JP3291784B2 - 血液凝固因子活性測定法 - Google Patents
血液凝固因子活性測定法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、血液凝固第Ｖおよび第
ＶＩＩＩ因子の活性測定の際用いるリン脂質を担体に固
定化し、血液凝固第Ｖ及び第ＶＩＩＩ引致の活性測定を
簡便化した活性測定法に関するものである。
ＶＩＩＩ因子の活性測定の際用いるリン脂質を担体に固
定化し、血液凝固第Ｖ及び第ＶＩＩＩ引致の活性測定を
簡便化した活性測定法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】血液凝固第Ｖ及び第ＶＩＩＩ因子は、血
液凝固の際、活性化血小板表面上に露出したホスファチ
ジルセリン表面上において働く補因子である。詳しく
は、血液凝固第Ｖ因子はホスファチジルセリンの露出し
た血小板などの表面上において活性化血液凝固第Ｘ因子
（ＦＸａ）による血液凝固第ＩＩ因子（プロトロンビ
ン）の活性化を促進する因子であり、血液凝固第ＶＩＩ
Ｉ因子は活性化血液凝固第ＩＸ因子（ＦＩＸａ）による
血液凝固第Ｘ因子の活性化を促進する因子である。
液凝固の際、活性化血小板表面上に露出したホスファチ
ジルセリン表面上において働く補因子である。詳しく
は、血液凝固第Ｖ因子はホスファチジルセリンの露出し
た血小板などの表面上において活性化血液凝固第Ｘ因子
（ＦＸａ）による血液凝固第ＩＩ因子（プロトロンビ
ン）の活性化を促進する因子であり、血液凝固第ＶＩＩ
Ｉ因子は活性化血液凝固第ＩＸ因子（ＦＩＸａ）による
血液凝固第Ｘ因子の活性化を促進する因子である。
【０００３】血液凝固第ＶＩＩＩ因子の欠損あるい機能
障害による出血性の疾患血友病Ａは５０００〜１０００
０人に一人と非常に多数の患者が認められる。また血液
凝固第Ｖ因子の先天性の欠損症パラヘモフィリアは１９
４３年Ｏｗｒｅｎにより発見され（Lancet,1,446,1943
年）、以来現在までに世界で約１００例が報告されてい
る。更に最近になり、血液凝固第Ｖ及び第ＶＩＩＩ因子
は後天性欠乏症として産生細胞である肝臓の障害、ある
いは血管内凝固症候群（ＤＩＣ）において低下すること
が知られている。
障害による出血性の疾患血友病Ａは５０００〜１０００
０人に一人と非常に多数の患者が認められる。また血液
凝固第Ｖ因子の先天性の欠損症パラヘモフィリアは１９
４３年Ｏｗｒｅｎにより発見され（Lancet,1,446,1943
年）、以来現在までに世界で約１００例が報告されてい
る。更に最近になり、血液凝固第Ｖ及び第ＶＩＩＩ因子
は後天性欠乏症として産生細胞である肝臓の障害、ある
いは血管内凝固症候群（ＤＩＣ）において低下すること
が知られている。
【０００４】これら疾病を早期に感知するには、血液凝
固第Ｖ及び第ＶＩＩＩ因子活性の測定は必須である。従
来、その測定方法としては、その活性を測定するための
各種凝固時間測定法、合成基質を用いた測定方法、ある
いはその抗原量を測定するための免疫学的な酵素抗体測
定法が知られている。
固第Ｖ及び第ＶＩＩＩ因子活性の測定は必須である。従
来、その測定方法としては、その活性を測定するための
各種凝固時間測定法、合成基質を用いた測定方法、ある
いはその抗原量を測定するための免疫学的な酵素抗体測
定法が知られている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかし、従来の測定法
は非常に繁雑であり、簡便な、強いては自動化に適した
方法が切望されていた。
は非常に繁雑であり、簡便な、強いては自動化に適した
方法が切望されていた。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、簡便に血
液凝固第因子の活性測定が行え、従来困難であった自動
化に適した血液凝固因子活性測定法を鋭意検討した結
果、リン脂質を固定化した担体を用いることで操作が簡
便化され、更にはバックグラウンドの軽減した精度の高
い活性測定法を提供できることを見出だし本発明を完成
させた。即ち本発明は、リン脂質を固定化した担体を用
いる血液凝固因子活性測定法である。以下に本発明を詳
細に説明する。
液凝固第因子の活性測定が行え、従来困難であった自動
化に適した血液凝固因子活性測定法を鋭意検討した結
果、リン脂質を固定化した担体を用いることで操作が簡
便化され、更にはバックグラウンドの軽減した精度の高
い活性測定法を提供できることを見出だし本発明を完成
させた。即ち本発明は、リン脂質を固定化した担体を用
いる血液凝固因子活性測定法である。以下に本発明を詳
細に説明する。
【０００７】（１）リン脂質 測定に用いるリン脂質は少なくとのホスファチジルセリ
ンを含む物であれば特に限定されない。例えば、牛脳か
らのリン脂質抽出物等が例示できる。より好ましくは、
常法で精製されたホスファチジルセリン、あるいはホス
ファチジルコリン等、他のリン脂質とホスファチジルセ
リンとの混合物が良い。この際、血液凝固第Ｖ因子では
ホスファチジルセリンの含有モル％が１５〜４０％、血
液凝固第ＶＩＩＩ因子では５０〜１００％であると良い
が、血液凝固第Ｖ又は第ＶＩＩＩ因子の活性測定にはそ
れぞれ１５〜２０、８０〜９０％であることが特に好ま
しい。
ンを含む物であれば特に限定されない。例えば、牛脳か
らのリン脂質抽出物等が例示できる。より好ましくは、
常法で精製されたホスファチジルセリン、あるいはホス
ファチジルコリン等、他のリン脂質とホスファチジルセ
リンとの混合物が良い。この際、血液凝固第Ｖ因子では
ホスファチジルセリンの含有モル％が１５〜４０％、血
液凝固第ＶＩＩＩ因子では５０〜１００％であると良い
が、血液凝固第Ｖ又は第ＶＩＩＩ因子の活性測定にはそ
れぞれ１５〜２０、８０〜９０％であることが特に好ま
しい。
【０００８】（２）固定化担体 リン脂質を固定化する担体は、前記したリン脂質を固定
可能なものであればその材質、形状に制限はない。材質
はホリスチレン、ポリ塩化ビニルなど通常イムノアッセ
イに用いられるものが好ましく、また形状も通常イムノ
アッセイに用いられるプレ−ト状又はビ−ズが好まし
い。
可能なものであればその材質、形状に制限はない。材質
はホリスチレン、ポリ塩化ビニルなど通常イムノアッセ
イに用いられるものが好ましく、また形状も通常イムノ
アッセイに用いられるプレ−ト状又はビ−ズが好まし
い。
【０００９】（３）血液凝固第Ｖ因子の活性測定 リン脂質固定化担体がプレ−ト等、反応容器を兼ねてい
る場合はその中に、ビ−ズなどの場合は適当な容器に当
該ビ−ズを入れ、測定するサンプル及び以下の試薬を加
えれば良い。試薬は少なくとも活性化血液凝固第Ｘ因子
（ＦＸａ）、血液凝固第ＩＩ因子（ＦＩＩ）及び塩化カ
ルシウムである。例えば血液凝固第Ｖ因子が欠乏した血
しょう、あるいは粗精製したＦＸａ、ＦＩＩ及び塩化カ
ルシウムを適当な濃度で加えれば良い。反応後、生成し
た活性化血液凝固第ＩＩ因子（トロンビン）の量を測定
することで血液凝固第Ｖ因子の活性が測定できる。生成
したトロンビンは、例えばトロンビンに特異的な合成基
質などにより測定することができる。
る場合はその中に、ビ−ズなどの場合は適当な容器に当
該ビ−ズを入れ、測定するサンプル及び以下の試薬を加
えれば良い。試薬は少なくとも活性化血液凝固第Ｘ因子
（ＦＸａ）、血液凝固第ＩＩ因子（ＦＩＩ）及び塩化カ
ルシウムである。例えば血液凝固第Ｖ因子が欠乏した血
しょう、あるいは粗精製したＦＸａ、ＦＩＩ及び塩化カ
ルシウムを適当な濃度で加えれば良い。反応後、生成し
た活性化血液凝固第ＩＩ因子（トロンビン）の量を測定
することで血液凝固第Ｖ因子の活性が測定できる。生成
したトロンビンは、例えばトロンビンに特異的な合成基
質などにより測定することができる。
【００１０】（４）血液凝固第ＶＩＩＩ因子の活性測定 血液凝固第Ｖ因子活性測と同様、リン脂質固定化担体が
プレ−ト等、反応容器を兼ねている場合はその中に、ビ
−ズなどの場合は適当な容器にビ−ズを入れ測定するサ
ンプル及び以下の試薬を加えれば良い。試薬は少なくと
も活性化血液凝固第ＩＸ因子（ＦＩＸａ）、血液凝固第
Ｘ因子（ＦＸ）及び塩化カルシウムである。例えば血液
凝固第ＶＩＩＩ因子が欠乏した血しょう、あるいは粗精
製したＦＩＸａ、ＦＸ及び塩化カルシウムを適当な濃度
で加えば良い。反応後、生成した活性化血液凝固第Ｘ因
子（ＦＸａ）の量を測定することにより血液凝固第ＶＩ
ＩＩ因子の活性を測定できる。生成したＦＸａは、例え
ばＦＸａに特異的な合成基質などにより測定することが
できる。
プレ−ト等、反応容器を兼ねている場合はその中に、ビ
−ズなどの場合は適当な容器にビ−ズを入れ測定するサ
ンプル及び以下の試薬を加えれば良い。試薬は少なくと
も活性化血液凝固第ＩＸ因子（ＦＩＸａ）、血液凝固第
Ｘ因子（ＦＸ）及び塩化カルシウムである。例えば血液
凝固第ＶＩＩＩ因子が欠乏した血しょう、あるいは粗精
製したＦＩＸａ、ＦＸ及び塩化カルシウムを適当な濃度
で加えば良い。反応後、生成した活性化血液凝固第Ｘ因
子（ＦＸａ）の量を測定することにより血液凝固第ＶＩ
ＩＩ因子の活性を測定できる。生成したＦＸａは、例え
ばＦＸａに特異的な合成基質などにより測定することが
できる。
【００１１】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、本発明は実施例に限定されるものではない。
するが、本発明は実施例に限定されるものではない。
【００１２】実施例１ 本測定法での血液凝固第ＶＩＩＩ因子活性化の際のリン
脂質特異性を以下の方法で測定した。細胞培養用２４穴
プレイト（Corning 社製）に１０μＭの濃度のホスファ
チジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルエタノ−ルアミ
ン（ＰＥ）、ホスファチジルイノシト−ル（ＰＩ）、ホ
スファチジン酸（ＰＡ）あるいはカルジオリピン（Ｃ
Ｌ）を等量のホスファチジルコリン（ＰＣ，１０μＭ）
と混合したエタノ−ル溶液２００μｌ／穴を入れ、室温
で乾燥させリン脂質をコ−トした。
脂質特異性を以下の方法で測定した。細胞培養用２４穴
プレイト（Corning 社製）に１０μＭの濃度のホスファ
チジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルエタノ−ルアミ
ン（ＰＥ）、ホスファチジルイノシト−ル（ＰＩ）、ホ
スファチジン酸（ＰＡ）あるいはカルジオリピン（Ｃ
Ｌ）を等量のホスファチジルコリン（ＰＣ，１０μＭ）
と混合したエタノ−ル溶液２００μｌ／穴を入れ、室温
で乾燥させリン脂質をコ−トした。
【００１３】続いて３％の牛血清アルブミンを含む１０
ｍＭトリス塩酸、１５０ｍＭ塩化ナトリウム溶液、ｐＨ
７．４（ＴＢＳ）を２００μｌ／穴加え、３時間ブロッ
キング処理を行った。次に牛血清アルブミンを含まない
ＴＢＳにより３回洗浄後、５０倍希釈した正常人血しょ
う、および予め３７℃に加温した１００μｌの血液凝固
第Ｘ因子（１５ｎｋａｔ／ｍｌ、カビ社）、活性化血液
凝固第ＩＸ因子（０．４ｎｍｏｌ／ｍｌ）混合物を加え
３７℃で１０分放置した。さらに５０μｌの２５ｍＭ塩
化カルシウム溶液を加え、３７℃で正確に１０分間反応
させ、１００μｌの活性化血液凝固第Ｘ因子特異的合成
基質Ｓ２２２２（２．７ｍＭ，ｋａｂｉ社）を加え３７
℃で２０分間反応させた。５０μｌの５０％酢酸により
反応を停止し、４０５ｎｍの吸光度を測定した。また、
血しょう及び血液凝固第Ｘ因子、活性化血液凝固第ＩＸ
因子混合物は０．２％牛血清アルブミンを含む５０ｍＭ
トリス塩酸緩衝溶液、ｐＨ７．３にて希釈した。
ｍＭトリス塩酸、１５０ｍＭ塩化ナトリウム溶液、ｐＨ
７．４（ＴＢＳ）を２００μｌ／穴加え、３時間ブロッ
キング処理を行った。次に牛血清アルブミンを含まない
ＴＢＳにより３回洗浄後、５０倍希釈した正常人血しょ
う、および予め３７℃に加温した１００μｌの血液凝固
第Ｘ因子（１５ｎｋａｔ／ｍｌ、カビ社）、活性化血液
凝固第ＩＸ因子（０．４ｎｍｏｌ／ｍｌ）混合物を加え
３７℃で１０分放置した。さらに５０μｌの２５ｍＭ塩
化カルシウム溶液を加え、３７℃で正確に１０分間反応
させ、１００μｌの活性化血液凝固第Ｘ因子特異的合成
基質Ｓ２２２２（２．７ｍＭ，ｋａｂｉ社）を加え３７
℃で２０分間反応させた。５０μｌの５０％酢酸により
反応を停止し、４０５ｎｍの吸光度を測定した。また、
血しょう及び血液凝固第Ｘ因子、活性化血液凝固第ＩＸ
因子混合物は０．２％牛血清アルブミンを含む５０ｍＭ
トリス塩酸緩衝溶液、ｐＨ７．３にて希釈した。
【００１４】その結果、図１に示すように本反応系にお
いてはホスファチジルセリン／ホスファチジルコリン
（１：１）においてホスファチジルセリン特異的に反応
し、他のリン脂質の影響をまったく受けないことが示さ
れた。
いてはホスファチジルセリン／ホスファチジルコリン
（１：１）においてホスファチジルセリン特異的に反応
し、他のリン脂質の影響をまったく受けないことが示さ
れた。
【００１５】実施例２ 血液凝固第ＶＩＩＩ因子の活性測定を以下の方法により
行った。エンザイムイムノアッセイ用９６穴マイクロタ
イタ−プレイト（Immuron Ｉ、Dynateck社製）に実施例
１と同様にＰＳ（１０μＭ）、およびＰＣ（１０μＭ）
を等量混合したエタノ−ル溶液を１０、２５、５０、あ
るいは１００μｌ／穴を入れ、室温で乾燥させリン脂質
をコ−トした。つづいて３％の牛血清アルブミンを含む
ＴＢＳを２００μｌ／穴加え、３時間ブロッキング処理
を行った。次ぎに牛血清アルブミンを含まないＴＢＳに
より３回洗浄後、２０μｌの希釈血しょう、および予め
３７℃に加温した４０μｌの血液凝固第Ｘ因子及び活性
化血液凝固第ＩＸ因子を加え３７℃で１０分放置した。
さらに２０μｌの２５ｍＭ塩化カルシウム溶液を加えて
３７℃で正確に１０分間反応させ、４０μｌの活性化血
液凝固第Ｘ因子特異的合成基質Ｓ２２２２（２．７ｍ
Ｍ，ｋａｂｉ社）を加え３７℃で２０分間反応させた。
２０μｌの５０％酢酸により反応を停止し、４０５ｎｍ
の吸光度を測定した。
行った。エンザイムイムノアッセイ用９６穴マイクロタ
イタ−プレイト（Immuron Ｉ、Dynateck社製）に実施例
１と同様にＰＳ（１０μＭ）、およびＰＣ（１０μＭ）
を等量混合したエタノ−ル溶液を１０、２５、５０、あ
るいは１００μｌ／穴を入れ、室温で乾燥させリン脂質
をコ−トした。つづいて３％の牛血清アルブミンを含む
ＴＢＳを２００μｌ／穴加え、３時間ブロッキング処理
を行った。次ぎに牛血清アルブミンを含まないＴＢＳに
より３回洗浄後、２０μｌの希釈血しょう、および予め
３７℃に加温した４０μｌの血液凝固第Ｘ因子及び活性
化血液凝固第ＩＸ因子を加え３７℃で１０分放置した。
さらに２０μｌの２５ｍＭ塩化カルシウム溶液を加えて
３７℃で正確に１０分間反応させ、４０μｌの活性化血
液凝固第Ｘ因子特異的合成基質Ｓ２２２２（２．７ｍ
Ｍ，ｋａｂｉ社）を加え３７℃で２０分間反応させた。
２０μｌの５０％酢酸により反応を停止し、４０５ｎｍ
の吸光度を測定した。
【００１６】その結果、図２に示す通り０．１〜１ｎｍ
ｏｌ（１０μＭ × １０〜１００μｌ／穴）でリン脂
質をコ−トした際、正常人血しょう１０〜４０倍希釈で
その活性が確認できることが示された。
ｏｌ（１０μＭ × １０〜１００μｌ／穴）でリン脂
質をコ−トした際、正常人血しょう１０〜４０倍希釈で
その活性が確認できることが示された。
【００１７】実施例３ 血液凝固第ＶＩＩＩ因子の活性測定の際のＰＳの至適濃
度を以下の方法により検討した。９６穴マイクロタイタ
−プレイト（Immuron Ｉ）に実施例１と同様にＰＳ（１
０μＭ）、およびＰＣ（１０μＭ）をＰＳのモル％で０
〜１００％で１０あるいは２５μｌ／穴でコ−トした。
つづいて３％の牛血清アルブミンを含むＴＢＳを２００
μｌ／穴加え、３時間ブロッキング処理を行った。以下
実施例２と同様反応を行い各穴の４０５ｎｍの吸光度を
測定した。
度を以下の方法により検討した。９６穴マイクロタイタ
−プレイト（Immuron Ｉ）に実施例１と同様にＰＳ（１
０μＭ）、およびＰＣ（１０μＭ）をＰＳのモル％で０
〜１００％で１０あるいは２５μｌ／穴でコ−トした。
つづいて３％の牛血清アルブミンを含むＴＢＳを２００
μｌ／穴加え、３時間ブロッキング処理を行った。以下
実施例２と同様反応を行い各穴の４０５ｎｍの吸光度を
測定した。
【００１８】その結果、図３に示す通り、０．１ｎｍｏ
ｌのリン脂質のコ−トにおいて７０％（ＰＳ−ｍｏｌ
％）までＰＳ濃度の上昇と共に血液凝固第ＶＩＩＩ因子
活性は上昇した。７０％以上の濃度で、吸光度４０５ｎ
ｍは０．３付近でプラト−に達した。一方、０．２５ｎ
ｍｏｌのリン脂質のコ−トにおいては８０％（ＰＳ−ｍ
ｏｌ％）までＰＳ濃度の上昇と共に血液凝固第ＶＩＩＩ
因子活性は上昇し、８０％を頂点としてその活性の減少
が認められた。
ｌのリン脂質のコ−トにおいて７０％（ＰＳ−ｍｏｌ
％）までＰＳ濃度の上昇と共に血液凝固第ＶＩＩＩ因子
活性は上昇した。７０％以上の濃度で、吸光度４０５ｎ
ｍは０．３付近でプラト−に達した。一方、０．２５ｎ
ｍｏｌのリン脂質のコ−トにおいては８０％（ＰＳ−ｍ
ｏｌ％）までＰＳ濃度の上昇と共に血液凝固第ＶＩＩＩ
因子活性は上昇し、８０％を頂点としてその活性の減少
が認められた。
【００１９】実施例４ 血液凝固第Ｖ因子の活性測定の際のＰＳの至適濃度を以
下の方法により検討した。２４穴プレイト（Corning 社
製）に実施例１と同様にＰＳ（１０μＭ）、およびＰＣ
（１０μＭ）をＰＳのモル％で０〜１００％で２００μ
ｌ／穴でコ−トした。続いて３％の牛血清アルブミンを
含むＴＢＳを２００μｌ／穴加え、３時間ブロッキング
処理を行った。続いて、５ｍＭ塩化カルシウム、０．１
％牛血清アルブミンを含むＴＢＳを７０μｌを穴に加え
た。さらに、精製牛血液凝固第Ｖ因子（５３μｇ／ｍ
ｌ）１０μｌ、活性化血液凝固第Ｘ因子（ＦＸａ、１．
５μｇ／ｍｌ）１０μｌ、およびプロトロンビン（１．
２ｍｇ／ｍｌ）１０μｌ加えた。３７℃にて６分間反応
させ、０．１Ｍ−ＥＤＴＡ（エチレンジアミンテトラア
セテ−ト）を加え反応を停止した。次に反応液５０μｌ
に対し、トロンビン特異的合成基質Ｓ２２３８（Ｋａｂ
ｉ社）５００μｌ加え３７℃にて１分間反応させた後、
１００μｌの５０％酢酸を加え反応を停止させ、４０５
ｎｍの吸光度を測定した。
下の方法により検討した。２４穴プレイト（Corning 社
製）に実施例１と同様にＰＳ（１０μＭ）、およびＰＣ
（１０μＭ）をＰＳのモル％で０〜１００％で２００μ
ｌ／穴でコ−トした。続いて３％の牛血清アルブミンを
含むＴＢＳを２００μｌ／穴加え、３時間ブロッキング
処理を行った。続いて、５ｍＭ塩化カルシウム、０．１
％牛血清アルブミンを含むＴＢＳを７０μｌを穴に加え
た。さらに、精製牛血液凝固第Ｖ因子（５３μｇ／ｍ
ｌ）１０μｌ、活性化血液凝固第Ｘ因子（ＦＸａ、１．
５μｇ／ｍｌ）１０μｌ、およびプロトロンビン（１．
２ｍｇ／ｍｌ）１０μｌ加えた。３７℃にて６分間反応
させ、０．１Ｍ−ＥＤＴＡ（エチレンジアミンテトラア
セテ−ト）を加え反応を停止した。次に反応液５０μｌ
に対し、トロンビン特異的合成基質Ｓ２２３８（Ｋａｂ
ｉ社）５００μｌ加え３７℃にて１分間反応させた後、
１００μｌの５０％酢酸を加え反応を停止させ、４０５
ｎｍの吸光度を測定した。
【００２０】その結果、図４に示すようにＰＳのモル
％、２０〜４０％において活性の最大値が認められた。
さらに、０〜２５％における活性を調べた結果、図５に
示すとうり１５〜２０で活性の最大値が認められた。
％、２０〜４０％において活性の最大値が認められた。
さらに、０〜２５％における活性を調べた結果、図５に
示すとうり１５〜２０で活性の最大値が認められた。
【００２１】実施例５ 血液凝固第Ｖ因子の活性測定をＰＳ濃度（１５モル％）
において行った。１５モル％のＰＳを２４穴プレイトに
実施例４と同様に２００μｌ／穴でコ−トし、血液凝固
第Ｖ因子の濃度を０〜５．３μｌ／ｍｌとして実施例４
と同様の方法でその活性を測定した。
において行った。１５モル％のＰＳを２４穴プレイトに
実施例４と同様に２００μｌ／穴でコ−トし、血液凝固
第Ｖ因子の濃度を０〜５．３μｌ／ｍｌとして実施例４
と同様の方法でその活性を測定した。
【００２２】その結果、図６に示す通り血液凝固第Ｖ因
子濃度０〜２．７μｌ／ｍｌの範囲で、その濃度依存的
に活性の上昇が認められた。
子濃度０〜２．７μｌ／ｍｌの範囲で、その濃度依存的
に活性の上昇が認められた。
【００２３】
【発明の効果】本発明は、血液凝固第Ｖ及び第ＶＩＩＩ
因子の活性測定の際用いるリン脂質を担体に固定化する
ことを特徴とする、血液凝固因子、特に血液凝固第Ｖ又
は第ＶＩＩＩ因子活性測定法に関するものである。本発
明方法によれば非常に繁雑であった血液凝固第因子の活
性測定が簡便になり、さらに通常血液凝固因子の活性測
定に使用されるリン脂質の量を飛躍的に少なくすること
により、バックグラウンドの軽減など多くの効果が得ら
れる。また、リン脂質を担体に固定化することにより自
動化に適しているなど、優れた効果を有するものであ
る。
因子の活性測定の際用いるリン脂質を担体に固定化する
ことを特徴とする、血液凝固因子、特に血液凝固第Ｖ又
は第ＶＩＩＩ因子活性測定法に関するものである。本発
明方法によれば非常に繁雑であった血液凝固第因子の活
性測定が簡便になり、さらに通常血液凝固因子の活性測
定に使用されるリン脂質の量を飛躍的に少なくすること
により、バックグラウンドの軽減など多くの効果が得ら
れる。また、リン脂質を担体に固定化することにより自
動化に適しているなど、優れた効果を有するものであ
る。
【図１】図１は、各種リン脂質による血液凝固第ＶＩＩ
Ｉ因子活性への影響の結果を示すものである。
Ｉ因子活性への影響の結果を示すものである。
【図２】図２は、ホスファチジルセリン／ホスファチジ
ルコリン（１：１）のリン脂質コ−ト量と血液凝固第Ｖ
ＩＩＩ因子活性の関係を示すものである。
ルコリン（１：１）のリン脂質コ−ト量と血液凝固第Ｖ
ＩＩＩ因子活性の関係を示すものである。
【図３】図３は、ホスファチジルセリン／ホスファチジ
ルコリンのモル比（リン脂質量一定）と血液凝固第ＶＩ
ＩＩ因子活性の関係を示すものである。
ルコリンのモル比（リン脂質量一定）と血液凝固第ＶＩ
ＩＩ因子活性の関係を示すものである。
【図４】図４は、ホスファチジルセリン／ホスファチジ
ルコリンのモル比（リン脂質量一定：０〜１００％）と
血液凝固第Ｖ因子活性の関係を示すものである。
ルコリンのモル比（リン脂質量一定：０〜１００％）と
血液凝固第Ｖ因子活性の関係を示すものである。
【図５】図５は、ホスファチジルセリン／ホスファチジ
ルコリンのモル比（リン脂質量一定：０〜２５％）と血
液凝固第Ｖ因子活性の関係を示すものである。
ルコリンのモル比（リン脂質量一定：０〜２５％）と血
液凝固第Ｖ因子活性の関係を示すものである。
【図６】図６は、ホスファチジルセリン／ホスファチジ
ルコリン（１５：８５ ｍｏｌ％）での血液凝固第Ｖ因
子活性の測定結果を示すものである。
ルコリン（１５：８５ ｍｏｌ％）での血液凝固第Ｖ因
子活性の測定結果を示すものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/48 - 33/98 ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (3)
- 【請求項１】ホスファチジルセリンを含むリン脂質を固
定化した担体を用いる血液凝固因子活性測定法。 - 【請求項２】血液凝固因子が第Ｖ因子である請求項１に
記載の活性測定法。 - 【請求項３】血液凝固因子が第ＶＩＩＩ因子である請求
項１に記載の活性測定法。
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|---|---|---|---|
| JP25046892A JP3291784B2 (ja) | 1992-08-27 | 1992-08-27 | 血液凝固因子活性測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|
| JP25046892A JP3291784B2 (ja) | 1992-08-27 | 1992-08-27 | 血液凝固因子活性測定法 |
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|---|---|
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| JP3291784B2 true JP3291784B2 (ja) | 2002-06-10 |
Family
ID=17208322
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP25046892A Expired - Fee Related JP3291784B2 (ja) | 1992-08-27 | 1992-08-27 | 血液凝固因子活性測定法 |
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|---|---|
| JP (1) | JP3291784B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
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|---|---|---|---|---|
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-
1992
- 1992-08-27 JP JP25046892A patent/JP3291784B2/ja not_active Expired - Fee Related
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