JP3320246B2 - 免疫分析用粒子 - Google Patents
免疫分析用粒子Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は免疫分析用粒子に関し、
更に詳しくは、試料中に存在する特定の抗原又は抗体な
ど免疫的に活性な物質を検出又は定量するための免疫分
析用粒子に関する。
更に詳しくは、試料中に存在する特定の抗原又は抗体な
ど免疫的に活性な物質を検出又は定量するための免疫分
析用粒子に関する。
【０００２】
【従来の技術】免疫分析用粒子は抗原抗体反応により惹
起される凝集現象を利用して、試料中の特定の抗原また
は抗体を検出するためのものである。この目的の為に従
来はポリスチレンラテックス粒子が広く用いられてい
る。
起される凝集現象を利用して、試料中の特定の抗原また
は抗体を検出するためのものである。この目的の為に従
来はポリスチレンラテックス粒子が広く用いられてい
る。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】免疫分析に用いられて
いる粒子の形状は、一般には球形である。しかしなが
ら、球状粒子の表面積／体積比は、粒子の形状が多形の
場合の比に比べて小さく、粒子表面を利用する免疫分析
の場合その感度を低下させる原因になっている。
いる粒子の形状は、一般には球形である。しかしなが
ら、球状粒子の表面積／体積比は、粒子の形状が多形の
場合の比に比べて小さく、粒子表面を利用する免疫分析
の場合その感度を低下させる原因になっている。
【０００４】本発明の目的はその著しく広い表面積を活
用して従来の免疫分析用粒子の形状が球形であることに
よる感度の上限を解消し、検出感度の高い分析を可能に
する免疫分析用粒子を提供することにある。
用して従来の免疫分析用粒子の形状が球形であることに
よる感度の上限を解消し、検出感度の高い分析を可能に
する免疫分析用粒子を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは先に親水性
高分子ゲルのマイクロスフェアを、親水性の表面を持つ
基板に挟み込み乾燥することによって、柱状でその底面
が複雑な多形の粒子を製造する方法を開発した（特願平
６−１２７０９１）。
高分子ゲルのマイクロスフェアを、親水性の表面を持つ
基板に挟み込み乾燥することによって、柱状でその底面
が複雑な多形の粒子を製造する方法を開発した（特願平
６−１２７０９１）。
【０００６】この粒子は多形柱状粒子が、直径１０ｎｍ
から１ｍｍ、高さが直径の１／４から１／１００であ
り、柱の断面が、分枝を有することがありうる多数の枝
がそれぞれの一端で結合して形成される中心部からそれ
ぞれの他端である外方に延伸してほゞ星状またはヒトデ
状の外形を有し、体積に対して表面積が従来使用されて
いた粒子に比して抜群に大きい。以下この粒子を簡単に
多形柱状粒子と呼ぶ。この広い表面積は免疫分析の基本
である抗原抗体反応を促進させることに極めて有利に利
用できる。すなわち、この多形柱状粒子の表面に、試料
中の抗原又は抗体に対応する抗体又は抗原を固定化する
と、抗原抗体反応による粒子の凝集が従来に比べて鋭敏
になり、免疫分析の感度を向上させることが可能である
ことを見いだし、本発明を完成した。
から１ｍｍ、高さが直径の１／４から１／１００であ
り、柱の断面が、分枝を有することがありうる多数の枝
がそれぞれの一端で結合して形成される中心部からそれ
ぞれの他端である外方に延伸してほゞ星状またはヒトデ
状の外形を有し、体積に対して表面積が従来使用されて
いた粒子に比して抜群に大きい。以下この粒子を簡単に
多形柱状粒子と呼ぶ。この広い表面積は免疫分析の基本
である抗原抗体反応を促進させることに極めて有利に利
用できる。すなわち、この多形柱状粒子の表面に、試料
中の抗原又は抗体に対応する抗体又は抗原を固定化する
と、抗原抗体反応による粒子の凝集が従来に比べて鋭敏
になり、免疫分析の感度を向上させることが可能である
ことを見いだし、本発明を完成した。
【０００７】本発明に用いられる多形柱状粒子は、親水
性高分子ゲルのマイクロスフェアを、親水性の表面を持
つ基板に挟み込み乾燥することによって調製される。簡
単に説明すれば、大きさとしては１０ｎｍ〜１ｍｍの径
を有し、径の１／４から１／１００の高さを有する、デ
ィスク状の多形粒子である。免疫分析用に用いられる為
に大きさはディスクの径で１０ｎｍ〜数μｍが好まし
い。また水懸濁媒体中における安定性を付与する為に、
親水性高分子ゲルポリマーに少量の硫酸基、カルボキシ
ル基、水酸基、界面活性剤などを導入しても良い。後の
実施例で製法を示したが更に詳細な情報が必要であれば
前記の特許公報に開示してある。
性高分子ゲルのマイクロスフェアを、親水性の表面を持
つ基板に挟み込み乾燥することによって調製される。簡
単に説明すれば、大きさとしては１０ｎｍ〜１ｍｍの径
を有し、径の１／４から１／１００の高さを有する、デ
ィスク状の多形粒子である。免疫分析用に用いられる為
に大きさはディスクの径で１０ｎｍ〜数μｍが好まし
い。また水懸濁媒体中における安定性を付与する為に、
親水性高分子ゲルポリマーに少量の硫酸基、カルボキシ
ル基、水酸基、界面活性剤などを導入しても良い。後の
実施例で製法を示したが更に詳細な情報が必要であれば
前記の特許公報に開示してある。
【０００８】多形柱状粒子の表面に結合させる免疫的に
活性な物質としては、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥなどの免
疫グロブリン；補体、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、
フェリチン、α1 マクログロブリン、β2 マクログロブ
リンなど血漿蛋白及びそれらの抗体；α−フェトプロテ
イン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺性酸性ホスファ
ターゼ（ＰＡＰ）、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５などの
腫瘍マーカー及びそれらの抗体；黄体化ホルモン（Ｌ
Ｈ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ヒト絨毛性ゴナド
トロピン（ｈＣＧ）、エストロゲン、インスリンなどの
ホルモン類及びそれらの抗体；ＨＢＶ関連抗原（ＨＢ
ｓ、ＨＢｅ、ＨＢｃ）、ＨＩＶ、ＡＴＬなどウイルス感
染関連物質及びそれらの抗体；ジフテリア菌、ボツリヌ
ス菌、マイコプラズマ、梅毒トレポネーマなどのバクテ
リア類及びそれらの抗体；トキソプラズマ、トリコモナ
ス・リーシュマニア、トリパノゾーマ、マラリア原虫な
どの原虫類及びそれらの抗体；フェニトイン、フェノバ
ルビタールなどの抗てんかん薬、キニジン、ジゴキシニ
ンなどの心血管薬、テオフィリンなどの抗喘息薬、クロ
ラムフェニコール、ゲンタマイシンなどの抗生物質など
の薬物類及びそれらの抗体；その他酵素、菌体外毒素
（ストレリジンＯなど）及びそれらの抗体などがあり、
検体中の被測定物質と抗原−抗体反応を起こす物質が検
体の種類に応じて適宜選択されて使用される。
活性な物質としては、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥなどの免
疫グロブリン；補体、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、
フェリチン、α1 マクログロブリン、β2 マクログロブ
リンなど血漿蛋白及びそれらの抗体；α−フェトプロテ
イン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺性酸性ホスファ
ターゼ（ＰＡＰ）、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５などの
腫瘍マーカー及びそれらの抗体；黄体化ホルモン（Ｌ
Ｈ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ヒト絨毛性ゴナド
トロピン（ｈＣＧ）、エストロゲン、インスリンなどの
ホルモン類及びそれらの抗体；ＨＢＶ関連抗原（ＨＢ
ｓ、ＨＢｅ、ＨＢｃ）、ＨＩＶ、ＡＴＬなどウイルス感
染関連物質及びそれらの抗体；ジフテリア菌、ボツリヌ
ス菌、マイコプラズマ、梅毒トレポネーマなどのバクテ
リア類及びそれらの抗体；トキソプラズマ、トリコモナ
ス・リーシュマニア、トリパノゾーマ、マラリア原虫な
どの原虫類及びそれらの抗体；フェニトイン、フェノバ
ルビタールなどの抗てんかん薬、キニジン、ジゴキシニ
ンなどの心血管薬、テオフィリンなどの抗喘息薬、クロ
ラムフェニコール、ゲンタマイシンなどの抗生物質など
の薬物類及びそれらの抗体；その他酵素、菌体外毒素
（ストレリジンＯなど）及びそれらの抗体などがあり、
検体中の被測定物質と抗原−抗体反応を起こす物質が検
体の種類に応じて適宜選択されて使用される。
【０００９】多形柱状粒子に抗原や抗体を感作させる方
法には、物理吸着法と化学結合法があり、どちらを用い
ても良い。物理吸着法は、蛋白質と多形柱状粒子を混合
するだけで容易に形成される疎水結合を利用するもので
あるが、作り易い多形柱状粒子は基本的に親水性である
ので疎水結合は生じにくい。この点を解決し感作効率を
向上させる目的で、親水性高分子ゲルポリマーに少量の
炭素数３以上のアルキル基やフェニル基を導入しても良
い。ただし多量の疎水性基の導入は粒子の多形性の減少
を惹起し易いので、ポリマー重量の１０％以下に抑える
ことが望ましい。
法には、物理吸着法と化学結合法があり、どちらを用い
ても良い。物理吸着法は、蛋白質と多形柱状粒子を混合
するだけで容易に形成される疎水結合を利用するもので
あるが、作り易い多形柱状粒子は基本的に親水性である
ので疎水結合は生じにくい。この点を解決し感作効率を
向上させる目的で、親水性高分子ゲルポリマーに少量の
炭素数３以上のアルキル基やフェニル基を導入しても良
い。ただし多量の疎水性基の導入は粒子の多形性の減少
を惹起し易いので、ポリマー重量の１０％以下に抑える
ことが望ましい。
【００１０】化学結合法は、多形柱状粒子の表面の官能
基を利用して、蛋白質と共有結合を形成させるものであ
る。代表的なものは、多形柱状粒子表面のカルボン酸を
水溶性カルボジイミドで活性化し、蛋白質のアミノ基と
反応させる方法である。この他にも、グルタルアルデヒ
ドなどのポリアルデヒドを用いたカルバモイル基やアミ
ノ基の架橋固定化、臭化シアンを用いたヒドロキシル基
の架橋固定化、エポキシ基やアルデヒド基を利用した直
接固定化など公知の方法で多形柱状粒子表面に抗原又は
抗体を結合させることができる（固定化酵素、講談社
（１９７５）、千畑一郎編参照）。
基を利用して、蛋白質と共有結合を形成させるものであ
る。代表的なものは、多形柱状粒子表面のカルボン酸を
水溶性カルボジイミドで活性化し、蛋白質のアミノ基と
反応させる方法である。この他にも、グルタルアルデヒ
ドなどのポリアルデヒドを用いたカルバモイル基やアミ
ノ基の架橋固定化、臭化シアンを用いたヒドロキシル基
の架橋固定化、エポキシ基やアルデヒド基を利用した直
接固定化など公知の方法で多形柱状粒子表面に抗原又は
抗体を結合させることができる（固定化酵素、講談社
（１９７５）、千畑一郎編参照）。
【００１１】
【実施例】以下、本発明を実施例を用いて更に詳細に説
明する。 実施例１ ＜逆相懸濁重合法による親水性高分子ゲル粒子の作製＞
次の水溶液Ａを用意した。
明する。 実施例１ ＜逆相懸濁重合法による親水性高分子ゲル粒子の作製＞
次の水溶液Ａを用意した。
【００１２】水溶液Ａ：１０％アクリルアミド、０．１
％アクリル酸、０．２５％メチレンビスアクリルアミ
ド、０．２％Ｎ−メチロールアクリルアミド及び２．５
ｍｇ／ｍｌ過硫酸アンモニウムを含む５０ｍＭトリス塩
酸緩衝液（ｐＨ８．０） 容量３００ｍｌの四頭丸底フラスコにＮ2 供給口、温度
計、滴下用セプタム栓、および羽根式攪拌機を装備し
た。Ｎ2 ガスを掃流しながらベンゼン８６．４ｍｌとク
ロロホルム２１．６ｍｌ、さらに水溶液Ａ１２ｍｌをフ
ラスコに入れた。セプタムで密栓後、氷浴上、１，００
０ｒｐｍで攪拌した。ドデシル硫酸ナトリウム１０％水
溶液を１．５ｍｌ注入管に取り、セプタム栓からゆっく
り注入した。界面活性剤の注入により乳化が起こり白濁
した。Ｎ2 ガスの掃流により溶存気体を十分置換した
後、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミ
ン３００μｌをマイクロシリンジに取りセプタム栓から
フラスコに注入した。１０分以内に発熱があり、その後
１時間攪拌した。内容物を１ｌナス型フラスコに移し、
イオン交換水１５ｍｌを加え、ロータリーエヴァポレー
ターにより有機溶媒を除去し、ポリアクリルアミドゲル
粒子を水相に移行させ、回収した。イオン交換水でゲル
粒子を懸濁し、遠心分離によってゲル粒子を回収する操
作を繰り返すことにより、ゲル粒子を洗浄し、イオン交
換水中にて保存した。動的光散乱法により粒径を測定す
ると１．５μｍであった。 ＜ガラス基板の親水性処理＞光学顕微鏡観察用スライド
グラスおよびカバーガラスを０．１Ｎ水酸化ナトリウム
で処理することにより表面を親水性とした。両基板はイ
オン交換水中で保存し、使用直前に窒素ガスをブローし
て水分を払った。 ＜親水性高分子ゲル粒子の展開＞上記アクリルアミドゲ
ル粒子の水懸濁液を適当に希釈し、前記親水性処理した
スライドグラス上に注ぎ、ゲル粒子を２５万個／ｍｍ2
の粒子密度で吸着させた。浮遊している余分なゲル粒子
を除いた。 ＜親水性高分子ゲル粒子の乾燥＞続いて前記親水性処理
したカバーグラスをかけ展開されたアクリルアミドゲル
粒子を挟んだ。その際カバーグラスの四隅にスペーサー
を挟んで、基板間の距離を５μｍに保持した。試料をデ
シケーター中にて希硫酸を乾燥剤として室温で７２時間
乾燥した。 ＜多形柱状粒子の回収＞得られた多形柱状粒子を１１０
℃、３分間の熱処理を施した。カバーグラスを剥し、ス
ライドグラス及びカバーグラスを水に浸漬しながら表面
にある多形柱状粒子を鋭利な刃物でこそげ取り回収し
た。回収された多形柱状粒子の水中での膨潤は観察され
なかった。動的光散乱法によって粒径を測定すると１５
０ｎｍであった。 ＜抗体感作懸濁液の調製＞抗ヒトＣＲＰヤギ血清（Ｂｉ
ｏ Ｍａｋｏｒ製）をＰｒｏｔｅｉｎ−Ａ Ｓｅｐｈａ
ｒｏｓｅ（ファルマシア製）のカラムクロマトグラフィ
ーによりＩｇＧ分画に精製し、ｐＨ５．５の０．１Ｍリ
ン酸塩緩衝液に１０ｍｇ／ｍｌの濃度となるように希釈
した。
％アクリル酸、０．２５％メチレンビスアクリルアミ
ド、０．２％Ｎ−メチロールアクリルアミド及び２．５
ｍｇ／ｍｌ過硫酸アンモニウムを含む５０ｍＭトリス塩
酸緩衝液（ｐＨ８．０） 容量３００ｍｌの四頭丸底フラスコにＮ2 供給口、温度
計、滴下用セプタム栓、および羽根式攪拌機を装備し
た。Ｎ2 ガスを掃流しながらベンゼン８６．４ｍｌとク
ロロホルム２１．６ｍｌ、さらに水溶液Ａ１２ｍｌをフ
ラスコに入れた。セプタムで密栓後、氷浴上、１，００
０ｒｐｍで攪拌した。ドデシル硫酸ナトリウム１０％水
溶液を１．５ｍｌ注入管に取り、セプタム栓からゆっく
り注入した。界面活性剤の注入により乳化が起こり白濁
した。Ｎ2 ガスの掃流により溶存気体を十分置換した
後、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミ
ン３００μｌをマイクロシリンジに取りセプタム栓から
フラスコに注入した。１０分以内に発熱があり、その後
１時間攪拌した。内容物を１ｌナス型フラスコに移し、
イオン交換水１５ｍｌを加え、ロータリーエヴァポレー
ターにより有機溶媒を除去し、ポリアクリルアミドゲル
粒子を水相に移行させ、回収した。イオン交換水でゲル
粒子を懸濁し、遠心分離によってゲル粒子を回収する操
作を繰り返すことにより、ゲル粒子を洗浄し、イオン交
換水中にて保存した。動的光散乱法により粒径を測定す
ると１．５μｍであった。 ＜ガラス基板の親水性処理＞光学顕微鏡観察用スライド
グラスおよびカバーガラスを０．１Ｎ水酸化ナトリウム
で処理することにより表面を親水性とした。両基板はイ
オン交換水中で保存し、使用直前に窒素ガスをブローし
て水分を払った。 ＜親水性高分子ゲル粒子の展開＞上記アクリルアミドゲ
ル粒子の水懸濁液を適当に希釈し、前記親水性処理した
スライドグラス上に注ぎ、ゲル粒子を２５万個／ｍｍ2
の粒子密度で吸着させた。浮遊している余分なゲル粒子
を除いた。 ＜親水性高分子ゲル粒子の乾燥＞続いて前記親水性処理
したカバーグラスをかけ展開されたアクリルアミドゲル
粒子を挟んだ。その際カバーグラスの四隅にスペーサー
を挟んで、基板間の距離を５μｍに保持した。試料をデ
シケーター中にて希硫酸を乾燥剤として室温で７２時間
乾燥した。 ＜多形柱状粒子の回収＞得られた多形柱状粒子を１１０
℃、３分間の熱処理を施した。カバーグラスを剥し、ス
ライドグラス及びカバーグラスを水に浸漬しながら表面
にある多形柱状粒子を鋭利な刃物でこそげ取り回収し
た。回収された多形柱状粒子の水中での膨潤は観察され
なかった。動的光散乱法によって粒径を測定すると１５
０ｎｍであった。 ＜抗体感作懸濁液の調製＞抗ヒトＣＲＰヤギ血清（Ｂｉ
ｏ Ｍａｋｏｒ製）をＰｒｏｔｅｉｎ−Ａ Ｓｅｐｈａ
ｒｏｓｅ（ファルマシア製）のカラムクロマトグラフィ
ーによりＩｇＧ分画に精製し、ｐＨ５．５の０．１Ｍリ
ン酸塩緩衝液に１０ｍｇ／ｍｌの濃度となるように希釈
した。
【００１３】前記多形柱状粒子１０％水−懸濁液１０ｍ
ｌに縮合剤として１−シクロヘキシル−３−（２−モル
ホリノエチル）カルボジイミド メソ−ｐ−トルエンス
ルホネート（以下カルボジイミドＴａ）の１％水溶液２
５ｍｌを加え、更に上述のＩｇＧ分画抗体２０ｍｌを加
え、室温で３時間攪拌し、感作多形柱状粒子を得た。上
記感作多形柱状粒子を遠心洗浄後、１％牛血清アルブミ
ン３％ショ糖となるように調製したｐＨ７．２のリン酸
塩緩衝液−生理食塩水（以下ＰＢＳ）を加え、ＣＲＰ抗
体感作多形柱状粒子懸濁液とした。 ＜免疫分析−ＣＲＰの測定＞標準ＣＲＰ血清（協和油化
製）をトリス塩酸緩衝液で希釈し、０．５ｍｇ／ｄｌの
濃度とした。
ｌに縮合剤として１−シクロヘキシル−３−（２−モル
ホリノエチル）カルボジイミド メソ−ｐ−トルエンス
ルホネート（以下カルボジイミドＴａ）の１％水溶液２
５ｍｌを加え、更に上述のＩｇＧ分画抗体２０ｍｌを加
え、室温で３時間攪拌し、感作多形柱状粒子を得た。上
記感作多形柱状粒子を遠心洗浄後、１％牛血清アルブミ
ン３％ショ糖となるように調製したｐＨ７．２のリン酸
塩緩衝液−生理食塩水（以下ＰＢＳ）を加え、ＣＲＰ抗
体感作多形柱状粒子懸濁液とした。 ＜免疫分析−ＣＲＰの測定＞標準ＣＲＰ血清（協和油化
製）をトリス塩酸緩衝液で希釈し、０．５ｍｇ／ｄｌの
濃度とした。
【００１４】上記ＣＲＰ抗体感作多形柱状粒子懸濁液
を、粒子固形分濃度が０．２％となるようにＰＢＳで希
釈し、ガラス製光学セル（光路長１ｃｍ）に入れた。
を、粒子固形分濃度が０．２％となるようにＰＢＳで希
釈し、ガラス製光学セル（光路長１ｃｍ）に入れた。
【００１５】更に上記セル中にＣＲＰ標準血清（０．５
ｍｇ／ｄｌ）を１０μｌ加え、ただちに分光光度計で６
３３ｎｍの波長における吸光度変化を測定した。
ｍｇ／ｄｌ）を１０μｌ加え、ただちに分光光度計で６
３３ｎｍの波長における吸光度変化を測定した。
【００１６】吸光度測定開始後１２０秒以内に吸光度は
一定となり、ＣＲＰ量に比例した凝集比濁現象が観察さ
れた。 実施例２ 実施例１と同様にして多形柱状粒子を調製した。 ＜抗体感作多形柱状粒子の調製＞抗ｈＣＧ抗体（ウサ
ギ）（Ｂｉｏ Ｍａｋｏｒ製）をＰｒｏｔｅｉｎ−Ａ
Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ファルマシア製）のカラムクロマ
トグラフィーによりＩｇＧ分画に精製し、そのＩｇＧ分
画をｐＨ７．２のリン酸緩衝液に、１０ｍｇ／ｍｌの濃
度で希釈した。
一定となり、ＣＲＰ量に比例した凝集比濁現象が観察さ
れた。 実施例２ 実施例１と同様にして多形柱状粒子を調製した。 ＜抗体感作多形柱状粒子の調製＞抗ｈＣＧ抗体（ウサ
ギ）（Ｂｉｏ Ｍａｋｏｒ製）をＰｒｏｔｅｉｎ−Ａ
Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ファルマシア製）のカラムクロマ
トグラフィーによりＩｇＧ分画に精製し、そのＩｇＧ分
画をｐＨ７．２のリン酸緩衝液に、１０ｍｇ／ｍｌの濃
度で希釈した。
【００１７】多形柱状粒子１０％−水懸濁液４ｍｌにカ
ルボジイミドＴａの１％水溶液２０ｍｌ加え、さらにＩ
ｇＧ分画抗体２０ｍｌを加え、室温で２時間攪拌し、固
定化した抗体感作多形柱状粒子を得た。
ルボジイミドＴａの１％水溶液２０ｍｌ加え、さらにＩ
ｇＧ分画抗体２０ｍｌを加え、室温で２時間攪拌し、固
定化した抗体感作多形柱状粒子を得た。
【００１８】上記感作粒子を遠心洗浄後、１％牛血清ア
ルブミン３％ショ糖、２％カルボキシメチルセルロース
ナトリウム塩となるように添加し、ＰＢＳを加え再分散
しｈＣＧ抗体感作多形柱状粒子懸濁液とした。 ＜免疫分析−ｈＣＧの測定＞ｈＣＧ標準液（日本ケミカ
ルリサーチ製）をＰＢＳで希釈し、１０ＩＵ／ｍｌの濃
度とした。
ルブミン３％ショ糖、２％カルボキシメチルセルロース
ナトリウム塩となるように添加し、ＰＢＳを加え再分散
しｈＣＧ抗体感作多形柱状粒子懸濁液とした。 ＜免疫分析−ｈＣＧの測定＞ｈＣＧ標準液（日本ケミカ
ルリサーチ製）をＰＢＳで希釈し、１０ＩＵ／ｍｌの濃
度とした。
【００１９】上記ｈＣＧ抗体感作多形柱状粒子懸濁液
を、粒子固形分濃度が０．２％となるようにＰＢＳで希
釈し、ガラス製光学セル（光路長１ｃｍ）に入れた。
を、粒子固形分濃度が０．２％となるようにＰＢＳで希
釈し、ガラス製光学セル（光路長１ｃｍ）に入れた。
【００２０】更に上記セル中にｈＣＧ標準液（１０ＩＵ
／ｍｌ）を１０μｌ加え、ただちに分光光度計で６３３
ｎｍの波長における吸光度変化を測定した。
／ｍｌ）を１０μｌ加え、ただちに分光光度計で６３３
ｎｍの波長における吸光度変化を測定した。
【００２１】吸光度測定開始後１２０秒以内に吸光度は
一定となり、ｈＣＧ量に比例した凝集比濁現象が観察さ
れた。
一定となり、ｈＣＧ量に比例した凝集比濁現象が観察さ
れた。
【００２２】
【発明の効果】本発明によれば、高感度免疫分析に利用
可能な感作多形柱状粒子を得ることができる。
可能な感作多形柱状粒子を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に用いる多形柱状粒子の一例の形状を示
す模式図。
す模式図。
Claims (4)
- 【請求項１】 多形柱状粒子の表面に免疫的に活性な物
質が固定された免疫分析用粒子であって、 前記多形柱状粒子は、柱の横断面の中心部から外方に延
伸された複数の枝を有し、星状またはヒトデ状の外形を
有する ことを特徴とする免疫分析用粒子。 - 【請求項２】 多形柱状粒子は親水性高分子ゲルポリマ
ーよりなり、ポリマー重量の１０％を超えない疎水性基
を含むことを特徴とする請求項１に記載の免疫分析用粒
子。 - 【請求項３】 疎水性基は、炭素数３以上のアルキル基
またはフェニル基のいずれか１以上であることを特徴と
する請求項２に記載の免疫分析用粒子。 - 【請求項４】 親水性高分子ゲルポリマーは、カルボキ
シル基、アミノ基、ヒドロキシル基のいずれか１以上を
少なくとも多形柱状粒子の表面に有することを特徴とす
る請求項２または３のいずれかに記載の免疫分析用粒
子。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP08242495A JP3320246B2 (ja) | 1995-04-07 | 1995-04-07 | 免疫分析用粒子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP08242495A JP3320246B2 (ja) | 1995-04-07 | 1995-04-07 | 免疫分析用粒子 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08278307A JPH08278307A (ja) | 1996-10-22 |
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1995
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