JP3693213B2 - 老化防止用皮膚外用剤 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、皮膚細胞の賦活作用を有し、皮膚のシワ，かさつき，ざらつきなどを改善し、皮膚のきめを整え、皮膚の荒れ，炎症及び創傷の治療に有効な皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、皮膚の状態を改善し、皮膚の炎症や創傷を治療するため、種々の活性成分を配合した皮膚外用剤が提供されてきた。かかる皮膚外用剤には、ホルモン類，各種ビタミン類，植物抽出物，ムコ多糖類など、皮膚細胞賦活作用，抗炎症作用，創傷治癒作用を有する成分が配合されている。
【０００３】
また最近、グリコール酸，乳酸をはじめとするα-ヒドロキシ酸又はこれらの塩、或いは誘導体が線維芽細胞の増殖を促進し、皮膚の老化防止，状態改善に有効であることが明らかとなった（特開平５−１１２４２２号公報，特開平５−１５７８４３号公報）。
【０００４】
しかしながら、上記した真皮線維芽細胞賦活効果を有する成分等の中には、作用効果が不十分であったり、安定性が悪かったりして、皮膚外用剤基剤中に含有させた場合、有効な効果を得るにはかなりの量を含有させなければならないものも存在していた。また、好ましくない副作用や刺激性などを有していたり、製剤安定性に悪影響を及ぼすものや、臭いや色の点で外用剤に配合しにくいもの、一定の作用，品質を維持することの困難なものも多かった。
【０００５】
線維芽細胞の増殖促進に有効なα-ヒドロキシ酸類についても、経皮吸収が悪く、期待通りの効果を得るため配合量を多くすると、皮膚刺激性を示すという問題があった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
そこで本発明においては、かかる問題点を解決し、皮膚刺激性や感作性など安全性上問題がなく、製剤の安定性にも優れ、皮膚状態の改善、炎症，創傷の治療に有効な皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、線維芽細胞増殖促進作用を有するα-ヒドロキシ酸，これらの塩及び誘導体より成る群より選択した１種又は２種以上と、下記の化学式（１）で示されるサリシンを併用して配合することにより、上記の課題を解決することができることを見いだした。
【０００８】
【化１】
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明において、α-ヒドロキシ酸としては、炭素数２〜２６のものが好ましく使用される。例えば、α-ヒドロキシ酢酸（グリコール酸），α-ヒドロキシプロピオン酸（乳酸），α-ヒドロキシブタン酸（α-ヒドロキシ酪酸），α-ヒドロキシペンタン酸（α-ヒドロキシ吉草酸），α-ヒドロキシヘキサン酸（α-ヒドロキシカプロン酸），α-ヒドロキシヘプタン酸（α-ヒドロキシエナント酸），α-ヒドロキシオクタン酸（α-ヒドロキシカプリル酸），α-ヒドロキシノナン酸（α-ヒドロキシペラルゴン酸），α-ヒドロキシデカン酸（α-ヒドロキシカプリン酸），α-ヒドロキシウンデカン酸，α-ヒドロキシトリデカン酸，α-ヒドロキシテトラデカン酸（α-ヒドロキシミリスチン酸），α-ヒドロキペンタデカン酸，α-ヒドロキシヘキサデカン酸（α-ヒドロキシパルミチン酸），α-ヒドロキシヘプタデカン酸（α-ヒドロキシマルガリン酸），α-ヒドロキシオクタデカン酸（α-ヒドロキシステアリン酸），α-ヒドロキシノナデカン酸，α-ヒドロキシエイコサン酸（α-ヒドロキシアラキン酸），α-ヒドロキシヘンエイコサン酸，α-ヒドロキシドコサン酸（α-ヒドロキシベヘン酸），α-ヒドロキシトリコサン酸，α-ヒドロキシテトラコサン酸（α-ヒドロキシリグノセリン酸），α-ヒドロキシペンタコサン酸，α-ヒドロキシヘキサコサン酸（α-ヒドロキシセロチン酸）といったα位に水酸基を有する直鎖飽和脂肪酸、α-ヒドロキシプロペン酸（α-ヒドロキシアクリル酸），α-ヒドロキシ-trans-2-ブテン酸（α-ヒドロキシクロトン酸），α-ヒドロキシ-cis-2-ブテン酸（α-ヒドロキシイソクロトン酸），α-ヒドロキシ-2-ヘキセン酸，α-ヒドロキシ-3-ヘキセン酸，α-ヒドロキシ-4-ヘキセン酸，α-ヒドロキシ-5-ヘキセン酸，α-ヒドロキシ-2-ヘプテン酸，α-ヒドロキシ-3-ヘプテン酸，α-ヒドロキシ-5-ヘプテン酸，α-ヒドロキシ-cis-2-オクテン酸，α-ヒドロキシ-trans-2-オクテン酸，α-ヒドロキシ-3-オクテン酸，α-ヒドロキシ-cis-2-ノネン酸，α-ヒドロキシ-trans-2-ノネン酸，α-ヒドロキシ-3-ノネン酸，α-ヒドロキシ-2-デセン酸，α-ヒドロキシ-4-デセン酸，α-ヒドロキシ-9-デセン酸（α-ヒドロキシ-9-カプロレイン酸），α-ヒドロキシ-9-ウンデセン酸（α-ヒドロキシウンデシレン酸），α-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸（α-ヒドロキシ-10-ウンデシレン酸），α-ヒドロキシ-2-ドデセン酸（α-ヒドロキシ-2-ラウロレイン酸），α-ヒドロキシ-3-ドデセン酸（α-ヒドロキシリンデル酸），α-ヒドロキシ-4-ドデセン酸（α-ヒドロキシトウハク酸），α-ヒドロキシ-5-ドデセン酸（α-ヒドロキシ-5-ラウロレイン酸），α-ヒドロキシ-11-ドデセン酸（α-ヒドロキシ-11-ラウロレイン酸），α-ヒドロキシ-2-トリデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-9-トリデセン酸，α-ヒドロキシ-12-トリデセン酸，α-ヒドロキシ-4-テトラデセン酸（α-ヒドロキシツズ酸），α-ヒドロキシ-5-テトラデセン酸（α-ヒドロキシ-5-ミリストレイン酸），α-ヒドロキシ-9-テトラデセン酸（α-ヒドロキシ-9-ミリストレイン酸），α-ヒドロキシ-6-ペンタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-9-ペンタデセン酸，α-ヒドロキシ-14-ペンタデセン酸，α-ヒドロキシ-2-ヘキサデセン酸（α-ヒドロキシ-2-パルミトレイン酸），α-ヒドロキシ-trans-3-ヘキサデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-7-ヘプタデセン酸（α-ヒドロキシ-7-パルミトレイン酸），α-ヒドロキシ-cis-9-ヘキサデセン酸（α-ヒドロキシ-cis-9-パルミトレイン酸，ゾーマリン酸），α-ヒドロキシ-trans-9-ヘキサデセン酸（α-ヒドロキシ-trans-9-パルミトレイン酸），α-ヒドロキシ-2-ヘプタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-7-ヘプタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-8-ヘプタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-9-ヘプタデセン酸，α-ヒドロキシ-trans-2-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-2-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-trans-3-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-3-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-trans-4-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-6-オクタデセン酸（α-ヒドロキシペトロセリン酸），α-ヒドロキシ-trans-6-オクタデセン酸（α-ヒドロキシペトロセエライジン酸），α-ヒドロキシ-cis-7-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-trans-7-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-8-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-trans-8-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-9-オクタデセン酸（α-ヒドロキシオレイン酸），α-ヒドロキシ-trans-9-オクタデセン酸（α-ヒドロキシエライジン酸），α-ヒドロキシ-cis-11-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-trans-11-オクタデセン酸（α-ヒドロキシバセニン酸），α-ヒドロキシ-cis-9-ノナデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-11-エイコセン酸（α-ヒドロキシゴンドイン酸），α-ヒドロキシ-trans-11-エイコセン酸（α-ヒドロキシ-trans-ゴンドイン酸），α-ヒドロキシ-cis-13-ドコセン酸（α-ヒドロキシエルカ酸），α-ヒドロキシ-trans-13-ドコセン酸（α-ヒドロキシブラシン酸），α-ヒドロキシ-cis-15-テトラコセン酸（α-ヒドロキシセラコレイン酸），α-ヒドロキシ-trans-15-テトラコセン酸（α-ヒドロキシ-trans-セラコレイン酸），α-ヒドロキシ-cis-17-ヘキサコセン酸等のα-位に水酸基を有する直鎖モノエン酸、α-ヒドロキシ-2,4-ヘキサジエン酸（α-ヒドロキシソルビン酸），α-ヒドロキシ-trans-8,trans-10-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-cis-9,cis-12-オクタデカジエン酸（α-ヒドロキシリノール酸），α-ヒドロキシ-trans-9,trans-12-オクタデカジエン酸（α-ヒドロキシリノエライジン酸），α-ヒドロキシ-cis-9,trans-11-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-trans-10-cis-12-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-cis-9,cis-11-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-cis-10,cis-12-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-trans10-,trans-12-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-trans-9,trans-11-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-trans-8,trans-10-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-cis-9,trans-11,trans-13-オクタデカトリエン酸（α-ヒドロキシ-α-エレオステアリン酸），α-ヒドロキシ-trans-9,trans-11,trans-13-オクタデカトリエン酸（α-ヒドロキシ-β-エレオステアリン酸），α-ヒドロキシ-cis-9cis-11,trans-13-オクタデカトリエン酸，α-ヒドロキシ-cis-9,cis-12,cis-15-オクタデカトリエン酸（α-ヒドロキシリノレン酸），α-ヒドロキシ-trans-9,trans-12,trans-15-オクタデカトリエン酸（α-ヒドロキシリノレンエライジン酸），α-ヒドロキシ-trans10,trans-12,trans-14-オクタデカトリエン酸（α-ヒドロキシプソイドエレオステアリン酸），α-ヒドロキシ-9,11,13,15-オクタデカテトラエン酸（α-ヒドロキシ-α-パナリン酸），α-ヒドロキシ-5,8,11,14-エイコサテトラエン酸（α-ヒドロキシアラキドン酸），α-ヒドロキシ-12,20-ヘンエイコサジエン酸，α-ヒドロキシ-9,13-ドコサジエン酸，α-ヒドロキシ-4,8,12,15,19-ドコサペンタエン酸（α-ヒドロキシクルパノドン酸），α-ヒドロキシ-9,15-テトラコサジエン酸等のα-位に水酸基を有するジ，トリ及びテトラエン酸類、α-ヒドロキシ-3-メチルブタン酸（α-ヒドロキシイソ吉草酸），α-ヒドロキシ-2-エチルブタン酸，α-ヒドロキシ-2-メチルペンタン酸，α-ヒドロキシ-4-メチルペンタン酸（α-ヒドロキシイソカプロン酸），α-ヒドロキシ-2-エチルヘキサン酸，α-ヒドロキシ-7-メチルオクタン酸（α-ヒドロキシイソノナン酸），α-ヒドロキシイソステアリン酸等のα-位に水酸基を有する分岐鎖脂肪酸、酒石酸，リンゴ酸等のα-位に水酸基を有するジカルボン酸、クエン酸などのα-位に水酸基を有するトリカルボン酸などが挙げられる。また、これらのα-ヒドロキシ酸のナトリウム塩，カリウム塩，カルシウム塩，塩基性アミノ酸塩等の塩の形態で用いることが出来る。さらに、上記α-ヒドロキシ酸の誘導体を用いることもできる。誘導体としては、コレステロール等のステロール類，ホスファチジルコリンなどのリン脂質類，脂肪酸類，高級アルコール類等とのエステルを好適な例として挙げることが出来る。本発明においては、上記のα-ヒドロキシ酸の中から１種又は２種以上を選択して用いることが出来る。
【００１０】
本発明で用いられるα-ヒドロキシ酸類と併用するサリシンは、合成品でも天然物、特に天然植物からの抽出物でも良い。また、サリシンを含む混合物であっても、サリシンそのものであっても良い。
【００１１】
本発明に用いられるサリシンは、ヤナギ科（Saliceae）植物の樹皮，葉及び雌花に多く含まれる。本発明においては、これらのヤナギ科（Saliceae）植物抽出物及びその生成物を用いることが皮膚線維芽細胞賦活作用の点から好ましい。サリシンを含有するヤナギ科（Saliceae）の植物としては、ケショウヤナギ属のケショウヤナギ(Chosenia arbutifolia(Pallas)A.Skvortz;Chosenia bracteosa Nakai)、ハコヤナギ（ヤマナラシ，ポプラ）属のハコヤナギ（ヤマナラシ）(Populus sieboldi Miq.)，デロ（ドロノキ）(Populus maxmowiczii Henry)，ウラジロハコヤナギ（ギンドロ）(Populus alba L.)，アメリカクロヤマナラシ(Populus deltoides Marsh.;Populus monilifera Ait.;Populus angulata Aiv.)，コトカケヤナギ(Populus euphratica Oliv.)，ヨーロッパクロヤマナラシ(Populus nigra L.)，セイヨウハコヤナギ(Populus nigra var. italica Koehne)，ヨーロッパヤマナラシ(Populus tremula)、ヤナギ属のカスピヤナギ(Salix acutifolia L.)，ヨーロッパヤナギ(Salix alba L.;Salix aurea Salisb.)，シダレヤナギ（イトヤナギ）(Salix babylonica L.)，ヤマネコヤナギ（バッコヤナギ）(Salix bakko Kimura)，アカメヤナギ(Salix chaenomeloides Kimura)，ナガバカワヤナギ(Salix gilgiana Seemen.)，ネコヤナギ（エノコロヤナギ，カワヤナギ）(Salix gracilistyla Miq.)，イヌコリヤナギ(Salix integra Thunb.)，シバヤナギ(Salix japonica Thunb.)，キヌヤナギ(Salix kinuyanagi Kimura)，コリヤナギ(Salix koriyanagi Kimura;Salix purpurea var.japonica Nakai)，フリソデヤナギ(Salix leucopithecia Kimura)，ウンリュウヤナギ(Salix matsudana Koidz.)，タカネイワヤナギ（レンゲイワヤナギ）(Salix nakamurana Koidz.)，クロヤナギ(Salix nigra)，ムラサキヤナギ(Salix purpurea L.)，オノエヤナギ（カラフトヤナギ）(Salix sachalinensis Fr.Schm.)，ミヤマヤナギ（ミネヤナギ）(Salix reinii Fr.et Sav.)，ヤマヤナギ(Salix sieboldiana Bl.)，タイリクキヌヤナギ(Salix viminalis L;Salix longifolia Lam.) ，キツネヤナギ（イワヤナギ）(Salix vulpina)、オオバヤナギ属のオオバヤナギ(Toisusu urbaniana;Salix urbaniana)等が例示される。これらの中でも特に、ヨーロッパヤマナラシ(Populus tremula)，ヨーロッパヤナギ(Salix alba L.;Salix aurea Salisb.)，シダレヤナギ（イトヤナギ）(Salix babylonica L.)，クロヤナギ(Salix nigra)，ムラサキヤナギ(Salix purpurea L.)の樹皮若しくは葉抽出物中でサリシン含有率が高いため、好ましく使用でき、さらにはクロヤナギ(Salix nigra)樹皮抽出物が最も好ましい。
【００１２】
これらのヤナギの抽出物を得るための抽出溶媒としては、水、エタノール，メタノール，イソプロパノール，イソブタノール，n-ヘキサノール，メチルアミルアルコール，2-エチルブタノール，n-オクチルアルコールなどのアルコール類、グリセリン，エチレングリコール，エチレングリコールモノメチルエーテル，エチレングリコールモノエチルエーテル，プロピレングリコール，プロピレングリコールモノメチルエーテル，プロピレングリコールモノエチルエーテル，トリエチレングリコール，1,3-ブチレングリコール，ヘキシレングリコール等の多価アルコール又はその誘導体、アセトン，メチルエチルケトン，メチルイソブチルケトン，メチル-n-プロピルケトンなどのケトン類、酢酸エチル，酢酸イソプロピルなどのエステル類、エチルエーテル，イソプロピルエーテル，n-ブチルエーテル等のエーテル類などの極性溶媒から選択される１種又は２種以上の混合溶媒が好適に使用でき、また、リン酸緩衝生理食塩水をも用いることができるが、特に限定はされない。本発明の目的には、サリシン回収率の点から、極性溶媒が好ましく、さらには、メタノール，エタノール，1,3-ブチレングリコール，水から選択される１種又は２種以上の混合溶媒、特に水を溶媒とすることが好ましい。
【００１３】
抽出方法としては、室温，冷却又は加温した状態で浸漬させて抽出する方法、水蒸気蒸留等の蒸留法を用いて抽出する方法、生のヤナギから圧搾して抽出物を得る圧搾法等が例示され、これらの方法を単独で、又は２種以上を組み合わせて抽出を行う。
【００１４】
抽出の際のヤナギと溶媒との比率は特に限定されるものではないが、ヤナギ１に対して溶媒０．５〜１０００重量倍、特に抽出操作、効率の点で０．５〜１００重量倍が好ましい。また、抽出温度は、常圧下で室温から溶剤の沸点以下の範囲とするのが便利であり、抽出時間は抽出温度などによって異なるが、２時間〜２週間の範囲とするのが好ましい。
【００１５】
また、このようにして得られたヤナギ抽出物は、抽出物をそのまま用いることもできるが、線維芽細胞賦活作用を失わない範囲内で脱臭，脱色，濃縮等の精製操作を加えたり、さらにはカラムクロマトグラフィー等を用いて分画物として用いてもよい。これらの抽出物や精製物、分画物は、これらから溶媒を除去することによって乾固物とすることもでき、さらにアルコールなどの溶媒に可溶化した形態、或いは乳剤の形態で提供することができる。
【００１６】
これらのα-ヒドロキシ酸類及びサリシン類の配合量は、単独で使用する場合に比べはるかに少量でよく、多くてもそれぞれ５重量％までで十分である。
【００１７】
本発明においては、皮膚外用剤として、ローション，乳剤，クリーム，軟膏等の形態をとることができる。またさらに、柔軟性化粧水，収れん性化粧水，洗浄用化粧水等の化粧水類、エモリエントクリーム，モイスチュアクリーム，マッサージクリーム，クレンジングクリーム，メイクアップクリーム等のクリーム類、エモリエント乳液，モイスチュア乳液，ナリシング乳液，クレンジング乳液等の乳液類、ゼリー状パック，ピールオフパック，洗い流しパック，粉末パック等のパック類、美容液、及び洗顔料といった種々の製剤形態の老化防止用化粧料としても提供することができる。
【００１８】
本発明においてはさらに、他の細胞賦活剤や美白成分，保湿剤，抗炎症剤，紫外線吸収剤等、他の有効成分を併用することもでき、日焼け止め化粧料、皮膚保護用化粧料、美白剤等の薬用化粧料或いは医薬部外品等として提供することもできる。
【００１９】
α-ヒドロキシ酸類及びサリシンの線維芽細胞賦活作用を測定した。ヒト由来線維芽細胞を１ウェルあたり２．０×１０4個となるように９６穴マイクロプレートに播種し、２４時間後に表１に示した試料を含有する１．０容量％牛胎仔血清添加ダルベッコ最小必須培地に交換して、３７℃で４８時間培養した。次いで2-(4,5-ジメチル-2-チアゾリル)-3,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を４００μｇ／ｍｌ含有する前記培地に交換して３７℃で２時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを５６０ｎｍにおける吸光度により測定した。なお、１．０容量％牛胎仔血清添加ダルベッコ最小必須培地のみで培養した系を対照とし、５．０容量％牛胎仔血清添加ダルベッコ最小必須培地で培養した系を陽性対照とした。結果は、対照における吸光度を１００．０％として表した活性化指数により示した。
【００２０】
【表１】
【００２１】
ここで、表１に示したサリシンを含有するクロヤナギ樹皮精製水抽出物は、新鮮なクロヤナギ樹皮を粉砕し、１０重量倍の精製水を添加し、３昼夜浸漬した後濾過し、サリシン含有量が１０重量％となるまで減圧濃縮を行ったものを使用した。
【００２２】
表１に示した結果より、α-ヒドロキシ酸類及びサリシンを同時に添加して線維芽細胞を培養することにより、α-ヒドロキシ酸類又はサリシンを単独で添加した場合と比較して１０分の１〜１００分の１程度の低濃度で線維芽細胞賦活作用を発揮し、相乗的な線維芽細胞賦活作用の向上が認められた。
【００２３】
【実施例】
さらに本発明の特徴について、実施例により詳細に説明する。
【００２４】
［実施例１〜５，比較例１〜５］Ｏ／Ｗ乳化型美容液
表２に示した添加剤を用いて、下記の処方によりＯ／Ｗ乳化型美容液を調製した。
（処方）
(１)スクワラン ５．０(重量％)
(２)白色ワセリン ２．０
(３)ミツロウ ０．５
(４)ソルビタンセスキオレエート ０．８
(５)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20EO) １．２
(６)パラオキシ安息香酸メチル ０．１
(７)プロピレングリコール ５．０
(８)精製水 ６０．０
(９)カルボキシビニルポリマー1.0重量％水溶液 ２０．０
(10)水酸化カリウム ０．１
(11)エタノール ５．０
(12)添加剤 ０．１(合計)
(13)香料 ０．２
製法：(１)〜(５)の油相成分を混合し７５℃に加熱して溶解，均一化する。一方(６)〜(８)の水相成分を混合，溶解して７５℃に加熱し、油相成分を添加して予備乳化する。(９)を添加した後ホモミキサーにて均一に乳化し、(10)を加えてｐＨを調整する。冷却後４０℃にて(11)〜(13)を添加，混合，均一化する。
【００２５】
【表２】
【００２６】
上記実施例１〜実施例５及び比較例１〜比較例５を用いて、紫外線によるしわの発生に対する防止効果を評価した。しわ発生防止効果は、ヘアレスマウス５匹を１群とし、各群について実施例及び比較例をそれぞれ１日１回背部に塗布し、１Ｊ／ｃｍ2／週の長波長紫外線（ＵＶＡ）を５０週間照射し、ヘアレスマウスにおけるしわの発生状況を観察し、表３に示す判定基準に従って点数化して行った。この際、精製水のみを塗布した群を対照とした。結果は各群の平均値を算出し、ＵＶＡ照射日数との関係により表４に示した。
【００２７】
【表３】
【００２８】
【表４】
【００２９】
表４に示されるように、対照群においては、ＵＶＡ照射日数が４０週を越える頃には形成されたしわの深さが中程度にまで達し、５０週後には深いしわの発生が認められていた。また、比較例塗布群ではある程度のしわ軽減効果は認められたが、４０週を越える頃には軽微なしわが明確に認められ、５０週後には軽微ないし中程度のしわの発生が認められていた。これに対し、本発明の実施例塗布群では、いずれにおいても５０週後に微小ないし軽微なしわが認められた程度で、サリシンとα-ヒドロキシ酸類を併用することにより、それぞれを単独で用いる場合と比較して、しわの発生は顕著に抑制されていた。
【００３０】
続いて、本発明の実施例１〜実施例５及び比較例１〜比較例５について、抗炎症作用及び創傷治癒促進効果を評価した。人工的に炎症又は創傷を形成した１群５匹のマウスを用い、各群に実施例及び比較例をそれぞれ０．５ｇずつ１日２回７日間塗布し、７日目に炎症部位及び創傷部位の状態を観察した。抗炎症作用については「有効」，「やや有効」，「無効」、創傷治癒促進効果については「完全治癒」，「ほぼ治癒」，「治癒不完全」の３段階でそれぞれ評価し、各評価を得たマウスの数にて表５に示した。
【００３１】
【表５】
【００３２】
表５より明らかなように、抗炎症作用については、本発明の実施例塗布群ではいずれにおいても無効と評価されたマウスは見られず、４例以上のマウスにおいて有効な抗炎症作用が認められていた。また創傷治癒促進効果についても、本発明の実施例塗布群では創傷治癒の不完全なマウスはいずれにおいても認められておらず、４例以上のマウスで完全な治癒を認めていた。これに対し比較例塗布群では、ある程度の抗炎症作用及び創傷治癒促進効果が認められていたが、その効果は実施例塗布群に比べて有意に小さく、無効若しくは治癒不完全なマウスが１例認められたものもあった。
【００３３】
次に本発明の実施例１〜実施例５及び比較例１〜比較例５について、６ヶ月間の実使用試験を行った。パネラーとして、顕著なしわの発生等の皮膚症状を有する４０歳〜６０歳代の女性を用い、１群２０名とした。使用試験は、各群に実施例及び比較例のそれぞれをブラインドにて使用させて行った。使用試験前および使用試験終了後の皮膚の状態を観察し、しわの改善状況について、「改善」，「やや改善」，「変化なし」の３段階にて評価した。なお、しわの程度については写真撮影及びレプリカにより評価した。結果は、各評価を得たパネラー数にて表６に示した。
【００３４】
【表６】
【００３５】
表６に示されるように、しわの改善状況について、本発明の実施例使用群ではすべてにおいて改善傾向が認められていた。特に、実施例１，実施例３使用群では、９０％以上のパネラーで明確な改善を認めていた。これに対し、比較例使用群では、ある程度の改善効果は認められたが、一部の比較例使用群で、変化の認められなかったパネラーが１名見られた。
【００３６】
なお、本発明の実施例１〜実施例５については、上記使用試験期間中に含有成分の析出，分離，凝集，変臭，変色といった状態変化は全く見られなかった。また、各実施例使用群において、皮膚刺激性反応や皮膚感作性反応を示したパネラーも存在しなかった。
【００３７】
続いて本発明の他の実施例の処方を示す。
［実施例６］皮膚用ローション
(１)エタノール １０．０(重量％)
(２)ヒドロキシエチルセルロース １．０
(３)クロヤナギ樹皮精製水抽出物 ０．５
(４)乳酸 ０．０５
(５)パラオキシ安息香酸メチル ０．１
(６)精製水 ８８．３５
製法：(１)〜(６)を混合し均一とする。なお、クロヤナギ樹皮精製水抽出物は、前記実施例１〜実施例５で使用したものを用いた。
【００３８】
［実施例７］皮膚用乳剤
(１)ステアリン酸 ０．２(重量％)
(２)セタノール １．５
(３)ワセリン ３．０
(４)流動パラフィン ７．０
(５)ポリオキシエチレン(10EO)モノオレイン酸エステル １．５
(６)α-ヒドロキシ酢酸コレステリルエステル ０．３
(７)酢酸トコフェロール ５．０
(８)グリセリン ５．０
(９)パラオキシ安息香酸メチル ０．１
(10)トリエタノールアミン １．０
(11)精製水 ７５．２
(12)サリシン ０．２
製法：(１)〜(７)の油相成分を混合，加熱して均一に溶解し、７０℃に保つ。一方、(８)〜(11)の水相成分を混合，加熱して均一とし、７０℃とする。この水相成分に前記油相成分を攪拌しながら徐々に添加して乳化し、冷却した後４０℃にて(12)を添加，混合する。
【００３９】
［実施例８］皮膚用ゲル剤
(１)精製水 ８８．４(重量％)
(２)カルボキシビニルポリマー ０．５
(３)ジプロピレングリコール １０．０
(４)パラオキシ安息香酸メチル ０．１
(５)水酸化カリウム ０．１
(６)クロヤナギ樹皮５０重量％エタノール抽出物 ０．４
(７)乳酸ステアリルエステル ０．５
製法：(１)に(２)を均一に溶解した後、(３)に(４)を溶解して添加し、次いで(５)を加えて増粘させ、(６)及び(７)を添加する。ここで用いいたクロヤナギ樹皮５０重量％エタノール抽出物は、新鮮なクロヤナギ樹皮を粉砕し、１０重量倍の５０重量％エタノールを添加し、３昼夜浸漬した後濾過し、サリシン含有量が１０重量％となるまで減圧濃縮を行ったものを使用した。
【００４０】
製法：(１)〜(７)の油相成分を混合，溶解して７５℃に加熱する。一方、(８)〜(10)の水相成分を混合，溶解して７５℃に加熱する。次いで、前記水相成分に油相成分を添加して予備乳化した後、ホモミキサーにて均一に乳化し、冷却後４０℃にて(11)及び(12)を添加，混合する。ここで用いたムラサキヤナギ葉精製水抽出物は、ムラサキヤナギの葉を粉砕し、１０重量倍の精製水を添加し、３昼夜浸漬した後濾過し、サリシン含有量が１０重量％となるまで減圧濃縮を行ったものを使用した。
【００４１】
［実施例１０］水中油型乳剤性軟膏
(１)白色ワセリン ２５．０(重量％)
(２)ステアリルアルコール ２５．０
(３)α-ヒドロキシ酢酸ホスファチジルエステル ０．１５
(４)ラウリル硫酸ナトリウム １．０
(５)グリセリン １２．０
(６)パラオキシ安息香酸メチル ０．１
(７)精製水 ３６．７
(８)サリシン ０．０５
製法：(１)〜(４)の油相成分を混合，溶解して均一とし、７５℃に加熱する。一方、(５)，(６)を(７)に溶解して７５℃に加熱し、これに前記油相成分を添加して乳化し、冷却後４０℃にて(８)を添加，混合する。
【００４２】
［実施例１１］メイクアップベースクリーム
(１)ステアリン酸 １２．０(重量％)
(２)セタノール ２．０
(３)グリセリルトリ2-エチルヘキサン酸エステル ２．５
(４)自己乳化型グリセリルモノステアリン酸エステル ２．０
(５)α-ヒドロキシ酢酸ラウリルエステル ０．２５
(６)プロピレングリコール １０．０
(７)水酸化カリウム ０．３
(８)精製水 ６９．１
(９)酸化チタン １．０
(10)ベンガラ ０．１
(11)黄酸化鉄 ０．４
(12)香料 ０．１
(13)クロヤナギ精製水抽出物 ０．２５
製法：(１)〜(５)の油相成分を混合し、７５℃に加熱して均一とする。一方(６)〜(８)の水相成分を混合し、７５℃に加熱，溶解して均一とし、これに(９)〜(11)の顔料を添加し、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を添加し、ホモミキサーにて乳化した後冷却し、４０℃にて(12)，(13)を添加，混合する。なお、クロヤナギ樹皮精製水抽出物は、前記実施例１〜実施例５で使用したものを用いた。
【００４３】
［実施例１２］乳液状ファンデーション
(１)ステアリン酸 ２．０(重量％)
(２)スクワラン ５．０
(３)ミリスチン酸オクチルドデシル ５．０
(４)セタノール １．０
(５)デカグリセリルモノイソパルミチン酸エステル ９．０
(６)乳酸コレステリルエステル ０．０２
(７)1,3-ブチレングリコール ６．０
(８)水酸化カリウム ０．１
(９)パラオキシ安息香酸メチル ０．１
(10)精製水 ５３．５５
(11)酸化チタン ９．０
(12)タルク ７．４
(13)ベンガラ ０．５
(14)黄酸化鉄 １．１
(15)黒酸化鉄 ０．１
(16)香料 ０．１
(17)サリシン ０．０３
製法：(１)〜(６)の油相成分を混合し、７５℃に加熱して均一とする。一方(７)〜(10)の水相成分を混合し、７５℃に加熱，溶解して均一とし、これに(11)〜(15)の顔料を添加しホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を添加し、ホモミキサーにて均一に乳化した後冷却し、４０℃にて(16)，(17)を添加，混合する。
【００４４】
製法：(１)〜(７)の油相成分を混合，溶解して７５℃に加熱する。一方、(８)〜(10)の水相成分を混合，溶解して７５℃に加熱する。ついで、この水相成分に油相成分を添加して予備乳化した後、ホモミキサーにて均一に乳化して冷却し、４０℃にて(11)を添加，混合する。
【００４５】
【発明の効果】
以上詳述したように、サリシン及びα-ヒドロキシ酸類をともに含有する皮膚外用剤は、それぞれを単独で含有する皮膚外用剤と比較して、老化防止が相乗的に向上し、加齢や紫外線などの種々のストレスによるしわ，シミの発生、皮膚弾性の低下といった皮膚老化症状の防止或いは改善に有効で、抗炎症作用，創傷治癒促進作用をも有し、さらに安定性，安全性も良好である。
【発明の属する技術分野】
本発明は、皮膚細胞の賦活作用を有し、皮膚のシワ，かさつき，ざらつきなどを改善し、皮膚のきめを整え、皮膚の荒れ，炎症及び創傷の治療に有効な皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、皮膚の状態を改善し、皮膚の炎症や創傷を治療するため、種々の活性成分を配合した皮膚外用剤が提供されてきた。かかる皮膚外用剤には、ホルモン類，各種ビタミン類，植物抽出物，ムコ多糖類など、皮膚細胞賦活作用，抗炎症作用，創傷治癒作用を有する成分が配合されている。
【０００３】
また最近、グリコール酸，乳酸をはじめとするα-ヒドロキシ酸又はこれらの塩、或いは誘導体が線維芽細胞の増殖を促進し、皮膚の老化防止，状態改善に有効であることが明らかとなった（特開平５−１１２４２２号公報，特開平５−１５７８４３号公報）。
【０００４】
しかしながら、上記した真皮線維芽細胞賦活効果を有する成分等の中には、作用効果が不十分であったり、安定性が悪かったりして、皮膚外用剤基剤中に含有させた場合、有効な効果を得るにはかなりの量を含有させなければならないものも存在していた。また、好ましくない副作用や刺激性などを有していたり、製剤安定性に悪影響を及ぼすものや、臭いや色の点で外用剤に配合しにくいもの、一定の作用，品質を維持することの困難なものも多かった。
【０００５】
線維芽細胞の増殖促進に有効なα-ヒドロキシ酸類についても、経皮吸収が悪く、期待通りの効果を得るため配合量を多くすると、皮膚刺激性を示すという問題があった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
そこで本発明においては、かかる問題点を解決し、皮膚刺激性や感作性など安全性上問題がなく、製剤の安定性にも優れ、皮膚状態の改善、炎症，創傷の治療に有効な皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、線維芽細胞増殖促進作用を有するα-ヒドロキシ酸，これらの塩及び誘導体より成る群より選択した１種又は２種以上と、下記の化学式（１）で示されるサリシンを併用して配合することにより、上記の課題を解決することができることを見いだした。
【０００８】
【化１】
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明において、α-ヒドロキシ酸としては、炭素数２〜２６のものが好ましく使用される。例えば、α-ヒドロキシ酢酸（グリコール酸），α-ヒドロキシプロピオン酸（乳酸），α-ヒドロキシブタン酸（α-ヒドロキシ酪酸），α-ヒドロキシペンタン酸（α-ヒドロキシ吉草酸），α-ヒドロキシヘキサン酸（α-ヒドロキシカプロン酸），α-ヒドロキシヘプタン酸（α-ヒドロキシエナント酸），α-ヒドロキシオクタン酸（α-ヒドロキシカプリル酸），α-ヒドロキシノナン酸（α-ヒドロキシペラルゴン酸），α-ヒドロキシデカン酸（α-ヒドロキシカプリン酸），α-ヒドロキシウンデカン酸，α-ヒドロキシトリデカン酸，α-ヒドロキシテトラデカン酸（α-ヒドロキシミリスチン酸），α-ヒドロキペンタデカン酸，α-ヒドロキシヘキサデカン酸（α-ヒドロキシパルミチン酸），α-ヒドロキシヘプタデカン酸（α-ヒドロキシマルガリン酸），α-ヒドロキシオクタデカン酸（α-ヒドロキシステアリン酸），α-ヒドロキシノナデカン酸，α-ヒドロキシエイコサン酸（α-ヒドロキシアラキン酸），α-ヒドロキシヘンエイコサン酸，α-ヒドロキシドコサン酸（α-ヒドロキシベヘン酸），α-ヒドロキシトリコサン酸，α-ヒドロキシテトラコサン酸（α-ヒドロキシリグノセリン酸），α-ヒドロキシペンタコサン酸，α-ヒドロキシヘキサコサン酸（α-ヒドロキシセロチン酸）といったα位に水酸基を有する直鎖飽和脂肪酸、α-ヒドロキシプロペン酸（α-ヒドロキシアクリル酸），α-ヒドロキシ-trans-2-ブテン酸（α-ヒドロキシクロトン酸），α-ヒドロキシ-cis-2-ブテン酸（α-ヒドロキシイソクロトン酸），α-ヒドロキシ-2-ヘキセン酸，α-ヒドロキシ-3-ヘキセン酸，α-ヒドロキシ-4-ヘキセン酸，α-ヒドロキシ-5-ヘキセン酸，α-ヒドロキシ-2-ヘプテン酸，α-ヒドロキシ-3-ヘプテン酸，α-ヒドロキシ-5-ヘプテン酸，α-ヒドロキシ-cis-2-オクテン酸，α-ヒドロキシ-trans-2-オクテン酸，α-ヒドロキシ-3-オクテン酸，α-ヒドロキシ-cis-2-ノネン酸，α-ヒドロキシ-trans-2-ノネン酸，α-ヒドロキシ-3-ノネン酸，α-ヒドロキシ-2-デセン酸，α-ヒドロキシ-4-デセン酸，α-ヒドロキシ-9-デセン酸（α-ヒドロキシ-9-カプロレイン酸），α-ヒドロキシ-9-ウンデセン酸（α-ヒドロキシウンデシレン酸），α-ヒドロキシ-10-ウンデセン酸（α-ヒドロキシ-10-ウンデシレン酸），α-ヒドロキシ-2-ドデセン酸（α-ヒドロキシ-2-ラウロレイン酸），α-ヒドロキシ-3-ドデセン酸（α-ヒドロキシリンデル酸），α-ヒドロキシ-4-ドデセン酸（α-ヒドロキシトウハク酸），α-ヒドロキシ-5-ドデセン酸（α-ヒドロキシ-5-ラウロレイン酸），α-ヒドロキシ-11-ドデセン酸（α-ヒドロキシ-11-ラウロレイン酸），α-ヒドロキシ-2-トリデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-9-トリデセン酸，α-ヒドロキシ-12-トリデセン酸，α-ヒドロキシ-4-テトラデセン酸（α-ヒドロキシツズ酸），α-ヒドロキシ-5-テトラデセン酸（α-ヒドロキシ-5-ミリストレイン酸），α-ヒドロキシ-9-テトラデセン酸（α-ヒドロキシ-9-ミリストレイン酸），α-ヒドロキシ-6-ペンタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-9-ペンタデセン酸，α-ヒドロキシ-14-ペンタデセン酸，α-ヒドロキシ-2-ヘキサデセン酸（α-ヒドロキシ-2-パルミトレイン酸），α-ヒドロキシ-trans-3-ヘキサデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-7-ヘプタデセン酸（α-ヒドロキシ-7-パルミトレイン酸），α-ヒドロキシ-cis-9-ヘキサデセン酸（α-ヒドロキシ-cis-9-パルミトレイン酸，ゾーマリン酸），α-ヒドロキシ-trans-9-ヘキサデセン酸（α-ヒドロキシ-trans-9-パルミトレイン酸），α-ヒドロキシ-2-ヘプタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-7-ヘプタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-8-ヘプタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-9-ヘプタデセン酸，α-ヒドロキシ-trans-2-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-2-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-trans-3-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-3-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-trans-4-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-6-オクタデセン酸（α-ヒドロキシペトロセリン酸），α-ヒドロキシ-trans-6-オクタデセン酸（α-ヒドロキシペトロセエライジン酸），α-ヒドロキシ-cis-7-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-trans-7-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-8-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-trans-8-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-9-オクタデセン酸（α-ヒドロキシオレイン酸），α-ヒドロキシ-trans-9-オクタデセン酸（α-ヒドロキシエライジン酸），α-ヒドロキシ-cis-11-オクタデセン酸，α-ヒドロキシ-trans-11-オクタデセン酸（α-ヒドロキシバセニン酸），α-ヒドロキシ-cis-9-ノナデセン酸，α-ヒドロキシ-cis-11-エイコセン酸（α-ヒドロキシゴンドイン酸），α-ヒドロキシ-trans-11-エイコセン酸（α-ヒドロキシ-trans-ゴンドイン酸），α-ヒドロキシ-cis-13-ドコセン酸（α-ヒドロキシエルカ酸），α-ヒドロキシ-trans-13-ドコセン酸（α-ヒドロキシブラシン酸），α-ヒドロキシ-cis-15-テトラコセン酸（α-ヒドロキシセラコレイン酸），α-ヒドロキシ-trans-15-テトラコセン酸（α-ヒドロキシ-trans-セラコレイン酸），α-ヒドロキシ-cis-17-ヘキサコセン酸等のα-位に水酸基を有する直鎖モノエン酸、α-ヒドロキシ-2,4-ヘキサジエン酸（α-ヒドロキシソルビン酸），α-ヒドロキシ-trans-8,trans-10-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-cis-9,cis-12-オクタデカジエン酸（α-ヒドロキシリノール酸），α-ヒドロキシ-trans-9,trans-12-オクタデカジエン酸（α-ヒドロキシリノエライジン酸），α-ヒドロキシ-cis-9,trans-11-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-trans-10-cis-12-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-cis-9,cis-11-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-cis-10,cis-12-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-trans10-,trans-12-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-trans-9,trans-11-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-trans-8,trans-10-オクタデカジエン酸，α-ヒドロキシ-cis-9,trans-11,trans-13-オクタデカトリエン酸（α-ヒドロキシ-α-エレオステアリン酸），α-ヒドロキシ-trans-9,trans-11,trans-13-オクタデカトリエン酸（α-ヒドロキシ-β-エレオステアリン酸），α-ヒドロキシ-cis-9cis-11,trans-13-オクタデカトリエン酸，α-ヒドロキシ-cis-9,cis-12,cis-15-オクタデカトリエン酸（α-ヒドロキシリノレン酸），α-ヒドロキシ-trans-9,trans-12,trans-15-オクタデカトリエン酸（α-ヒドロキシリノレンエライジン酸），α-ヒドロキシ-trans10,trans-12,trans-14-オクタデカトリエン酸（α-ヒドロキシプソイドエレオステアリン酸），α-ヒドロキシ-9,11,13,15-オクタデカテトラエン酸（α-ヒドロキシ-α-パナリン酸），α-ヒドロキシ-5,8,11,14-エイコサテトラエン酸（α-ヒドロキシアラキドン酸），α-ヒドロキシ-12,20-ヘンエイコサジエン酸，α-ヒドロキシ-9,13-ドコサジエン酸，α-ヒドロキシ-4,8,12,15,19-ドコサペンタエン酸（α-ヒドロキシクルパノドン酸），α-ヒドロキシ-9,15-テトラコサジエン酸等のα-位に水酸基を有するジ，トリ及びテトラエン酸類、α-ヒドロキシ-3-メチルブタン酸（α-ヒドロキシイソ吉草酸），α-ヒドロキシ-2-エチルブタン酸，α-ヒドロキシ-2-メチルペンタン酸，α-ヒドロキシ-4-メチルペンタン酸（α-ヒドロキシイソカプロン酸），α-ヒドロキシ-2-エチルヘキサン酸，α-ヒドロキシ-7-メチルオクタン酸（α-ヒドロキシイソノナン酸），α-ヒドロキシイソステアリン酸等のα-位に水酸基を有する分岐鎖脂肪酸、酒石酸，リンゴ酸等のα-位に水酸基を有するジカルボン酸、クエン酸などのα-位に水酸基を有するトリカルボン酸などが挙げられる。また、これらのα-ヒドロキシ酸のナトリウム塩，カリウム塩，カルシウム塩，塩基性アミノ酸塩等の塩の形態で用いることが出来る。さらに、上記α-ヒドロキシ酸の誘導体を用いることもできる。誘導体としては、コレステロール等のステロール類，ホスファチジルコリンなどのリン脂質類，脂肪酸類，高級アルコール類等とのエステルを好適な例として挙げることが出来る。本発明においては、上記のα-ヒドロキシ酸の中から１種又は２種以上を選択して用いることが出来る。
【００１０】
本発明で用いられるα-ヒドロキシ酸類と併用するサリシンは、合成品でも天然物、特に天然植物からの抽出物でも良い。また、サリシンを含む混合物であっても、サリシンそのものであっても良い。
【００１１】
本発明に用いられるサリシンは、ヤナギ科（Saliceae）植物の樹皮，葉及び雌花に多く含まれる。本発明においては、これらのヤナギ科（Saliceae）植物抽出物及びその生成物を用いることが皮膚線維芽細胞賦活作用の点から好ましい。サリシンを含有するヤナギ科（Saliceae）の植物としては、ケショウヤナギ属のケショウヤナギ(Chosenia arbutifolia(Pallas)A.Skvortz;Chosenia bracteosa Nakai)、ハコヤナギ（ヤマナラシ，ポプラ）属のハコヤナギ（ヤマナラシ）(Populus sieboldi Miq.)，デロ（ドロノキ）(Populus maxmowiczii Henry)，ウラジロハコヤナギ（ギンドロ）(Populus alba L.)，アメリカクロヤマナラシ(Populus deltoides Marsh.;Populus monilifera Ait.;Populus angulata Aiv.)，コトカケヤナギ(Populus euphratica Oliv.)，ヨーロッパクロヤマナラシ(Populus nigra L.)，セイヨウハコヤナギ(Populus nigra var. italica Koehne)，ヨーロッパヤマナラシ(Populus tremula)、ヤナギ属のカスピヤナギ(Salix acutifolia L.)，ヨーロッパヤナギ(Salix alba L.;Salix aurea Salisb.)，シダレヤナギ（イトヤナギ）(Salix babylonica L.)，ヤマネコヤナギ（バッコヤナギ）(Salix bakko Kimura)，アカメヤナギ(Salix chaenomeloides Kimura)，ナガバカワヤナギ(Salix gilgiana Seemen.)，ネコヤナギ（エノコロヤナギ，カワヤナギ）(Salix gracilistyla Miq.)，イヌコリヤナギ(Salix integra Thunb.)，シバヤナギ(Salix japonica Thunb.)，キヌヤナギ(Salix kinuyanagi Kimura)，コリヤナギ(Salix koriyanagi Kimura;Salix purpurea var.japonica Nakai)，フリソデヤナギ(Salix leucopithecia Kimura)，ウンリュウヤナギ(Salix matsudana Koidz.)，タカネイワヤナギ（レンゲイワヤナギ）(Salix nakamurana Koidz.)，クロヤナギ(Salix nigra)，ムラサキヤナギ(Salix purpurea L.)，オノエヤナギ（カラフトヤナギ）(Salix sachalinensis Fr.Schm.)，ミヤマヤナギ（ミネヤナギ）(Salix reinii Fr.et Sav.)，ヤマヤナギ(Salix sieboldiana Bl.)，タイリクキヌヤナギ(Salix viminalis L;Salix longifolia Lam.) ，キツネヤナギ（イワヤナギ）(Salix vulpina)、オオバヤナギ属のオオバヤナギ(Toisusu urbaniana;Salix urbaniana)等が例示される。これらの中でも特に、ヨーロッパヤマナラシ(Populus tremula)，ヨーロッパヤナギ(Salix alba L.;Salix aurea Salisb.)，シダレヤナギ（イトヤナギ）(Salix babylonica L.)，クロヤナギ(Salix nigra)，ムラサキヤナギ(Salix purpurea L.)の樹皮若しくは葉抽出物中でサリシン含有率が高いため、好ましく使用でき、さらにはクロヤナギ(Salix nigra)樹皮抽出物が最も好ましい。
【００１２】
これらのヤナギの抽出物を得るための抽出溶媒としては、水、エタノール，メタノール，イソプロパノール，イソブタノール，n-ヘキサノール，メチルアミルアルコール，2-エチルブタノール，n-オクチルアルコールなどのアルコール類、グリセリン，エチレングリコール，エチレングリコールモノメチルエーテル，エチレングリコールモノエチルエーテル，プロピレングリコール，プロピレングリコールモノメチルエーテル，プロピレングリコールモノエチルエーテル，トリエチレングリコール，1,3-ブチレングリコール，ヘキシレングリコール等の多価アルコール又はその誘導体、アセトン，メチルエチルケトン，メチルイソブチルケトン，メチル-n-プロピルケトンなどのケトン類、酢酸エチル，酢酸イソプロピルなどのエステル類、エチルエーテル，イソプロピルエーテル，n-ブチルエーテル等のエーテル類などの極性溶媒から選択される１種又は２種以上の混合溶媒が好適に使用でき、また、リン酸緩衝生理食塩水をも用いることができるが、特に限定はされない。本発明の目的には、サリシン回収率の点から、極性溶媒が好ましく、さらには、メタノール，エタノール，1,3-ブチレングリコール，水から選択される１種又は２種以上の混合溶媒、特に水を溶媒とすることが好ましい。
【００１３】
抽出方法としては、室温，冷却又は加温した状態で浸漬させて抽出する方法、水蒸気蒸留等の蒸留法を用いて抽出する方法、生のヤナギから圧搾して抽出物を得る圧搾法等が例示され、これらの方法を単独で、又は２種以上を組み合わせて抽出を行う。
【００１４】
抽出の際のヤナギと溶媒との比率は特に限定されるものではないが、ヤナギ１に対して溶媒０．５〜１０００重量倍、特に抽出操作、効率の点で０．５〜１００重量倍が好ましい。また、抽出温度は、常圧下で室温から溶剤の沸点以下の範囲とするのが便利であり、抽出時間は抽出温度などによって異なるが、２時間〜２週間の範囲とするのが好ましい。
【００１５】
また、このようにして得られたヤナギ抽出物は、抽出物をそのまま用いることもできるが、線維芽細胞賦活作用を失わない範囲内で脱臭，脱色，濃縮等の精製操作を加えたり、さらにはカラムクロマトグラフィー等を用いて分画物として用いてもよい。これらの抽出物や精製物、分画物は、これらから溶媒を除去することによって乾固物とすることもでき、さらにアルコールなどの溶媒に可溶化した形態、或いは乳剤の形態で提供することができる。
【００１６】
これらのα-ヒドロキシ酸類及びサリシン類の配合量は、単独で使用する場合に比べはるかに少量でよく、多くてもそれぞれ５重量％までで十分である。
【００１７】
本発明においては、皮膚外用剤として、ローション，乳剤，クリーム，軟膏等の形態をとることができる。またさらに、柔軟性化粧水，収れん性化粧水，洗浄用化粧水等の化粧水類、エモリエントクリーム，モイスチュアクリーム，マッサージクリーム，クレンジングクリーム，メイクアップクリーム等のクリーム類、エモリエント乳液，モイスチュア乳液，ナリシング乳液，クレンジング乳液等の乳液類、ゼリー状パック，ピールオフパック，洗い流しパック，粉末パック等のパック類、美容液、及び洗顔料といった種々の製剤形態の老化防止用化粧料としても提供することができる。
【００１８】
本発明においてはさらに、他の細胞賦活剤や美白成分，保湿剤，抗炎症剤，紫外線吸収剤等、他の有効成分を併用することもでき、日焼け止め化粧料、皮膚保護用化粧料、美白剤等の薬用化粧料或いは医薬部外品等として提供することもできる。
【００１９】
α-ヒドロキシ酸類及びサリシンの線維芽細胞賦活作用を測定した。ヒト由来線維芽細胞を１ウェルあたり２．０×１０4個となるように９６穴マイクロプレートに播種し、２４時間後に表１に示した試料を含有する１．０容量％牛胎仔血清添加ダルベッコ最小必須培地に交換して、３７℃で４８時間培養した。次いで2-(4,5-ジメチル-2-チアゾリル)-3,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を４００μｇ／ｍｌ含有する前記培地に交換して３７℃で２時間培養し、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを５６０ｎｍにおける吸光度により測定した。なお、１．０容量％牛胎仔血清添加ダルベッコ最小必須培地のみで培養した系を対照とし、５．０容量％牛胎仔血清添加ダルベッコ最小必須培地で培養した系を陽性対照とした。結果は、対照における吸光度を１００．０％として表した活性化指数により示した。
【００２０】
【表１】
ここで、表１に示したサリシンを含有するクロヤナギ樹皮精製水抽出物は、新鮮なクロヤナギ樹皮を粉砕し、１０重量倍の精製水を添加し、３昼夜浸漬した後濾過し、サリシン含有量が１０重量％となるまで減圧濃縮を行ったものを使用した。
【００２２】
表１に示した結果より、α-ヒドロキシ酸類及びサリシンを同時に添加して線維芽細胞を培養することにより、α-ヒドロキシ酸類又はサリシンを単独で添加した場合と比較して１０分の１〜１００分の１程度の低濃度で線維芽細胞賦活作用を発揮し、相乗的な線維芽細胞賦活作用の向上が認められた。
【００２３】
【実施例】
さらに本発明の特徴について、実施例により詳細に説明する。
【００２４】
［実施例１〜５，比較例１〜５］Ｏ／Ｗ乳化型美容液
表２に示した添加剤を用いて、下記の処方によりＯ／Ｗ乳化型美容液を調製した。
（処方）
(１)スクワラン ５．０(重量％)
(２)白色ワセリン ２．０
(３)ミツロウ ０．５
(４)ソルビタンセスキオレエート ０．８
(５)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20EO) １．２
(６)パラオキシ安息香酸メチル ０．１
(７)プロピレングリコール ５．０
(８)精製水 ６０．０
(９)カルボキシビニルポリマー1.0重量％水溶液 ２０．０
(10)水酸化カリウム ０．１
(11)エタノール ５．０
(12)添加剤 ０．１(合計)
(13)香料 ０．２
製法：(１)〜(５)の油相成分を混合し７５℃に加熱して溶解，均一化する。一方(６)〜(８)の水相成分を混合，溶解して７５℃に加熱し、油相成分を添加して予備乳化する。(９)を添加した後ホモミキサーにて均一に乳化し、(10)を加えてｐＨを調整する。冷却後４０℃にて(11)〜(13)を添加，混合，均一化する。
【００２５】
【表２】
上記実施例１〜実施例５及び比較例１〜比較例５を用いて、紫外線によるしわの発生に対する防止効果を評価した。しわ発生防止効果は、ヘアレスマウス５匹を１群とし、各群について実施例及び比較例をそれぞれ１日１回背部に塗布し、１Ｊ／ｃｍ2／週の長波長紫外線（ＵＶＡ）を５０週間照射し、ヘアレスマウスにおけるしわの発生状況を観察し、表３に示す判定基準に従って点数化して行った。この際、精製水のみを塗布した群を対照とした。結果は各群の平均値を算出し、ＵＶＡ照射日数との関係により表４に示した。
【００２７】
【表３】
【表４】
表４に示されるように、対照群においては、ＵＶＡ照射日数が４０週を越える頃には形成されたしわの深さが中程度にまで達し、５０週後には深いしわの発生が認められていた。また、比較例塗布群ではある程度のしわ軽減効果は認められたが、４０週を越える頃には軽微なしわが明確に認められ、５０週後には軽微ないし中程度のしわの発生が認められていた。これに対し、本発明の実施例塗布群では、いずれにおいても５０週後に微小ないし軽微なしわが認められた程度で、サリシンとα-ヒドロキシ酸類を併用することにより、それぞれを単独で用いる場合と比較して、しわの発生は顕著に抑制されていた。
【００３０】
続いて、本発明の実施例１〜実施例５及び比較例１〜比較例５について、抗炎症作用及び創傷治癒促進効果を評価した。人工的に炎症又は創傷を形成した１群５匹のマウスを用い、各群に実施例及び比較例をそれぞれ０．５ｇずつ１日２回７日間塗布し、７日目に炎症部位及び創傷部位の状態を観察した。抗炎症作用については「有効」，「やや有効」，「無効」、創傷治癒促進効果については「完全治癒」，「ほぼ治癒」，「治癒不完全」の３段階でそれぞれ評価し、各評価を得たマウスの数にて表５に示した。
【００３１】
【表５】
表５より明らかなように、抗炎症作用については、本発明の実施例塗布群ではいずれにおいても無効と評価されたマウスは見られず、４例以上のマウスにおいて有効な抗炎症作用が認められていた。また創傷治癒促進効果についても、本発明の実施例塗布群では創傷治癒の不完全なマウスはいずれにおいても認められておらず、４例以上のマウスで完全な治癒を認めていた。これに対し比較例塗布群では、ある程度の抗炎症作用及び創傷治癒促進効果が認められていたが、その効果は実施例塗布群に比べて有意に小さく、無効若しくは治癒不完全なマウスが１例認められたものもあった。
【００３３】
次に本発明の実施例１〜実施例５及び比較例１〜比較例５について、６ヶ月間の実使用試験を行った。パネラーとして、顕著なしわの発生等の皮膚症状を有する４０歳〜６０歳代の女性を用い、１群２０名とした。使用試験は、各群に実施例及び比較例のそれぞれをブラインドにて使用させて行った。使用試験前および使用試験終了後の皮膚の状態を観察し、しわの改善状況について、「改善」，「やや改善」，「変化なし」の３段階にて評価した。なお、しわの程度については写真撮影及びレプリカにより評価した。結果は、各評価を得たパネラー数にて表６に示した。
【００３４】
【表６】
表６に示されるように、しわの改善状況について、本発明の実施例使用群ではすべてにおいて改善傾向が認められていた。特に、実施例１，実施例３使用群では、９０％以上のパネラーで明確な改善を認めていた。これに対し、比較例使用群では、ある程度の改善効果は認められたが、一部の比較例使用群で、変化の認められなかったパネラーが１名見られた。
【００３６】
なお、本発明の実施例１〜実施例５については、上記使用試験期間中に含有成分の析出，分離，凝集，変臭，変色といった状態変化は全く見られなかった。また、各実施例使用群において、皮膚刺激性反応や皮膚感作性反応を示したパネラーも存在しなかった。
【００３７】
続いて本発明の他の実施例の処方を示す。
［実施例６］皮膚用ローション
(１)エタノール １０．０(重量％)
(２)ヒドロキシエチルセルロース １．０
(３)クロヤナギ樹皮精製水抽出物 ０．５
(４)乳酸 ０．０５
(５)パラオキシ安息香酸メチル ０．１
(６)精製水 ８８．３５
製法：(１)〜(６)を混合し均一とする。なお、クロヤナギ樹皮精製水抽出物は、前記実施例１〜実施例５で使用したものを用いた。
【００３８】
［実施例７］皮膚用乳剤
(１)ステアリン酸 ０．２(重量％)
(２)セタノール １．５
(３)ワセリン ３．０
(４)流動パラフィン ７．０
(５)ポリオキシエチレン(10EO)モノオレイン酸エステル １．５
(６)α-ヒドロキシ酢酸コレステリルエステル ０．３
(７)酢酸トコフェロール ５．０
(８)グリセリン ５．０
(９)パラオキシ安息香酸メチル ０．１
(10)トリエタノールアミン １．０
(11)精製水 ７５．２
(12)サリシン ０．２
製法：(１)〜(７)の油相成分を混合，加熱して均一に溶解し、７０℃に保つ。一方、(８)〜(11)の水相成分を混合，加熱して均一とし、７０℃とする。この水相成分に前記油相成分を攪拌しながら徐々に添加して乳化し、冷却した後４０℃にて(12)を添加，混合する。
【００３９】
［実施例８］皮膚用ゲル剤
(１)精製水 ８８．４(重量％)
(２)カルボキシビニルポリマー ０．５
(３)ジプロピレングリコール １０．０
(４)パラオキシ安息香酸メチル ０．１
(５)水酸化カリウム ０．１
(６)クロヤナギ樹皮５０重量％エタノール抽出物 ０．４
(７)乳酸ステアリルエステル ０．５
製法：(１)に(２)を均一に溶解した後、(３)に(４)を溶解して添加し、次いで(５)を加えて増粘させ、(６)及び(７)を添加する。ここで用いいたクロヤナギ樹皮５０重量％エタノール抽出物は、新鮮なクロヤナギ樹皮を粉砕し、１０重量倍の５０重量％エタノールを添加し、３昼夜浸漬した後濾過し、サリシン含有量が１０重量％となるまで減圧濃縮を行ったものを使用した。
【００４０】
【００４１】
［実施例１０］水中油型乳剤性軟膏
(１)白色ワセリン ２５．０(重量％)
(２)ステアリルアルコール ２５．０
(３)α-ヒドロキシ酢酸ホスファチジルエステル ０．１５
(４)ラウリル硫酸ナトリウム １．０
(５)グリセリン １２．０
(６)パラオキシ安息香酸メチル ０．１
(７)精製水 ３６．７
(８)サリシン ０．０５
製法：(１)〜(４)の油相成分を混合，溶解して均一とし、７５℃に加熱する。一方、(５)，(６)を(７)に溶解して７５℃に加熱し、これに前記油相成分を添加して乳化し、冷却後４０℃にて(８)を添加，混合する。
【００４２】
［実施例１１］メイクアップベースクリーム
(１)ステアリン酸 １２．０(重量％)
(２)セタノール ２．０
(３)グリセリルトリ2-エチルヘキサン酸エステル ２．５
(４)自己乳化型グリセリルモノステアリン酸エステル ２．０
(５)α-ヒドロキシ酢酸ラウリルエステル ０．２５
(６)プロピレングリコール １０．０
(７)水酸化カリウム ０．３
(８)精製水 ６９．１
(９)酸化チタン １．０
(10)ベンガラ ０．１
(11)黄酸化鉄 ０．４
(12)香料 ０．１
(13)クロヤナギ精製水抽出物 ０．２５
製法：(１)〜(５)の油相成分を混合し、７５℃に加熱して均一とする。一方(６)〜(８)の水相成分を混合し、７５℃に加熱，溶解して均一とし、これに(９)〜(11)の顔料を添加し、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を添加し、ホモミキサーにて乳化した後冷却し、４０℃にて(12)，(13)を添加，混合する。なお、クロヤナギ樹皮精製水抽出物は、前記実施例１〜実施例５で使用したものを用いた。
【００４３】
［実施例１２］乳液状ファンデーション
(１)ステアリン酸 ２．０(重量％)
(２)スクワラン ５．０
(３)ミリスチン酸オクチルドデシル ５．０
(４)セタノール １．０
(５)デカグリセリルモノイソパルミチン酸エステル ９．０
(６)乳酸コレステリルエステル ０．０２
(７)1,3-ブチレングリコール ６．０
(８)水酸化カリウム ０．１
(９)パラオキシ安息香酸メチル ０．１
(10)精製水 ５３．５５
(11)酸化チタン ９．０
(12)タルク ７．４
(13)ベンガラ ０．５
(14)黄酸化鉄 １．１
(15)黒酸化鉄 ０．１
(16)香料 ０．１
(17)サリシン ０．０３
製法：(１)〜(６)の油相成分を混合し、７５℃に加熱して均一とする。一方(７)〜(10)の水相成分を混合し、７５℃に加熱，溶解して均一とし、これに(11)〜(15)の顔料を添加しホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を添加し、ホモミキサーにて均一に乳化した後冷却し、４０℃にて(16)，(17)を添加，混合する。
【００４４】
【００４５】
【発明の効果】
以上詳述したように、サリシン及びα-ヒドロキシ酸類をともに含有する皮膚外用剤は、それぞれを単独で含有する皮膚外用剤と比較して、老化防止が相乗的に向上し、加齢や紫外線などの種々のストレスによるしわ，シミの発生、皮膚弾性の低下といった皮膚老化症状の防止或いは改善に有効で、抗炎症作用，創傷治癒促進作用をも有し、さらに安定性，安全性も良好である。
Claims (3)
- 下記の化学式（１）で示されるサリシンと、α−ヒドロキシ酢酸、その塩及び誘導体より成る群から選択される１種又は２種以上を含有してなる老化防止改善用皮膚外用剤。
- サリシンを含有するヤナギ科（saliceae）植物抽出物と、α−ヒドロキシ酢酸、その塩及び誘導体より成る群から選択される１種又は２種以上を含有してなる老化防止改善用皮膚外用剤。
- 皮膚外用剤が化粧料である、請求項１又は請求項２に記載の老化防止改善用皮膚外用剤。
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