JP3581670B2

JP3581670B2 - 血糖上昇抑制食品

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Publication number: JP3581670B2
Application number: JP2001118470A
Authority: JP
Inventors: 源次郎草野; 真喜雄芝野; 一男竹内
Original assignee: Spirulina Bio Lab Ltd
Current assignee: Spirulina Bio Lab Ltd
Priority date: 2001-04-17
Filing date: 2001-04-17
Publication date: 2004-10-27
Anticipated expiration: 2021-04-17
Also published as: JP2002306123A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、糖尿病や肥満症などを予防するための血糖上昇抑制食品に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
国内における糖尿病患者は急激に増加する傾向にあり、１９９７年の厚生省の実態調査によれば、その患者数は６９０万人であり、また、糖尿病と健康との境界線にあたる予備群を含めると、その数は１３７０万人にもなる。これらの患者は、血糖や血清インスリンなどの濃度が特に食後において上昇して異常値を示す。従って、これら血糖や血清インスリンなどの濃度が上昇しないように抑制しコントロールする方法として、炭水化物の消化吸収阻害が考えられており、実際に、α−グルコシダーゼ阻害薬（α−glucosidase阻害薬、α−ＧＩ）が血糖の濃度の上昇を抑える血糖上昇抑制剤として用いられている。このようなα−ＧＩは血糖上昇抑制剤として用いられるほかに、膵臓Ｂ細胞の疲弊を防止し、さらにはインスリン非依存型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の発症予防につながることが期待されているものである。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、糖尿病や肥満症などを予防する目的で、日常的に手軽に摂取または飲食することができるものが望まれていた。
【０００４】
本発明は、血糖の濃度の上昇を抑えるのに有効で、しかも人体に対して安全である血糖上昇抑制食品を提供することを目的とするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明の請求項１に係る血糖上昇抑制食品は、ツユクサに含まれている１−デオキシノジリマイシンと２，５−ジハイドロオキシメチル３，４−ジハイドロオキシピロリジンを有効成分とすることを特徴とするものであり、ツユクサに含まれている1-deoxynojirimycin（１−デオキシノジリマイシンであって、以下、ＤＮＪと略することがある）と2,5-dihydroxymethyl3,4-dihydroxypyrrolidine（２，５−ジハイドロオキシメチル３，４−ジハイドロオキシピロリジンであって、以下、ＤＭＤＰと略することがある）によりα−グルコシダーゼ（α−glucosidase）の活性を阻害することができる。
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態を説明する。
【００１０】
本発明の血糖上昇抑制食品はツユクサ科（Commelinaceae）の植物であるツユクサ（Commelina communis）とオオボウシバナ（C.communis var.hortensis）の一方あるいは両方の植物体の全草（茎、葉、根などの各種部位）をそのままあるいは乾燥した後、粉末に粉砕したものを主成分とするものである。また、本発明の血糖上昇抑制食品はツユクサとオオボウシバナの植物体の各種部位をそのままあるいは乾燥し、必要に応じて粉砕した後、水や熱水及び／又はエチルアルコール等のアルコールなどの溶媒で抽出したものを主成分とするものである。ツユクサとオオボウシバナには主活性成分として下記の化学式で示される1-deoxynojirimycin（ＤＮＪ）と2,5-dihydroxymethyl3,4-dihydroxypyrrolidine（ＤＭＤＰ）の二つの化合物が含まれている。
【００１１】
【化１】

そして、本発明の血糖上昇抑制食品はツユクサやオオボウシバナの粉砕物あるいは抽出液に含まれている上記二つの化合物により二糖類の分解酵素であるα−グルコシダーゼの活性を阻害することができ、血糖の上昇を抑えることができるものである。ＤＮＪとＤＭＤＰはそれぞれ単独でα−グルコシダーゼの活性を阻害することは知られているが、ツユクサとオオボウシバナ（及び抽出液）はそれぞれＤＮＪとＤＭＤＰの両方を約１：１で同時に含むものであり、従って、ＤＮＪとＤＭＤＰの相乗効果により高いα−グルコシダーゼの活性阻害効果を得ることができるものである。しかも、ＤＮＪとＤＭＤＰをそれぞれ別々の物質から得た場合、これらを併用しようとすると混合する必要があるが、本発明ではこのような混合の手間が必要ないものである。
【００１２】
本発明は上記のツユクサやオオボウシバナの粉砕物そのものあるいは抽出物そのものを血糖上昇抑制食品とすることができる。また、本発明の血糖上昇抑制食品はツユクサやオオボウシバナの粉砕物や抽出物を既知の飲食品類などの他の成分に添加して形成することができる。他の成分としては、例えば、口腔用組成物（ガム、キャンデーなど）やかまぼこ、ちくわなどの加工水産ねり製品、ソーセージ、ハムなどの畜産製品、洋菓子類、和菓子類、生めん、中華めん、ゆでめん、ソバなどのめん類、ソース、醤油、タレ、砂糖、ハチミツ、粉末あめ、水あめなどの調味料、カレー粉、からし粉、コショウ粉などの香辛料、ジャム、マーマレード、チョコレートスプレッド、漬物、そう菜、ふりかけや、各種野菜・果実の缶詰・瓶詰など加工野菜・果実類、チーズ、バター、ヨーグルトなど乳製品、みそ汁、スープ、果実ジュース、野菜ジュース、乳清飲料、清涼飲料、酒類などの飲料、茶葉、その他、健康食品など一般的な飲食品類への使用を例示することができる。また、本発明の血糖上昇抑制食品は既知の賦形材やカプセル材を用いて各種の内用・外用製剤類（動物用に使用する製剤も含む）のように、アンプル状、カプセル状、丸剤、錠剤状、粉末状、顆粒状、固形状、液状、ゲル状或いは気泡性のように形成しても良い。尚、抽出物は抽出液に溶解された状態で用いても良いし、抽出液から溶媒を除去して得られる結晶体の状態で用いても良い。また、ツユクサやオオボウシバナの粉砕物や抽出物を既知の飲食品類に添加したり既知の賦形材やカプセル材を用いる場合、ツユクサやオオボウシバナの粉砕物や抽出物の使用量は任意であるが、６０ｋｇの成人において上記の二つの主活性成分の一回当たりの摂取量の合計が１〜４０ｍｇとなるように血糖上昇抑制食品に含有させるのが好ましく、これにより、本発明の血糖上昇抑制食品よる血糖上昇抑制を効果的に得ることができるものである。
【００１３】
オオボウシバナの抽出物は、溶媒を用いてオオボウシバナの植物体の全草（茎、葉、根などの各種部位）を直接抽出する方法で得ることができる。抽出に用いる溶媒としては水やアルコールを用いることができ、アルコールとしてはメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等を用いることができる。また、これらの溶媒を任意の比率で混合した混合溶媒を用いることもできる。上記の溶媒の中でも、水、エタノール、または水とエタノールの混合溶媒を用いるのが好ましく、水とエタノールの混合溶媒を用いる場合は、その混合比率を通常、アルコール濃度で５〜９５％、好ましくは７０％にするのが最適である。溶媒はオオボウシバナ１ｇに対して３〜２００ミリリットル、好ましくは５〜３０ミリリットル配合して抽出を行うようにする。
【００１４】
抽出に際しては、オオボウシバナを適当な大きさ（１０〜２０ｍｍ）に細切に切断することが好ましい。抽出方法は、オオボウシバナの粉砕物と溶媒の混合物を８０〜９０℃で３時間程度加熱し、この後、還流法で抽出することが好ましいが、上記加熱後に静置により抽出してもよい。次に、冷却後ろ過し、そのろ液を減圧下で４５℃以下の温度で完全に溶媒を留去し、乾燥エキスとして抽出物を得ることができる。
【００１５】
また、本発明の血糖上昇抑制食品はこの抽出物を溶媒に溶解した状態のままで使用しても良いし、粗画分として得られるものを使用しても良い。しかしながら、上記のような抽出により得られる抽出物は上記の二つの主活性成分の含量が少なく、血糖の上昇抑制に寄与しない不純物も多い。そこで、上記の抽出により得られる抽出物から水溶性塩基性画分を分離精製して分画し、この水溶性塩基性画分を本発明の血糖上昇抑制食品として用いるのが好ましく、これにより、ＤＮＪとＤＭＤＰの含有量（濃度）が高い血糖上昇抑制食品を調製することができる。水溶性塩基性画分を分画するにあたっては既知の方法を採用することができ、例えば、陽イオン交換樹脂を備えるクロマトグラフィーを用いておこなうことができる。
【００１６】
ここで、ツユクサ及びオオボウシバナと他のツユクサ科植物とのα−グルコシダーゼ阻害活性を比較する。まず、ツユクサ科植物として、ツユクサ、オオボウシバナ、イボクサ（Aneilema Keisak）、ムラサキオモト（Rhoeo discolor）、ヤブミョウガ（Polliajaponica）、オオムラサキツユクサ（Tradescantia virginiana）、シロフハカタカラクサ（T.viridis）、ノハカタカラクサ（トキワツユクサ）（T.flumiensis）、ブライダルベル（Tripogandra multiflora）を用意した。
【００１７】
次に、図１に示す手順に従ってサンプルを調製した。すなわち、乾燥させた上記のツユクサ科植物の全草を適当な大きさに切断し、切断したツユクサ科植物の全草５０ｇ（乾燥重量）を水２リットルに入れて加熱して１時間の熱水抽出を行い、抽出液を濾過して得た。次に、抽出液を弱酸性陽イオン交換樹脂（Amberlite CG-50）を固相として用いたカラムクロマトグラフィーで処理した。この時の抽出液の温度は室温、抽出液の流速は４０〜６０ミリリットル／分でカラム中に流下させた。次に、上記の弱酸性陽イオン交換樹脂を水で洗浄した後、次に、弱酸性陽イオン交換樹脂に吸着した成分を濃度２．８％のアンモニア水で溶出し、この溶出液を濃縮して粗塩基性画分を得た。次に、粗塩基性画分を水に溶解してサンプルとした。
【００１８】
そして、上記の各ツユクサ科植物から得られたサンプルのα−グルコシダーゼに対する阻害率をジニトロサリチル酸（ＤＮＳ）法により求めた。ＤＮＳ法は以下の［化２］に示すような反応を用いるものである。
【００１９】
【化２】

ＤＮＳ法は図２に示すようにして行う。すなわち、まず、（１）２５マイクロリットルのサンプルに濃度５０ｍＭでｐＨ７．０のリン酸緩衝液（phosphate buffer）を２００マイクロリットル加えて３７℃で５分間加温した。次に、サンプルを混入した緩衝溶液に基質溶液（濃度１００ｍＭのショ糖水溶液）を１７５マイクロリットル加えて３７℃で５分間加温した。次に、（２）この溶液に酵素溶液（１００マイクロリットルのα−グルコシダーゼ溶液）を加えて３７℃で３０分間反応した。（尚、α−グルコシダーゼ溶液は酵素標準品（Saccharomyces sp.由来）を濃度１０ｍＭでｐＨ７．０のリン酸緩衝液で１ｍｇ／ミリリットルに溶解し、同緩衝液で約４０倍に希釈したものを用いた。）次に、（３）α−グルコシダーゼ溶液を加えた溶液にＤＮＳ溶液を加えて１００℃で１０分間反応した。（尚、ＤＮＳ溶液は水１リットルに対して、3,5-dinitrosalicylic acid(DNS)を１％、酒石酸カリウムを５％、ＮａＯＨを１％、フェノールを０．２％、Ｎａ_２ＳＯ_３を０．０５％の割合で溶解した溶液を用いた。）そして、（４）ＤＮＳ溶液を加えた溶液を水で３倍に希釈した後、５４０ｎｍにおける３−アミノ−５−ニトロサリチル酸の光学濃度を測定（ODsample）し、以下の式で阻害率を算出した。
阻害率(%)=100-(ODsample-ODblank)/(ODcontrol-ODblank)×100
ODcontrolは（１）の操作でサンプルの代わりにＨ_２Ｏで反応を行ったときの光学濃度、ODblankは（２）の操作で酵素溶液の代わりに緩衝液を加えて行ったときの光学濃度をそれぞれ示す。
【００２０】
上記の各ツユクサ科植物の阻害率を表１に示す。
【００２１】
【表１】

表１から明らかなように、ツユクサやオオボウシバナから得られる熱水抽出物の水溶性塩基性画分は他のツユクサ科植物から得られる熱水抽出物の水溶性塩基性画分よりも阻害率が高く、従って、本発明ではツユクサ科植物の中でもツユクサやオオボウシバナを用いるのである。
【００２２】
また、オオボウシバナから得られる熱水抽出物の水溶性塩基性画分の成分の同定を行った。まず、図３に示す方法で成分１、２を得た。すなわち、乾燥させたオオボウシバナの全草を適当な大きさに切断し、切断したオオボウシバナの全草１．２ｋｇ（乾燥重量）を水４０リットルに入れて加熱して１時間の熱水抽出を行い、抽出液を濾過して得た。次に、抽出液を弱酸性陽イオン交換樹脂（Amberlite CG-50）を固相として用いたカラムクロマトグラフィーで処理した。この時の抽出液の温度は室温、抽出液の流速は４０〜６０ミリリットル／分でカラム中に流下させた。次に、上記の弱酸性陽イオン交換樹脂に吸着した成分を濃度２．８％のアンモニア水で溶出し、この溶出液の溶媒を除去することによって粗塩基性画分を得た。次に、粗塩基性画分を水に溶解し、この粗塩基性画分溶液を０．２ＭでｐＨ５．７のギ酸アンモニウム緩衝液で緩衝化させた強酸性陽イオン交換樹脂（DOWEX 50WX4）を固相として用いたカラムクロマトグラフィーで処理した。この時、粗塩基性画分溶液の温度は室温、粗塩基性画分溶液の流速は１０ミリリットル／分でカラム中に流下させた。
【００２３】
次に、上記の強酸性陽イオン交換樹脂に吸着した成分を０．２８％アンモニア水（１→１００）で溶出し、溶出液の溶媒を除去することによって、０．２８％アンモニア水溶出画分を得た。そして、上記の０．２８％アンモニア水溶出画分を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ，ＡｓａｈｉｐａｋＮＨ_２Ｐ，８０％ＣＨ_３ＣＮ）で処理して成分１と成分２を得た。この成分１と成分２を核磁気共鳴分光法（^１Ｈ−ＮＭＲｓｐｅｃｔｒｕｍ（Ｄ_２Ｏ））で解析した。結果を図４、図５に示す。
【００２４】
成分１は図４のような^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示し、各シグナルは化学シフトの値、カップリング定数、^１Ｈ−^１ＨＣＯＳＹスペクトル、^１Ｈ−^１３ＣＣＯＳＹスペクトルの解析結果を統合して、低磁場側から３位と４位の水素（２Ｈ相当）、ヒドロキシメチル基の水素（４Ｈ相当）、２位と５位の水素（２Ｈ相当）に帰属することができた。
【００２５】
成分２は図５のような^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示し、成分１と類似の解析結果を統合して、各シグナルを図に示したように帰属することができた。
【００２６】
成分１はＤＭＤＰであり、色のない粉体であった。また、次のような性質を示すものであった。
ニンヒドリン反応：ｐｏｓｉｔｉｖｅ（ｏｒａｎｇｅ）
ＳＩ−ＭＳ（質量スペクトル）：ｍ／ｚ１６４（Ｍ＋１）であり、分子量が１６３で分子式がＣ_６Ｈ_１３ＮＯ_４であることを意味する。
［α］_Ｄ＋７４．０°（ｃ＝０．０７，Ｈ_２Ｏ）であり、この値は天然由来のＤＭＤＰ固有の値であって、合成ＤＭＤＰではないことを示している。
【００２７】
また、成分２はＤＮＪであり、色のない粉体であった。また、次のような性質を示すものであった。
ニンヒドリン反応：ｐｏｓｉｔｉｖｅ（ｙｅｌｌｏｗ）
ＳＩ−ＭＳ（質量スペクトル）：ｍ／ｚ１６４（Ｍ＋１）であり、分子量が１６３で分子式がＣ_６Ｈ_１３ＮＯ_４であることを意味する。
［α］_Ｄ−３０．５°（ｃ＝０．１０，Ｈ_２Ｏ）であり、この値は天然由来のＤＮＪ固有の値であって、合成ＤＮＪではないことを示している。
【００２８】
また、オオボウシバナから得られる熱水抽出物の水溶性塩基性画分中のＤＮＪとＤＭＤＰの定量を行った。まず、図６に示す方法でＨＰＬＣ用サンプルを得た。すなわち、恒量にしたオオボウシバナの粉末５００ｍｇを精秤し、５０％ＣＨ_３ＣＮを１０ミリリットル正確に加え、２０分間超音波抽出した。次に、以下の分析の前処理として、ＨＰＬＣのカラムの保護のため、同じ中身の樹脂に一度通して共稚物を取り除いた（ＳｅｐｐａｋＮＨ_２（Ｗａｔｅｒｓ））。次に、ゴミなどにより配管等を詰まらせないために、ろ過（０．２２μｍ）を行った。このようにして高速液体クロマトグラフィー用のサンプルを調製した。このサンプルを用いて高速液体クロマトグラフィー／質量分析（ＬＣ／ＭＳ）を行った。ＬＣ／ＭＳ条件は次の通りである。
カラム：ＡｓａｈｉｐａｋＮＨ_２Ｐ，４．６ｍｍｉ．ｄ×２５０ｍｍ
移動相：７５％ＣＨ_３ＣＮ
流速：０．８ミリリットル／ｍｉｎ
カラム温度：２５℃
注入量：５マイクロリットル（カット注入）
検出：イオントラップ型質量分析計
イオン化：大気圧化学イオン化法（ＡＰＣＩ）
極性：ポジティブ
噴霧器温度：１８０℃
脱溶媒室温度：３５０℃
第一細孔温度：１２０℃
第二細孔温度：１２０℃
ニードル電圧：３．００ｋＶ
ドリフト電圧：１００Ｖ
フォーカス電圧：３０Ｖ
上記のＬＣ／ＭＳ分析の結果を図７にグラフで示す。尚、グラフ中のオオボウシバナ１は草津市内で栽培したもの、オオボウシバナ２は大阪薬科大学の薬用植物園で栽培したもの、オオボウシバナ３はオオボウシバナ１の根部である。ツユクサ科植物のツユクサの結果も併記する。
【００２９】
図７から明らかなように、ツユクサ及びオオボウシバナには約０．０２〜０．０６％のＤＭＤＰとＤＮＪが含有されている。
【００３０】
また、図８に示すように、上記のオオボウシバナの場合と同様にしてツユクサから得られる成分１、２を得て、ツユクサから得られる熱水抽出物の水溶性塩基性画分の成分の同定を行った。そして、オオボウシバナの場合と同様にして成分１と成分２を核磁気共鳴分析法（^１Ｈ−ＮＭＲｓｐｅｃｔｒｕｍ（Ｄ_２Ｏ））で分析した。結果を図９に示す。上記のオオボウシバナの場合と同様に、成分１はＤＭＤＰ、成分２はＤＮＪであり、それぞれオオボウシバナの場合と同様の性質を示した。
【００３１】
また、図１０に示すように、上記のオオボウシバナの場合と同様にしてツユクサから得られる熱水抽出物のＨＰＬＣ用サンプルの作成し、ツユクサから得られる熱水抽出物の水溶性塩基性画分中のＤＮＪとＤＭＤＰの定量を行った。ＬＣ／ＭＳ条件は上記のオオボウシバナの場合と同様である。
【００３２】
上記のＬＣ／ＭＳによる定量分析の結果を図１１にグラフで示す。尚、グラフ中のツユクサ１、２、３は野生品（高槻市周辺）で栽培したもの、ツユクサ４は大阪薬科大の薬用植物園で栽培したもの、ツユクサ５はツユクサ４において葉にふ模様のあるものである。
【００３３】
図１１から明らかなように、オオボウシバナには約０．０２〜０．１２％のＤＭＤＰとＤＮＪが含有されている。
【００３４】
図１２にＤＭＤＰ及びＤＮＪ標準溶液による検量線をグラフで示す。標準溶液１はＤＭＤＰを７５ｐｐｍとＤＮＪを７５ｐｐｍそれぞれ含むものである。また、標準溶液２はＤＭＤＰを１５０ｐｐｍとＤＮＪを１５０ｐｐｍそれぞれ含むものである。また、注入量は５マイクロリットルとした。図１２から明らかなように、相関係数が０．９９７以上の良好な検量線が得られている。
【００３５】
【実施例】
以下本発明を実施例によって具体的に説明する。
【００３６】
（実施例１）
乾燥したツユクサを適当な大きさに切断粉砕して得られた粉砕物を血糖上昇抑制食品とした。
【００３７】
（参考例１）
ツユクサの代わりに、乾燥したオオボウシバナを用いた以外は実施例１と同様にして血糖上昇抑制食品を製造した。
【００３８】
（実施例２）
ツユクサの代わりに、乾燥したツユクサと乾燥したオオボウシバナを１：１で混合したものを用いた以外は実施例１と同様にして血糖上昇抑制食品を製造した。
【００３９】
（実施例３）
ツユクサを適当な大きさに切断し、切断したツユクサ１５ｇ（乾燥重量）を水に入れて加熱して１時間の熱水抽出を行い、抽出液を濾過して得た。次に、抽出残渣に１リットルの水を加え、上記と同様の熱水抽出を行った。この後、さらに抽出残渣に１リットルの水を加え、上記と同様の熱水抽出を行った。そして、３回の熱水抽出で得た抽出液を合わせて血糖上昇抑制食品を製造した。
【００４０】
（参考例２）
ツユクサの代わりに、乾燥したオオボウシバナを用いた以外は実施例３と同様にして血糖上昇抑制食品を製造した。
【００４１】
（実施例４）
ツユクサの代わりに、乾燥したツユクサと乾燥したオオボウシバナを１：１で混合したものを用いた以外は実施例３と同様にして血糖上昇抑制食品を製造した。
【００４２】
（実施例５）
図１３に示す方法で水溶性塩基性画分を得た。ツユクサを適当な大きさに切断し、切断したツユクサ１５ｇ（乾燥重量）を水に入れて加熱して１時間の熱水抽出を行い、抽出液を濾過して得た。次に、抽出残渣に１リットルの水を加え、上記と同様の熱水抽出を行った。この後、さらに抽出残渣に１リットルの水を加え、上記と同様の熱水抽出を行った。
【００４３】
次に、上記３回の熱水抽出で得た抽出液を合わせ、弱酸性陽イオン交換樹脂（Amberlite CG-50）を固相として用いたカラムクロマトグラフィーで処理した。この時の抽出液の温度は室温、抽出液の流速は４０〜６０ミリリットル／分で、抽出液を３時間かけてカラム中に流下させた。
【００４４】
次に、上記の弱酸性陽イオン交換樹脂に吸着した成分を濃度２．８％のアンモニア水で溶出し、この溶出液の溶媒を除去することによって１１０ｍｇの粗塩基性画分を得た。次に、粗塩基性画分を水に溶解し、この粗塩基性画分溶液をｐＨ５．７のギ酸アンモニウム緩衝液で緩衝させた強酸性陽イオン交換樹脂（DOWEX 50WX4）を固相として用いたカラムクロマトグラフィーで処理した。この時、粗塩基性画分溶液の温度は室温、粗塩基性画分溶液の流速は１０ミリリットル／分で、粗塩基性画分溶液を３時間かけてカラム中に流下させた。
【００４５】
次に、上記の強酸性陽イオン交換樹脂に吸着した成分を水と濃度０．２８％のアンモニア水と濃度２．８％のアンモニア水で順次溶出し、各溶出液の溶媒を除去することによって、７０ｍｇの水溶出画分と、２０ｍｇの０．２８％アンモニア水溶出画分と、１０ｍｇの２．８％アンモニア水溶出画分を得た。
【００４６】
そして、上記の０．２８％アンモニア水溶出画分を血糖上昇抑制食品とした。
【００４７】
（参考例３）
ツユクサの代わりに、オオボウシバナを用いた以外は実施例５と同様にして血糖上昇抑制食品を製造した。
【００４８】
（実施例６）
ツユクサの代わりに、ツユクサとオオボウシバナを１：１で混合したものを用いた以外は実施例５と同様にして血糖上昇抑制食品を製造した。
【００４９】
（比較例１）
アルガボースを血糖上昇抑制剤とした。
【００５０】
（比較例２）
ボグリボースを血糖上昇抑制剤とした。
【００５１】
（阻害活性試験）
実施例４〜６と参考例１〜３及び比較例１、２について、α−グルコシダーゼの阻害活性試験を図２に示す上記のＤＮＳ法に準じて行った。
【００５２】
α−グルコシダーゼの阻害活性試験の結果をＩＣ_５０値として表２に示す。
【００５３】
【表２】

（血糖上昇抑制試験）
実施例１〜６と参考例１〜３の血糖上昇抑制試験としてスクロース負荷試験を以下のようにして行った。
【００５４】
動物はｄｄＹマウス♂７週令（一群５匹）を用いた。負荷糖としてはsucrose（スクロース）を用いた。
【００５５】
そして、一晩絶食したマウス（一群５匹）の空腹時血中グルコース濃度を測定した後、マウスに負荷糖を４ｇ／ｋｇ強制経口投与すると共に、負荷糖を投与したマウスの一群に実施例１〜６と参考例１〜３をそれぞれ別々に強制経口投与した。また、比較のために、負荷糖を投与したマウスのある一群にＤＮＪを１０ｍｇ／ｋｇ強制経口投与し、別の一群にＤＭＤＰを１０ｍｇ／ｋｇ強制経口投与した。また、対照のために、負荷糖を投与したマウスのある一群に脱イオン水を２０ｍｇ／ｋｇ強制経口投与した。そして、実施例等を投与した後、３０分後に尾静脈から採血し、血中のグルコース濃度を測定して血糖値とした。測定方法はキットによるグルコースオキシターゼ法（ロート製薬）である。スクロース負荷試験の結果を図１４に示す。尚、図１４において、ｂｌａｎｋは負荷糖や実施例等を与えなかったもの、ｃｏｎｔｒｏｌは脱イオン水を与えたもの、ｎｏｒｍａｌは負荷糖のみを与えたものをそれぞれ示す。
【００５６】
尚、実施例１〜４及び参考例１、２の投与量は２００ｍｇ／ｋｇとし、実施例５、６及び参考例３の投与量は５０ｍｇ／ｋｇとした。
【００５７】
本発明は材料の入手が容易で、自然環境保全にも寄与する植物であること、及び図１４から明らかなように、実施例１〜６と参考例１〜３はＤＮＪ単独及びＤＭＤＰ単独の約１００分の１に相当する量で、それらに相当する血糖低下作用を示すものであり、従って、食品材料等として使用するのに安全性が高く、使用量を適量に制御し易いものである。
【００５８】
【発明の効果】
上記のように本発明の請求項１の発明は、ツユクサに含まれている１−デオキシノジリマイシンと２，５−ジハイドロオキシメチル３，４−ジハイドロオキシピロリジンを有効成分とすることを特徴とするものであり、ツユクサに含まれている1-deoxynojirimycinと2,5-dihydroxymethyl3,4-dihydroxypyrrolidine（ＤＭＤＰ）によりによりα−グルコシダーゼの活性を阻害することができ、血糖の濃度の上昇を抑えるのに有効であり、しかも天然の植物を用いることによって、人体に対して安全なものであり、また、食事等で日常的に手軽に摂取または飲食して血糖の上昇を抑制することができるものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】α−グルコシダーゼ阻害活性試験のサンプルの調製方法を示す説明図である。
【図２】ＤＮＳ法を示す説明図である。
【図３】オオボウシバナから得られる熱水抽出物の水溶性塩基性画分の成分１、２の調製方法を示す説明図である。
【図４】オオボウシバナから得られる熱水抽出物の水溶性塩基性画分の成分１に関する核磁気共鳴分析の結果を示すグラフである。
【図５】オオボウシバナから得られる熱水抽出物の水溶性塩基性画分の成分２に関する核磁気共鳴分析の結果を示すグラフである。
【図６】ＨＰＬＣ用サンプルの調製方法を示す説明図である。
【図７】ＬＣ／ＭＳによる定量分析の結果を示すグラフである。
【図８】ツユクサから得られる熱水抽出物の水溶性塩基性画分の成分１、２の調製方法を示す説明図である。
【図９】ツユクサから得られる熱水抽出物の水溶性塩基性画分の成分１、２に関する核磁気共鳴分析の結果を示すグラフである。
【図１０】ＨＰＬＣ用サンプルの調製方法を示す説明図である。
【図１１】ＬＣ／ＭＳによる定量分析の結果を示すグラフである。
【図１２】ＤＭＤＰ及びＤＮＪ標準溶液による検量線を示すグラフである。
【図１３】実施例５の調製方法を示す説明図である。
【図１４】実施例及び比較例のスクロース負荷試験の結果を示すグラフである。

Claims

ツユクサに含まれている１−デオキシノジリマイシンと２，５−ジハイドロオキシメチル３，４−ジハイドロオキシピロリジンを有効成分とすることを特徴とする血糖上昇抑制食品。