】
表1より、DHA含有率の低い原料を用いても、従来にない高い分解率が達成でき、その結果、未分解グリセライドにDHAが高含有率で濃縮できることが示された。
【0036】
【発明の効果】
本発明によれば、従来にない高い分解率でDHA含有油脂の加水分解を行うことが可能となり、そのためウィンタリングを必要とすることなく、DHA高含有油脂を製造することができる。これにより、ウィンタリング時の収率の低下が回避でき、また極低温用冷凍機等の高価な設備が不要になり、製造コストを下げることができる。また、ウィンタリング等であらかじめDHA含有率を高めた原料油を使用した場合にも、従来にない高濃度のDHA高含有油脂が1段の加水分解で製造することができる。
Claims (5)
- ドコサヘキサエン酸(DHA)を構成脂肪酸の一部とする油脂に酵素を作用させ加水分解してDHA高含有油脂を製造するに際し、当該酵素として、油脂分解用酵素を固定化用担体に吸着させた後、乾燥せずに、脂肪酸トリグリセライド又は脂肪酸部分グリセライドに接触させることにより生起する加水分解反応で残存水分を消費させて酵素水分量を低減した固定化酵素を使用するDHA高含有油脂の製法。
- 請求項1記載の固定化酵素を使用し、固定化していない当該油脂分解用酵素を使用した場合における到達分解率を超える分解率まで加水分解反応を行うDHA高含有油脂の製法。
- 固定化用担体が、あらかじめ脂溶性脂肪酸又はその誘導体を吸着させたものである請求項1又は2記載のDHA高含有油脂の製法。
- 油脂分解酵素が、リパーゼである請求項1〜3のいずれかに記載のDHA高含有油脂の製法。
- リパーゼが、キャンディダ(Candida)属由来のものである請求項4記載のDHA高含有油脂の製法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2003138073A JP3847729B2 (ja) | 2002-05-23 | 2003-05-16 | ドコサヘキサエン酸高含有油脂の製法 |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2002148998 | 2002-05-23 | ||
JP2003138073A JP3847729B2 (ja) | 2002-05-23 | 2003-05-16 | ドコサヘキサエン酸高含有油脂の製法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2004041188A JP2004041188A (ja) | 2004-02-12 |
JP3847729B2 true JP3847729B2 (ja) | 2006-11-22 |
Family
ID=31719677
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2003138073A Expired - Fee Related JP3847729B2 (ja) | 2002-05-23 | 2003-05-16 | ドコサヘキサエン酸高含有油脂の製法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3847729B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100684642B1 (ko) * | 2006-09-14 | 2007-02-22 | 주식회사 일신웰스 | 어유 유래 글리세라이드 유지 조성물 및 이의 제조방법 |
JP6990076B2 (ja) * | 2017-09-20 | 2022-02-03 | 花王株式会社 | 脂肪酸類の製造方法 |
-
2003
- 2003-05-16 JP JP2003138073A patent/JP3847729B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2004041188A (ja) | 2004-02-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2009040854A (ja) | ジアシルグリセロール高含有油脂の製造方法 | |
US7906305B2 (en) | Process for preparing an immobilized enzyme | |
EP1008647A2 (en) | A process for preparing an immobilized enzyme | |
KR100944071B1 (ko) | 디글리세라이드의 제조방법 | |
JP4694939B2 (ja) | 脂肪酸類の製造方法 | |
JP5242230B2 (ja) | 固定化酵素の製造方法 | |
JP6715586B2 (ja) | 高度不飽和脂肪酸の製造方法 | |
JP3847729B2 (ja) | ドコサヘキサエン酸高含有油脂の製法 | |
JP3893107B2 (ja) | 脂肪酸の製造方法 | |
JP6645804B2 (ja) | 構造油脂の製造方法 | |
JP4012117B2 (ja) | 固定化酵素の製造方法 | |
JP3929890B2 (ja) | ジグリセリドの製造方法 | |
JP4220957B2 (ja) | 固定化酵素の製造方法 | |
KR101297957B1 (ko) | 고정화 리파아제를 사용하는 효소가수분해법 공정 및고온고압가수분해법 공정을 포함하는 유지로부터의지방산류 제조를 위한 2-단계 과정 | |
JP3813585B2 (ja) | ジグリセリドの製造方法 | |
JP5527983B2 (ja) | ドコサヘキサエン酸高含有油脂の製造方法 | |
JP4694938B2 (ja) | 脂肪酸類の製造方法 | |
JP3813584B2 (ja) | ジグリセリドの製造方法 | |
JP2012034622A (ja) | ジアシルグリセロール高含有油脂の製造方法 | |
JP2019094445A (ja) | アマニ油の製造方法 | |
JP2008253196A (ja) | 脂肪酸類の製造方法 | |
JP2019054738A (ja) | 脂肪酸類の製造方法 | |
JP7092460B2 (ja) | 構造油脂の製造方法 | |
JP3037349B2 (ja) | 酵素固定化用担体及び固定化酵素の製造方法 | |
JP4616755B2 (ja) | 固定化酵素の製造方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20040513 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060530 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20060822 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20060823 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090901 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100901 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110901 Year of fee payment: 5 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120901 Year of fee payment: 6 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130901 Year of fee payment: 7 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |