JP3424033B2 - 生体液成分吸着抑制材料及びその材料からなる生体液取扱い用具 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、少なくとも表面が高分
子電解質錯体からなるグロブリン又はアルブミン吸着抑
制用の材料（好ましくは、生体液の分析用取扱い用具用
の材料）、及びそのグロブリン又はアルブミン吸着抑制
用の材料からなる生体液取扱い用具に関する。

【０００２】

【従来の技術】医療分野において、正確な疾病診断や治
療効果の指標を得るために、血液や尿等の生体液を材料
とすることは日常的に行われている。生体液中に含まれ
る指標成分は多岐に渡っており、ある成分の量は極めて
微量（ｎｇ／ｍｌ〜μｇ／ｍｌ単位）な場合があり、こ
れらを精度良く測定することは重要なことで、測定技術
の開発や分析機器の発展とともに、年々高精度化が進ん
でいる。一方、医療分野以外でも各種成分の生理活性機
能を解明する研究も進んでおり、生体液中の微量成分を
正確に分析することが要求されている。

【０００３】これら生体液は、適当な手段（例えば採血
等）によって生体より採取され、保管される。そして、
分析に供される際には、適当な用具に移され、必要に応
じて抽出操作、濾過・精製操作、希釈操作等の処理工程
に付される。また、このような生体液は重要な材料とし
て、適当な容器（例えばガラス容器やポリマーチューブ
等）中で長期間に渡って保存されることも多い。

【０００４】しかし、生体液はその由来や種類によって
性状、粘性等の物性、そこに含まれる構成成分等に大き
な差があり多様であり、また、指標となる生体液中の成
分含量が微量の場合もある。そのためしばしば本来目的
とする成分の測定結果が異常値（特に低値）を示した
り、保存検体の場合、初期値と比較して大幅に低減化す
る等の問題が生じている。例えば、糖尿病性腎症の指標
の一つとして用いられている尿中マイクロアルブミンの
測定に−２０℃で保存した尿検体を用いた場合、検体の
保存期間が長ければ長いほど測定値が低くなることが、
Ｌ．Ｄ．Ｅｌｖｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｃｌｉｎ．Ｃｈ
ｅｍ．３５．３０８：１９８９）や、Ｉ．Ｏｓｂｅｒｇ
ｅｔ ａｌ．（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３６．１４２
８：１９９０）により報告されている。これらの原因と
しては、測定系における不充分な条件設定や、保存中の
成分分解等が考えられ、それらの欠点を改善する方法が
従来から多く検討され、実際にかなり改善されてきてい
る。

【発明が解決しようとする課題】

【０００５】しかし、上述のような問題点は全てが解消
されているわけではなく、その他の要因として、生体液
を取扱う用具の材質という点が挙げられる。例えば、生
体液の各種容器や光学的測定用セルなどの取扱い用具の
材料としては、従来、エチレン系やビニル系等の合成高
分子類あるいはガラスが主に汎用されてきた。これらの
材料の表面特性は、その種類によって表面官能基の種類
や量、親和性、電荷等に大きな差がある。このような材
料が有する物性に呼応して、生体液に含まれる成分の中
には材料表面に吸着されてしまい、最終的な測定値に大
きな誤差を与えてしまうものがある。特に、生体液に含
まれるアルブミンやグロブリンに代表されるタンパク質
は、疾病の診断指標や生理活性機能の解明において重要
な成分であると共に、こうした影響を受けやすい成分で
もある。

【０００６】従来、このような影響を除去ないし軽減す
る手段として、材料表面を処理して不活性化することが
行われてきた。例えば、材料表面をシリコーンによって
処理する方法、予め材料表面にアルブミンを吸着させて
おく方法、あるいは生体液を希釈する溶液中にアルブミ
ンを共存させておく方法、プラズマ処理等で材料表面に
親水性を付与する方法等の対策が施されていた。しか
し、材料表面を化学的に処理する方法は、操作が煩雑で
ある。また、アルブミンを用いる方法では、アルブミン
が大量に必要となるだけでなく、使用するアルブミンロ
ット差等により効果が不確定であることや、材料表面に
予めアルブミンを吸着させておいても、他のタンパク質
による吸着置換が起きること（Ｙ．Ｔａｍａｄａ ｅｔ
ａｌ．，Ｍａｋｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｓｕｐｐ
ｌ．，９．８５：１９８５）、更には、アルブミン自体
が吸着や反応系等に関与してしまう場合もある等、問題
点も多い。そこで、本発明者は、タンパク質を取扱う際
に使用される用具への吸着自体を抑制し、より正確なデ
ーターが得られるような素材とそれを用いた用具を提供
することを目的とし、鋭意検討の結果、意外にも、高分
子電解質錯体には、タンパク質の吸着を抑制する作用が
あることを見出した。本発明はこうした知見に基づくも
のである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】従って、本発明はアミン
化合物のポリマー、第４級アンモニウム化合物のポリマ
ー、塩基性アミノ酸のポリマー及びカチオン性多糖類か
らなる群から選択された、繰り返し単位中にＮ⁺ 原子を
含有するカチオン性高分子電解質と、アニオン性多糖
類、酸性アミノ酸ポリマー、スルホン酸系ポリマー及び
アクリル酸系ポリマーからなる群から選択された、繰り
返し単位中に−ＣＯＯ^- 基、−ＳＯ₃ ^- 基、−ＰＯ₃ Ｈ
^- 基又は−ＰＯ₃ ^2- 基を含有するアニオン性高分子電解
質とを反応させることによって得られる高分子電解質錯
体により、少なくとも表面が形成されていることを特徴
とする、グロブリン又はアルブミン吸着抑制用の材料に
関する。また、本発明は、少なくとも生体液を含む流体
と接触する部位が、前記のグロブリン又はアルブミン吸
着抑制用の材料からなることを特徴とする、生体液の分
析用取扱い用具にも関する。以下、本発明を詳述する。

【０００８】本発明に用いられる高分子電解質錯体（ｐ
ｏｌｙｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ ｃｏｍｐｌｅｘ：以
下、ＰＥＣともいう）は、それ自体公知の物質である。
ＰＥＣは正荷電を有する高分子電解質であるカチオンポ
リマーの溶液と負荷電を有する高分子電解質であるアニ
オンポリマーの溶液とを混合することにより瞬時に形成
することができる。こうして得られたＰＥＣは、特殊な
３元系溶媒（例えば、特定の組成からなる、水／アセト
ン／低分子塩）には溶解するが、一般的な溶媒には不溶
性である。ＰＥＣは、出発ポリマー（高分子電解質）の
種類、それらの混合比、調製条件などにより、多様な性
質を有する各種の高分子電解質錯体を提供することがで
きる。

【０００９】本発明で用いられるカチオンポリマーは、
繰り返し単位中にＮ⁺ 原子を含有する高分子電解質であ
り、具体的には

【００１０】（ａ１）一般式（Ｉ）

【化１】

【化２】 で表されるカチオンポリマー、即ち４級アンモニウム塩
ポリマー、

【００１１】（ａ２）一般式（II）

【化３】

【化４】 で表されるカチオンポリマー、即ち４級アンモニウム塩
ポリマー、

【００１２】（ａ３）一般式（III)

【化５】 で表されるカチオンポリマー、即ち塩基性アミノ酸ポリ
マー、及び

【００１３】（ａ４）カチオン性多糖類からなる群から
選択された少なくとも１種の化合物である。

【００１４】本発明で用いられるアニオンポリマーは、
繰り返し単位中に−ＣＯＯ^- 基、−ＳＯ₃ ^- 基、−ＰＯ
₃ Ｈ^- 基又は−ＰＯ₃ ^2- 基を含有する高分子電解質で
あり、具体的には

【００１５】（ｂ１）一般式（IV）

【化６】 で表されるアニオンポリマー、即ち酸性アミノ酸ポリマ
ー、

【００１６】（ｂ２）一般式（Ｖ）

【化７】 で表されるアニオンポリマー、即ちアクリル酸系ポリマ
ー、及び（ｂ３）アニオン性多糖類からなる群から選択
された少なくとも１種の化合物である。

【００１７】前記一般式（Ｉ）のカチオンポリマー（ａ
１）の具体例を挙げれば、第４級ポリエチレンイミンク
ロライド、ポリ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−
アルキレン−ｐ−キシリレンジアンモニウムクロライ
ド）、ポリ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−アル
キレン−ジアンモニウムジクロライド）、ポリ（Ｎ，Ｎ
−ジメチル−３−ヒドロキシプロピルアンモニウムクロ
ライド）、ポリ（２−ヒドロキシ−３−メタクロイルオ
キシプロピルトリメチルアンモニウムクロライド）、ポ
リ（２−メタクロイルオキシエチルトリメチルアンモニ
ウムクロライド）、ポリ（グリシジルトリメチルアンモ
ニウムクロライド）、ポリ〔（ジメチルイミニオ）エチ
レン（ジメチルイミニオ）メチレン−１，４−フェニレ
ンメチレンジクロライド〕〔一般に、２Ｘと称され
る〕、ポリ〔（ジメチルイミニオ）ヘキサメチレン（ジ
メチルイミニオ）メチレン−１，４−フェニレンメチレ
ンジクロライド〕〔一般に、６Ｘと称される〕、ポリ
〔（ジメチルイミニオ）ヘキサメチレンクロライド〕
〔一般に、６，６と称される〕、ポリ（Ｎ−エチル−４
−ビニルピリジニウムブロマイド）、ポリ（ジメチルジ
アリルアンモニウムクロライド）等である。

【００１８】前記一般式（II）のカチオンポリマー（ａ
２）の具体例を挙げれば、ポリ（ビニルベンジルトリメ
チルアンモニウムクロライド）、ポリビニルピリジウム
クロライド、ポリ（Ｎ−ベンジル−４−ビニルピリジウ
ムクロライド）等である。前記一般式（III)のカチオン
ポリマー（ａ３）の具体例を挙げれば、ポリリジン、ポ
リアルギニン又はこれらポリマーを構成する単量体のコ
ポリマー、更に、これら単量体とグリシン、アラニン、
フェニルアラニン、チロシン、バリン、ロイシン、イソ
ロイシン、セリン、トレオニン、メチオニン、システイ
ン、ヒスチジン、プロリン、及び／又はトリプトファン
などとのコポリマーである。カチオン性多糖類（ａ４）
の具体例としては、ＷＯ９２／０９１９８号公報に記載
されているように、キトサン及びその誘導体、並びに中
性多糖類のジエチルアミノエチル誘導体を挙げることが
できる。中性多糖類としては、デキストラン、セルロー
ス、マンナン、スターチ又はアガロース等を挙げること
ができる。これら誘導体のジエチルアミノエチル置換度
は、糖残基１個当たり０．５〜２．０基、好ましくは
０．７〜１．５基であり、重合度は、５０〜５００、好
ましくは１００〜１０００である。なお、ジエチルアミ
ノエチル基の窒素原子とアニオンポリマーのアニオン基
とが結合する。

【００１９】前記一般式（IV）のアニオンポリマー（ｂ
１）の具体例を挙げれば、ポリグルタミン酸、ポリアス
パラギン酸又はこれらポリマーを構成する単量体のコポ
リマー、更に、これら単量体とグリシン、アラニン、フ
ェニルアラニン、チロシン、バリン、ロイシン、イソロ
イシン、セリン、トレオニン、メチオニン、システイ
ン、ヒスチジン、プロリン、及び／又はトリプトファン
などとのコポリマーである。なお、一般式（III)及び
（IV）で示されるポリアミノ酸は、一般的な酸無水物モ
ノマー法、活性エステル化法、メリーフィールド法等に
よって合成することができる。

【００２０】前記一般式（Ｖ）のアニオンポリマー（ｂ
２）の具体例を挙げれば、ポリアクリル酸、ポリメタク
リル酸、ポリイタコン酸モノエステル、ポリマレイン酸
モノエステル、ポリビニルスルホン酸、ポリスチレンス
ルホン酸、これらポリマーを構成する単量体のいずれか
２種以上のコポリマー、更に、これら単量体とその単量
体のカルボキシル基にエステル結合によって結合した炭
素数４〜２０個のアルキル基を有するカルボン酸誘導体
とのコポリマーである。アニオン性多糖類（ｂ３）の具
体例としては、例えば、ＷＯ９２／０９１９８号公報に
記載されているようなセルロース、キチン、アルギン
酸、ヒアルロン酸等及びその塩が挙げられる。

【００２１】これらのカチオン性高分子電解質とアニオ
ン性高分子電解質とを通常の方法で反応させることによ
って容易にＰＥＣを調製することができる。即ち、前記
のカチオンポリマー及びアニオンポリマーの各水溶液
（好ましくは、イオン席として１０^-5モル／リットル〜
１０^-2モル／リットル）を、カチオンポリマーのカチオ
ン席とアニオンポリマーのアニオン席との濃度比（カチ
オン席／アニオン席）が０．２５〜４．０の範囲内、好
ましくは０．４〜２．５の範囲内で、水溶液中で混合し
て反応させれば良い。カチオン席とアニオン席の濃度比
が０．２５〜４．０の範囲外になると、ＰＥＣが形成さ
れ難くなるので好ましくない。各ポリマーを溶解する溶
媒としては、精製水や各種緩衝液（例えばリン酸緩衝液
等）、あるいはそれらと水混和性有機溶媒（例えばメタ
ノール、エタノール、アセトン等）との混合液を用いる
ことができる。この反応は比較的活性が高いので、溶液
のｐＨ、イオン強度、温度などは比較的広い範囲である
ことができるが、一般的にはｐＨ３〜９、イオン強度０
〜１．０及び２０〜６０℃で実施する。

【００２２】本発明においては、カチオンポリマーとア
ニオンポリマーとの各種の組合せを広く自由に選択する
ことができ、更に、カチオンポリマーとアニオンポリマ
ーの配合比を変化させることにより、生成するＰＥＣの
荷電バランスを容易に変更し、調整することができる。
即ち、種々の荷電バランスを有するＰＥＣを用いること
により、タンパク質吸着抑制用の材料の表面電荷を調整
し、その使用条件に従って至適の組合せと表面特性を適
宜選択することが可能となる。本発明で用いるＰＥＣの
荷電バランスは、−６〜＋６の範囲で選択することがで
きる。ここで、荷電バランスとは、ＰＥＣの荷電状態
を、その出発原料であるカチオンポリマー及びアニオン
ポリマーの、各々のカチオン席及びアニオン席の濃度比
で表現するものである。例えば、使用するカチオンポリ
マーのカチオン席及びアニオンポリマーのアニオン席の
濃度比が等しい場合は、生成するＰＥＣの荷電バランス
は±０となる。濃度比がこれより大きければ（即ち、カ
チオン席の濃度の方が高ければ）荷電バランスはプラス
となり、小さければ（即ち、アニオン席の方が高けれ
ば）マイナスとなる。また、濃度比が１．５の場合は荷
電バランスは＋２となり、濃度比が０．５の場合は荷電
バランスは−３．３となる。荷電バランスの調整は、等
濃度のカチオンポリマー溶液及びアニオンポリマー溶液
の混合量を変化させることによって容易に行うことがで
きる。

【００２３】こうして得られるＰＥＣをそのまま直接使
用するか、生成したＰＥＣをフィルム、繊維又は板状等
に成形し、場合により用途に応じて加工して使用する
か、あるいは適当な基材（例えば、高分子材料又はガラ
ス）に被覆した形でタンパク質吸着抑制用の材料として
使用することができる。基材としては、無機材料、例え
ば、ガラス、金属、セラミックス若しくは石英；又は有
機材料、例えば、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリ
アクリル酸、ポリスチレン、ポリエステル、ポリイソプ
レン、ポリプロピレン若しくはポリアミド等の合成高分
子樹脂、綿若しくはパルプ等の天然高分子、キュプロフ
ァン若しくはレーヨン等の再生樹脂等を挙げることがで
きる。

【００２４】本発明の生体液取扱い用具は、少なくとも
生体液と接触する部位を、前記のタンパク質吸着抑制用
の材料から構成する。ここで、生体液取扱い用具とは、
前記の生体液と接触する部位を有する任意の用具を意味
し、生体液の分析用取扱い用具、あるいは、尿、唾液、
髄液、細胞抽出物、及び組織抽出物、並びにそれらの処
理液からなる群から選んだ生体液の取扱い用具が含まれ
る。例えば、前記の生体液の採取、輸送又は保存に用い
る各種用具から、生体表面又は内部に装着して使用する
用具も含まれる。具体的には、生体液と接触する各種容
器、採血管、チューブ類、濾紙フィルター、ビーズ、プ
レート、フィルム、繊維、ピペット類、分析用セル、コ
ンタクトレンズ、バック類（輸液バック等）、注射器、
検査室用品、更には、人工血管等、生体内に埋め込む人
工臓器等である。

【００２５】ＰＥＣの調製時における溶液のｐＨ、塩濃
度及び／又は水混和性有機溶媒の含有量等を変化させる
ことによって、生成ＰＥＣの物性（例えば、硬度や弾
性）を自由に調整することが可能で、粒子状、板状、フ
ィルム状等の成型も容易に行えるので、ＰＥＣそれ自体
から直接、前記の生体液取扱い用具を成形することがで
きる。

【００２６】また、フィルム、繊維又は板状等に成形さ
れているＰＥＣ、更にはＰＥＣ被覆体を、用途に応じて
加工することにより、本発明の生体液取扱い用具を成形
することもできる。更に、ＰＥＣは種々の材質に対して
簡便且つ容易に被覆できる性質を有しているので、目的
の形状に成形されている基材をＰＥＣで被覆して本発明
の生体液取扱い用具を製造することもできる。この場
合、少なくとも、生体液と接触する部位をＰＥＣで被覆
する。基材としては、前記の無機又は有機基材の他に、
従来法において生体液取扱い用具として用いられている
製品それ自体を用い、それらをＰＥＣで被覆して本発明
の生体液取扱い用具を製造することもできる。例えば、
ポリエチレン製等のチューブ類、ポリメチルペンテン製
等の注射器類、ポリスチレン製等の分析用セル等の市販
品ではその容量や形状等がすでに管理されており、従っ
て、それらの市販品を基材として用い、ＰＥＣで被覆す
ると、種々の規格が管理された本発明による生体液取扱
い用具を簡便に製造することができる。

【００２７】ＰＥＣを基材（又は従来の用具）に被覆さ
せるには、例えば、塗布、噴霧又は浸漬などの方法で行
うことができる。ＰＥＣ溶液を基材（又は従来の用具）
に単に接触させるだけでも良い。例えば、カチオンポリ
マー溶液とアニオンポリマー溶液とを混合し、その溶液
と基材（又は従来の用具）を０．５〜４８時間程度接触
させ、こうして処理した基材（又は従来の用具）を生理
食塩水や精製水で洗浄し、洗浄した基材（又は従来の用
具）を室温で風乾するか、あるいは５０〜１００℃程度
に加温し乾燥することにより、本発明のタンパク質吸着
抑制用の材料又は生体液取扱い用具を製造することがで
きる。この際、例えばＮａＣｌ等の塩を０．０１〜５Ｍ
の濃度で存在させたり、温度を０〜１００℃の範囲で変
化させて、ＰＥＣを生成し、そして基材（又は従来の用
具）と接触又は浸漬することによって、ＰＥＣの被覆処
理時間を短縮（例えば温度を高めることによる）した
り、より温和な条件下でＰＥＣを被覆することもでき
る。

【００２８】本明細書において、生体液とは、生物（動
植物や微生物）の血液、血清、血漿、尿、唾液、髄液等
や、細胞及び組織抽出物等、更にはそれらの処理液（例
えば、希釈液、濃縮液、抽出液等）をいう。また、吸着
抑制の対象となるタンパク質としては、分子量数千のプ
ロタミン類から数千万以上のウイルスタンパク質が含ま
れ、更には分子量数千以下の所謂ポリペプチドも含まれ
る。より具体的には、例えば、単純タンパク質であるア
ルブミンとしての血清アルブミン、オバルブミン、コナ
ルブミン、ラクトアルブミン等、同様に単純タンパク質
である血清グロブリン、フィブリノゲン、クリスタリ
ン、オボグロブリン、ラクトグロブリン等が挙げられ
る。血清グロブリンの中には周知のように、αグロブリ
ン、βグロブリン、γグロブリンが存在し、γグロブリ
ンには免疫グロブリンのＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭなどが
あり、この他に血液凝固に関係するタンパク質、補体な
ども含まれる。更にこれらタンパク質が糖、脂質等と結
合した物質も含むものである。

【００２９】本発明においては、これらの生体液やタン
パク質の種類、構成及び／又は吸着性、更には用具の使
用目的に応じて、適切な物性を有するＰＥＣを適宜選択
することができる。例えば、タンパク質の吸着を効率的
に抑制することができ、微量成分の測定の精度向上や、
長期保存時や連続的接触による吸着等の経時的変化を著
しく改善することができる。

【００３０】

【作用】タンパク質は両性高分子であるので、各種のポ
リカチオンやポリアニオンとは静電力を介して相互作用
することが知られている。また、タンパク質の吸着にお
いては、材料表面の親水性・疎水性、表面エネルギー、
ミクロドメイン構造などが深く関与していることが明ら
かになっている。一般に、アルブミンは親水性表面に、
グロブリンは疎水性表面に吸着しやすいことが報告され
ているが、グロブリンの場合は、分子内に親水性部と疎
水性部が局在しているため、材料表面の親水性・疎水性
により特定の配向をして吸着することが明らかとなって
いる。ポリカチオンとポリアニオンとからなるＰＥＣが
タンパク質、特にグロブリンの吸着を抑制するのは、対
イオンが相互に高分子化合物であるため、両者の中和反
応が効率よく起こり、両者の荷電が有効に遮蔽されてい
ることが考えられることから、ＰＥＣとタンパク質間に
は静電的相互作用が殆ど働かなくなることが一つの要因
と思われる。また、ＰＥＣがミクロドメイン構造を呈す
ることが明らかとなっていることから、グロブリンが配
向して吸着することができないことも要因の一つと考え
られる。更に、ＰＥＣはハイドロゲルとしても機能して
いるので、物理的な表面の運動性、排除体積効果なども
関与していることが考えられる。このような幾つかの要
因があいまって、従来に無い、極めて優れた吸着抑制作
用を発現しているものと思われる。

【００３１】

【実施例】以下、実施例により本発明を更に具体的に説
明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。なお、以下の実施例に記載の平均分子量は蒸気圧降
下法で測定した数平均分子量である。また、以下の実施
例において使用したポリマー及びその略称を以下に示
す。（１）カチオンポリマー ２Ｘ：ポリ［（ジメチルイミニオ）エチレン（ジメチル
イミニオ）メチレン−１，４−フェニレンメチレンジク
ロライド（平均分子量約6000） ６Ｘ：ポリ［（ジメチルイミニオ）ヘキサメチレン（ジ
メチルイミニオ）メチレン−１，４−フェニレンメチレ
ンジクロライド（平均分子量約10000 ） ＰＶＢＭＡ：ポリ（ビニルベンジルトリメチルアンモニ
ウムクロライド）（平均分子量約15000 ） ＰＬＬ：ポリ（Ｌ−リジン）（平均分子量約3000） ＣＳ１００：キトサン（脱アセチル化度１００％；平均
分子量約2000）（２）アニオンポリマー ＣＢＡ：アクリル酸／ブチルアクリレ−トの共重合体
（アクリル酸含量約７０モル％；平均分子量約36000 ） ＣＬＡ：アクリル酸／ラウリルアクリレートのランダム
共重合体（アクリル酸含量約７０モル％；平均分子量約
10000 ） ＣＯＡ：アクリル酸／２−エチルヘキシルアクリレート
のランダム共重合体（アクリル酸含量約７０モル％；平
均分子量約8000） ＣＳＡ：アクリル酸／ステアリルアクリレ−トの共重合
体（アクリル酸含量約７０モル％；平均分子量約28000
） ＰＡＡ：ポリアクリル酸（平均分子量約56000 ） ＰＧＡ：ポリグルタミン酸（平均分子量約4000） ＰＳＳ：ポリスチレンスルホン酸（平均分子量約15000
） ＳＬＡ：スチレンスルホン酸／ラウリルアクリレ−トの
共重合体（スルホン酸含量約７０モル％；平均分子量約
25000 ） ＳＯＡ：スチレンスルホン酸／２−エチルヘキシルアク
リレ−トの共重合体（スルホン酸含量約７０モル％；平
均分子量約32000 ） ＳＳＡ：スチレンスルホン酸／ステアリルアクリレ−ト
の共重合体（スルホン酸含量約９０モル％；平均分子量
約18000 ） Ａｌｇ：アルギン酸ナトリウム（平均分子量約50000 〜
200000） Ｈｙａ：ヒアルロン酸ナトリウム（平均分子量1400000
） ＣｈＳ−Ａ：コンドロイチン硫酸（タイプＡ；平均分子
量約30000 ） ＣｈＳ−Ｃ：コンドロイチン硫酸（タイプＣ；平均分子
量約40000 ） ＣＣＥＬ：カルボキシメチルセルロ−ス（１ピラノ−ス
酸基当たりの官能基導入率０．９；平均分子量約18000
0） ＣＣＨＮ：カルボキシメチルキチン（１ピラノ−ス酸基
当たりの官能基導入率０．７；平均分子量約59000 ） ＰＣＥＬ：リン酸化セルロ−ス（１ピラノ−ス酸基当た
りの官能基導入率０．５；平均分子量約160000） ＰＣＨＮ：リン酸化キチン（１ピラノ−ス酸基当たりの
官能基導入率１．０；平均分子量約60000 ） ＳＣＥＬ：硫酸化セルロ−ス（１ピラノ−ス酸基当たり
の官能基導入率１．３；平均分子量約120000） ＳＣＨＮ：硫酸化キチン（１ピラノ−ス酸基当たりの官
能基導入率０．７４；平均分子量約32000 ）

【００３２】実施例１：タンパク質の吸着実験 （１）ＰＥＣコーティングディッシュの調製 カチオンポリマーである２Ｘを１．４５ｍｇ／ｍｌの濃
度（イオン席として１０^-2Ｍ；以下１０^-2ＵＭともい
う）となるよう蒸留水（ｐＨ７．０）を用いて調製し、
２Ｘ溶液とした。また、アニオンポリマーであるＰＡＡ
を０．７２ｍｇ／ｍｌの濃度（１０^-2Ｍ）となるよう蒸
留水（ｐＨ７．０）を用いて調整し、ＰＡＡ溶液とし
た。２４穴マルチウェル（ＮＵＮＣＬＯＮ ＤＥＲＴＡ
２４ ＷＥＬＬ；親水化処理ポリスチレン）に、２Ｘ
溶液及びＰＡＡ溶液を順に０．５ｍｌづつ撹拌しながら
各ウェルに分注した。室温で一晩静置した後、上澄を除
去し、６５℃で６時間乾燥させた。乾燥後、蒸留水でウ
ェルを洗浄した後、再度乾燥させ、ＰＥＣ（２Ｘ−ＰＡ
Ａ：荷電バランス±０）コーティングディシュとし後記
の測定に用いた。前記と同様に表１及び表２に示した各
カチオンポリマー溶液（１０^-2ＵＭ：ｐＨ７．０）と各
アニオンポリマー溶液（１０^-2ＵＭ：ｐＨ７．０）を調
製した。表１及び表２のような組み合わせからなるＰＥ
Ｃ（荷電バランス±０）を用い、前記と同様な操作でコ
ーティングディッシュを調製した。対照用としては、未
処理の２４穴マルチウェルを後記の測定に用いた。 （２）アルブミンの吸着性 ウシ血清アルブミン（以下ＢＳＡともいう；カッペル
社）を５００ｎｇ／ｍｌとなるように２０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ７．４）（以下、ＰＢともいう）で調製し、
ＢＳＡ溶液とした。前記（１）で調製したＰＥＣコーテ
ィングマルチウェルに、ＢＳＡ溶液を１ｍｌずつ加え、
３７℃で１時間静置し、吸着を行った。ＢＳＡの吸着量
は、吸着反応後の上澄液のＢＳＡ濃度の減少量より求め
た。

【００３３】（３）ＢＳＡ測定用プレ−トの調製 イムノプレ−ト（ＮＵＮＣ Ｉｍｍｕｎｏ Ｐｌａｔ
ｅ）に抗ウシアルブミン抗体（バインディングサイト
社）１００μｌ／ウェルを加え、３７℃で２時間静置し
た。ＰＢ２００μｌでウェルを３回洗浄した後、蒸留水
で４倍希釈したブロックエ−ス（免疫実験用；雪印乳
業）２００μｌ／ウェルを加え、３７℃で１時間静置
し、ブロッキングを行った。Ｔｗｅｅｎ−２０（化学
用；和光純薬）が０．１（ｖ／ｖ）％となるように蒸留
水で１０倍希釈したブロックエ−ス（以下、洗浄液とも
いう）を２００μｌずつ加え、ウェルを４回洗浄した。
さらに、ＰＢ２００μｌで、ウェルを３回洗浄した後、
再びＰＢ２００μｌ／ウェルを加え、使用時まで４℃で
保存した。 （４）ＢＳＡの測定 前記（３）で調製したＢＳＡ測定用プレ−トに、前記
（２）における吸着反応前、及び吸着反応後のＢＳＡ溶
液１００μｌ／ウェルを加えた。３７℃で２０分間静置
した後、ＰＢ２００μｌで、ウェルを４回洗浄した。蒸
留水で１０倍希釈したブロックエ−スを用いて、ペルオ
キシダ−ゼ標識抗ウシアルブミン抗体（バインディング
サイト社）を１０００倍希釈し、この溶液１００μｌ／
ウェルを加えた。４℃で１２時間静置した後、洗浄液２
００μｌでウェルを４回洗浄した。さらに、ＰＢ２００
μｌで、ウェルを３回洗浄した後、３０ｍＭο−フェニ
レンジアミンと０．１％Ｈ₂ Ｏ₂ とを含む、０．１５Ｍ
クエン酸緩衝液（ｐＨ５．５）（以下、発色液ともい
う）１００μｌ／ウェルを加えた。３７℃で３０分間静
置した後、３Ｎ−ＨＣｌを１００μｌ／ウェルの量で加
えて発色を停止させ、波長４９２ｎｍにおける吸光度よ
り、ＢＳＡ濃度を測定した。結果を表１及び表２に示
す。表１及び表２から明らかなとおり、未処理ウェルに
比較してＰＥＣコーティングウェルは、アルブミンの吸
着抑制能が優れていることが認められた。

【００３４】（５）グロブリンの吸着性 ウシイムノグロブリンＧ（以下Ｂ−ＩｇＧともいう；カ
ッペル社）を５０ｎｇ／ｍｌ又は５００ｎｇ／ｍｌとな
るようにＰＢで調整し、Ｂ−ＩｇＧ溶液とした。前記
（１）で調製したＰＥＣコーティングマルチウェルに、
Ｂ−ＩｇＧ溶液を１ｍｌずつ加え、３７℃で１時間静置
し吸着を行った。Ｂ−ＩｇＧの吸着量は、吸着反応後の
上澄液のＢ−ＩｇＧ濃度の減少量より求めた。 （６）Ｂ−ＩｇＧ測定用プレ−トの調製 イムノプレ−トに抗ウシＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（バイン
ディングサイト社）１００μｌ／ウェルを加え、３７℃
で２時間静置した。ＰＢ２００μｌでウェルを３回洗浄
した後、蒸留水で４倍希釈したブロックエ−ス２００μ
ｌ／ウェルを加え、３７℃で１時間静置し、ブロッキン
グを行った。洗浄液２００μｌでウェルを４回洗浄し
後、さらにＰＢ２００μｌでウェルを３回洗浄した。再
びＰＢ２００μｌ／ウェルを加え、使用時まで４℃で保
存した。

【００３５】（７）Ｂ−ＩｇＧの測定 前記（６）のＢ−ＩｇＧ測定用プレ−トに前記（５）の
吸着反応前、及び吸着反応後のＢ−ＩｇＧ溶液１００μ
ｌ／ウェルを加えた。３７℃で２０分間静置した後、Ｐ
Ｂ２００μｌで、ウェルを４回洗浄した。蒸留水で１０
倍希釈したブロックエ−スを用いて、ペルオキシダ−ゼ
標識抗ウシイムノグロブリンＧ抗体（バインディングサ
イト社）を１０００倍希釈し、この溶液１００μｌ／ウ
ェルを加えた。４℃で１２時間静置した後、洗浄液２０
０μｌでウェルを４回洗浄した。さらに、ＰＢ２００μ
ｌで、ウェルを３回洗浄した後、発色液１００μｌ／ウ
ェルを加えた。３７℃で３０分間静置した後、３Ｎ−Ｈ
Ｃｌを１００μｌ／ウェルの量で加えて発色を停止さ
せ、波長４９２ｎｍにおける吸光度より、Ｂ−ＩｇＧ濃
度を求めた。結果を表１及び表２に示す。表１及び表２
から明らかなとおり、未処理ウェルに比較して、ＰＥＣ
コーティングウェルは、グロブリンの吸着抑制能が優れ
ていることが認められた。

【００３６】

【表１】

【００３７】

【表２】

【００３８】実施例２：β₂ −マイクログロブリンの測
定 （１）チューブ及びセルのＰＥＣコーティング カチオンポリマーであるＰＶＢＭＡを２１１．５μｇ／
ｍｌの濃度（１０^-3ＵＭ）となるように０．１５Ｍ−Ｎ
ａＣｌ含有１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）（以
下、ＰＢＳともいう）を用いて調整し、ＰＶＢＭＡ溶液
とした。また、アニオンポリマーであるＣＬＡを１６
５．６μｇ／ｍｌの濃度（１０^-3ＵＭ）となるようＰＢ
Ｓを用いて調整し、ＣＬＡ溶液とした。このＰＶＢＭＡ
溶液とＣＬＡ溶液を等量混和（荷電バランス±０）して
ＰＥＣ溶液を作成し、尿を希釈する際のチューブ（ポリ
スチレン製）及び凝集反応の濁度を測定する際のセル
（ポリスチレン製）に１ｍｌずつ分注し、５６℃で３０
分間放置した。蒸留水で３回洗浄した後、乾燥させ、Ｐ
ＥＣコーティングチューブ及びセルとした。対照用とし
て未処理のチューブ及びセルを用い、後記のβ₂ −マイ
クログロブリン（以下、β₂ −ｍともいう）測定を行っ
た。 （２）尿中β₂ −ｍの測定 β₂ −ｍ含量が高く、希釈を必要とする尿を試料として
使用する場合に、前記（１）の操作でＰＥＣコーティン
グしたチューブを用い、０．１５Ｍ−ＮａＣｌで１００
倍に希釈した。また、０．０５％ＢＳＡと０．０５％Ｅ
ＤＴＡ，０．１５Ｍ−ＮａＣｌを含む０．１Ｍトリス緩
衝液（ｐＨ８．２）を調製し、安定化液とした。原尿検
体又は希釈液検体２０μｌを前記（１）の操作でＰＥＣ
コーティングしたセルにとり、安定化液５００μｌを加
え、５分間放置した後、常法で調製した抗ヒトβ₂ −ｍ
抗体感作ラテックス溶液８０μｌを加えた。波長９５０
ｎｍにおける濁度変化によりβ₂ −ｍ濃度を測定した。
結果を表３及び表４に示す。原尿をサンプルとして用い
た場合（表３）は、未処理セルと比較して、ＰＥＣコー
ティングセルでは５％ほどの測定値の上昇が認められ
た。また、希釈検体をサンプルとして用いた場合（表
４）は、ＰＥＣコーティングチューブとセルを用いるこ
とにより３０％前後の測定値の上昇が認められた。この
ように、ＰＥＣ処理することで、測定時に用いられる用
具のチューブやセルへのβ₂ −ｍの吸着を抑制すること
ができ、より正確な測定値を得ることができる。

【００３９】

【表３】

【００４０】

【表４】

【００４１】実施例３：尿保存試験 （１）検体保存用容器のＰＥＣコーティング カチオンポリマーである２Ｘを１．４５ｍｇ／ｍｌの濃
度（１０^-2ＵＭ）となるよう蒸留水（ｐＨ７．０）を用
いて調整し、２Ｘ溶液とした。また、アニオンポリマー
であるＣＯＡを１．６６ｍｇ／ｍｌの濃度（１０^-2Ｕ
Ｍ）となるよう蒸留水（ｐＨ７．０）を用いて調整し、
ＣＯＡ溶液とした。この２Ｘ溶液１．０ｍｌとＣＯＡ溶
液１．１ｍｌを混和してＰＥＣ溶液（荷電バランス−
０．５）を作成した。検体保存用容器（アシストチュー
ブ；ＳＡＲＳＴＥＤＴ）の、検体と接触する可能性のあ
る部分全てをＰＥＣ溶液で満たし、室温で一晩静置し
た。上澄を除去し、６０℃で３時間乾燥させた後、蒸留
水でチューブ内を洗浄し、再度乾燥させ、ＰＥＣコーテ
ィング保存容器とした。前記と同様に、カチオンポリマ
ーである２Ｘ、アニオンポリマーであるＣＯＡ及びＳＯ
Ａを１０^-2ＵＭとなるよう蒸留水（ｐＨ７．０）を用い
て調整した。カチオンポリマー−アニオンポリマーの組
み合わせとして、２Ｘ−ＳＯＡ、ＰＶＢＭＡ−ＣＯＡ、
ＰＶＢＭＡ−ＳＯＡをそれぞれ等量混和し、ＰＥＣ溶液
（荷電バランス±０）を調製し、前記と同様の操作によ
り検体保存用容器をＰＥＣコーティングした。対照用と
して、未処理の検体保存用容器を後記の測定に用いた。 （２）尿中マイクロアルブミンの測定 前記（１）の操作で調製したＰＥＣコーティング検体保
存用容器及び未処理の検体保存用容器に、由来の異なる
尿１０検体（Ａ〜Ｊ）をそれぞれ１ｍｌずつ分注し、−
２０℃で保存した。保存開始から３日後、１週間後及び
２週間後に各尿中のマイクロアルブミン（以下、ｍ−Ａ
ＬＢともいう）の濃度を測定した。なお、ｍ−ＡＬＢ濃
度の測定は市販のキット（商品名・ミクロアルブ：マイ
ルス イタリア−ナ社）を用いた。その結果、１０検体
中の３検体（Ｂ，Ｃ，Ｈ）について、未処理の容器で保
存した尿検体のｍ−ＡＬＢ濃度が低下していることが認
められたが、ＰＥＣ処理した容器で保存したそれらの３
検体（Ｂ，Ｃ，Ｈ）では、ｍ−ＡＬＢ濃度の低下は、認
められなかった。表５〜表７から明らかなとおり、未処
理容器に比較して、ＰＥＣコーティング容器で保存した
検体の測定値は、安定していた。このように、ＰＥＣ処
理をすることにより、検体保存中のｍ−ＡＬＢの吸着を
抑制することができ、より正確な値を得ることができ
た。

【００４２】

【表５】

【００４３】

【表６】

【００４４】

【表７】

【００４５】

【発明の効果】本発明によれば、取扱う生体液やその中
に含まれるタンパク質の種類、構成及び／又は吸着性、
更には用具の使用目的に応じて、適切な物性を有するＰ
ＥＣを適宜選択して、適切なタンパク質吸着抑制用の材
料及びその材料からなる生体液取扱い用具を提供するこ
とができる。従って、例えば、タンパク質の吸着を効率
的に抑制することができ、微量成分の測定の精度向上
や、長期保存時や連続的接触による吸着等の経時的変化
を著しく改善することができる。

フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭60−203265（ＪＰ，Ａ) 特開 昭53−34887（ＪＰ，Ａ) 特開 昭51−23561（ＪＰ，Ａ) 特開 昭50−63096（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61L 24/00 - 33/18 ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 アミン化合物のポリマー、第４級アンモ
   ニウム化合物のポリマー、塩基性アミノ酸のポリマー及
   びカチオン性多糖類からなる群から選択された、繰り返
   し単位中にＮ⁺ 原子を含有するカチオン性高分子電解質
   と、アニオン性多糖類、酸性アミノ酸ポリマー、スルホ
   ン酸系ポリマー及びアクリル酸系ポリマーからなる群か
   ら選択された、繰り返し単位中に−ＣＯＯ^- 基、−ＳＯ
   ₃ ^- 基、−ＰＯ₃ Ｈ^- 基又は−ＰＯ₃ ^2- 基を含有するア
   ニオン性高分子電解質とを反応させることによって得ら
   れる高分子電解質錯体により、少なくとも表面が形成さ
   れていることを特徴とする、グロブリン又はアルブミン
   吸着抑制用の材料。
2. 【請求項２】 少なくとも生体液を含む流体と接触する
   部位が、請求項１記載のグロブリン又はアルブミン吸着
   抑制用の材料からなることを特徴とする、生体液の分析
   用取扱い用具。