JP3295165B2 - 抗アレルギー剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗アレルギー作用に優
れた抗アレルギー剤に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】従来、
抗アレルギー剤及び抗炎症剤としては、グルココルチコ
イド型の副腎皮質ホルモン剤や、インドメサシン、イブ
プロフェン等の非ステロイド性抗炎症剤等が用いられて
いる。しかしながら、ステロイドホルモン剤は抗アレル
ギー作用及び抗炎症作用を有するものの副作用が強いと
いう問題があり、また、インドメサシン、イブプロフェ
ン等は抗炎症作用のみ有するため抗アレルギー剤として
は有用でなかった。

【０００３】従って、副作用が少なく、優れた抗アレル
ギー作用及び抗炎症作用を有する経口投与可能な薬剤が
望まれていた。

【０００４】一方、延胡索は鎮痛、鎮痙作用を有するこ
とが知られており、古くから漢方胃腸薬などに配合して
使用されている。

【０００５】

【課題を解決するための手段】かかる実情において、本
発明者らは、鋭意研究を行った結果、延胡索の極性溶媒
抽出物を用いれば、副作用が少なく、抗アレルギー作用
に優れた経口投与可能な抗アレルギー剤が得られること
を見出し、本発明を完成した。

【０００６】すなわち、本発明は、延胡索の４級アルカ
ロイド画分を含有する抗アレルギー剤を提供するもので
ある。

【０００７】本発明で用いられる延胡索（Ｃｏｒｙｄａ
ｌｉｓ ｔｕｒｔｓｃｈａｎｉｎｏｖｉｉ ｆｏｒｍａ
ｙａｎｈｕｓｕｏ）は、中国東部に自生する多年草で
あり、この塊茎等を使用することができる。これらの延
胡索から有効成分を抽出するための極性溶媒としては、
例えばメタノール、エタノール等のアルコール、水、エ
ーテル、クロロホルムなどが挙げられ、これらの１種又
は２種以上を組合わせて用い、通常の方法により単回又
は複数回抽出することにより、抽出物を得ることができ
る。

【０００８】このようにして得られる延胡索の極性溶媒
抽出物としては、例えば以下のものが挙げられる。 （１）延胡索のアルコール抽出物 （２）アルコール抽出物の水抽出物 （３）（２）のエーテル抽出物（この抽出物には３級ア
ルカロイド画分が含まれている） （４）（３）の水抽出物（この抽出物には３級フェノー
ル性アルカロイド画分が含まれている） （５）（３）から（４）を抽出した後の抽出物（この抽
出物には３級非フェノール性アルカロイド画分が含まれ
ている） （６）（２）のクロロホルム抽出物（この抽出物には４
級アルカロイド画分が含まれている）

【０００９】また、（４）〜（６）のアルカロイド画分
から、更にアルカロイド成分を単離することができ、こ
れらの成分を単独又は組合わせて使用することもでき
る。例えば（４）の抽出物を、クロロホルム、エタノー
ル及びエーテルを用いて再結晶を行うことにより、ｌ−
テトラヒドロコルンバミンを単離することができる。ま
た、（５）の抽出物からは、カラムクロマトグラフィー
及び再結晶法を組合わせて行うことにより、ｄ−コリダ
リン、ｄ−グラウシン、プロトピン、ｌ−テトラヒドロ
コプチシン及びｄｌ−テトラヒドロパルマチンをそれぞ
れ単離することができる。更に、（６）の抽出物から
は、カラムクロマトグラフィー及びメタノール再結晶に
より、デヒドロコリダリンを単離することができる。

【００１０】このようにして得られる延胡索の抽出物
は、後記実施例に示すように優れた抗アレルギー作用及
び抗炎症作用を有し、しかも安全性も高いため、アレル
ギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹皮膚炎、じん麻
疹、急性又は慢性結膜炎、気管支喘息、慢性関節リウマ
チ等の治療剤として有用である。なお、安全性について
は、延胡索抽出物について、モルモットを用いた能動的
全身性アナフィラキシー（ＡＳＡ）、感作モルモット分
離血清によるモルモットを用いた受身皮膚アナフィラキ
シー（ＰＣＡ）により抗原性の有無を検討した結果、延
胡索エキスには抗原性はないことが確認された。

【００１１】かかる延胡索抽出物は、そのままあるいは
種々の投与形態で投与することができる。本発明の抗ア
レルギー剤の投与形態については特に制限はなく、錠
剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液剤等の経口
剤や、注射剤、外用剤、坐剤、吸入剤、点鼻剤、点眼剤
等の非経口剤のいずれによっても投与することができ
る。

【００１２】経口用固形担体の例としては、デンプン、
乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロー
ス、コーンスターチ、無機塩等が挙げられ、必要によ
り、更に、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動
性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を使用することがで
きる。より具体的には、結合剤としてのデンプン、デキ
ストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロ
ピルスターチ、メチルセルロース、カルボキシメチルセ
ルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、
結晶セルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリ
ドン、マクロゴール等；崩壊剤としてのデンプン、ヒド
ロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロース
ナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、
カルボキシメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピ
ルセルロース等；界面活性剤としてのラウリル硫酸ナト
リウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポリソ
ルベート８０等；滑沢剤としてのタルク、ロウ類、水素
添加植物油、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸アル
ミニウム、ポリエチレングリコール等；流動性促進剤と
しての軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、
合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム等が使用
できる。

【００１３】また経口用の液剤としては、懸濁液、エマ
ルション剤、シロップ剤、エリキシル剤等の剤型を挙げ
ることができ、これらの各種剤型には、矯味剤、矯香
剤、着色剤を配合することもできる。

【００１４】更に、非経口用液剤担体としては、注射用
蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、
ゴマ油、落花生油、大豆油、トウモロコシ油、プロピレ
ングリコール、ポリエチレングリコール等が用いられ、
更に必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤、等張化
剤、無痛化剤等を加えることもできる。

【００１５】本発明において、有効成分の投与量は抽出
物等の性状、投与経路、その他の要因によって左右され
るが、延胡索のアルコール抽出物の場合は、一日当り約
１〜１０mg／kg；アルカロイド画分の場合、一日当り約
０．２〜２mg／kg；アルカロイド成分の場合、一日当り
約０．１〜１mg／kgであるのが好ましい。また、これら
の一日量は所望により２〜３回に分割して投与すること
もできる。

【００１６】

【発明の効果】本発明の抗アレルギー剤は、副作用が少
なく、しかも抗アレルギー作用に優れたものである。

【００１７】

【実施例】次に、実施例を挙げて本発明を更に説明す
る。

【００１８】実施例１ 延胡索の抗炎症作用： （１）延胡索のメタノール抽出物の調製 中国産延胡索（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｔｕｒｔｓｃｈａ
ｎｉｎｏｖｉｉ ｆｏｒｍａ ｙａｎｈｕｓｕｏ；日本
粉末薬品社製）の塊茎を細切した後、１０倍量のメタノ
ールで２時間、２回抽出し、熱時濾過した。減圧下でメ
タノールを留去した後、メタノール抽出エキスを得た。
得られた延胡索メタノール抽出エキス（以下、ＣＴ−ｅ
ｘｔと略記）の収率は２．９５％であった。なお、以下
の実施例においては、得られたＣＴ−ｅｘｔを必要に応
じて適当な濃度に溶解したものを使用した。

【００１９】（２）カラゲニン浮腫に及ぼす影響 Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットに１％λ−カラゲニン生理食
塩水溶液０．１ml／ラットを右後肢足蹠皮下に注射し、
発生する浮腫を１５、３０、４５分、２、３時間後に測
定し、浮腫率を算出した。被検体（０．５％ カルボキ
シメチルセルロースナトリウム（以下、ＣＭＣ・Ｎａと
略記）に懸濁）はカラゲニン生理食塩水溶液注射１時間
前に１回経口投与した（表１）。

【００２０】

【表１】

【００２１】表１の結果から明らかなように、ＣＴ−ｅ
ｘｔ５００mg／kg投与群には初期の浮腫形成に対して抑
制傾向を示し、カラゲニン投与２、３時間後の浮腫を有
意に抑制する作用が認められた。

【００２２】（３）コンパウンド４８／８０浮腫に及ぼ
す影響 Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットに０．０１％コンパウンド４
８／８０生理食塩水溶液０．１ml／ラットを右後肢足蹠
皮下に注射し、発生する浮腫を１５、３０分後に測定
し、浮腫率を算出した。被検体（０．５％ＣＭＣ・Ｎａ
に懸濁）はコンパウンド４８／８０投与１時間前に１回
経口投与した（表２）。

【００２３】

【表２】

【００２４】表２の結果から明らかなように、コンパウ
ンド４８／８０をラットの右後肢足蹠に皮下注射する
と、１５、３０分後に著しい浮腫が観察されたが、ＣＴ
−ｅｘｔ投与群にはコンパウンド４８／８０誘発急性浮
腫を有意に抑制する作用が認められた。

【００２５】（４）毛細血管透過性に及ぼす影響 ｄｄＹ系雄性マウスに被検体（０．５％ＣＭＣ・Ｎａに
懸濁）を経口投与１時間後に４％ポンタミンスカイブル
ー生理食塩水溶液１０ml／kgを静脈内注射し、１５分後
に１％酢酸生理食塩水溶液１０ml／kgを腹腔内注射し
た。更に、２０分後にマウスを断頭致死させ、腹腔内に
滲出した色素を生理食塩水で洗い集め、全量１０mlとし
た後、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液０．１mlを添加し、５
９０nmで吸光度を測定した（表３）。

【００２６】

【表３】

【００２７】表３の結果から明らかなように、ＣＴ−ｅ
ｘｔ投与群には酢酸誘発毛細血管透過性亢進を有意に抑
制する作用が認められた。

【００２８】（５）ヒスタミンによるモルモット摘出回
腸収縮に及ぼす影響 マグヌス法に準じて、２４時間絶食したＨａｒｔｌｅｙ
系雄性モルモットを打撲放血後、摘出した回腸約１．５
cmをマグヌス装置のｏｒｇａｎ ｂａｔｈ内に懸垂し
た。ｏｒｇａｎ ｂａｔｈ内にはＴｙｒｏｄｅ液（Ｎａ
Ｃｌ ８ｇ、ＫＣｌ ０．２ｇ、ＣａＣｌ₂ ０．２
ｇ、ＭｇＣｌ₂ ０．１ｇを水１ｌに溶解後、ＮａＨ₂Ｐ
Ｏ₄ ０．０５ｇ、ＮａＨＣＯ₃ １ｇ、グルコース１ｇ
を加え溶解したもの）を満たし、温度を３７±１℃に保
って絶えず空気を通じた。ヒスタミン１０^-9−１０^-4mm
ol／mlにより、標本が濃度依存的な収縮高を示した。そ
の後、被検体としてＣＴ−ｅｘｔ処置２分後にヒスタミ
ンを注入し、それらの濃度−作用曲線を求めた。なお、
検定間の標本の休憩時間を１０分とした（図１）。

【００２９】図１の結果から明らかなように、ヒスタミ
ン１０^-9−１０^-4mmol／mlには濃度依存的に収縮率を増
大させる作用が認められ、その回腸収縮作用はＣＴ−ｅ
ｘｔの前処置によってヒスタミンの収縮作用に対して拮
抗的に作用した。

【００３０】（６）アジュバント関節炎に及ぼす影響 （ｉ）アジュバント関節炎の誘導及び被検体の投与法：
乾燥結核死菌体（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｕｔ
ｙｒｉｃｕｍ，Ｄｉｆｃｏ社製）をメノウ乳鉢で摩砕し
た後、鉱物油（Ｂａｙｏｌ Ｆ）を加えて１％の懸濁液
を調製した。これをオートクレーブにて滅菌し、アジュ
バントとして使用した。このアジュバント０．０５mlを
ＳＤ系雌性ラットの右後肢足蹠及び尾根から約３cm離れ
た尾部に皮内注射してアジュバント関節炎を誘導した。
被検体（０．５％ＣＭＣ・Ｎａに懸濁）はアジュバント
注射直後から１日１回連日２１日間経口投与した。な
お、体重は経日的に測定した。 （ii）関節炎症状の観察：関節炎症状は右後肢足容積を
経日的に２１日間測定して算定した浮腫率から求めた
（表４）。

【００３１】

【表４】

【００３２】表４に示したように、アジュバントを注射
すると、右後肢は１日後から著しい浮腫が認められ、そ
の浮腫は５日後に最大になり、９日後まで若干消腫した
が、１１日後から再び浮腫が増大した。アジュバント注
射直後から被検体を１日１回連日経口投与すると、ＣＴ
−ｅｘｔ５００mg／kgは右後肢の浮腫に対して抑制傾向
を示し、アジュバント注射３、５、９、１３、１５日後
の右後肢浮腫を有意に抑制した。なお、５００mg／kgの
ＣＴ−ｅｘｔを２１日間投与してもアジュバント関節炎
を誘発したラットの体重変動には影響を及ぼさなかっ
た。

【００３３】実施例２ 延胡索抽出物の抗アレルギー作
用： （１）ヒスタミン遊離に及ぼす影響 （ｉ）感作ラット腹腔肥満細胞浮遊液の調製：Ｗｉｓｔ
ａｒ系雄性ラットに２倍希釈した抗卵白アルブミン（以
下、ＥＷＡと略記）ラット血清０．５mlを腹腔内投与し
て感作した。２４時間後に断頭瀉血後、Ｕｖｎａｓ＆Ｔ
ｈｏｎの方法（Ｂ．Ｕｖｎａｓ ａｎｄ Ｉ．Ｌ．Ｔｈ
ｏｎ，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．，１８，５１２（１
９５９））に従って肥満細胞浮遊液を調製した。すなわ
ち、断頭瀉血後ただちにハンクス液（１０μｇ／mlのヘ
パリン含有）１０mlを腹腔内に注入し、約９０秒間腹部
を静かにマッサージ後、腹腔内液を採取し、４０％フィ
コール溶液２mlに静かに重層し、室温で３０分間放置
後、５℃、１，２００rpm、１０分間遠心分離を行い、
フィコール層上の肥満細胞を集めた。この肥満細胞はリ
ン酸緩衝液（以下、ＰＢＳと略記）（pH７．０）に浮遊
させ、遠心分離による洗浄を３回繰り返し、再びＰＢＳ
に浮遊（肥満細胞数２．９×１０⁶個／ml）させた。こ
の浮遊液中の肥満細胞含有率は８５−９０％で、生残率
はトルイジンブルー（０．１％、５０％エタノール溶
液）染色法で９０％以上であることを確認した。

【００３４】（ii）ヒスタミン遊離反応試験：（ｉ）で
得られた肥満細胞浮遊液１．８mlを３７℃、１０分間プ
レインキュベートした後、被検液（１０％ジメチルスル
ホキシド（以下、ＤＭＳＯと略記）／ＰＢＳに溶解〕を
０．１ml添加し、１０分間インキュベートし、更にＥＷ
Ａとホスファチジル−Ｌ−セリンを混合したもの（最終
濃度：ＥＷＡ２mg／ml、ホスファチジル−Ｌ−セリン１
００μｇ／ml）０．１mlを加えて１５分間インキュベー
トした。氷冷により反応を停止し、５℃、１，２００rp
m、５分間遠心分離を行い、上清中のヒスタミン量を測
定した。すなわち、上清０．７mlに水１．４ml、１Ｎ−
ＮａＯＨ ０．４ml、１％ ｏ−フタルジアルデヒド／
メタノール溶液０．１mlを加えて４分間放置後、３Ｎ−
ＨＣｌ溶液０．２mlにより反応を停止させた。反応終了
１０分後に５℃、３，０００rpm、５分間遠心分離し、
上清及び沈渣を得た。上清の蛍光は励起波長３６０nm、
蛍光波長４５０nmで測定（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｆｌｕｏｒ
ｅｓｃｅｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ
６５０−１０Ｓ）し、既知濃度のヒスタミン検量線か
ら上清中のヒスタミン量を求めた。また、肥満細胞に残
存するヒスタミン量は沈渣にＰＢＳ２mlを加えて超音波
処理、更に凍結融解法で肥満細胞からヒスタミンを遊離
させ、上記と同様の方法で測定し、ヒスタミン遊離率を
求めた（表５）。

【００３５】

【表５】

【００３６】表５の結果から明らかなように、ＣＴ−ｅ
ｘｔは抗原抗体反応による肥満細胞からのヒスタミン遊
離を有意に抑制した。

【００３７】（２）塩化ピクリル誘発接触性皮膚炎（以
下、ＰＣ−ＣＤと略記）に及ぼす影響 （ａ）ＰＣ−ＣＤ（炎症過程）に及ぼす影響 前日剪毛したＩＣＲ系雌性マウス（体重３０−３２ｇ）
の腹部に７％塩化ピクリルエタノール溶液０．１mlを塗
布して感作した。その６日後に１％塩化ピクリル−オリ
ーブ油溶液０．０２mlを片耳に塗布して接触性皮膚炎を
誘発した。被検体は感作日２日前から７日間経口投与し
た。誘発２４時間後の耳の厚さをｄｉａｌ ｔｈｉｃｋ
ｎｅｓｓ ｇａｕｇｅ（Ｏｚａｋｉ ＭＦＧ．Ｃｏ．Ｌ
ｔｄ．）で測定し、腫脹率を求めた（表６）。

【００３８】

【表６】

【００３９】表６から明らかなように、ＣＴ−ｅｘｔ投
与群には、ＰＣ−ＣＤにより誘発された腫脹の有意な抑
制が認められた。

【００４０】（ｂ）ＰＣ−ＣＤ（誘発腫張の成立過程）
に及ぼす影響 （ａ）の方法で１回感作、誘発した２４時間後に充分な
腫脹が得られたマウスを選別し、３日後から再度感作、
誘発を繰り返し、誘発前及び誘発２４時間後の耳の厚さ
をｄｉａｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｇａｕｇｅ（Ｏｚａ
ｋｉ ＭＦＧ．Ｃｏ．Ｌｔｄ．）で測定し、腫脹率を求
めた。被験体は誘発直前及び誘発１６時間後の２回経口
投与した（表７）。

【００４１】

【表７】

【００４２】表７から明らかなように、ＣＴ−ｅｘｔ投
与群には、ＰＣ−ＣＤにより誘発された腫脹の有意な抑
制が認められた。

【００４３】（ｃ）ＰＣ−ＣＤに対する治療作用 誘発２４時間後に被検体を１回経口投与し、投与２時間
後から２時間間隔で５回腫脹率を測定した。ＰＣ−ＣＤ
を惹起させ、その腫脹が最大となる２４時間後に被検体
を１回経口投与した（表８）。

【００４４】

【表８】

【００４５】表８から明らかなように、ＣＴ−ｅｘｔ投
与群には経口投与６から１０時間後においてＰＣ−ＣＤ
による誘発腫脹を有意に消退させる作用が認められた。

【００４６】（３）ラットの受け身皮膚アナフィラキシ
ー（以下、ＰＣＡと略記）反応に及ぼす影響 （ｉ）抗ＥＷＡラット血清の調整：１mgのＥＷＡを水酸
化アルミニウムゲル２０mg及び百日咳ジフテリア破傷風
混合ワクチン０．５mlと混合し、Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラ
ットの足蹠皮内に４分割して投与した。１４日後、頸動
脈から採血して抗ＥＷＡ血清を得た。 （ii）ＰＣＡ反応試験：Ｗｉｓｔａｒ系雄性ラットの背
部を剪毛し、皮内に抗ＥＷＡ血清を８倍もしくは１６倍
に希釈したものを０．０５ml／匹の割合で、それぞれ２
点ずつ合計４点に注射した。４８時間後、ＥＷＡ２mgを
含む１％エバンスブルー生理食塩水溶液０．５mlを尾静
脈から注入し、３０分後に放血致死させ、８倍希釈の血
清により生じた青斑の面積を測定した。更に、この青斑
を切り出し、１Ｎ−ＫＯＨ溶液で溶解し、リン酸−アセ
トン混液で抽出し、その色素量を予め作製したエバンス
ブルーの検量線より求めた。被検体はＰＣＡ誘発１時間
前に経口投与した（表９）。

【００４７】

【表９】

【００４８】表９の結果から明らかなように、ＣＴ−ｅ
ｘｔ投与群では有意なＰＣＡ反応抑制が認められた。

【００４９】（４）ＩｇＥ抗体産生に及ぼす影響 （ｉ）ＩｇＥ抗体産生：１mgＥＷＡと１．５mg水酸化ア
ルミニウムゲルの混合液０．２mlをＢＡＬＢ／ｃ系雌性
マウスに腹腔内投与した。免疫後７、１４日目に眼底静
脈洞から採血し、常法により得た血清をＩｇＥ抗体価の
測定に使用した。被検体は（０．５％ＣＭＣ・Ｎａに懸
濁）免疫日から１日１回連日経口投与した。 （ii）ＩｇＥ抗体価の測定：ラット４８時間ホモロガス
ＰＣＡ反応により測定した。すなわち、Ｗｉｓｔａｒ系
雄性ラットの背部を剪毛し、皮内に各血清を生理食塩水
で倍々希釈系で希釈したものを０．１mlずつ注射した。
４８時間後、ＥＷＡ２mgを含む１％エバンスブルー生理
食塩水溶液０．５mlを尾静脈から注入し、３０分後に放
血致死させ、背部の皮を剥ぎ、血清により生じた直径５
mm以上の青斑をプラスとして判定し、ＩｇＥ抗体価とし
た（表１０）。

【００５０】

【表１０】

【００５１】表１０の結果のように、ＣＴ−ｅｘｔ５０
０mg／kg投与群においては、抗原感作１週間後及び２週
間後で有意なＩｇＥ抗体産生抑制が認められた。また、
ＣＴ−ｅｘｔ５０、２００mg／kgの各投与群において
は、１週間後でのみ有意な抑制が認められた。

【００５２】実施例３ （１）延胡索のアルカロイド画分の調製 中国産延胡索（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｔｕｒｔｓｃｈａ
ｎｉｎｏｖｉｉ ｆｏｒｍａ ｙａｎｈｕｓｕｏ）の塊
茎５kgを細切後、１０倍量の１００％メタノールにて２
時間、２回還流抽出し、熱時濾過した。減圧下でメタノ
ールを留去後、メタノール抽出エキス（収率：２．９５
％）を得た。得られたエキスを１０％酢酸溶液４，００
０mlとエーテル６００mlに溶解後、分液ロートに移し、
振盪して脱脂した（エーテル層）。１０％酢酸層は濾過
し（不溶解物を除去）、氷冷下にて濾液にアンモニアガ
スを飽和し、液性をpH８．６から９．０（pH試験紙に
て）に調整した。析出する沈澱を考慮せずにエーテル
１，０００mlにて２０回振盪抽出した。このエーテル抽
出液（３級アルカロイド画分）を１／５に濃縮し、１０
％水酸化ナトリウム溶液１，０００mlにて１０回振盪抽
出した。エーテル層は炭酸カルシウムで乾燥し、濾過
後、減圧下で溶媒を留去して３級フェノール性アルカロ
イド画分（収率：０．１６２％）を得た。１０％水酸化
ナトリウム層は塩化アンモニウムで飽和し、濾過後、エ
ーテルにて抽出した。この抽出液を炭酸カルシウムで乾
燥後、濾過し、減圧下で溶媒を留去して３級非フェノー
ル性アルカロイド画分（収率：０．０１９６％）を得
た。また、３級アルカロイドを除去した水層は塩酸にて
液性をpH６．６から７．０（pH試験紙にて）とした後、
クロロホルム１，０００mlにて２０回振盪抽出し、硫酸
ナトリウムにて脱水後、減圧下にてクロロホルムを留去
し、４級アルカロイド画分（収率：０．１５４％）を得
た。

【００５３】（２）３級非フェノール性アルカロイド画
分からのアルカイド成分の単離 ３級非フェノール性アルカロイド画分（以下、ＣＴ−１
と略記）を塩基性アルミナ（２３０−４００メッシュ
ＡＳＴＭ、ＭＥＲＣＫ社製）を用いたカラムクロマトグ
ラフィーに付し、エーテル、エーテル／クロロホルム
（５：１）及びクロロホルムで展開溶出し、薄層クロマ
トグラフィー〔薄層プレート；シリカゲル６０Ｆ
₂₅₄（ＭＥＲＣＫ社製）、展開溶媒；シクロヘキサン：
酢酸エチル：ジエチルアミン＝８０：１５：５又はクロ
ロホルム、発色試液；ドラーゲンドルフ試液〕をモニタ
ーとして、ｌ−テトラヒドロコプチシン含有画分、ｄ−
コリダリン含有画分、ｄ−コリダリン、ｄｌ−テトラヒ
ドロパルマチン及びプロトピン含有画分、ｄｌ−テトラ
ヒドロパルマチン含有画分、ｌ−グラウシン含有画分を
得た。ｌ−テトラヒドロコプチシン、ｄ−コリダリンは
それらが主に含まれる画分からクロロホルム、エタノー
ル、エーテルを用いて再結晶法により得た。ｄ−コリダ
リン、ｄｌ−テトラヒドロパルマチン及びプロトピン含
有画分はシリカゲル（２３０−４００メッシュ ＡＳＴ
Ｍ、ＭＥＲＣＫ社製）を用いたカラムクロマトグラフィ
ーに付し、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１：１）、
（１：３）、（１：５）で順次展開溶出し、上記の薄層
クロマトグラフィーをモニターとして、各画分からクロ
ロホルム、エタノール、エーテルを用いて再結晶法によ
り、ｄ−コリダリン、ｄｌ−テトラヒドロパルマチン、
プロトピンを得た。また、ｄ−グラウシン含有画分はシ
リカゲル（２３０−４００メッシュ ＡＳＴＭ、ＭＥＲ
ＣＫ社製）を用いたカラムクロマトグラフィーに付し、
クロロホルム、５％クロロホルム／メタノール、１０％
クロロホルム／メタノールで順次溶出し、エタノール、
ｎ−ヘキサンを用いて再結晶法により、ｄ−グラウシン
を得た。また、それぞれの母液をシリカゲルクロマトグ
ラフィー及び再結晶法を繰り返し、上記のアルカロイド
成分を単離した。なお、それぞれの成分の収率はｄ−コ
リダリンが０．０５１１％、ｄ−グラウシンが０．０２
４３％、プロトピンが０．０１０４％、ｌ−テトラヒド
ロコプチシンが０．００６４８％、ｄｌ−テトラヒドロ
パルマチンが０．０１６２％であった。

【００５４】（３）３級フェノール性アルカロイド画分
からのアルカイド成分の単離 ３級フェノール性アルカロイド画分（以下、ＣＴ−２と
略記）をクロロホルム、エタノール、エーテルを用いて
再結晶法によりｌ−テトラヒドロコルンバミンを単離し
た。その収率は０．０１００％であった。

【００５５】（４）４級アルカロイド画分からのアルカ
ロイド成分の単離 ４級アルカロイド画分（以下、ＣＴ−３と略記）をシリ
カゲル（２３０−４００メッシュＡＳＴＭ、ＭＥＲＣＫ
社製）を用いたカラムクロマトグラフィーに付し、クロ
ロホルムで展開溶出し、上記の薄層クロマトグラフィー
をモニターとして、デヒドロコリダリン含有画分を得
た。この画分からメタノールを用いて再結晶法によりデ
ヒドロコリダリンを得た。収率は０．０５３１％であっ
た。

【００５６】（５）各画分のヒスタミン遊離に及ぼす影
響 （１）〜（４）で得られたＣＴ−１、ＣＴ−２、ＣＴ−
３画分、及び各アルカロイド成分について、実施例２
（１）と同様にしてラット腹腔肥満細胞浮遊液を調製
し、ヒスタミン遊離剤としてコンパウンド４８／８０
（最終濃度１０μｇ／ml）を用い、実施例２（１）と同
様にしてヒスタミン遊離反応試験を行った。（表１１、
表１２）。

【００５７】

【表１１】

【００５８】

【表１２】

【００５９】表１１の結果より、ＣＴ−１及びＣＴ−３
画分にヒスタミン遊離抑制作用が認められた。また表１
２の結果より、デヒドロコリダリンに最も強いヒスタミ
ン遊離抑制が認められ、次いでｄ−コリダリン、ｄ−グ
ラウシン、ｌ−テトラヒドロコプチシン、プロトピンに
も抑制が認められた。

【００６０】実施例４ 点眼剤： ＣＴ−ｅｘｔの０．５％水溶液を調製し、充血眼（赤
眼）、カユミの症状を有する健常成人男子５０名に、１
日数回（２〜３滴／回）点眼した。点眼開始７日後に判
定したところ、充血眼に対しては５０名中４２名（８４
％）に有効であり、カユミに対しては５０名中４５名
（９０％）に有効であった。また、副作用は認められな
かった。

【００６１】実施例５ 点眼液： 下記の（１）原液３０mlと（２）原液０．３mlを混合
し、これに最終濃度が０．５％になるようにＣＴ−ｅｘ
ｔを添加した。pHが６．８になるよう（１）原液、
（２）原液で調整し、得られた液を遠心し（１０，００
０rpm ，４℃，１０分）、上清を取り、０．２２μm の
フィルターで濾過した。濾液を滅菌した容器に入れ、点
眼液を得た。

【表１３】 緩衝液 （１）酸性原液 ほう酸 １２．４ｇ 塩化カリウム ７．４ｇ 滅菌精製水 全量１０００．０ml （２）アルカリ原液 炭酸ナトリウム ２１．２ｇ 滅菌精製水 全量１０００．０ml

【００６２】実施例６ 点眼液：

【表１４】 ＣＴ−ｅｘｔ ０．５ｇ 濃グリセリン １．５ｇ ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 １．０ｇ 塩化ベンザルコニウム ０．００５ｇ エデト酸ナトリウム ０．０１ｇ 希塩酸 適量 水酸化ナトリウム 適量 滅菌精製水 全量１００ml

【００６３】実施例７ 点眼液：

【表１５】 ＣＴ−ｅｘｔ １．０ｇ 濃グリセリン １．２５ｇ ポリソルベート８０ ２．０ｇ パラオキシ安息香酸メチル ０．０２６ｇ パラオキシ安息香酸プロピル ０．０１４ｇ 希塩酸 適量 水酸化ナトリウム 適量 滅菌精製水 全量１００ml

【００６４】実施例８ 眼軟膏：

【表１６】 ＣＴ−ｅｘｔ １．０ｇ 流動パラフィン １０ｇ 白色ワセリン ８９ｇ

【００６５】実施例９ 眼軟膏：

【表１７】 ＣＴ−ｅｘｔ ２．０ｇ 流動パラフィン １０ｇ 白色ワセリン ８８ｇ

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１（５）における、ヒスタミンによるモ
ルモット摘出回腸収縮に及ぼす影響を示す図である。

フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭53−148539（ＪＰ，Ａ) ＴＨＥＲＡＰＩＥ，1973，ＶＯＬ. 28，ＮＯ．４，ｐｐ．767−774 Ｊ．ＮＡＴＵＲＡＬ ＰＲＯＤＵＣＴ Ｓ，1988，ＶＯＬ．51，ＮＯ．５，ｐ ｐ．1021−1022 ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＡＢＳＴＲＡＣＴ Ｓ，1981，ＶＯＬ．95，ＮＯ．16，ｐ. 371，ｎｏ．95：138479ｆ Ｊ．ＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲ．，1990, ＶＯＬ．518，ＮＯ．１，ｐｐ．273− 276 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 35/78 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 延胡索の４級アルカロイド画分を含有す
   る抗アレルギー剤。