JP3793714B2 - 抗アレルギー剤 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗アレルギー作用及び抗炎症作用に優れた抗アレルギー剤及び抗炎症剤に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
従来、抗アレルギー剤及び抗炎症剤としては、グルココルチコイド型の副腎皮質ホルモン剤や、インドメサシン、イブプロフェン等の非ステロイド性抗炎症剤等が用いられている。
しかしながら、ステロイドホルモン剤は抗アレルギー作用及び抗炎症作用を有するものの副作用が強いという問題があり、また、インドメサシン、イブプロフェン等は抗炎症作用のみ有するため抗アレルギー剤としては有用でなかった。
【０００３】
従って、副作用が少なく、優れた抗アレルギー作用及び抗炎症作用を有する経口投与可能な薬剤が望まれていた。
【０００４】
一方、延胡索は鎮痛、鎮痙作用を有することが知られており、古くから漢方胃腸薬などに配合して使用されている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
かかる実情において、本発明者らは、鋭意研究を行った結果、延胡索の成分であるｄ−コリダリン及び／又はデヒドロコリダリンを用いれば、副作用が少なく、抗アレルギー作用と抗炎症作用に優れた経口投与可能な抗アレルギー剤及び抗炎症剤が得られることを見出し、本発明を完成した。
【０００６】
すなわち、本発明は、ｄ−コリダリン及び／又はデヒドロコリダリンからなる抗アレルギー剤を提供するものである。
【０００７】
本発明のｄ−コリダリン及びデヒドロコリダリンは、延胡索の極性溶媒抽出物より得ることができる。
本発明で用いられる延胡索（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｔｕｒｔｓｃｈａｎｉｎｏｖｉｉ ｆｏｒｍａ ｙａｎｈｕｓｕｏ）は、中国東部に自生する多年草であり、この塊茎等を使用することができる。
これらの延胡索から有効成分を抽出するための極性溶媒としては、例えばメタノール、エタノール等のアルコール、水、エーテル、クロロホルムなどが挙げられ、これらの１種又は２種以上を組合わせて用い、通常の方法により単回又は複数回抽出することにより、抽出物を得ることができる。
【０００８】
このようにして得られる延胡索の極性溶媒抽出物としては、例えば以下のものが挙げられる。
（１）延胡索のアルコール抽出物
（２）アルコール抽出物の水抽出物
（３）（２）のエーテル抽出物（この抽出物には３級アルカロイド画分が含まれている）
（４）（３）の水抽出物（この抽出物には３級フェノール性アルカロイド画分が含まれている）
（５）（３）から（４）を抽出した後の抽出物（この抽出物には３級非フェノール性アルカロイド画分が含まれている）
（６）（２）のクロロホルム抽出物（この抽出物には４級アルカロイド画分が含まれている）
【０００９】
また、（４）〜（６）のアルカロイド画分から、更にアルカロイド成分を単離することができ、これらの成分を単独又は組合わせて使用することもできる。
例えば（４）の抽出物を、クロロホルム、エタノール及びエーテルを用いて再結晶を行うことにより、ｌ−テトラヒドロコルンバミンを単離することができる。また、（５）の抽出物からは、カラムクロマトグラフィー及び再結晶法を組合わせて行うことにより、ｄ−コリダリン、ｄ−グラウシン、プロトピン、ｌ−テトラヒドロコプチシン及びｄｌ−テトラヒドロパルマチンをそれぞれ単離することができる。更に、（６）の抽出物からは、カラムクロマトグラフィー及びメタノール再結晶により、デヒドロコリダリンを単離することができる。
【００１０】
このようにして得られる本発明のｄ−コリダリン及びデヒドロコリダリンは、後記実施例に示すように優れた抗アレルギー作用及び抗炎症作用を有し、しかも安全性も高いため、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹皮膚炎、じん麻疹、急性又は慢性結膜炎、気管支喘息、慢性関節リウマチ等の治療剤として有用である。
なお、安全性については、延胡索抽出物について、モルモットを用いた能動的全身性アナフィラキシー（ＡＳＡ）、感作モルモット分離血清によるモルモットを用いた受身皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）により抗原性の有無を検討した結果、延胡索エキスには抗原性はないことが確認された。
【００１１】
かかる延胡索抽出物は、そのままあるいは種々の投与形態で投与することができる。本発明の抗アレルギー剤及び抗炎症剤の投与形態については特に制限はなく、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液剤等の経口剤や、注射剤、外用剤、坐剤、吸入剤、点鼻剤、点眼剤等の非経口剤のいずれによっても投与することができる。
【００１２】
経口用固形担体の例としては、デンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩等が挙げられ、必要により、更に、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を使用することができる。より具体的には、結合剤としてのデンプン、デキストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等；崩壊剤としてのデンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース等；界面活性剤としてのラウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポリソルベート８０等；滑沢剤としてのタルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコール等；流動性促進剤としての軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム等が使用できる。
【００１３】
また経口用の液剤としては、懸濁液、エマルション剤、シロップ剤、エリキシル剤等の剤型を挙げることができ、これらの各種剤型には、矯味剤、矯香剤、着色剤を配合することもできる。
【００１４】
更に、非経口用液剤担体としては、注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴマ油、落花生油、大豆油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等が用いられ、更に必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤、等張化剤、無痛化剤等を加えることもできる。
【００１５】
本発明において、有効成分の投与量は、投与経路、その他の要因によって左右されるが、一日当り約０．１〜１mg／kgであるのが好ましい。また、これらの一日量は所望により２〜３回に分割して投与することもできる。
【００１６】
【発明の効果】
本発明の抗アレルギー剤及び抗炎症剤は、副作用が少なく、しかも抗アレルギー作用及び抗炎症作用に優れたものである。
【００１７】
【実施例】
次に、実施例を挙げて本発明を更に説明する。
【００１８】
実施例１ 延胡索の抗炎症作用：
（１）延胡索のメタノール抽出物の調製
中国産延胡索（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｔｕｒｔｓｃｈａｎｉｎｏｖｉｉ ｆｏｒｍａ ｙａｎｈｕｓｕｏ；日本粉末薬品社製）の塊茎を細切した後、１０倍量のメタノールで２時間、２回抽出し、熱時濾過した。減圧下でメタノールを留去した後、メタノール抽出エキスを得た。得られた延胡索メタノール抽出エキス（以下、ＣＴ−ｅｘｔと略記）の収率は２．９５％であった。
なお、以下の実施例においては、得られたＣＴ−ｅｘｔを必要に応じて適当な濃度に溶解したものを使用した。
【００１９】
（２）カラゲニン浮腫に及ぼす影響
Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットに１％λ−カラゲニン生理食塩水溶液０．１ml／ラットを右後肢足蹠皮下に注射し、発生する浮腫を１５、３０、４５分、２、３時間後に測定し、浮腫率を算出した。被検体（０．５％ カルボキシメチルセルロースナトリウム（以下、ＣＭＣ・Ｎａと略記）に懸濁）はカラゲニン生理食塩水溶液注射１時間前に１回経口投与した（表１）。
【００２０】
【表１】

【００２１】
表１の結果から明らかなように、ＣＴ−ｅｘｔ５００mg／kg投与群には初期の浮腫形成に対して抑制傾向を示し、カラゲニン投与２、３時間後の浮腫を有意に抑制する作用が認められた。
【００２２】
（３）コンパウンド４８／８０浮腫に及ぼす影響
Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットに０．０１％コンパウンド４８／８０生理食塩水溶液０．１ml／ラットを右後肢足蹠皮下に注射し、発生する浮腫を１５、３０分後に測定し、浮腫率を算出した。被検体（０．５％ＣＭＣ・Ｎａに懸濁）はコンパウンド４８／８０投与１時間前に１回経口投与した（表２）。
【００２３】
【表２】

【００２４】
表２の結果から明らかなように、コンパウンド４８／８０をラットの右後肢足蹠に皮下注射すると、１５、３０分後に著しい浮腫が観察されたが、ＣＴ−ｅｘｔ投与群にはコンパウンド４８／８０誘発急性浮腫を有意に抑制する作用が認められた。
【００２５】
（４）毛細血管透過性に及ぼす影響
ｄｄＹ系雄性マウスに被検体（０．５％ＣＭＣ・Ｎａに懸濁）を経口投与１時間後に４％ポンタミンスカイブルー生理食塩水溶液１０ml／kgを静脈内注射し、１５分後に１％酢酸生理食塩水溶液１０ml／kgを腹腔内注射した。更に、２０分後にマウスを断頭致死させ、腹腔内に滲出した色素を生理食塩水で洗い集め、全量１０mlとした後、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液０．１mlを添加し、５９０nmで吸光度を測定した（表３）。
【００２６】
【表３】

【００２７】
表３の結果から明らかなように、ＣＴ−ｅｘｔ投与群には酢酸誘発毛細血管透過性亢進を有意に抑制する作用が認められた。
【００２８】
（５）ヒスタミンによるモルモット摘出回腸収縮に及ぼす影響
マグヌス法に準じて、２４時間絶食したＨａｒｔｌｅｙ系雄性モルモットを打撲放血後、摘出した回腸約１．５cmをマグヌス装置のｏｒｇａｎ ｂａｔｈ内に懸垂した。ｏｒｇａｎ ｂａｔｈ内にはＴｙｒｏｄｅ液（ＮａＣｌ ８ｇ、ＫＣｌ ０．２ｇ、ＣａＣｌ₂ ０．２ｇ、ＭｇＣｌ₂ ０．１ｇを水１ｌに溶解後、ＮａＨ₂ＰＯ₄ ０．０５ｇ、ＮａＨＣＯ₃ １ｇ、グルコース１ｇを加え溶解したもの）を満たし、温度を３７±１℃に保って絶えず空気を通じた。ヒスタミン１０^-9−１０^-4mmol／mlにより、標本が濃度依存的な収縮高を示した。その後、被検体としてＣＴ−ｅｘｔ処置２分後にヒスタミンを注入し、それらの濃度−作用曲線を求めた。なお、検定間の標本の休憩時間を１０分とした（図１）。
【００２９】
図１の結果から明らかなように、ヒスタミン１０^-9−１０^-4mmol／mlには濃度依存的に収縮率を増大させる作用が認められ、その回腸収縮作用はＣＴ−ｅｘｔの前処置によってヒスタミンの収縮作用に対して拮抗的に作用した。
【００３０】
（６）アジュバント関節炎に及ぼす影響
（ｉ）アジュバント関節炎の誘導及び被検体の投与法：
乾燥結核死菌体（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ，Ｄｉｆｃｏ社製）をメノウ乳鉢で摩砕した後、鉱物油（Ｂａｙｏｌ Ｆ）を加えて１％の懸濁液を調製した。これをオートクレーブにて滅菌し、アジュバントとして使用した。このアジュバント０．０５mlをＳＤ系雌性ラットの右後肢足蹠及び尾根から約３cm離れた尾部に皮内注射してアジュバント関節炎を誘導した。被検体（０．５％ＣＭＣ・Ｎａに懸濁）はアジュバント注射直後から１日１回連日２１日間経口投与した。なお、体重は経日的に測定した。
（ii）関節炎症状の観察：
関節炎症状は右後肢足容積を経日的に２１日間測定して算定した浮腫率から求めた（表４）。
【００３１】
【表４】

【００３２】
表４に示したように、アジュバントを注射すると、右後肢は１日後から著しい浮腫が認められ、その浮腫は５日後に最大になり、９日後まで若干消腫したが、１１日後から再び浮腫が増大した。アジュバント注射直後から被検体を１日１回連日経口投与すると、ＣＴ−ｅｘｔ５００mg／kgは右後肢の浮腫に対して抑制傾向を示し、アジュバント注射３、５、９、１３、１５日後の右後肢浮腫を有意に抑制した。なお、５００mg／kgのＣＴ−ｅｘｔを２１日間投与してもアジュバント関節炎を誘発したラットの体重変動には影響を及ぼさなかった。
【００３３】
実施例２ 延胡索抽出物の抗アレルギー作用：
（１）ヒスタミン遊離に及ぼす影響
（ｉ）感作ラット腹腔肥満細胞浮遊液の調製：
Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットに２倍希釈した抗卵白アルブミン（以下、ＥＷＡと略記）ラット血清０．５mlを腹腔内投与して感作した。２４時間後に断頭瀉血後、Ｕｖｎａｓ＆Ｔｈｏｎの方法（Ｂ．Ｕｖｎａｓ ａｎｄ Ｉ．Ｌ．Ｔｈｏｎ，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．，１８，５１２（１９５９））に従って肥満細胞浮遊液を調製した。すなわち、断頭瀉血後ただちにハンクス液（１０μｇ／mlのヘパリン含有）１０mlを腹腔内に注入し、約９０秒間腹部を静かにマッサージ後、腹腔内液を採取し、４０％フィコール溶液２mlに静かに重層し、室温で３０分間放置後、５℃、１，２００rpm、１０分間遠心分離を行い、フィコール層上の肥満細胞を集めた。この肥満細胞はリン酸緩衝液（以下、ＰＢＳと略記）（pH７．０）に浮遊させ、遠心分離による洗浄を３回繰り返し、再びＰＢＳに浮遊（肥満細胞数２．９×１０⁶個／ml）させた。この浮遊液中の肥満細胞含有率は８５−９０％で、生残率はトルイジンブルー（０．１％、５０％エタノール溶液）染色法で９０％以上であることを確認した。
【００３４】
（ii）ヒスタミン遊離反応試験：
（ｉ）で得られた肥満細胞浮遊液１．８mlを３７℃、１０分間プレインキュベートした後、被検液（１０％ジメチルスルホキシド（以下、ＤＭＳＯと略記）／ＰＢＳに溶解）を０．１ml添加し、１０分間インキュベートし、更にＥＷＡとホスファチジル−Ｌ−セリンを混合したもの（最終濃度：ＥＷＡ２mg／ml、ホスファチジル−Ｌ−セリン１００μｇ／ml）０．１mlを加えて１５分間インキュベートした。氷冷により反応を停止し、５℃、１，２００rpm、５分間遠心分離を行い、上清中のヒスタミン量を測定した。すなわち、上清０．７mlに水１．４ml、１Ｎ−ＮａＯＨ ０．４ml、１％ ｏ−フタルジアルデヒド／メタノール溶液０．１mlを加えて４分間放置後、３Ｎ−ＨＣｌ溶液０．２mlにより反応を停止させた。反応終了１０分後に５℃、３，０００rpm、５分間遠心分離し、上清及び沈渣を得た。上清の蛍光は励起波長３６０nm、蛍光波長４５０nmで測定（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ ６５０−１０Ｓ）し、既知濃度のヒスタミン検量線から上清中のヒスタミン量を求めた。また、肥満細胞に残存するヒスタミン量は沈渣にＰＢＳ２mlを加えて超音波処理、更に凍結融解法で肥満細胞からヒスタミンを遊離させ、上記と同様の方法で測定し、ヒスタミン遊離率を求めた（表５）。
【００３５】
【表５】

【００３６】
表５の結果から明らかなように、ＣＴ−ｅｘｔは抗原抗体反応による肥満細胞からのヒスタミン遊離を有意に抑制した。
【００３７】
（２）塩化ピクリル誘発接触性皮膚炎（以下、ＰＣ−ＣＤと略記）に及ぼす影響
（ａ）ＰＣ−ＣＤ（炎症過程）に及ぼす影響
前日剪毛したＩＣＲ系雌性マウス（体重３０−３２ｇ）の腹部に７％塩化ピクリルエタノール溶液０．１mlを塗布して感作した。その６日後に１％塩化ピクリル−オリーブ油溶液０．０２mlを片耳に塗布して接触性皮膚炎を誘発した。被検体は感作日２日前から７日間経口投与した。誘発２４時間後の耳の厚さをｄｉａｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｇａｕｇｅ（Ｏｚａｋｉ ＭＦＧ．Ｃｏ．Ｌｔｄ．）で測定し、腫脹率を求めた（表６）。
【００３８】
【表６】

【００３９】
表６から明らかなように、ＣＴ−ｅｘｔ投与群には、ＰＣ−ＣＤにより誘発された腫脹の有意な抑制が認められた。
【００４０】
（ｂ）ＰＣ−ＣＤ（誘発腫張の成立過程）に及ぼす影響
（ａ）の方法で１回感作、誘発した２４時間後に充分な腫脹が得られたマウスを選別し、３日後から再度感作、誘発を繰り返し、誘発前及び誘発２４時間後の耳の厚さをｄｉａｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｇａｕｇｅ（Ｏｚａｋｉ ＭＦＧ．Ｃｏ．Ｌｔｄ．）で測定し、腫脹率を求めた。被験体は誘発直前及び誘発１６時間後の２回経口投与した（表７）。
【００４１】
【表７】

【００４２】
表７から明らかなように、ＣＴ−ｅｘｔ投与群には、ＰＣ−ＣＤにより誘発された腫脹の有意な抑制が認められた。
【００４３】
（ｃ）ＰＣ−ＣＤに対する治療作用
誘発２４時間後に被検体を１回経口投与し、投与２時間後から２時間間隔で５回腫脹率を測定した。ＰＣ−ＣＤを惹起させ、その腫脹が最大となる２４時間後に被検体を１回経口投与した（表８）。
【００４４】
【表８】

【００４５】
表８から明らかなように、ＣＴ−ｅｘｔ投与群には経口投与６から１０時間後においてＰＣ−ＣＤによる誘発腫脹を有意に消退させる作用が認められた。
【００４６】
（３）ラットの受け身皮膚アナフィラキシー（以下、ＰＣＡと略記）反応に及ぼす影響
（ｉ）抗ＥＷＡラット血清の調整：
１mgのＥＷＡを水酸化アルミニウムゲル２０mg及び百日咳ジフテリア破傷風混合ワクチン０．５mlと混合し、Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットの足蹠皮内に４分割して投与した。１４日後、頸動脈から採血して抗ＥＷＡ血清を得た。
（ii）ＰＣＡ反応試験：
Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットの背部を剪毛し、皮内に抗ＥＷＡ血清を８倍もしくは１６倍に希釈したものを０．０５ml／匹の割合で、それぞれ２点ずつ合計４点に注射した。４８時間後、ＥＷＡ２mgを含む１％エバンスブルー生理食塩水溶液０．５mlを尾静脈から注入し、３０分後に放血致死させ、８倍希釈の血清により生じた青斑の面積を測定した。更に、この青斑を切り出し、１Ｎ−ＫＯＨ溶液で溶解し、リン酸−アセトン混液で抽出し、その色素量を予め作製したエバンスブルーの検量線より求めた。被検体はＰＣＡ誘発１時間前に経口投与した（表９）。
【００４７】
【表９】

【００４８】
表９の結果から明らかなように、ＣＴ−ｅｘｔ投与群では有意なＰＣＡ反応抑制が認められた。
【００４９】
（４）ＩｇＥ抗体産生に及ぼす影響
（ｉ）ＩｇＥ抗体産生：
１mgＥＷＡと１．５mg水酸化アルミニウムゲルの混合液０．２mlをＢＡＬＢ／ｃ系雌性マウスに腹腔内投与した。免疫後７、１４日目に眼底静脈洞から採血し、常法により得た血清をＩｇＥ抗体価の測定に使用した。被検体は（０．５％ＣＭＣ・Ｎａに懸濁）免疫日から１日１回連日経口投与した。
（ii）ＩｇＥ抗体価の測定：
ラット４８時間ホモロガスＰＣＡ反応により測定した。すなわち、Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットの背部を剪毛し、皮内に各血清を生理食塩水で倍々希釈系で希釈したものを０．１mlずつ注射した。４８時間後、ＥＷＡ２mgを含む１％エバンスブルー生理食塩水溶液０．５mlを尾静脈から注入し、３０分後に放血致死させ、背部の皮を剥ぎ、血清により生じた直径５mm以上の青斑をプラスとして判定し、ＩｇＥ抗体価とした（表１０）。
【００５０】
【表１０】

【００５１】
表１０の結果のように、ＣＴ−ｅｘｔ５００mg／kg投与群においては、抗原感作１週間後及び２週間後で有意なＩｇＥ抗体産生抑制が認められた。また、ＣＴ−ｅｘｔ５０、２００mg／kgの各投与群においては、１週間後でのみ有意な抑制が認められた。
【００５２】
実施例３
（１）延胡索のアルカロイド画分の調製
中国産延胡索（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｔｕｒｔｓｃｈａｎｉｎｏｖｉｉ ｆｏｒｍａ ｙａｎｈｕｓｕｏ）の塊茎５kgを細切後、１０倍量の１００％メタノールにて２時間、２回還流抽出し、熱時濾過した。減圧下でメタノールを留去後、メタノール抽出エキス（収率：２．９５％）を得た。得られたエキスを１０％酢酸溶液４，０００mlとエーテル６００mlに溶解後、分液ロートに移し、振盪して脱脂した（エーテル層）。１０％酢酸層は濾過し（不溶解物を除去）、氷冷下にて濾液にアンモニアガスを飽和し、液性をpH８．６から９．０（pH試験紙にて）に調整した。析出する沈澱を考慮せずにエーテル１，０００mlにて２０回振盪抽出した。このエーテル抽出液（３級アルカロイド画分）を１／５に濃縮し、１０％水酸化ナトリウム溶液１，０００mlにて１０回振盪抽出した。エーテル層は炭酸カルシウムで乾燥し、濾過後、減圧下で溶媒を留去して３級フェノール性アルカロイド画分（収率：０．１６２％）を得た。１０％水酸化ナトリウム層は塩化アンモニウムで飽和し、濾過後、エーテルにて抽出した。この抽出液を炭酸カルシウムで乾燥後、濾過し、減圧下で溶媒を留去して３級非フェノール性アルカロイド画分（収率：０．０１９６％）を得た。また、３級アルカロイドを除去した水層は塩酸にて液性をpH６．６から７．０（pH試験紙にて）とした後、クロロホルム１，０００mlにて２０回振盪抽出し、硫酸ナトリウムにて脱水後、減圧下にてクロロホルムを留去し、４級アルカロイド画分（収率：０．１５４％）を得た。
【００５３】
（２）３級非フェノール性アルカロイド画分からのアルカイド成分の単離
３級非フェノール性アルカロイド画分（以下、ＣＴ−１と略記）を塩基性アルミナ（２３０−４００メッシュ ＡＳＴＭ、ＭＥＲＣＫ社製）を用いたカラムクロマトグラフィーに付し、エーテル、エーテル／クロロホルム（５：１）及びクロロホルムで展開溶出し、薄層クロマトグラフィー〔薄層プレート；シリカゲル６０Ｆ₂₅₄ （ＭＥＲＣＫ社製）、展開溶媒；シクロヘキサン：酢酸エチル：ジエチルアミン＝８０：１５：５又はクロロホルム、発色試液；ドラーゲンドルフ試液〕をモニターとして、ｌ−テトラヒドロコプチシン含有画分、ｄ−コリダリン含有画分、ｄ−コリダリン、ｄｌ−テトラヒドロパルマチン及びプロトピン含有画分、ｄｌ−テトラヒドロパルマチン含有画分、ｌ−グラウシン含有画分を得た。ｌ−テトラヒドロコプチシン、ｄ−コリダリンはそれらが主に含まれる画分からクロロホルム、エタノール、エーテルを用いて再結晶法により得た。ｄ−コリダリン、ｄｌ−テトラヒドロパルマチン及びプロトピン含有画分はシリカゲル（２３０−４００メッシュ ＡＳＴＭ、ＭＥＲＣＫ社製）を用いたカラムクロマトグラフィーに付し、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１：１）、（１：３）、（１：５）で順次展開溶出し、上記の薄層クロマトグラフィーをモニターとして、各画分からクロロホルム、エタノール、エーテルを用いて再結晶法により、ｄ−コリダリン、ｄｌ−テトラヒドロパルマチン、プロトピンを得た。また、ｄ−グラウシン含有画分はシリカゲル（２３０−４００メッシュ ＡＳＴＭ、ＭＥＲＣＫ社製）を用いたカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム、５％クロロホルム／メタノール、１０％クロロホルム／メタノールで順次溶出し、エタノール、ｎ−ヘキサンを用いて再結晶法により、ｄ−グラウシンを得た。また、それぞれの母液をシリカゲルクロマトグラフィー及び再結晶法を繰り返し、上記のアルカロイド成分を単離した。なお、それぞれの成分の収率はｄ−コリダリンが０．０５１１％、ｄ−グラウシンが０．０２４３％、プロトピンが０．０１０４％、ｌ−テトラヒドロコプチシンが０．００６４８％、ｄｌ−テトラヒドロパルマチンが０．０１６２％であった。
【００５４】
（３）３級フェノール性アルカロイド画分からのアルカイド成分の単離
３級フェノール性アルカロイド画分（以下、ＣＴ−２と略記）をクロロホルム、エタノール、エーテルを用いて再結晶法によりｌ−テトラヒドロコルンバミンを単離した。その収率は０．０１００％であった。
【００５５】
（４）４級アルカロイド画分からのアルカロイド成分の単離
４級アルカロイド画分（以下、ＣＴ−３と略記）をシリカゲル（２３０−４００メッシュＡＳＴＭ、ＭＥＲＣＫ社製）を用いたカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルムで展開溶出し、上記の薄層クロマトグラフィーをモニターとして、デヒドロコリダリン含有画分を得た。この画分からメタノールを用いて再結晶法によりデヒドロコリダリンを得た。収率は０．０５３１％であった。
【００５６】
（５）各画分のヒスタミン遊離に及ぼす影響
（１）〜（４）で得られたＣＴ−１、ＣＴ−２、ＣＴ−３画分、及び各アルカロイド成分について、実施例２（１）と同様にしてラット腹腔肥満細胞浮遊液を調製し、ヒスタミン遊離剤としてコンパウンド４８／８０（最終濃度１０μｇ／ml）を用い、実施例２（１）と同様にしてヒスタミン遊離反応試験を行った。（表１１、表１２）。
【００５７】
【表１１】

【００５８】
【表１２】

【００５９】
表１１の結果より、ＣＴ−１及びＣＴ−３画分にヒスタミン遊離抑制作用が認められた。また表１２の結果より、デヒドロコリダリンに最も強いヒスタミン遊離抑制が認められ、次いでｄ−コリダリン、ｄ−グラウシン、ｌ−テトラヒドロコプチシン、プロトピンにも抑制が認められた。
【００６０】
実施例４ 点眼剤：
ＣＴ−ｅｘｔの０．５％水溶液を調製し、充血眼（赤眼）、カユミの症状を有する健常成人男子５０名に、１日数回（２〜３滴／回）点眼した。
点眼開始７日後に判定したところ、充血眼に対しては５０名中４２名（８４％）に有効であり、カユミに対しては５０名中４５名（９０％）に有効であった。また、副作用は認められなかった。
【００６１】
実施例５ 点眼液：
下記の（１）原液３０mlと（２）原液０．３mlを混合し、これに最終濃度が０．５％になるようにＣＴ−ｅｘｔを添加した。pHが６．８になるよう（１）原液、（２）原液で調整し、得られた液を遠心し（１０，０００rpm，４℃，１０分）、上清を取り、０．２２μmのフィルターで濾過した。濾液を滅菌した容器に入れ、点眼液を得た。
（表１３）
緩衝液
（１）酸性原液
ほう酸 １２．４ｇ
塩化カリウム ７．４ｇ
滅菌精製水 全量１０００．０ml
（２）アルカリ原液
炭酸ナトリウム ２１．２ｇ
滅菌精製水 全量１０００．０ml
【００６２】
実施例６ 点眼液：
（表１４）
ＣＴ−ｅｘｔ ０．５ｇ
濃グリセリン １．５ｇ
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 １．０ｇ
塩化ベンザルコニウム ０．００５ｇ
エデト酸ナトリウム ０．０１ｇ
希塩酸 適量
水酸化ナトリウム 適量
滅菌精製水 全量１００ml
【００６３】
実施例７ 点眼液：
（表１５）
ＣＴ−ｅｘｔ １．０ｇ
濃グリセリン １．２５ｇ
ポリソルベート８０ ２．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．０２６ｇ
パラオキシ安息香酸プロピル ０．０１４ｇ
希塩酸 適量
水酸化ナトリウム 適量
滅菌精製水 全量１００ml
【００６４】
実施例８ 眼軟膏：
（表１６）
ＣＴ−ｅｘｔ １．０ｇ
流動パラフィン １０ｇ
白色ワセリン ８９ｇ
【００６５】
実施例９ 眼軟膏：
（表１７）
ＣＴ−ｅｘｔ ２．０ｇ
流動パラフィン １０ｇ
白色ワセリン ８８ｇ
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１（５）における、ヒスタミンによるモルモット摘出回腸収縮に及ぼす影響を示す図である。

Claims (1)

1. ｄ−コリダリン及び／又はデヒドロコリダリンからなる抗アレルギー剤。

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