JP3522335B2 - 皮膚老化防止用化粧料 - Google Patents
皮膚老化防止用化粧料Info
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
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- Cosmetics (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規な皮膚老化防止用化
粧料、さらに詳しくは、抗酸化酵素であるＦｅ型スーパ
ーオキシドディスムターゼを含有し、その酵素活性が安
定かつ効果的に発現され、皮膚の老化を有効に防止する
ことができ、しかも安全性の高い化粧料に関するもので
ある。
粧料、さらに詳しくは、抗酸化酵素であるＦｅ型スーパ
ーオキシドディスムターゼを含有し、その酵素活性が安
定かつ効果的に発現され、皮膚の老化を有効に防止する
ことができ、しかも安全性の高い化粧料に関するもので
ある。
【０００２】
【従来の技術】スーパーオキシドディスムターゼ（Ｓｕ
ｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ、以下ＳＯＤと
略称する）は超酸化物不均化酵素とも呼ばれ、微生物か
らヒトまで、すべての動物が体内に有している酵素で、
活性中心に銅と亜鉛を含む酵素（Ｃｕ／Ｚｎ−ＳＯ
Ｄ）、マンガンを含む酵素（Ｍｎ−ＳＯＤ）及び鉄を含
む酵素（Ｆｅ−ＳＯＤ）の３種が知られている。Ｃｕ／
Ｚｎ−ＳＯＤは主として真核生物に分布し、Ｍｎ−ＳＯ
Ｄ及びＦｅ−ＳＯＤは主として細菌類、放線菌、真菌に
分布している。
ｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ、以下ＳＯＤと
略称する）は超酸化物不均化酵素とも呼ばれ、微生物か
らヒトまで、すべての動物が体内に有している酵素で、
活性中心に銅と亜鉛を含む酵素（Ｃｕ／Ｚｎ−ＳＯ
Ｄ）、マンガンを含む酵素（Ｍｎ−ＳＯＤ）及び鉄を含
む酵素（Ｆｅ−ＳＯＤ）の３種が知られている。Ｃｕ／
Ｚｎ−ＳＯＤは主として真核生物に分布し、Ｍｎ−ＳＯ
Ｄ及びＦｅ−ＳＯＤは主として細菌類、放線菌、真菌に
分布している。
【０００３】このＳＯＤは、スーパーオキシドアニオン
ラジカル（Ｏ2・-）の不均化反応 ２Ｏ2・-＋２Ｈ+→Ｏ2＋Ｈ2Ｏ2 を触媒する酵素、すなわち生体内の活性酸素を過酸化水
素と酸素とに変換する酵素である。該活性酸素は炎症な
どの組織障害や老化をもたらす原因の１つとみられてお
り、したがって、ＳＯＤはこの活性酸素の毒性から生物
を保護すると考えられている。
ラジカル（Ｏ2・-）の不均化反応 ２Ｏ2・-＋２Ｈ+→Ｏ2＋Ｈ2Ｏ2 を触媒する酵素、すなわち生体内の活性酸素を過酸化水
素と酸素とに変換する酵素である。該活性酸素は炎症な
どの組織障害や老化をもたらす原因の１つとみられてお
り、したがって、ＳＯＤはこの活性酸素の毒性から生物
を保護すると考えられている。
【０００４】ＳＯＤはこのような生理活性を有すること
から、最近、抗炎症剤として関節炎やリウマチに有効で
あることが確認されており、またベーチェット病、虚血
性心疾患、膠原病などに対しても、その有効性が期待さ
れている。さらに、皮膚科領域においては、皮膚潰瘍、
ケロイド形成、日光皮膚炎などに対して有効性が示され
ている。従って、臨床面でのＳＯＤの応用研究が積極的
になされている。
から、最近、抗炎症剤として関節炎やリウマチに有効で
あることが確認されており、またベーチェット病、虚血
性心疾患、膠原病などに対しても、その有効性が期待さ
れている。さらに、皮膚科領域においては、皮膚潰瘍、
ケロイド形成、日光皮膚炎などに対して有効性が示され
ている。従って、臨床面でのＳＯＤの応用研究が積極的
になされている。
【０００５】一方、化粧品分野においては、皮膚老化防
止用化粧料の開発研究が盛んに行われており、種々の商
品が上市されている。最近の皮膚科学の研究から、皮膚
の老化は、加齢に伴う保湿機能の低下、紫外線などによ
る外的刺激の蓄積及び皮膚細胞の機能低下によってもた
らされることが知られている。したがって、皮膚老化防
止用化粧料としては、例えば紫外線吸収剤や紫外線反射
・散乱剤、紫外線によるメラニン色素の生成を抑制する
作用をもつアルブチンやコウジ酸、保湿作用をもつヒア
ルロン酸やコラーゲンなどを配合したものが開発されて
いる。
止用化粧料の開発研究が盛んに行われており、種々の商
品が上市されている。最近の皮膚科学の研究から、皮膚
の老化は、加齢に伴う保湿機能の低下、紫外線などによ
る外的刺激の蓄積及び皮膚細胞の機能低下によってもた
らされることが知られている。したがって、皮膚老化防
止用化粧料としては、例えば紫外線吸収剤や紫外線反射
・散乱剤、紫外線によるメラニン色素の生成を抑制する
作用をもつアルブチンやコウジ酸、保湿作用をもつヒア
ルロン酸やコラーゲンなどを配合したものが開発されて
いる。
【０００６】さらに、最近、皮膚の老化の原因の１つと
して、活性酸素が重要な役割を果たすことが見出されて
いる。すなわち、活性酸素により、皮脂膜中のスクワレ
ンが酸化されて可酸化脂質となり、これを放置すると、
表皮や真皮の細胞膜の脂質も酸化されて老化をもたらす
ことが確認されている。
して、活性酸素が重要な役割を果たすことが見出されて
いる。すなわち、活性酸素により、皮脂膜中のスクワレ
ンが酸化されて可酸化脂質となり、これを放置すると、
表皮や真皮の細胞膜の脂質も酸化されて老化をもたらす
ことが確認されている。
【０００７】また、皮膚表面が様々な生物的、化学的、
物理的ストレスを受けた場合、例えば紫外線が照射され
た場合、皮膚表面で通常よりも多い量の活性酸素が発生
したり、活性酸素を除去する機能が低下することなども
見出されている。したがって、活性酸素を分解するＳＯ
Ｄは、皮膚老化防止用化粧料の成分として有効であるこ
とが期待できる。
物理的ストレスを受けた場合、例えば紫外線が照射され
た場合、皮膚表面で通常よりも多い量の活性酸素が発生
したり、活性酸素を除去する機能が低下することなども
見出されている。したがって、活性酸素を分解するＳＯ
Ｄは、皮膚老化防止用化粧料の成分として有効であるこ
とが期待できる。
【０００８】化粧料の成分としてＳＯＤを用いる場合、
ＳＯＤが皮膚に対して親和性や浸透性を有し、その活性
が効果的に発現され、かつ安定であり、しかもＳＯＤが
容易に生産でき、安価でかつ安定供給しうることが重要
である。
ＳＯＤが皮膚に対して親和性や浸透性を有し、その活性
が効果的に発現され、かつ安定であり、しかもＳＯＤが
容易に生産でき、安価でかつ安定供給しうることが重要
である。
【０００９】通常のＳＯＤは、生体内外での半減期が短
く、かつ組織への親和性や浸透性などに問題があるた
め、その対策として、レシチンを用いたリポゾーム化や
他の物質との結合などの化学修飾、あるいは包括性物質
による包括化などの方法がとられてきた。また、ＳＯＤ
の生産については、従来ウシの血球から抽出精製されて
いたが、原料に制限があるため、近年、遺伝子組換えに
よる大腸菌からのヒトＳＯＤの生産が試みられている。
く、かつ組織への親和性や浸透性などに問題があるた
め、その対策として、レシチンを用いたリポゾーム化や
他の物質との結合などの化学修飾、あるいは包括性物質
による包括化などの方法がとられてきた。また、ＳＯＤ
の生産については、従来ウシの血球から抽出精製されて
いたが、原料に制限があるため、近年、遺伝子組換えに
よる大腸菌からのヒトＳＯＤの生産が試みられている。
【００１０】しかしながら、上記の化学修飾や包括化に
よるＳＯＤの安定化及び親和性や浸透性を向上させる方
法は、操作が煩雑であってコスト高となり、また、遺伝
子組換えによるヒトＳＯＤは、極めて煩雑な操作を必要
とするため高価なものとなり、化粧料の成分としては実
用的でない。
よるＳＯＤの安定化及び親和性や浸透性を向上させる方
法は、操作が煩雑であってコスト高となり、また、遺伝
子組換えによるヒトＳＯＤは、極めて煩雑な操作を必要
とするため高価なものとなり、化粧料の成分としては実
用的でない。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
事情のもとで、安価で安定供給可能なＳＯＤを含有し、
その酵素活性が安定でかつ効果的に発現され、皮膚の老
化を有効に防止することができ、しかも安全性の高い新
規な皮膚老化防止用化粧料を提供することを目的として
なされたものである。
事情のもとで、安価で安定供給可能なＳＯＤを含有し、
その酵素活性が安定でかつ効果的に発現され、皮膚の老
化を有効に防止することができ、しかも安全性の高い新
規な皮膚老化防止用化粧料を提供することを目的として
なされたものである。
【００１２】
【課題を解決するための手段】本発明者は、ＳＯＤ含有
皮膚老化防止用化粧料について鋭意研究を重ねた結果、
細菌由来のＦｅ−ＳＯＤは、細菌の培養による大量生産
が可能であり、安定供給しうること、そしてこのＦｅ−
ＳＯＤを、特定組成のクリーム基剤に所定の割合で配合
したものは、その酵素活性が安定で、かつ皮膚に対する
ＳＯＤの親和性や浸透性が向上し、活性が効果的に発現
され、皮膚の老化を有効に防止することができ、しかも
安全性が高いことを見出し、この知見に基づいて本発明
を完成するに至った。
皮膚老化防止用化粧料について鋭意研究を重ねた結果、
細菌由来のＦｅ−ＳＯＤは、細菌の培養による大量生産
が可能であり、安定供給しうること、そしてこのＦｅ−
ＳＯＤを、特定組成のクリーム基剤に所定の割合で配合
したものは、その酵素活性が安定で、かつ皮膚に対する
ＳＯＤの親和性や浸透性が向上し、活性が効果的に発現
され、皮膚の老化を有効に防止することができ、しかも
安全性が高いことを見出し、この知見に基づいて本発明
を完成するに至った。
【００１３】すなわち、本発明は、ヘキサデシルアルコ
ール１〜１０重量％、シリコーン油２０〜４５重量％、
グリセリン１５〜４０重量％、リン酸塩０．３〜７．０
重量％及びカルボキシメチルセルロース５〜２５重量％
を必須成分として含有するクリーム基剤１００重量部に
対し、細菌より抽出したＦｅ型スーパーオキシドディス
ムターゼを、タンパク質量として０．００５〜０．０５
重量部の割合で配合したことを特徴とする皮膚老化防止
用化粧料を提供するものである。
ール１〜１０重量％、シリコーン油２０〜４５重量％、
グリセリン１５〜４０重量％、リン酸塩０．３〜７．０
重量％及びカルボキシメチルセルロース５〜２５重量％
を必須成分として含有するクリーム基剤１００重量部に
対し、細菌より抽出したＦｅ型スーパーオキシドディス
ムターゼを、タンパク質量として０．００５〜０．０５
重量部の割合で配合したことを特徴とする皮膚老化防止
用化粧料を提供するものである。
【００１４】本発明の皮膚老化防止用化粧料に用いられ
るＳＯＤは、細菌の培養菌体より抽出・精製して得られ
たＦｅ−ＳＯＤである。この細菌としては、例えばシュ
ウドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、バチルス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ミクロコッカス（Ｍｉｃｒｏ
ｃｏｃｃｕｓ）属、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａ
ｓ）属、アセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）
属、フラボバクター（Ｆｌａｂｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）
属、グルコノバクター（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ）
属、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）
属、リゾビュウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）属、レジオネ
ラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）属などのグラム陽性菌やグ
ラム陰性菌を挙げることができる。
るＳＯＤは、細菌の培養菌体より抽出・精製して得られ
たＦｅ−ＳＯＤである。この細菌としては、例えばシュ
ウドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、バチルス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ミクロコッカス（Ｍｉｃｒｏ
ｃｏｃｃｕｓ）属、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａ
ｓ）属、アセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）
属、フラボバクター（Ｆｌａｂｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）
属、グルコノバクター（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ）
属、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）
属、リゾビュウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）属、レジオネ
ラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）属などのグラム陽性菌やグ
ラム陰性菌を挙げることができる。
【００１５】これらの細菌の具体例を示すと、シュウド
モナス属細菌としては、シュウドモナス・シリンガエ
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ，ＩＦＯ
３５０８）、シュウドモナス・ラディオラ（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ ｒａｄｉｏｒａ，ＩＡＭ １２０９
８）、シュウドモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，ＩＡＭ １２３７）
など、バチルス属細菌としては、バチルス・アミロリケ
ファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕ
ｅｆａｃｉｅｎｓ，ＩＡＭ １５２３）、バチルス・ス
テアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒ
ｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ，ＩＡＭ １１００２な
ど、ミクロコッカス属細菌としては、ミクロコッカス・
カンジダス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｎｄｉｄｕ
ｓ，ＩＡＭ １２００４）、ミクロコッカス・コングロ
メラタス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｃｏｎｇｌｏｍｅ
ｒａｔｕｓ，ＩＡＭ １４５９）など、アエロモナス属
細菌としては、アエロモナス・リケファシエンス（Ａｅ
ｒｏｍｏｎａｓ ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ，ＩＡＭ
１２３３５）、アエロモナス・シゲロイデス（Ａｅｒｏ
ｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ，ＡＴＣＣ １
４０２９）など、アセトバクター属細菌としては、アセ
トバクター・アセチゲナス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ
ａｃｅｔｉｇｅｎｕｓ，ＩＦＯ ３２７７）、アセトバ
クター・オーランタス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｕ
ｒａｎｔｕｓ，ＩＦＯ ３２４７）など、フラボバクタ
ー属細菌としてはフラボバクテリウム・アクアチレ（Ｆ
ｌａｂｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｑｕａｔｉｌｅ，ＩＡ
Ｍ １２３１６）など、グルコノバクター属細菌として
は、グルコノバクター・ズブオキシダンス（Ｇｌｕｃｏ
ｎｏｂａｃｔｅｒ ｓｕｂｏｘｙｄａｎｓ，ＩＡＭ １
２３０６）など、ラクトバチルス属細菌としては、ラク
トバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ
ｂｒｅｖｉｓ，ＩＡＭ１０８２）、ラクトバチルス・カ
ゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ，ＩＡ
Ｍ １０４５）など、リゾビュウム属細菌としては、リ
ゾビュウム・メリオッテ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌ
ｉｌｏｔｉ，ＩＡＭ １２０３５）、リゾビュウム・ト
リフォリ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｔｒｉｆｏｌｌｉ，Ａ
ＨＵ １１３４）など、レジオネラ属細菌としては、レ
ジオネラ・ニュウモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐ
ｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ，ＡＴＣＣ ３３１５４）、レジ
オネラ・ニュウモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎ
ｅｕｍｏｐｈｉｌａ，ＡＴＣＣ ４３２８３）などがあ
る。これらの菌は、国内及び国外のタイプカルチャーコ
レクションから容易に入手することができる。
モナス属細菌としては、シュウドモナス・シリンガエ
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ，ＩＦＯ
３５０８）、シュウドモナス・ラディオラ（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ ｒａｄｉｏｒａ，ＩＡＭ １２０９
８）、シュウドモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，ＩＡＭ １２３７）
など、バチルス属細菌としては、バチルス・アミロリケ
ファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕ
ｅｆａｃｉｅｎｓ，ＩＡＭ １５２３）、バチルス・ス
テアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒ
ｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ，ＩＡＭ １１００２な
ど、ミクロコッカス属細菌としては、ミクロコッカス・
カンジダス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｎｄｉｄｕ
ｓ，ＩＡＭ １２００４）、ミクロコッカス・コングロ
メラタス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｃｏｎｇｌｏｍｅ
ｒａｔｕｓ，ＩＡＭ １４５９）など、アエロモナス属
細菌としては、アエロモナス・リケファシエンス（Ａｅ
ｒｏｍｏｎａｓ ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ，ＩＡＭ
１２３３５）、アエロモナス・シゲロイデス（Ａｅｒｏ
ｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ，ＡＴＣＣ １
４０２９）など、アセトバクター属細菌としては、アセ
トバクター・アセチゲナス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ
ａｃｅｔｉｇｅｎｕｓ，ＩＦＯ ３２７７）、アセトバ
クター・オーランタス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｕ
ｒａｎｔｕｓ，ＩＦＯ ３２４７）など、フラボバクタ
ー属細菌としてはフラボバクテリウム・アクアチレ（Ｆ
ｌａｂｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｑｕａｔｉｌｅ，ＩＡ
Ｍ １２３１６）など、グルコノバクター属細菌として
は、グルコノバクター・ズブオキシダンス（Ｇｌｕｃｏ
ｎｏｂａｃｔｅｒ ｓｕｂｏｘｙｄａｎｓ，ＩＡＭ １
２３０６）など、ラクトバチルス属細菌としては、ラク
トバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ
ｂｒｅｖｉｓ，ＩＡＭ１０８２）、ラクトバチルス・カ
ゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ，ＩＡ
Ｍ １０４５）など、リゾビュウム属細菌としては、リ
ゾビュウム・メリオッテ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌ
ｉｌｏｔｉ，ＩＡＭ １２０３５）、リゾビュウム・ト
リフォリ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｔｒｉｆｏｌｌｉ，Ａ
ＨＵ １１３４）など、レジオネラ属細菌としては、レ
ジオネラ・ニュウモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐ
ｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ，ＡＴＣＣ ３３１５４）、レジ
オネラ・ニュウモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎ
ｅｕｍｏｐｈｉｌａ，ＡＴＣＣ ４３２８３）などがあ
る。これらの菌は、国内及び国外のタイプカルチャーコ
レクションから容易に入手することができる。
【００１６】これらの細菌の培養法については特に制限
はなく、通常使用されている方法を用いることができる
が、高酸素分圧下での液体培養法、例えば、液体培地と
して、トリプトケース、ブラインハートインフジョン、
ニュートリエント、イーストエキストラクト液体培地な
どを用い、ｐＨ７前後、温度３０〜３７℃程度の条件
で、培地中に無菌酸素を吹き込み、高酸素分圧下で、前
記細菌の培養を行う方法が好ましい。
はなく、通常使用されている方法を用いることができる
が、高酸素分圧下での液体培養法、例えば、液体培地と
して、トリプトケース、ブラインハートインフジョン、
ニュートリエント、イーストエキストラクト液体培地な
どを用い、ｐＨ７前後、温度３０〜３７℃程度の条件
で、培地中に無菌酸素を吹き込み、高酸素分圧下で、前
記細菌の培養を行う方法が好ましい。
【００１７】次に、このようにして培養された菌体か
ら、Ｆｅ−ＳＯＤを抽出・精製する。この抽出・精製法
については特に制限はなく、従来細菌の細胞内酵素を抽
出・精製するのに用いられている様々な方法を用いるこ
とができる。
ら、Ｆｅ−ＳＯＤを抽出・精製する。この抽出・精製法
については特に制限はなく、従来細菌の細胞内酵素を抽
出・精製するのに用いられている様々な方法を用いるこ
とができる。
【００１８】例えば、培養菌体を遠心分離処理により集
菌し、ドライアイス‐アセトンなどを用いる通常の方法
により凍結菌体を得たのち、適当な緩衝液中で融解後、
ホモジナイザーで細胞を粉砕し、次いで遠心分離処理を
行い、粗酵素液（上澄液）を得る。次に、この粗酵素液
に硫酸アンモニウムなどを添加して塩析を行ったのち、
その沈殿物を適当な緩衝液にて透析を行い、さらにこの
透析液を適当に濃縮し、次いでカラムクロマトグラフィ
ーなどによりＳＯＤ活性画分を得る。このＳＯＤ活性画
分は、適当な緩衝液にて、再度透析したのち濃縮し、さ
らに凍結することにより、精製ＳＯＤが得られる。この
精製ＳＯＤのタンパク質量は、例えばロリー法による２
８０ｎｍでの吸光度から求めることができる。このよう
にして得られたＳＯＤは、活性中心に鉄を含むＦｅ−Ｓ
ＯＤである。
菌し、ドライアイス‐アセトンなどを用いる通常の方法
により凍結菌体を得たのち、適当な緩衝液中で融解後、
ホモジナイザーで細胞を粉砕し、次いで遠心分離処理を
行い、粗酵素液（上澄液）を得る。次に、この粗酵素液
に硫酸アンモニウムなどを添加して塩析を行ったのち、
その沈殿物を適当な緩衝液にて透析を行い、さらにこの
透析液を適当に濃縮し、次いでカラムクロマトグラフィ
ーなどによりＳＯＤ活性画分を得る。このＳＯＤ活性画
分は、適当な緩衝液にて、再度透析したのち濃縮し、さ
らに凍結することにより、精製ＳＯＤが得られる。この
精製ＳＯＤのタンパク質量は、例えばロリー法による２
８０ｎｍでの吸光度から求めることができる。このよう
にして得られたＳＯＤは、活性中心に鉄を含むＦｅ−Ｓ
ＯＤである。
【００１９】本発明の皮膚老化防止用化粧料においては
クリーム基剤１００重量部に対し、前記ＳＯＤを、タン
パク質量として０．００５〜０．０５重量部、好ましく
は０．０１〜０．０３重量部の割合で配合することが必
要である。この配合量が０．００５重量部未満では皮膚
の老化防止効果が十分に発揮されないし、０．０５重量
部を超えるとその配合量の割には効果の向上があまりみ
られず、むしろ経済的に不利となる。
クリーム基剤１００重量部に対し、前記ＳＯＤを、タン
パク質量として０．００５〜０．０５重量部、好ましく
は０．０１〜０．０３重量部の割合で配合することが必
要である。この配合量が０．００５重量部未満では皮膚
の老化防止効果が十分に発揮されないし、０．０５重量
部を超えるとその配合量の割には効果の向上があまりみ
られず、むしろ経済的に不利となる。
【００２０】本発明の皮膚老化防止用化粧料に用いられ
るクリーム基剤は、ヘキサデシルアルコール１〜１０重
量％、好ましくは２〜８重量％、シリコーン油２０〜４
５重量％、好ましくは２５〜４０重量％、グリセリン１
５〜４０重量％、好ましくは２０〜３５重量％、リン酸
塩０．３〜７．０重量％、好ましくは０．７〜５．０重
量％及びカルボキシメチルセルロース５〜２５重量％、
好ましくは１０〜２０重量％を必須成分として含有する
ものである。このクリーム基剤における各配合成分の含
有量が前記範囲を逸脱すると、Ｆｅ−ＳＯＤの安定性及
び皮膚に対する親和性や浸透性に問題が生じ、本発明の
効果が十分に発揮されない。
るクリーム基剤は、ヘキサデシルアルコール１〜１０重
量％、好ましくは２〜８重量％、シリコーン油２０〜４
５重量％、好ましくは２５〜４０重量％、グリセリン１
５〜４０重量％、好ましくは２０〜３５重量％、リン酸
塩０．３〜７．０重量％、好ましくは０．７〜５．０重
量％及びカルボキシメチルセルロース５〜２５重量％、
好ましくは１０〜２０重量％を必須成分として含有する
ものである。このクリーム基剤における各配合成分の含
有量が前記範囲を逸脱すると、Ｆｅ−ＳＯＤの安定性及
び皮膚に対する親和性や浸透性に問題が生じ、本発明の
効果が十分に発揮されない。
【００２１】本発明の皮膚老化防止用化粧料において
は、所望により他の皮膚老化防止効果を有する成分、例
えば紫外線吸収剤、紫外線反射・散乱剤、メラニン色素
生成抑制剤、保湿剤などを配合することができる。
は、所望により他の皮膚老化防止効果を有する成分、例
えば紫外線吸収剤、紫外線反射・散乱剤、メラニン色素
生成抑制剤、保湿剤などを配合することができる。
【００２２】紫外線吸収剤としては、例えばベンゾフェ
ノン系化合物、ベンゾトリアゾール系化合物、ケイ皮酸
誘導体などが挙げられ、紫外線反射・散乱剤としては、
例えば酸化チタン、酸化亜鉛、カオリン、炭酸カルシウ
ム、タルクなどが挙げられる。
ノン系化合物、ベンゾトリアゾール系化合物、ケイ皮酸
誘導体などが挙げられ、紫外線反射・散乱剤としては、
例えば酸化チタン、酸化亜鉛、カオリン、炭酸カルシウ
ム、タルクなどが挙げられる。
【００２３】また、メラニン生成抑制剤としては、例え
ばアルブチン、コウジ酸などが挙げられ、さらに、メラ
ニン色素がシミやソバカスに変わるのを抑制する効果が
あるサイトプロンなども配合することができる。
ばアルブチン、コウジ酸などが挙げられ、さらに、メラ
ニン色素がシミやソバカスに変わるのを抑制する効果が
あるサイトプロンなども配合することができる。
【００２４】一方、保湿剤としては、例えばアミノ酸、
ピロリドンカルボン酸、乳酸、尿素などのＮＭＦ（自然
保湿因子）、さらにはヒアルロン酸、コンドロイチン硫
酸、コラーゲン、リン脂質、スフィンゴ脂質、キチン・
キトサンなどが挙げられる。
ピロリドンカルボン酸、乳酸、尿素などのＮＭＦ（自然
保湿因子）、さらにはヒアルロン酸、コンドロイチン硫
酸、コラーゲン、リン脂質、スフィンゴ脂質、キチン・
キトサンなどが挙げられる。
【００２５】さらに、本発明の皮膚老化防止用化粧料に
は、本発明の目的がそこなわれない範囲で、前記成分以
外に、クリーム状皮膚用化粧料に通常用いられる公知の
成分、例えば油分、乳化剤、多価アルコール、防腐防菌
剤、増粘剤、酸化防止剤、香料、ビタミン類、アミノ酸
類、水などを配合することができる。
は、本発明の目的がそこなわれない範囲で、前記成分以
外に、クリーム状皮膚用化粧料に通常用いられる公知の
成分、例えば油分、乳化剤、多価アルコール、防腐防菌
剤、増粘剤、酸化防止剤、香料、ビタミン類、アミノ酸
類、水などを配合することができる。
【００２６】前記油分としては、例えばヒマシ油、オリ
ーブ油、ホホバ油、椿油などの液体油脂、硬化ヒマシ油
などの固体油脂、ラノリン、鯨ロウ、蜜ロウ、カルナウ
バロウ、キャンデリラロウなどのロウ類、スクワラン、
ワセリン、流動パラフィン、セリシン、パラフィンなど
の炭化水素類などが挙げられる。
ーブ油、ホホバ油、椿油などの液体油脂、硬化ヒマシ油
などの固体油脂、ラノリン、鯨ロウ、蜜ロウ、カルナウ
バロウ、キャンデリラロウなどのロウ類、スクワラン、
ワセリン、流動パラフィン、セリシン、パラフィンなど
の炭化水素類などが挙げられる。
【００２７】乳化剤としては、グリセリン脂肪酸エステ
ル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール
脂肪酸エステル、大豆リン脂質などが挙げられ、多価ア
ルコールとしては、例えばポリグリセリン、トリメチロ
ールプロパン、ペンタエリスリトール、ジペンタエリス
リトール、エチレングリコール、プロピレングリコー
ル、ポリプロピレングリコール、１，３‐ブチレングリ
コール、１，４‐ブチレングリコール、さらにはグルコ
ース、マルトース、マンノース、ラクトース、Ｄ‐グル
クロン酸、ウロン酸、サッカロース、Ｄ‐マンニット、
Ｄ‐ソルビット、ソルビタン、グルコノラクトン、セル
ロース、デンプン、グルコースリン酸エステルなどの単
糖類、多糖類及びこれらの誘導体などが挙げられる。
ル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール
脂肪酸エステル、大豆リン脂質などが挙げられ、多価ア
ルコールとしては、例えばポリグリセリン、トリメチロ
ールプロパン、ペンタエリスリトール、ジペンタエリス
リトール、エチレングリコール、プロピレングリコー
ル、ポリプロピレングリコール、１，３‐ブチレングリ
コール、１，４‐ブチレングリコール、さらにはグルコ
ース、マルトース、マンノース、ラクトース、Ｄ‐グル
クロン酸、ウロン酸、サッカロース、Ｄ‐マンニット、
Ｄ‐ソルビット、ソルビタン、グルコノラクトン、セル
ロース、デンプン、グルコースリン酸エステルなどの単
糖類、多糖類及びこれらの誘導体などが挙げられる。
【００２８】防腐防菌剤としては、例えばｐ‐ヒドロキ
シ安息香酸メチル、ｐ‐ヒドロキシ安息香酸エチル、デ
ヒドロ酢酸、サリチル酸、安息香酸、ソルビン酸、塩化
ベンザルコニウムなどが挙げられ、増粘剤としては、例
えばアルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、ケイ酸ア
ルミニウム、マロメロ種子抽出物、トラガントガム、デ
ンプンなどの天然高分子物質、メチルセルロース、ヒド
ロキシエチルセルロース、可溶性デンプン、カチオン化
セルロースなどの半合成高分子物質、カルボキシビニル
ポリマー、ポリビニルアルコールなどの合成高分子物質
などが挙げられる。
シ安息香酸メチル、ｐ‐ヒドロキシ安息香酸エチル、デ
ヒドロ酢酸、サリチル酸、安息香酸、ソルビン酸、塩化
ベンザルコニウムなどが挙げられ、増粘剤としては、例
えばアルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、ケイ酸ア
ルミニウム、マロメロ種子抽出物、トラガントガム、デ
ンプンなどの天然高分子物質、メチルセルロース、ヒド
ロキシエチルセルロース、可溶性デンプン、カチオン化
セルロースなどの半合成高分子物質、カルボキシビニル
ポリマー、ポリビニルアルコールなどの合成高分子物質
などが挙げられる。
【００２９】また、酸化防止剤としては、例えばジブチ
ルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、
没食子酸プロピル、アスコルビン酸などが挙げられ、香
料としては、例えば香精などの植物性天然香料、動物性
天然香料、合成香料などが挙げられる。
ルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、
没食子酸プロピル、アスコルビン酸などが挙げられ、香
料としては、例えば香精などの植物性天然香料、動物性
天然香料、合成香料などが挙げられる。
【００３０】ビタミン類としては、例えばビタミンＡ、
ビタミンＢ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビ
タミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＰ、ビタミンＵ、カル
ニチン、フェルラ酸、α‐オリザノール、α‐リポ酸、
オロット酸及びその誘導体などが、アミノ酸類として
は、例えばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イ
ソロイシン、セリン、トレオニン、フェニルアラニン、
チロシン、トリプトファン、シスチン、システイン、メ
チオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギ
ン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジン、リジン
及びこれらの誘導体などが挙げられる。
ビタミンＢ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビ
タミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＰ、ビタミンＵ、カル
ニチン、フェルラ酸、α‐オリザノール、α‐リポ酸、
オロット酸及びその誘導体などが、アミノ酸類として
は、例えばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イ
ソロイシン、セリン、トレオニン、フェニルアラニン、
チロシン、トリプトファン、シスチン、システイン、メ
チオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギ
ン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジン、リジン
及びこれらの誘導体などが挙げられる。
【００３１】
【発明の効果】本発明の皮膚老化防止用化粧料は、特定
組成のクリーム基剤に、細菌由来のＦｅ−ＳＯＤを配合
したものであって、このＦｅ−ＳＯＤの活性酸素を分解
する作用により、活性酸素による皮膚の老化を防止する
ことができる。また、この化粧料においては、配合され
たＦｅ−ＳＯＤの活性が安定で、かつＦｅ−ＳＯＤの皮
膚に対する親和性や浸透性が良好であるので、その活性
が効果的に発現され、しかも安全性についてもなんら問
題がない。
組成のクリーム基剤に、細菌由来のＦｅ−ＳＯＤを配合
したものであって、このＦｅ−ＳＯＤの活性酸素を分解
する作用により、活性酸素による皮膚の老化を防止する
ことができる。また、この化粧料においては、配合され
たＦｅ−ＳＯＤの活性が安定で、かつＦｅ−ＳＯＤの皮
膚に対する親和性や浸透性が良好であるので、その活性
が効果的に発現され、しかも安全性についてもなんら問
題がない。
【００３２】さらに、配合されるＦｅ−ＳＯＤは、細菌
由来のものであるから、大量生産が可能で、安価なもの
を安定供給することができる。
由来のものであるから、大量生産が可能で、安価なもの
を安定供給することができる。
【００３３】
【実施例】次に、実施例により本発明をさらに詳細に説
明する。
明する。
【００３４】参考例１
トリプトケース、ブラインハートインフジョン、ニュー
トリエント又はイーストエキストラクト液体培地（いず
れもシグマ社製）を用い、表１に示す細菌を、ｐＨ７．
０、温度３０〜３７℃の条件で４〜１８時間培養した。
なお、この培養は、酸素供給装置と溶存酸素測定装置
（東京理化社製、Ｍ−１００型）を用い、０．２０〜
６．５０Ｍ×１０6の無菌酸素をコンスタントに培地中
に吹き込み、高酸素分圧下で行った。
トリエント又はイーストエキストラクト液体培地（いず
れもシグマ社製）を用い、表１に示す細菌を、ｐＨ７．
０、温度３０〜３７℃の条件で４〜１８時間培養した。
なお、この培養は、酸素供給装置と溶存酸素測定装置
（東京理化社製、Ｍ−１００型）を用い、０．２０〜
６．５０Ｍ×１０6の無菌酸素をコンスタントに培地中
に吹き込み、高酸素分圧下で行った。
【００３５】次に、培養した菌体を４，０００×ｇの遠
心分離処理により集菌したのち、ドライアイス‐アセト
ンを用いて凍結させ、次いでこの凍結菌体１０ｇを、
０．１ＭのＥＤＴＡを含む４０ｍＭのリン酸カリウム緩
衝液（ｐＨ７．５）５０ｍｌ中で融解し、ブランホモジ
ナイザーにて、４℃、５ＫＣの条件で１０分間細胞の粉
砕処理を行ったのち、１２，０００Ｇにて遠心分離処理
を行い、粗酵素として上澄液を得た。この粗酵素に対
し、（ＮＨ4）2ＳＯ4を７０重量％添加して塩析処理し
たのち、１４，０００Ｇにて遠心分離処理し、得られた
沈殿物を０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．８）
で溶解し、再度１ＭＮａＯＨ水溶液でｐＨ７．８に調整
後、０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．８）に
て、一昼夜４℃で透析した。
心分離処理により集菌したのち、ドライアイス‐アセト
ンを用いて凍結させ、次いでこの凍結菌体１０ｇを、
０．１ＭのＥＤＴＡを含む４０ｍＭのリン酸カリウム緩
衝液（ｐＨ７．５）５０ｍｌ中で融解し、ブランホモジ
ナイザーにて、４℃、５ＫＣの条件で１０分間細胞の粉
砕処理を行ったのち、１２，０００Ｇにて遠心分離処理
を行い、粗酵素として上澄液を得た。この粗酵素に対
し、（ＮＨ4）2ＳＯ4を７０重量％添加して塩析処理し
たのち、１４，０００Ｇにて遠心分離処理し、得られた
沈殿物を０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．８）
で溶解し、再度１ＭＮａＯＨ水溶液でｐＨ７．８に調整
後、０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．８）に
て、一昼夜４℃で透析した。
【００３６】この透析内液を、アミコン濃縮器にて約７
０倍に濃縮したのち、ＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ
−５０樹脂を用いたカラムクロマトグラフィー（径７ｃ
ｍ、高さ６０ｃｍ）にて精製した。なお、この樹脂は予
め５ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．８）で洗浄
し、また溶出は０．００１５Ｍリン酸カリウム緩衝液
（ｐＨ７．８）にて行い、Ｆｅ−ＳＯＤ活性画分を回収
した。
０倍に濃縮したのち、ＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ
−５０樹脂を用いたカラムクロマトグラフィー（径７ｃ
ｍ、高さ６０ｃｍ）にて精製した。なお、この樹脂は予
め５ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．８）で洗浄
し、また溶出は０．００１５Ｍリン酸カリウム緩衝液
（ｐＨ７．８）にて行い、Ｆｅ−ＳＯＤ活性画分を回収
した。
【００３７】次いで、このＦｅ−ＳＯＤ活性画分を、リ
ン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．８）にて透析したのち、
アミコン濃縮器により濃縮後、この溶液を凍結させて精
製Ｆｅ−ＳＯＤとした。この精製Ｆｅ−ＳＯＤのタンパ
ク質量を、ロリー法による２８０ｎｍでの吸光度から測
定し、ＳＯＤ活性値（単位／ｍｇ）を求めた。結果を表
１に示す。なお、表中のＦｅ−ＳＯＤのアポタイプは酵
素阻害法により求めたものであり、酸素分圧は培地中の
溶存酸素量で示したものである。
ン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．８）にて透析したのち、
アミコン濃縮器により濃縮後、この溶液を凍結させて精
製Ｆｅ−ＳＯＤとした。この精製Ｆｅ−ＳＯＤのタンパ
ク質量を、ロリー法による２８０ｎｍでの吸光度から測
定し、ＳＯＤ活性値（単位／ｍｇ）を求めた。結果を表
１に示す。なお、表中のＦｅ−ＳＯＤのアポタイプは酵
素阻害法により求めたものであり、酸素分圧は培地中の
溶存酸素量で示したものである。
【００３８】
【表１】
【００３９】参考例２
表２に示す細菌を用い、参考例１と同様にしてＦｅ−Ｓ
ＯＤを調製し、そのＳＯＤ活性値を求めた。その結果を
表２に示す。
ＯＤを調製し、そのＳＯＤ活性値を求めた。その結果を
表２に示す。
【００４０】
【表２】
【００４１】実施例１
ヘキサデシルアルコール（シグマ社製）５重量％、シリ
コーン油（ナカライテスク社製、ＫＦ−９６）３５重量
％、グリセリン（和光純薬社製）３０重量％、リン酸ナ
トリウム無水物（和光純薬社製）３重量％、カルボキシ
メチルセルロース（和光純薬社製）１７重量％、ステア
リン酸グリセリン（和光純薬社製）０．２重量％、ｐ‐
ヒドロキシ安息香酸メチル（和光純薬社製）０．００５
重量％、香精（東京化成社製）０．００３重量％及び蒸
留水残部を混合し、撹拌機（日本化学機器社製）を用い
て、５分間十分に撹拌してクリーム基剤を調製した。
コーン油（ナカライテスク社製、ＫＦ−９６）３５重量
％、グリセリン（和光純薬社製）３０重量％、リン酸ナ
トリウム無水物（和光純薬社製）３重量％、カルボキシ
メチルセルロース（和光純薬社製）１７重量％、ステア
リン酸グリセリン（和光純薬社製）０．２重量％、ｐ‐
ヒドロキシ安息香酸メチル（和光純薬社製）０．００５
重量％、香精（東京化成社製）０．００３重量％及び蒸
留水残部を混合し、撹拌機（日本化学機器社製）を用い
て、５分間十分に撹拌してクリーム基剤を調製した。
【００４２】次いで、このクリーム基剤１ｇに、参考例
２で得られたミクロコッカス・カンジダス（ＩＡＭ １
２００４）由来のＦｅ−ＳＯＤ（活性値９．３単位／ｍ
ｇ）２００μｇを添加し、皮膚老化防止用化粧料を調製
した。
２で得られたミクロコッカス・カンジダス（ＩＡＭ １
２００４）由来のＦｅ−ＳＯＤ（活性値９．３単位／ｍ
ｇ）２００μｇを添加し、皮膚老化防止用化粧料を調製
した。
【００４３】次に、前記化粧料中のＦｅ−ＳＯＤ及びこ
のＦｅ−ＳＯＤ単独について、培養ヒト表皮細胞、ヒト
リンパ球、ヒト好中球及びヒト内皮細胞に対する生体外
での親和性を次に示す方法により求めた。
のＦｅ−ＳＯＤ単独について、培養ヒト表皮細胞、ヒト
リンパ球、ヒト好中球及びヒト内皮細胞に対する生体外
での親和性を次に示す方法により求めた。
【００４４】すなわち、前記各細胞を１０5〜１０7濃度
でＲＰＭＩ １６４０培地中に懸濁し、この浮遊液に、
125Ｉで放射性ラベル化した125Ｉ−Ｆｅ−ＳＯＤを含む
化粧料及び125Ｉ−Ｆｅ−ＳＯＤ単独をそれぞれ添加
し、３７℃で４時間インキュベート後、細胞と結合して
いる放射活性を測定し、添加前の化粧料及びＦｅ−ＳＯ
Ｄ単独の放射活性に対する百分率をそれぞれ求め、親和
性を評価した。この値が高いほど、親和性が良好であ
る。
でＲＰＭＩ １６４０培地中に懸濁し、この浮遊液に、
125Ｉで放射性ラベル化した125Ｉ−Ｆｅ−ＳＯＤを含む
化粧料及び125Ｉ−Ｆｅ−ＳＯＤ単独をそれぞれ添加
し、３７℃で４時間インキュベート後、細胞と結合して
いる放射活性を測定し、添加前の化粧料及びＦｅ−ＳＯ
Ｄ単独の放射活性に対する百分率をそれぞれ求め、親和
性を評価した。この値が高いほど、親和性が良好であ
る。
【００４５】なお、培養ヒト表皮細胞については、熱傷
患者の正常皮膚を無菌的に１ｃｍ2採取し、この組織を
カナマイシン添加生理食塩水で２回洗浄したのち、これ
にトリプシン及びコラゲナーゼ（いずれも生化学工業社
製）を加えＣＯ2インキュベーター内で３７℃で３０分
間消化した。この組織を、スポンジ状シートにコラーゲ
ン（ＩＶ型コラーゲン、生化学工業社製）をコーティン
グしたものに重ね、２０重量％ウシ胎児血清添加培地を
用いてＣＯ2培養したものを用いた。また、ヒトリンパ
球、ヒト好中球及びヒト内皮細胞については、常法に従
って、パラホルムアルデヒドで固定したプラスチック・
ポリプレンチューブで遠心処理後、塩化アンモニウム処
理して各細胞を分画し、それぞれ回収したものを用い
た。結果を表３に示す。なお、表中の±とともに付した
数値は３回の実験の標準偏差値である
患者の正常皮膚を無菌的に１ｃｍ2採取し、この組織を
カナマイシン添加生理食塩水で２回洗浄したのち、これ
にトリプシン及びコラゲナーゼ（いずれも生化学工業社
製）を加えＣＯ2インキュベーター内で３７℃で３０分
間消化した。この組織を、スポンジ状シートにコラーゲ
ン（ＩＶ型コラーゲン、生化学工業社製）をコーティン
グしたものに重ね、２０重量％ウシ胎児血清添加培地を
用いてＣＯ2培養したものを用いた。また、ヒトリンパ
球、ヒト好中球及びヒト内皮細胞については、常法に従
って、パラホルムアルデヒドで固定したプラスチック・
ポリプレンチューブで遠心処理後、塩化アンモニウム処
理して各細胞を分画し、それぞれ回収したものを用い
た。結果を表３に示す。なお、表中の±とともに付した
数値は３回の実験の標準偏差値である
【００４６】
【表３】
【００４７】表３から分るように、本発明化粧料中のＦ
ｅ−ＳＯＤは、Ｆｅ−ＳＯＤ単独のものに比べて各細胞
に対する親和性が優れている。
ｅ−ＳＯＤは、Ｆｅ−ＳＯＤ単独のものに比べて各細胞
に対する親和性が優れている。
【００４８】実施例２
皮膚表面は様々な生物的、化学的、物理的ストレスを受
けて、細胞障害並びに細胞活性の低下（老化）を誘因し
ている。その際、皮膚表面で通常よりも多い活性酸素が
発生したり、活性酸素を除去する機能の低下が考えられ
る。一般に、このような細胞障害の中で、紫外線は皮膚
の障害の指標として考えられてきた。本実施例は、この
点を鑑みて、以下のようなテストを行った。
けて、細胞障害並びに細胞活性の低下（老化）を誘因し
ている。その際、皮膚表面で通常よりも多い活性酸素が
発生したり、活性酸素を除去する機能の低下が考えられ
る。一般に、このような細胞障害の中で、紫外線は皮膚
の障害の指標として考えられてきた。本実施例は、この
点を鑑みて、以下のようなテストを行った。
【００４９】まず、参考例２で得られたミクロコッカス
・カンジダス（ＩＡＭ １２００４）由来のＦｅ−ＳＯ
Ｄ（活性値９．３単位／ｍｇ）を用い、実施例１と同様
にして皮膚老化防止用化粧料を調製した。
・カンジダス（ＩＡＭ １２００４）由来のＦｅ−ＳＯ
Ｄ（活性値９．３単位／ｍｇ）を用い、実施例１と同様
にして皮膚老化防止用化粧料を調製した。
【００５０】次に、マウスとして、雄ＢＡＬＢ／ｃ（日
本クレア社製）で７週齢の体重３０ｇ前後のものを用
い、このマウス背部を電気バリカンで剃毛し、剃毛部分
に前記化粧料をＦｅ−ＳＯＤ量が５０〜１５０μｇ／マ
ウスになるように塗布したのち、３０分後に、日立紫外
線ランプ（３４０〜４００ｎｍ）を用い、１５ｃｍ離し
た場所から、２．７ｍＷ／ｃｍ2の量で紫外線を経時的
に照射した。次いで紫外線照射部分の皮膚を１ｃｍ2と
り、フロー・オッチング（Ｆｌｏｈｅ ａｎｄＯｔｔｉ
ｎｇ）の方法によって抽出精製されたＳＯＤの活性を測
定した。さらに、対照、紫外線照射のみを行ったもの及
びクリーム基剤のみを塗布し、紫外線照射を行ったもの
についても、前記と同様にして皮膚のＳＯＤ活性を測定
した。これらの結果を表４に示す。
本クレア社製）で７週齢の体重３０ｇ前後のものを用
い、このマウス背部を電気バリカンで剃毛し、剃毛部分
に前記化粧料をＦｅ−ＳＯＤ量が５０〜１５０μｇ／マ
ウスになるように塗布したのち、３０分後に、日立紫外
線ランプ（３４０〜４００ｎｍ）を用い、１５ｃｍ離し
た場所から、２．７ｍＷ／ｃｍ2の量で紫外線を経時的
に照射した。次いで紫外線照射部分の皮膚を１ｃｍ2と
り、フロー・オッチング（Ｆｌｏｈｅ ａｎｄＯｔｔｉ
ｎｇ）の方法によって抽出精製されたＳＯＤの活性を測
定した。さらに、対照、紫外線照射のみを行ったもの及
びクリーム基剤のみを塗布し、紫外線照射を行ったもの
についても、前記と同様にして皮膚のＳＯＤ活性を測定
した。これらの結果を表４に示す。
【００５１】
【表４】
【００５２】表４から分るように、紫外線のみを照射し
たものは、対照に比べて皮膚のＳＯＤ活性が低下する。
これに対し、本発明の化粧料を塗布し、紫外線を照射し
たものは、いずれも対照に比べて皮膚のＳＯＤ活性が高
い。
たものは、対照に比べて皮膚のＳＯＤ活性が低下する。
これに対し、本発明の化粧料を塗布し、紫外線を照射し
たものは、いずれも対照に比べて皮膚のＳＯＤ活性が高
い。
【００５３】実施例３
従来から、ＳＯＤについては異種生物間でのアレルギー
反応の問題や長期使用の際にアナフラキー反応の懸念な
どがあることから、本実施例においては、本発明の皮膚
老化防止用化粧料について、単回投与毒性試験、反復投
与毒性試験、一次皮膚刺激試験、連続皮膚刺激試験、皮
膚感作試験、光感作試験、光毒性試験、変異原性試験を
行い、安全性を検討した。なお、前記試験方法は、昭和
５９年２月１５日薬審第１１８号のガイドラインに準じ
て行った。
反応の問題や長期使用の際にアナフラキー反応の懸念な
どがあることから、本実施例においては、本発明の皮膚
老化防止用化粧料について、単回投与毒性試験、反復投
与毒性試験、一次皮膚刺激試験、連続皮膚刺激試験、皮
膚感作試験、光感作試験、光毒性試験、変異原性試験を
行い、安全性を検討した。なお、前記試験方法は、昭和
５９年２月１５日薬審第１１８号のガイドラインに準じ
て行った。
【００５４】参考例で得られたアエロモナス・リケファ
シエンス由来のＦｅ−ＳＯＤ（活性値７．０単位／ｍ
ｇ）、ミクロコッカス・カンジダス由来のＦｅ−ＳＯＤ
（活性値９．３単位／ｍｇ）及びレジオネラ・ニューモ
ヒラ由来のＦｅ−ＳＯＤ（活性値１１．７単位／ｍｇ）
を用い、実施例１と同様にして、それぞれ皮膚老化防止
用化粧料Ａ、Ｂ及びＣの３種を調製した。
シエンス由来のＦｅ−ＳＯＤ（活性値７．０単位／ｍ
ｇ）、ミクロコッカス・カンジダス由来のＦｅ−ＳＯＤ
（活性値９．３単位／ｍｇ）及びレジオネラ・ニューモ
ヒラ由来のＦｅ−ＳＯＤ（活性値１１．７単位／ｍｇ）
を用い、実施例１と同様にして、それぞれ皮膚老化防止
用化粧料Ａ、Ｂ及びＣの３種を調製した。
【００５５】（１）単回投与毒性試験
マウス及びラットについて、経口及び皮下投与毒性試験
を行ったところ、３種の化粧料は、いずれもすべての試
験において、ＬＤ50値が１６ｇ／ｋｇであった。
を行ったところ、３種の化粧料は、いずれもすべての試
験において、ＬＤ50値が１６ｇ／ｋｇであった。
【００５６】（２）反復投与毒性試験
各化粧料を、マウスに対し４、８、１６ｇ／ｋｇの量で
３か月間反復経口投与したが、死亡例は認められず、ま
た剖検例において、肉眼的にも病理学的にも心臓、肺、
腎臓、肝臓、胃、小腸及び大腸の異常は認められなかっ
た。
３か月間反復経口投与したが、死亡例は認められず、ま
た剖検例において、肉眼的にも病理学的にも心臓、肺、
腎臓、肝臓、胃、小腸及び大腸の異常は認められなかっ
た。
【００５７】（３）一次皮膚刺激試験
損傷皮膚及び正常皮膚について一次皮膚刺激試験（紅斑
・皮下形成及び浮腫形成）を行い、Ｐ．Ｉ．Ｉ値を求め
た。その結果を表５に示す。
・皮下形成及び浮腫形成）を行い、Ｐ．Ｉ．Ｉ値を求め
た。その結果を表５に示す。
【００５８】
【表５】
【００５９】（４）連続皮膚刺激試験
モルモットに対し、１６日間投与し、連続皮膚刺激試験
を行った。判定結果を表６に示すとおり、いずれも判定
は「−」であった。
を行った。判定結果を表６に示すとおり、いずれも判定
は「−」であった。
【００６０】（５）皮膚感作試験
モルモットに対し、皮膚感作試験を行い、２４時間後観
察した。判定結果を表６に示すとおり、いずれも判定は
「−」であった。
察した。判定結果を表６に示すとおり、いずれも判定は
「−」であった。
【００６１】
【表６】
なお、皮膚感作試験において、ＤＮＣＢを用いた場合
は、紅斑の＋が３、浮腫の＋が２であった。
は、紅斑の＋が３、浮腫の＋が２であった。
【００６２】（６）光感作試験
モルモットに対して光感作試験を行い、紅斑について、
２４時間後及び４８時間後の観察を行った。その結果、
化粧料Ａ、Ｂ及びＣのいずれも、２４時間後及び４８時
間後共に、判定は「−」であった。
２４時間後及び４８時間後の観察を行った。その結果、
化粧料Ａ、Ｂ及びＣのいずれも、２４時間後及び４８時
間後共に、判定は「−」であった。
【００６３】（７）光毒性試験
モルモットに対して光毒性試験を行い、２４時間後、４
８時間後及び７２時間後の観察を行った。その結果、化
粧料Ａ、Ｂ及びＣのいずれも、２４時間後、４８時間後
及び７２時間後共に、判定は「−」であった。
８時間後及び７２時間後の観察を行った。その結果、化
粧料Ａ、Ｂ及びＣのいずれも、２４時間後、４８時間後
及び７２時間後共に、判定は「−」であった。
【００６４】（８）変異原性試験
濃度５０μｇ、１００μｇ及び５００μｇについて変異
原性試験を行った。その結果、化粧料Ａ、Ｂ及びＣはい
ずれも、すべての濃度において、Ｒｅｃ ａｓｓａｙ及
びＡｍｅｓ ｓｙｓｔｅｍ共に、判定は「−」であっ
た。
原性試験を行った。その結果、化粧料Ａ、Ｂ及びＣはい
ずれも、すべての濃度において、Ｒｅｃ ａｓｓａｙ及
びＡｍｅｓ ｓｙｓｔｅｍ共に、判定は「−」であっ
た。
【００６５】以上の結果から、本発明の皮膚老化防止用
化粧料は、安全性について問題のないことが確認され
た。
化粧料は、安全性について問題のないことが確認され
た。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ａ６１Ｋ 7/48 Ａ６１Ｋ 7/48
// Ａ６１Ｋ 35/74 35/74 Ｄ
(56)参考文献 特開 平１−128911（ＪＰ，Ａ)
特開 平１−96107（ＪＰ，Ａ)
特開 平５−32556（ＪＰ，Ａ)
特開 平３−204805（ＪＰ，Ａ)
特開 昭64−43342（ＪＰ，Ａ)
特開 平５−163134（ＪＰ，Ａ)
特開 昭64−67186（ＪＰ，Ａ)
特開 昭61−185184（ＪＰ，Ａ)
特表 昭62−501072（ＪＰ，Ａ)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
A61K 7/00 - 7/50
ＣＡ（ＳＴＮ)
Claims (3)
- 【請求項１】 ヘキサデシルアルコール１〜１０重量
％、シリコーン油２０〜４５重量％、グリセリン１５〜
４０重量％、リン酸塩０．３〜７．０重量％及びカルボ
キシメチルセルロース５〜２５重量％を必須成分として
含有するクリーム基剤１００重量部に対し、細菌より抽
出したＦｅ型スーパーオキシドディスムターゼを、タン
パク質量として０．００５〜０．０５重量部の割合で配
合したことを特徴とする皮膚老化防止用化粧料。 - 【請求項２】 クリーム基剤１００重量部に対し、Ｆｅ
型スーパーオキシドディスムターゼを、タンパク質量と
して０．０１〜０．０３重量部の割合で配合して成る請
求項１記載の皮膚老化防止用化粧料。 - 【請求項３】 Ｆｅ型スーパーオキシドディスムターゼ
が、シュウドモナス属、バチルス属、ミクロコッカス
属、アエロモナス属、アセトバクター属、フラボバクタ
ー属、グルコノバクター属、ラクトバチルス属、リゾビ
ュウム属及びレジオネラ属の中から選ばれた細菌より抽
出したものである請求項１又は２記載の皮膚老化防止用
化粧料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13681894A JP3522335B2 (ja) | 1994-06-20 | 1994-06-20 | 皮膚老化防止用化粧料 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13681894A JP3522335B2 (ja) | 1994-06-20 | 1994-06-20 | 皮膚老化防止用化粧料 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH083018A JPH083018A (ja) | 1996-01-09 |
| JP3522335B2 true JP3522335B2 (ja) | 2004-04-26 |
Family
ID=15184230
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13681894A Expired - Fee Related JP3522335B2 (ja) | 1994-06-20 | 1994-06-20 | 皮膚老化防止用化粧料 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3522335B2 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2775186B1 (fr) * | 1998-02-24 | 2001-07-27 | Oreal | Utilisation d'extraits bacteriens de la famille des pseudomonadacees comme agents cosmetiques |
| JP2006199624A (ja) * | 2005-01-20 | 2006-08-03 | Mitsukan Group Honsha:Kk | 酢酸菌体を含有する生体内抗酸化性組成物 |
| JP5512077B2 (ja) * | 2006-11-22 | 2014-06-04 | 株式会社 資生堂 | 安全性評価方法、安全性評価システム及び安全性評価プログラム |
| JP6614449B2 (ja) * | 2016-03-31 | 2019-12-04 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 抗炎症剤 |
| JP6614448B2 (ja) * | 2016-03-31 | 2019-12-04 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 抗光老化剤 |
| JP7061611B2 (ja) * | 2017-03-09 | 2022-04-28 | ジェノフォーカス インコーポレイテッド | バチルスアミロリケファシエンスｇｆ４２３菌株、及びそれによって生産されるポリペプチドを含む抗酸化及び抗炎症活性を提供するかあるいは脂質異常症を予防又は治療する組成物 |
| CN109431962B (zh) * | 2018-12-19 | 2021-10-29 | 仙婷(广州)科技研发有限公司 | 一种浮游生物代谢物和浮游生物发酵液及其应用 |
-
1994
- 1994-06-20 JP JP13681894A patent/JP3522335B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH083018A (ja) | 1996-01-09 |
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