JP3402304B2 - 猫クラミジアワクチンの製造方法 - Google Patents
猫クラミジアワクチンの製造方法Info
- Publication number
- JP3402304B2 JP3402304B2 JP2000094947A JP2000094947A JP3402304B2 JP 3402304 B2 JP3402304 B2 JP 3402304B2 JP 2000094947 A JP2000094947 A JP 2000094947A JP 2000094947 A JP2000094947 A JP 2000094947A JP 3402304 B2 JP3402304 B2 JP 3402304B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- chlamydia
- cells
- vaccine
- cat
- cultured
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、クラミジア・シッ
タシイ（Chlamydia psittaci）による猫のクラミジア感
染を予防するワクチンの製造方法に関する。
タシイ（Chlamydia psittaci）による猫のクラミジア感
染を予防するワクチンの製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】クラミジアは真生細菌の一種であるが、
他の細菌にはない形態学的変化を伴う独特な生活環を通
じて増殖する細胞偏性寄生菌である。すなわち、基本小
体（elementary body：ＥＢ）と網様体（reticulate bo
dy：ＲＢ）の間の菌形態の変換を伴って増殖する。感染
はＥＢの宿主細胞への吸着、宿主細胞による吸着ＥＢの
貧食によって成立する。貧食されたＥＢはＲＢに変換
後、２分裂増殖し、中間体を経て再びＥＢに成熟感染
し、細胞外へ放出される。この時期に至っても増殖の同
調性が低いため、放出菌体にはＥＢ、ＲＢ及び中間体が
混在するが、ＥＢのみが新たに宿主に感染する。
他の細菌にはない形態学的変化を伴う独特な生活環を通
じて増殖する細胞偏性寄生菌である。すなわち、基本小
体（elementary body：ＥＢ）と網様体（reticulate bo
dy：ＲＢ）の間の菌形態の変換を伴って増殖する。感染
はＥＢの宿主細胞への吸着、宿主細胞による吸着ＥＢの
貧食によって成立する。貧食されたＥＢはＲＢに変換
後、２分裂増殖し、中間体を経て再びＥＢに成熟感染
し、細胞外へ放出される。この時期に至っても増殖の同
調性が低いため、放出菌体にはＥＢ、ＲＢ及び中間体が
混在するが、ＥＢのみが新たに宿主に感染する。
【０００３】クラミジア属は、封入体の性質、サルファ
剤に対する感受性、基本小体（ＥＢ）の形態及び染色体
ＤＮＡの相同性から、クラミジア・トラコマティス（Ch
lamydia trachomatis）、クラミジア・シッタシイ（Chl
amydia psittaci）、クラミジア・ニューモニエ（Chlam
ydia pneumoniae）及びクラミジア・エコルム（Chlamyd
ia pecorum）の４種に分類される。
剤に対する感受性、基本小体（ＥＢ）の形態及び染色体
ＤＮＡの相同性から、クラミジア・トラコマティス（Ch
lamydia trachomatis）、クラミジア・シッタシイ（Chl
amydia psittaci）、クラミジア・ニューモニエ（Chlam
ydia pneumoniae）及びクラミジア・エコルム（Chlamyd
ia pecorum）の４種に分類される。
【０００４】クラミジア・シッタシイ（Chlamydia psit
taci）の自然宿主域は広く、オウム、インコ類をはじめ
とする鳥類、牛や羊等の反すう類、猫や犬等の伴侶動
物、また、無脊椎動物や、は虫類にも感染する。さらに
病態像も、持続的な不顕性感染、肺炎、流産、関節炎、
脳炎等、多様である。
taci）の自然宿主域は広く、オウム、インコ類をはじめ
とする鳥類、牛や羊等の反すう類、猫や犬等の伴侶動
物、また、無脊椎動物や、は虫類にも感染する。さらに
病態像も、持続的な不顕性感染、肺炎、流産、関節炎、
脳炎等、多様である。
【０００５】猫のクラミジア・シッタシイ（Chlamydia
psittaci）感染症は、結膜炎と上部気道呼吸器疾患を主
徴とする。症状は猫ウイルス性鼻気管炎や猫カリシウイ
ルス症と同様であり、重症例では死亡する場合もある。
psittaci）感染症は、結膜炎と上部気道呼吸器疾患を主
徴とする。症状は猫ウイルス性鼻気管炎や猫カリシウイ
ルス症と同様であり、重症例では死亡する場合もある。
【０００６】１９８５年から１９９５年にかけての日本
国内の猫のクラミジア・シッタシイ（Chlamydia psitta
ci）抗体調査では、採集した血清２３５検体中８５検体
（３６％）にＩｇＧ抗体が、３２検体（１４％）にＩｇ
Ｍ抗体が検出され、日本の猫にクラミジアが広く蔓延し
ていることが示唆されている。
国内の猫のクラミジア・シッタシイ（Chlamydia psitta
ci）抗体調査では、採集した血清２３５検体中８５検体
（３６％）にＩｇＧ抗体が、３２検体（１４％）にＩｇ
Ｍ抗体が検出され、日本の猫にクラミジアが広く蔓延し
ていることが示唆されている。
【０００７】クラミジア・シッタシイ（Chlamydia psit
taci）は、ヒトにオウム病として一括される重篤な呼吸
器感染症を起こす人畜共通伝染病の病原菌であり、公衆
衛生の面からもワクチンの重要性が指摘されているが、
日本国内では猫クラミジア感染症予防のためのワクチン
は販売されていない。一方、米国では、生ワクチン及び
不活化ワクチンが販売されているが、これらは主に発育
鶏卵を用いて培養したクラミジアを抗原としたものであ
る。
taci）は、ヒトにオウム病として一括される重篤な呼吸
器感染症を起こす人畜共通伝染病の病原菌であり、公衆
衛生の面からもワクチンの重要性が指摘されているが、
日本国内では猫クラミジア感染症予防のためのワクチン
は販売されていない。一方、米国では、生ワクチン及び
不活化ワクチンが販売されているが、これらは主に発育
鶏卵を用いて培養したクラミジアを抗原としたものであ
る。
【０００８】上記の発育鶏卵を用いて培養する方法で
は、卵黄嚢を採取し、これを乳剤化してクラミジアを採
取してワクチン液としていた。しかし、卵は多くの異種
蛋白を含んでいるため、発育鶏卵を用いて培養したクラ
ミジアを抗原として製造されたワクチンは、前記異種蛋
白によりアレルギー等の副作用を起こす危険性が高い。
また、多くの蛋白の中からクラミジアのみを精製するこ
とは大変困難である。
は、卵黄嚢を採取し、これを乳剤化してクラミジアを採
取してワクチン液としていた。しかし、卵は多くの異種
蛋白を含んでいるため、発育鶏卵を用いて培養したクラ
ミジアを抗原として製造されたワクチンは、前記異種蛋
白によりアレルギー等の副作用を起こす危険性が高い。
また、多くの蛋白の中からクラミジアのみを精製するこ
とは大変困難である。
【０００９】一方、近年になって、マウス線維芽細胞で
あるＬ９２９細胞や、ヒト子宮癌由来細胞であるＨｅＬ
ａ２２９細胞、さらにはマウス線維芽細胞であるＭｃＣ
ｏｙ細胞等の培養細胞を用いてクラミジアの培養が行わ
れるようになってきた。しかし、これらの細胞は、全て
接着型の細胞であるため、細胞継代及びクラミジア接種
・採取時の操作が複雑で、クラミジアの大量培養には不
向きである。
あるＬ９２９細胞や、ヒト子宮癌由来細胞であるＨｅＬ
ａ２２９細胞、さらにはマウス線維芽細胞であるＭｃＣ
ｏｙ細胞等の培養細胞を用いてクラミジアの培養が行わ
れるようになってきた。しかし、これらの細胞は、全て
接着型の細胞であるため、細胞継代及びクラミジア接種
・採取時の操作が複雑で、クラミジアの大量培養には不
向きである。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】本発明は上記のような
猫クラミジア感染を予防するためのワクチンの現状に鑑
み、発育鶏卵を用いて培養したクラミジアを抗原として
用いる場合のようにアレルギー等の副作用を起こすおそ
れがなく、また抗原としてのクラミジアを簡単な操作で
大量培養でき、猫クラミジア感染を予防することができ
るワクチンを容易に大量生産可能とすることを目的とす
るものである。
猫クラミジア感染を予防するためのワクチンの現状に鑑
み、発育鶏卵を用いて培養したクラミジアを抗原として
用いる場合のようにアレルギー等の副作用を起こすおそ
れがなく、また抗原としてのクラミジアを簡単な操作で
大量培養でき、猫クラミジア感染を予防することができ
るワクチンを容易に大量生産可能とすることを目的とす
るものである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】すなわち、本発明にかか
る猫クラミジア感染を予防するためのワクチンの製造方
法は、浮遊型の培養細胞を用いて増殖させた猫クラミジ
アを抗原とし、これを不活化してなることを特徴とする
ものである。前記浮遊型の培養細胞として、マウス線維
芽細胞より作出された細胞を用いることができ、さらに
前記マウス線維芽細胞としてはＬ９２９細胞を用いるこ
とができる。本発明の対象とするクラミジアは、猫に感
染するクラミジア・シッタシイ（Chlamydia psittaci）
である。また、本発明の第２は、上記のような方法によ
り製造されたワクチンを用いて、猫のクラミジア感染を
予防するために猫を免疫する方法である。
る猫クラミジア感染を予防するためのワクチンの製造方
法は、浮遊型の培養細胞を用いて増殖させた猫クラミジ
アを抗原とし、これを不活化してなることを特徴とする
ものである。前記浮遊型の培養細胞として、マウス線維
芽細胞より作出された細胞を用いることができ、さらに
前記マウス線維芽細胞としてはＬ９２９細胞を用いるこ
とができる。本発明の対象とするクラミジアは、猫に感
染するクラミジア・シッタシイ（Chlamydia psittaci）
である。また、本発明の第２は、上記のような方法によ
り製造されたワクチンを用いて、猫のクラミジア感染を
予防するために猫を免疫する方法である。
【００１２】上記のような本発明によれば、抗原として
のクラミジアの培養に浮遊型細胞を用いることにより、
細胞継代や、培養細胞へのクラミジア接種に際して、接
着型細胞のように培養容器から細胞を剥がす必要がない
ため操作が簡単であり、雑菌汚染の機会も少ない。ま
た、浮遊型細胞であるため、例えば大型ジャーを用いて
のクラミジアの培養が可能であり、大量のクラミジアを
効率よく培養することができる。
のクラミジアの培養に浮遊型細胞を用いることにより、
細胞継代や、培養細胞へのクラミジア接種に際して、接
着型細胞のように培養容器から細胞を剥がす必要がない
ため操作が簡単であり、雑菌汚染の機会も少ない。ま
た、浮遊型細胞であるため、例えば大型ジャーを用いて
のクラミジアの培養が可能であり、大量のクラミジアを
効率よく培養することができる。
【００１３】
【実施例】（１）浮遊型培養細胞の作出
静置培養したＬ９２９細胞をＰＢＳ（−）で洗浄後、
０．０５％トリプシン−０．０２％ＥＤＴＡ−ＰＢＳ
（−）液を用いて培養容器から剥がし、培地（１０％牛
胎児血清、３％トリプトース・ホスフェイト・ブロス、
０．０３％Ｌ−グルタミンを含むイーグルＭＥＭ（日水
製薬株式会社、以下「ニッスイ」と記す。）を炭酸水素
ナトリウムでｐＨ＝６．８〜７．０に調整したもの）を
用いて細胞数５×１０5個／ｍＬに調整して回転子を入
れたガラス瓶で回転子の回転速度３００〜４００ｒｐｍ
で３７℃で培養した。３〜４日後、細胞を含む培養液を
１，０００×ｇで１０分間遠心し、その沈渣を新しい培
地に浮遊して細胞数５×１０5個／ｍＬとなるように調
整し、再び３７℃で培養した。この継代培養を５０代続
けた。
０．０５％トリプシン−０．０２％ＥＤＴＡ−ＰＢＳ
（−）液を用いて培養容器から剥がし、培地（１０％牛
胎児血清、３％トリプトース・ホスフェイト・ブロス、
０．０３％Ｌ−グルタミンを含むイーグルＭＥＭ（日水
製薬株式会社、以下「ニッスイ」と記す。）を炭酸水素
ナトリウムでｐＨ＝６．８〜７．０に調整したもの）を
用いて細胞数５×１０5個／ｍＬに調整して回転子を入
れたガラス瓶で回転子の回転速度３００〜４００ｒｐｍ
で３７℃で培養した。３〜４日後、細胞を含む培養液を
１，０００×ｇで１０分間遠心し、その沈渣を新しい培
地に浮遊して細胞数５×１０5個／ｍＬとなるように調
整し、再び３７℃で培養した。この継代培養を５０代続
けた。
【００１４】上記のような方法で５０代継代したＬ９２
９細胞は、細胞数を１．５×１０5個／ｍＬ、培養液量
１００ｍＬに調整して３７℃で培養した場合、３〜４日
後には細胞数約１．０〜２．０×１０6個／ｍＬに増殖
し、接着型の細胞から浮遊型の細胞に変化したものと判
断された。
９細胞は、細胞数を１．５×１０5個／ｍＬ、培養液量
１００ｍＬに調整して３７℃で培養した場合、３〜４日
後には細胞数約１．０〜２．０×１０6個／ｍＬに増殖
し、接着型の細胞から浮遊型の細胞に変化したものと判
断された。
【００１５】（２）猫クラミジアの増殖
（ｉ）浮遊型培養細胞による増殖
上記（１）で得られた浮遊型Ｌ９２９細胞を細胞数１．
５×１０5個／ｍＬに調整し、マイクロキャリアースピ
ンナーフラスココンプリート内で３７℃で３日間培養し
た。この細胞培養液を１，５００×ｇで１０分間遠心
し、細胞を沈渣とした後、ＰＢＳ（＋）３０ｍＬに再浮
遊した。さらに、この遠心操作を２回行った後、沈渣と
した細胞に４．５log10ELD50のクラミジア（猫由来クラ
ミジアＦｅ／１４５株、又はＢ１６６株）を含むＳＰＧ
（sucrose phosphate glutamic acid medium）液３ｍＬ
でサスペンドし、３７℃で１時間振盪させることにより
細胞にクラミジアを吸着させた。１時間経過後、この吸
着液すべてを０．１ｍｇのシクロヘキシミドを含む維持
用培地（イーグルＭＥＭ（ニッスイ）＋５％熱非働化牛
胎児血清）１００ｍＬに加え、マイクロキャリアースピ
ンナーフラスココンプリート内で３７℃で３〜５日間培
養した。
５×１０5個／ｍＬに調整し、マイクロキャリアースピ
ンナーフラスココンプリート内で３７℃で３日間培養し
た。この細胞培養液を１，５００×ｇで１０分間遠心
し、細胞を沈渣とした後、ＰＢＳ（＋）３０ｍＬに再浮
遊した。さらに、この遠心操作を２回行った後、沈渣と
した細胞に４．５log10ELD50のクラミジア（猫由来クラ
ミジアＦｅ／１４５株、又はＢ１６６株）を含むＳＰＧ
（sucrose phosphate glutamic acid medium）液３ｍＬ
でサスペンドし、３７℃で１時間振盪させることにより
細胞にクラミジアを吸着させた。１時間経過後、この吸
着液すべてを０．１ｍｇのシクロヘキシミドを含む維持
用培地（イーグルＭＥＭ（ニッスイ）＋５％熱非働化牛
胎児血清）１００ｍＬに加え、マイクロキャリアースピ
ンナーフラスココンプリート内で３７℃で３〜５日間培
養した。
【００１６】（ii）接着型培養細胞による増殖
Ｌ９２９細胞を増殖用培地（イーグルＭＥＭ（ニッス
イ）に１０％牛胎児血清を加え、炭酸水素ナトリウムで
ｐＨ＝６．８〜７．０に調整したもの）を用いて細胞数
を１．５×１０5個／ｍＬに調整し、３７℃で静置培養
した。単層シートが形成された培養３〜４日後に培養上
清を吸引除去し、ＰＢＳ（−）で３回洗浄後、０．００
００３％ＤＥＡＥ−デキストラン液を細胞が浸る程度に
加え、室温に放置した。５分後、ＤＥＡＥ−デキストラ
ン液を吸引除去し、クラミジア液（Ｆｅ／１４５株、又
はＢ１６６株）を接種（接種量＝４．５log10ELD50）し
た。３７℃で１時間吸着後、接種したクラミジア液を吸
引し、維持用培地（イーグルＭＥＭ（ニッスイ）に５％
牛胎児血清を加え、炭酸水素ナトリウムでｐＨ＝６．８
〜７．０に調整したもの）を加え３７℃で４〜５日間培
養した。
イ）に１０％牛胎児血清を加え、炭酸水素ナトリウムで
ｐＨ＝６．８〜７．０に調整したもの）を用いて細胞数
を１．５×１０5個／ｍＬに調整し、３７℃で静置培養
した。単層シートが形成された培養３〜４日後に培養上
清を吸引除去し、ＰＢＳ（−）で３回洗浄後、０．００
００３％ＤＥＡＥ−デキストラン液を細胞が浸る程度に
加え、室温に放置した。５分後、ＤＥＡＥ−デキストラ
ン液を吸引除去し、クラミジア液（Ｆｅ／１４５株、又
はＢ１６６株）を接種（接種量＝４．５log10ELD50）し
た。３７℃で１時間吸着後、接種したクラミジア液を吸
引し、維持用培地（イーグルＭＥＭ（ニッスイ）に５％
牛胎児血清を加え、炭酸水素ナトリウムでｐＨ＝６．８
〜７．０に調整したもの）を加え３７℃で４〜５日間培
養した。
【００１７】（３）クラミジアの増殖評価
上記（２）の（ｉ）及び（ii）で得られたクラミジアの
培養液を一部採取して採取液の感染価を調べた。結果を
表１に示す。この表１から明らかなように、接着型Ｌ９
２９細胞に較べて、浮遊型Ｌ９２９細胞においてクラミ
ジアの大量な増殖が確認された。
培養液を一部採取して採取液の感染価を調べた。結果を
表１に示す。この表１から明らかなように、接着型Ｌ９
２９細胞に較べて、浮遊型Ｌ９２９細胞においてクラミ
ジアの大量な増殖が確認された。
【００１８】
【表１】
【００１９】(実施例１）上記（１）と同様の方法によ
り得られた浮遊型Ｌ９２９細胞を細胞数１．５×１０5
個／ｍＬに調整し、細胞培養用９０Ｌジャー（尚、以下
の操作中、ジャー内の培養、不活化は回転数５０ｒｐｍ
の撹拌のもとで行った。）内で３０Ｌの増殖用培地（イ
ーグルＭＥＭ（ニッスイ）＋１０％熱非働化牛胎児血
清）で３７℃で２４時間培養した。その後、毎分１００
ｍＬの下部通気を１８時間行い、その後、通気量を毎分
１Ｌに増やして培養開始から合計３日間３７℃で培養し
た。約１．２×１０6個／ｍＬの細胞数に増殖した浮遊
型Ｌ９２９細胞培養液を３，０００×ｇで１０分間遠心
し、細胞を集めた。集まった細胞を１０ＬのＰＢＳ
（＋）に浮遊し、再び３，０００×ｇで１０分間遠心し
た。この操作を２回繰り返した後、この細胞沈渣を８．
０log10ELD50のクラミジア（猫由来クラミジアＦｅ／１
４５株）を含むＳＰＧ（sucrose phosphate glutamic a
cid medium)液と混合し、３７℃で１時間振盪させるこ
とにより細胞にクラミジアを吸着させた。１時間経過
後、この吸着液全量を３０ｍｇのシクロヘキシミドを含
む維持用培地（イーグルＭＥＭ（ニッスイ）＋５％熱非
働化牛胎児血清）３０Ｌに加え、細胞培養用９０Ｌジャ
ー内で３７℃で培養した。４〜６日間経過後、培養液に
ホルマリンを最終濃度０．２％となるように添加し、３
７℃で１日間感作して不活化した。１日後、これを１
０，０００×ｇで連続遠心し、不活化クラミジア粒子及
び感染細胞を集めた。この沈渣を２ＬのＰＢＳ（−）に
再浮遊し、−８０℃に保存した。これを凍結融解後、
３，０００×ｇで１０分間遠心して細胞を除いた後、上
清を１０，０００×ｇで１時間遠心して不活化クラミジ
ア粒子を沈渣とし、これを２５０ｍＬのＰＢＳ（−）に
再浮遊してワクチン原液とした。このワクチン原液と無
水アンニトールオレイン酸エステル加流動パラフィンを
３：７の比率で混合し、ワクチンとした。
り得られた浮遊型Ｌ９２９細胞を細胞数１．５×１０5
個／ｍＬに調整し、細胞培養用９０Ｌジャー（尚、以下
の操作中、ジャー内の培養、不活化は回転数５０ｒｐｍ
の撹拌のもとで行った。）内で３０Ｌの増殖用培地（イ
ーグルＭＥＭ（ニッスイ）＋１０％熱非働化牛胎児血
清）で３７℃で２４時間培養した。その後、毎分１００
ｍＬの下部通気を１８時間行い、その後、通気量を毎分
１Ｌに増やして培養開始から合計３日間３７℃で培養し
た。約１．２×１０6個／ｍＬの細胞数に増殖した浮遊
型Ｌ９２９細胞培養液を３，０００×ｇで１０分間遠心
し、細胞を集めた。集まった細胞を１０ＬのＰＢＳ
（＋）に浮遊し、再び３，０００×ｇで１０分間遠心し
た。この操作を２回繰り返した後、この細胞沈渣を８．
０log10ELD50のクラミジア（猫由来クラミジアＦｅ／１
４５株）を含むＳＰＧ（sucrose phosphate glutamic a
cid medium)液と混合し、３７℃で１時間振盪させるこ
とにより細胞にクラミジアを吸着させた。１時間経過
後、この吸着液全量を３０ｍｇのシクロヘキシミドを含
む維持用培地（イーグルＭＥＭ（ニッスイ）＋５％熱非
働化牛胎児血清）３０Ｌに加え、細胞培養用９０Ｌジャ
ー内で３７℃で培養した。４〜６日間経過後、培養液に
ホルマリンを最終濃度０．２％となるように添加し、３
７℃で１日間感作して不活化した。１日後、これを１
０，０００×ｇで連続遠心し、不活化クラミジア粒子及
び感染細胞を集めた。この沈渣を２ＬのＰＢＳ（−）に
再浮遊し、−８０℃に保存した。これを凍結融解後、
３，０００×ｇで１０分間遠心して細胞を除いた後、上
清を１０，０００×ｇで１時間遠心して不活化クラミジ
ア粒子を沈渣とし、これを２５０ｍＬのＰＢＳ（−）に
再浮遊してワクチン原液とした。このワクチン原液と無
水アンニトールオレイン酸エステル加流動パラフィンを
３：７の比率で混合し、ワクチンとした。
【００２０】上記のようにして得られた猫クラミジアワ
クチンを、以下のように猫に免疫し、その後、クラミジ
アで攻撃することにより、ワクチンの評価を行った。
クチンを、以下のように猫に免疫し、その後、クラミジ
アで攻撃することにより、ワクチンの評価を行った。
【００２１】（猫クラミジアワクチンの評価方法）体重
約１ｋｇの２〜３ヶ月齢の猫６匹を用い、免疫群３匹
（猫番号１〜３）には、上記ワクチンを、１回１ｍＬを
猫の皮下に接種して免疫し、３週間後に同様にして再免
疫した。一方、対照群の３匹（猫番号４〜６）には何も
免疫せずに、免疫群の猫と同じケージで飼育した。再免
疫１週間後に、猫の両目及び鼻に猫由来クラミジアＢ１
６６株を３．０log10ELD50を感染させた。感染後２８日
間、毎日、結膜炎の観察及び体温の測定を行った。尚、
結膜炎の程度は、結膜充血、目やに・流涙、結膜腫脹を
左右両眼とも各３点合計で評価した。結果を図１及び図
２に示す。
約１ｋｇの２〜３ヶ月齢の猫６匹を用い、免疫群３匹
（猫番号１〜３）には、上記ワクチンを、１回１ｍＬを
猫の皮下に接種して免疫し、３週間後に同様にして再免
疫した。一方、対照群の３匹（猫番号４〜６）には何も
免疫せずに、免疫群の猫と同じケージで飼育した。再免
疫１週間後に、猫の両目及び鼻に猫由来クラミジアＢ１
６６株を３．０log10ELD50を感染させた。感染後２８日
間、毎日、結膜炎の観察及び体温の測定を行った。尚、
結膜炎の程度は、結膜充血、目やに・流涙、結膜腫脹を
左右両眼とも各３点合計で評価した。結果を図１及び図
２に示す。
【００２２】図１から明らかなように、何も免疫しない
対照群の猫は３匹ともクラミジア感染４日目から強い結
膜炎が観察されたのに対し、免疫群の猫は３匹とも症状
が弱く、また発症まで８〜１１日を要した。また、図２
に示したように、対照群では３匹とも感染１２〜１８日
目から４０℃を超える発熱が観察されたのに対し、免疫
群ではそのように発熱した個体はなかった。以上の結果
より、本発明方法により製造されたワクチンが猫のクラ
ミジア感染症の発症抑制に有効であることが明らかとな
った。
対照群の猫は３匹ともクラミジア感染４日目から強い結
膜炎が観察されたのに対し、免疫群の猫は３匹とも症状
が弱く、また発症まで８〜１１日を要した。また、図２
に示したように、対照群では３匹とも感染１２〜１８日
目から４０℃を超える発熱が観察されたのに対し、免疫
群ではそのように発熱した個体はなかった。以上の結果
より、本発明方法により製造されたワクチンが猫のクラ
ミジア感染症の発症抑制に有効であることが明らかとな
った。
【００２３】
【発明の効果】本発明によれば、浮遊型培養細胞によ
り、従来、大量に培養することが困難であった猫クラミ
ジアを効率よく大量に培養することが可能となり、さら
にこれを不活化することにより、猫クラミジア感染症の
予防に有効なワクチンを製造することが可能となった。
このワクチンを猫に接種することにより、クラミジア感
染症の予防及び蔓延の防止に有効である。また、このワ
クチンは、培養細胞を用いて培養したクラミジアから製
造することから、従来の発育鶏卵を用いて培養したクラ
ミジアから製造したワクチンに較べて異種蛋白量が極め
て少なく、アレルギー等の副作用の起こる危険性も低い
という利点もある。
り、従来、大量に培養することが困難であった猫クラミ
ジアを効率よく大量に培養することが可能となり、さら
にこれを不活化することにより、猫クラミジア感染症の
予防に有効なワクチンを製造することが可能となった。
このワクチンを猫に接種することにより、クラミジア感
染症の予防及び蔓延の防止に有効である。また、このワ
クチンは、培養細胞を用いて培養したクラミジアから製
造することから、従来の発育鶏卵を用いて培養したクラ
ミジアから製造したワクチンに較べて異種蛋白量が極め
て少なく、アレルギー等の副作用の起こる危険性も低い
という利点もある。
【図１】 クラミジア感染した猫の結膜炎の観察結果を
表すグラフ。
表すグラフ。
【図２】 クラミジア感染した猫の体温測定結果を表す
グラフ。
グラフ。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
//(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:91
Ｃ１２Ｒ 1:01） Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｅ
(Ｃ１２Ｎ 5/06
Ｃ１２Ｒ 1:91）
(72)発明者 山中 盛正
京都府宇治市明星町２丁目６−173
(56)参考文献 欧州特許出願公開641568（ＥＰ，Ａ
１)
ＩＮＦＥＣＴＩＯＮ ＡＮＤ ＩＭＭ
ＵＮＩＴＹ，1987，Ｖｏｌ．55，Ｎｏ.
11，ｐｐ．2653−2657
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
A61K 39/00
A61K 39/118
A61P 31/00
C12N 1/20
C12N 5/06
C12R 1:01
C12N 5/06
C12R 1:91
ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)
ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ)
ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
Claims (5)
- 【請求項１】 浮遊型の培養細胞を用いて増殖させた猫
クラミジアを抗原とし、これを不活化してなることを特
徴とする、猫のクラミジア感染を予防するためのワクチ
ンの製造方法。 - 【請求項２】 前記浮遊型の培養細胞として、マウス線
維芽細胞より作出された細胞を用いてなる請求項１記載
のワクチンの製造方法。 - 【請求項３】 前記マウス線維芽細胞がＬ９２９細胞で
ある請求項２記載のワクチンの製造方法。 - 【請求項４】 前記猫クラミジアがクラミジア・シッタ
シイ（Chlamydia psittaci）である請求項１〜３のいず
れかに記載のワクチンの製造方法。 - 【請求項５】 請求項１〜４のいずれかに記載の方法に
より製造されたワクチンを用いて、猫のクラミジア感染
を予防するために猫を免疫する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000094947A JP3402304B2 (ja) | 2000-03-30 | 2000-03-30 | 猫クラミジアワクチンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000094947A JP3402304B2 (ja) | 2000-03-30 | 2000-03-30 | 猫クラミジアワクチンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001278808A JP2001278808A (ja) | 2001-10-10 |
| JP3402304B2 true JP3402304B2 (ja) | 2003-05-06 |
Family
ID=18609908
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000094947A Expired - Fee Related JP3402304B2 (ja) | 2000-03-30 | 2000-03-30 | 猫クラミジアワクチンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3402304B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005333964A (ja) * | 2004-05-25 | 2005-12-08 | Yamaguchi Univ | 新規核酸、及び当該核酸を用いたスクリーニング方法 |
| PT2938747T (pt) * | 2012-12-28 | 2019-08-01 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Método de preparação de uma vacina de micoplasma |
| BR112021008808A2 (pt) * | 2018-11-08 | 2021-09-08 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Células independentes da ancoragem e utilização destas |
-
2000
- 2000-03-30 JP JP2000094947A patent/JP3402304B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ＩＮＦＥＣＴＩＯＮ ＡＮＤ ＩＭＭＵＮＩＴＹ，１９８７，Ｖｏｌ．５５，Ｎｏ．１１，ｐｐ．２６５３−２６５７ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2001278808A (ja) | 2001-10-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2749887B2 (ja) | 連続細胞系におけるｉｂｄｖの産生 | |
| JP5264843B2 (ja) | 細胞培養におけるインフルエンザウイルスの複製の方法、および本方法によって入手可能なインフルエンザウイルス | |
| Eddy | Polyomavirus | |
| JPH01230532A (ja) | 新規なワクチン及びその製法 | |
| CN104099301A (zh) | 柯萨奇病毒a16型病毒株、用途、疫苗及其制备方法 | |
| CN115141812B (zh) | 一株阿卡斑病毒疫苗株及其应用 | |
| US3520972A (en) | Feline virus vaccines obtained by propagation and serial passage attenuation of virulent feline viruses in diploid feline embryo tissue cell serial passage subculture strains | |
| CN114561366B (zh) | 一种山羊库布病毒分离株及其应用 | |
| CN114507272A (zh) | 牛赤羽病病毒疫苗 | |
| CN109679927B (zh) | 猪塞内加谷病毒、猪塞内加谷病毒灭活疫苗的制备方法、猪塞内加谷病毒灭活疫苗和应用 | |
| JP3402304B2 (ja) | 猫クラミジアワクチンの製造方法 | |
| JPS6225127B2 (ja) | ||
| WO1990015623A1 (en) | Naturally attenuated newcastle disease vaccine and method of using the same | |
| CN111138553B (zh) | 一种融合蛋白及一种弓形虫亚单位疫苗及其疫苗组合物 | |
| CN103160475A (zh) | 一种肠道病毒71型病毒株及其用途、疫苗和制备方法 | |
| CN108939060B (zh) | 一种中华鳖细菌性腮腺炎口服疫苗 | |
| CN103160474B (zh) | 肠道病毒71型病毒株、疫苗、动物模型建立方法 | |
| US3255080A (en) | Live rabies virus vaccine and method for the production thereof | |
| US3629396A (en) | Avian encephalomyelitis vaccine | |
| CN1232643C (zh) | 一种核酸疫苗 | |
| RU2242512C1 (ru) | Штамм вируса западного энцефаломиелита лошадей (western encephalomyelitis virus-wee 163-a) гкв № 964 для приготовления диагностических и профилактических препаратов | |
| RU2404804C2 (ru) | Инактивированная вакцина против вируса гепатита а | |
| SU555665A1 (ru) | Штамм LертосрIRа ромоNа ВГНКИ-6 | |
| RU2140288C1 (ru) | Способ получения живой коревой вакцины | |
| KR100556275B1 (ko) | 클라미디아시타시를함유하는고양이백신및그의제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100228 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100228 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110228 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120229 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130228 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130228 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140228 Year of fee payment: 11 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |